Centro de Bachillerato Tecnológico Industrial

y de Servicios numero 34

Identifica microorganismos con base en

técnicas microbiológicas para diagnóstico
clínico

Practica No.2 Cultivo de Bacterias

Q.B.P.: Lidia Paola Méndez Jiménez

Alumno
Luis Enrique Serrano Aguilar
 Introducción
El cultivo es el proceso de proliferación de microorganismos
al proporcionarles un entorno apropiado. Los
microorganismos en proliferación producen réplicas de sí
mismos y necesitan los elementos presentes en su
composición química. Los nutrientes deben proporcionar
estos elementos en una forma que sea accesible desde el
punto de vista metabólico. Además, los microorganismos
requieren energía metabólica para sintetizar macromoléculas
y mantener gradientes químicos esenciales a través de sus
membranas. Los factores que deben controlarse durante la
proliferación incluyen nutrientes, pH, temperatura, aireación,
concentración de sales y fuerza iónica del medio.

Objetivo
Aprender y practicar la técnica de aislamiento de la estría
cruzada y el método de las diluciones. Observar la gran
variedad de microorganismos presentes en el medio
ambiente, determinando las diferentes morfologías de
colonias que se obtienen, adiestrar al alumno en las técnicas
de inoculación de muestras en diferentes tipos de cultivos y
en la lectura del cultivo.

Materiales
 Equipo de calentamiento
 Porta objetos
 Cajas Petri
 Asa de inoculación
  Mechero
 Guantes
 Tubos de ensayo estériles
 Lápiz graso
 Microscopio
 Estufa bacteriológica

Reactivos

 Agar nutritivo
 Caldo nutritivo
 Agar MacConkey
 Colorantes Gram
 Aceite de inmersión

Procedimiento

1.-Preparacion de las placas de agar. Se funde el medio de

cultivo de preferencia a baño María, para evitar que se queme
el medio del fondo del matraz en las cajas Petri, para evitar la
contaminación del medio, se flamea antes y después de
vaciarlo, la boca del matraz y las cajas Petri, teniendo la
precaución de levantar solamente la parte superior de la
placa.
2.-Despues de haber vertido en las placas el medio de cultivo,
cerciórate de que el medio quedo bien distribuido en ella. Si
se forman burbujas sobre la superficie del medio, antes de
que solidifiqué, levanta la tapa y flamea cuidadosamente.
Deja un poco levantada la tapa de la caja Petri hasta que
enfrié el medio, y al final flamea la placa antes de taparla para
guardarla o usarla.

3.-Prepara un frotis y tíñelo con Gram, observando la

morfología de las bacterias contenidas en la muestra. Anota
los resultados.

4.-Cuando haya solidificado el medio, usando un lápiz graso

divide la placa en 3, 4 o 5 campos, para lograr una mejor
separación. Se esteriliza el asa y se toma una asada de la
muestra, sembrando por estría en el primer campo, se
esteriliza el asa y se toma una asada del primer campo o se
hace la estría en el segundo campo haciendo contacto con la
primera estría. Se hace la misma operación para la tercera
estría y para la cuarta o quinta según sea el caso. De esta
forma se logra una buena separación de colonias y se obtiene
un buen cultivo para aislarlo.

5.-Se incuban las cajas Petri ya sembradas o inoculadas a

37°C por 24 o 48 horas, en posición invertida para evitar la
condensación y sin olvidar el etiquetado en cada una de las
placas.
6.-Despues del tiempo de incubación, se observan las
características las colonias aisladas de a cuerdo al esquema
de morfología, esto es la lectura de los cultivos, Anota las
características de cada tipo de colonia desarrollada.

7.-Selecciona dos colonias aisladas y diferentes preparando

un frotis de cada una tiñéndolas con Gram. observa al
microscopio y anota los resultados.

8.-De cada una de las colonias anteriores (las usadas por

Gram), se siembran por estría en tubo con agar inclinado y en
caldo nutritivo, cada uno por separado y etiquetado cada uno,
En el agar inclinado se hace la inoculación traspasando el
medio para llegar al fondo del tubo y luego se hace una estría
en la superficie. En el caldo nutritivo se inocula tomando una
asada de la colonia y agitándola con el asa en el medio de
cultivo.

9.-En una placa de agar nutritivo, inocula por tres estrías una
colonia semejante a la usada en el punto anterior. Con estas
siembras se observa movilidad y otras características
importantes de la bacteria desarrollada, pero sobre todo la
pureza de la colonia.
 Observaciones

1.-Dibuja o añade una fotografía en tu reporte; los resultados

del frotis de la muestra teñida con Gram. Usa colores. Dos
campos.

2.-Dibuja las colonias obtenidas después de incubar el cultivo

primario (cultivo de la muestra) además describe las
características de las colonias desarrolladas. Usa colores.
3.-Dibuja lo observado en los frotis de las colonias
desarrolladas en los cultivos. Usa colores. Dos campos de
cada frotis.

X10

X100
4.-Describe el resultado del aislamiento realizado en los
pasos 8 y 9. De acuerdo a la tabla de características de las
bacterias que pueden describirse.
Características Colonia 1
Dimensiones Difusa
Forma Puntiforme
Elevación Papilada
Contorno o borde Ondulada
Superficie Puntos elevados
Color Rojo
Textura Mucosa
Tinción de Gram Gram negativo
Morfología Bacilos
Microscópica
Medio de cultivo Emb
Cuestionario

1.-Para poder identificar a una bacteria nos basamos en:

c)Pruebas bioquímicas
2.-Cual de las siguientes estructuras no es vital para la
bacteria
b) Capsula: virulencia porque dificulta la fagocitosis
3.-En que fase del crecimiento la bacteria comienza a
multiplicarse
b) Exponencial
4.-Que tejido se repara difícilmente luego de un proceso
inflamatorio
d)muscular cardiaco
5.-Las bacterias Gram (+) y Gram (-) producen cuadros
similares en el shock endotóxico debido a
c)Lipopolisacáridos y peptidoglicano
6.-A que se denomina virulencia
d)Grado de infección
7.-Las bacterias siempre son resistentes a los antibióticos que
actúan a nivel de
c)ninguna de las anteriores
8.-Que microorganismos debemos buscar en la secreción
vaginal de mujeres en etapa reproductiva
d) Gardnerella
9.-La resistencia bacteriana se debe a
c)capsula
10.-Los siguientes son medios de cultivo señale los falsos
a) Los amino glucósidos no son tóxicos
11.-Los bacilos Gram negativos son de color azul
b) falso
12.-La morfología de los cocos es forma de bastón?
b) falso
13.-El agar es un medio de cultivo solido o liquido;
Cierto
14.-Los llamados caldos de cultivo son medios de cultivo
solidos:
Falso
15.-Para que sirven las diferentes técnicas de inoculación:
son utilizadas en el laboratorio de Microbiología para lograr
un cultivo axénico. El inóculo debe ser introducido en un
medio nutritivo adecuado para desarrollarse.

Resultados

Siguiendo los requerimientos de la práctica, los resultados se

dieron conforme los días, ya que cultivar agares necesitan de
al menos dos días para lograr ver los resultados, los efectos
y/o reacciones que tuvieron.

Conclusión

Al momento de estar desarrollando esta practica se

obtuvieron diversos conocimientos, desde la preparación de
un agar, como se debe vaciar correctamente el agar a la caja
Petri, los métodos de estriados para obtener un crecimiento
de colonias esparcidas y que sean posibles de contar a
simple vista.

Bibliografía
https://www.sintesis.com/data/indices/9788490773185.pdf

https://medlineplus.gov/spanish/ency/esp_imagepages/
8682.htm
https://medlineplus.gov/spanish/ency/esp_imagepages/
19955.htm