CUADERNILLO DE LABORATORIO MICROBIOLOGA GENERAL 2016-2016

Cuestionario PRACTICA 1: Seguridad en el laboratorio.

1. El CDC (Control disease center) de los EEUU, establece que existen 4 niveles de bioseguridad en los laboratorios. Haga
una lista en las que consten 5 microorganismos para cada nivel de bioseguridad. El laboratorio de Microbiologa de la
Facultad a qu nivel pertenece?

2. En el siguiente cuadro se enumeran algunas de las especies bacterianas con las que trabajarn en este laboratorio.
Complete el cuadro con el nombre de la enfermedad/es que podran causarle sino usa adecuadamente el equipo de
proteccin personal, ni aplica las tcnicas correctamente.

Microorganismo Enfermedad que podra causar.

Escherichia coli
Pseudomonas aeruginosa
Klebsiella spp
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Bacillus cereus
Bacillus subtilis
Salmonella spp.
Proteus spp
Streptococcus mutans
Enterococcus faecalis

Cuestionario PRACTICA N 2: Medios de cultivo microbiolgicos y mtodos de siembra.

1. Indique el ejemplo de un medio que sea a la vez selectivo y diferencial. Explique.
2. Explique el fundamento de la esterilizacin con el autoclave e indique las condiciones de temperatura, presin y
tiempo que este proceso requiere.
3. Explique en sus palabras las diferencias entre la preparacin de medios que se autoclavan y medios que no se
autoclavan.
4. Siguiendo las instrucciones detalladas en el manual Merck o Difco, describa todos los pasos para preparar lo
siguiente:
a. 15 cajas de tripticasa soya agar (TSA).

b. 30 cajas de agar EMB (Eosin methylene blue lactosa sucrose agar)

c. 10 cajas de agar VRB (Violet red bile agar)

5. Consultando en el manual Merck o Difco, completar lo siguiente:

a. Concentracin de almidn en el medio Mueller-Hinton agar:
b. Porcentaje de cloruro de sodio en el manitol salado:
c. Porcentaje de agar en EMB:
d. Cantidad de extracto de carne en un caldo nutritivo:
6. Por qu las cajas deben incubarse con la base hacia arriba y cul es la temperatura de incubacin para bacterias
y hongos?

Cuestionario PRACTICA N 3: Tcnicas de tincin simple y diferencial.

1. Cul es la diferencia entre la tincin simple y diferencial?
2. Dos ejemplos de colorantes bsicos y cidos y de ejemplos de tinciones en las que se utilizan.
 3. Explique por qu en la coloracin Gram se recomienda el uso de cultivos de mximo 24 horas.
4. Por qu la tincin Gram no se usa para teir bacterias del gnero Mycobacterium? Cul es la tincin que se usa
en lugar de la tincin Gram para este tipo de microorganismos?
5. Complete la siguiente tabla dibujando lo que ocurre con las bacterias en cada paso de la tincin Gram y explique
la funcin y el tipo de colorante en cada paso:

PASO GRAM GRAM FUNCION DEL BASICO O ACIDO

NEGATIVOS POSITIVOS COLORANTE
cristal violeta

Colocar solucin de
lugol

alcohol-cetona

safranina

Cuestionario PRACTICA N 4 Y 5: tincin de estructuras microbianas: endoesporas y cpsulas. Movilidad bacteriana.

1. Por qu se usa calor para la tincin de endosporas?
2. Dibuje el ciclo de esporulacin y explique por qu algunas bacterias esporulan.
3. En la tincin de cpsula, por qu no se usa la fijacin por calor?
4. Qu ventajas tienen las bacterias encapsuladas sobre las que no lo son?
5. Dibuje una bacteria Gram negativa con flagelacin montrica, donde se aprecie claramente las partes del flagelo
en este tipo de microorganismos.
6. Diferencia entre movimiento Browniano y movilidad bacteriana por medio de flagelos.

Cuestionario: PRCTICA N6: Medicin del crecimiento microbiano.

Indique dos ventajas y dos desventajas de los mtodos de recuento utilizados (contaje en placa y turbidez).

Cuestionario: PRACTICA N 7: Recuento directo de clulas viables.

1. Compare los resultados que obtuvo por las dos tcnicas y discuta sobre posibles factores que influyen en la
variacin si la hubiera.
2. Qu caractersticas tuvieron las colonias que crecieron dentro del agar vs las que crecieron en la superficie?
3. Indique 3 fuentes de error en las tcnicas de recuento en placa.
4. Por qu la temperatura de 45 a 55C del agar fundido no mata la mayora de microorganismos que nos interesa
aislar por esta tcnica?
Cuestionario: PRACTICA N8: Mtodos de determinacin de la sensibilidad bacteriana a los antibiticos. Antibiograma.
1. Segn los resultados que obtuvo, qu antibitico recomendara para tratar una infeccin causada por el
microorganismos ensayado y por qu?
2. Explique cmo se prepara la escala Mc Farland? Haga un cuadro indicando el nmero de la escala y la
concentracin bacteriana a la que corresponde.
3. Cepas de Mycobacterium tuberculosis pueden ser resistentes a muchas drogas, consulte los mecanismos que
pudieron llevar a estas bacterias a adquirir tal nivel de resistencia. Y haga una lista de los antibiticos a los que
son resistentes.
4. En qu fase de su crecimiento las bacterias son ms susceptibles a los antibiticos y por qu?
5. De 5 ejemplos de antibiticos de amplio espectro, 5 para tratar infecciones por Gram positivos y 5 para tratar
Gram negativos.

Prctica N 9. Metabolismo microbiano I. Pruebas bioqumicas en bacterias Gram negativas.

1. Indique tres caractersticas indispensables para que una bacteria pertenezca a la familia Enterobacteriaceae
2. Haga la reaccin qumica que se d en una prueba de indol positiva.
3. Haga la reaccin qumica que se d cuando la enzima ureasa descompone la rea.

4. Dibuje los tubos de las pruebas bioqumicas (TSI, SIM, UREA y CITRATO) antes de sembrar y luego con todas las
opciones de resultados.
5. Complete la tabla:

REACTIVO
NOMBRE METODO DE
DE LA DE LECTURA INTERPRETACION
PRUEBA FUNDAMENTO COMPOSICION INDICADORES SIEMBRA (revelador) DE RESULTADOS
TSI
SIM
UREA
CITRATO
Fenilalanina
PRACTICA N 10. Metabolismo microbiano II y Mecanismos de patogenicidad microbiana. Cocos Gram positivos del
gnero Staphylococcus
1. Explique qu ventaja les d a ciertos microorganismos el tener enzimas como la catalasa y la coagulasa.
2. Explique cmo se prepara el agar sangre y el agar chocolate. Indique la utilidad de estos medios.