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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

Diagnóstico Bacteriología

Práctica B3: DIAGNÓSTICO BACTERIOLOGÍA

OBJETIVOS:

 Describir cuales son las muestras útiles para el diagnóstico de enfermedades


producidas por bacterias, la importancia de la correcta toma y manipulación de
muestras y solicitud de exámenes de laboratorio.
 Interpretar informes de resultados de los exámenes practicados en bacteriología.
 Analizar casos clínicos hipotéticos y su diagnóstico microbiológico.

1. INTRODUCCIÓN
“El tratamiento de las enfermedades infecciosas exige la comprensión de las
manifestaciones clínicas iniciales y el conocimiento de las características microbiológicas.
El cuadro de presentación de muchas infecciones incluye innumerables signos y síntomas
focales y generales, y los casos típicos sugieren fuertemente el diagnóstico, aunque la
enfermedad pudo haber sido causada por microorganismos diferentes. El arte de la
medicina se funda en la elaboración del diagnóstico clínico que más tarde será confirmad o
por datos de laboratorio” (1).

Uno de los principales objetivos del laboratorio de microbiología es identificar el agente


etiológico de una infección y establecer la actividad in vitro de determinados
antimicrobianos. Para maximizar el valor clínico de las pruebas diagnósticas
microbiológicas, es crucial que exista una estrecha colaboración entre el médico tratante,
el paciente, personal de enfermería y el laboratorio de microbiología. Precisamente, el
ciclo diagnóstico de una enfermedad infecciosa inicia con la etapa pre-analítica, en la
cual el médico tratante realiza un diagnóstico presuntivo y solicita la recolección de
muestra(s) para realizar un diagnóstico microbiológico (Figura 1). Esta etapa es crítica;
para obtener resultados válidos es esencial realizar una apropiada recolección y
manipulación de la muestra (2, 3). Posteriormente se da la etapa analítica, en la cual se
reciben y procesan las muestras por parte del laboratorio de microbiología, aplicando
diversas metodologías: diagnóstico directo (microscopía, cultivo, identificación del
microorganismo), determinación de la susceptibilidad a antimicrobianos, diagnóstico no
tradicional (métodos inmunológicos o basados en ácidos nucleicos) o diagnóstico
microbiológico indirecto (serológico). El laboratorio debe garantizar un rápido resultado al
clínico, que contribuya a la toma de decisiones en aquellas situaciones que así lo
requieran. Finalmente, en la etapa pos-analítica los resultados obtenidos por el
laboratorio de microbiología son enviados y analizados por el médico tratante.

En la presente práctica se revisarán las principales muestras que se necesitan para el


diagnóstico de enfermedades producidas por bacterias, algunas recomendaciones para la
toma de éstas, los medios de cultivo y pruebas de laboratorio que generalmente se usan
para procesar las muestras y la interpretarán de posibles resultados que las pruebas
arrojan. Adicionalmente se discutirán casos clínicos.

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2. CONSULTAS PRELIMINARES
Responda brevemente
1. Enumere 5 muestras que normalmente se usan para diagnóstico de infección por
bacterias.
2. ¿Qué resultado espera de un reporte de la coloración de Gram en una muestra clínica?
3. ¿Qué es concentración inhibitoria mínima (CIM) y cuál es la utilidad en la práctica médica
clínica?
4. ¿Qué son Beta-lactamasas y Beta-lactamasas de espectro extendido?
5. ¿Qué es lectura interpretada de un antibiograma?

Entregue las respuestas en la hoja final de esta guía. Se sugiere solo imprimir esa hoja para ser
amigables con el medio ambiente.

3. SEGURIDAD DURANTE LA PRÁCTICA

Normas de seguridad:
El estudiante debe referirse al manual de normas de seguridad.

Equipos de protección personal:


Usar durante todo el desarrollo de la práctica bata de laboratorio.
Dependiendo de los procedimientos a realizar, tener disponible los siguientes elementos de
seguridad:
 Guantes de nitrilo.
 Gafas de seguridad.
Mantener los elementos personales de seguridad identificados y en buen estado. Está
prohibido su intercambio con los demás compañeros de laboratorio.

Manejo de residuos químicos:


Tanto por razones de seguridad como por respeto al medio ambiente, es importante
disponer los residuos generados en las prácticas del laboratorio en forma adecuada. Por
ello el estudiante debe:

1. Emplear los recipientes destinados para eliminar los residuos o desechos de


laboratorio, los cuales están debidamente identificados según el tipo de sustancia a
desechar.
2. Verter únicamente los residuos en el recipiente correspondiente para evitar reacciones
no controladas y potencialmente peligrosas.

No arrojar por el desagüe los desechos o residuos químicos obtenidos durante el desarrollo
de la práctica. Si tiene alguna inquietud al respecto comuníquela al responsable del
laboratorio, quien le indicará la forma correcta de hacerlo.

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4. PROCEDIMIENTOS

4.1. MATERIALES
Tabla 1. Listado de materiales necesarios para el desarrollo de la práctica por pareja:

ITEM DESCRIPCION DEL ITEM CANTIDAD U.M. OBSERVACIONES


1 Cultivos bacterianos 1 UND
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2 Papel de arroz 2 libreta Por salón de clase


3 Kit de insumos plásticos para tinción 1 UND Por salón de clase
Pruebas de API 20E montadas y listar para Por salón de clase
4 2 UND
leer
5 Pruebas de Kirby Bauer listar para leer 2 UND Por salón de clase
Pruebas de microdilución en caldo listas Por salón de clase
6 2 UND
para leer

4.2. REACTIVOS
Tabla 2. Listado de soluciones que requieren estar listas para el día de la práctica:

ITEM DESCRIPCION DEL ITEM CANTIDAD U.M. OBSERVACIONES


1 Etanol al 70% 1 frasco Por salón de clase
2 Etanol al 96% 1 mL Por salón de clase
3 Cristal Violeta para Tinción Gram 1 Frasco Por salón de clase
4 Lugol para Tinción Gram 1 Frasco Por salón de clase
5 Alcohol-Acetona para Tinción Gram 1 Frasco Por salón de clase
6 Safranina para Tinción Gram 1 Frasco Por salón de clase
9 Aceite de inmersión 1 Frasco Por salón de clase

4.3. EQUIPOS

Tabla 3. Listado de equipos necesarios para el desarrollo de la práctica por pareja:

ITEM DESCRIPCION DEL ITEM CANTIDAD U.M. OBSERVACIONES


1 Microscopio 14 UND Por salón de clase

4.4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL


4.4.1 Actividad 1: Medios de cultivo y cultivos positivos
1. Observar los diferentes medios de cultivo usados en el laboratorio de microbiología (Agar
nutritivo, Agar sangre, BHI, MacConkey) sin inocular y de los que tienen crecimiento de colonias
bacterianas.
2. Anotar 2 diferencias en la morfología de las colonias por género bacteriano: color, textura, borde,
hemólisis (si aplica), etc.

4.4.2 Actividad 2: Coloración de Gram


3. Observar la demostración de cómo se realiza la coloración de Gram.
4. Observar las muestras dispuestas en cada microscopio; no desenfocar el campo visual. Note
que hay bacterias Gram positivas y Gram negativas. Leer el informe de laboratorio que
acompaña algunas muestras y comparar con la respuesta que esperaba (la que dio en la

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consultas preliminares).

4.4.3 Actividad 3: Identificación de Bacterias


5. Observar la demostración de pruebas de identificación de las bacterias seleccionadas,
mencione al menos una similitud y una diferencia entre estas.
6. Observar el informe de laboratorio que acompañe cada muestra, ¿cuál es su interpretación
del caso?

4.4.4 Actividad 4: Prueba de susceptibilidad a antibióticos


7. Observar la demostración de pruebas de susceptibilidad a antibióticos.
8. ¿Cuál es la CIM de la muestra señalada?
9. Observar el informe de laboratorio que acompañe cada muestra y dar una breve interpretación
del mismo.

4.4.5 Actividad 5: Casos clínicos


Responda las preguntas formuladas durante la práctica.

BIBLIOGRAFÍA
1. Carrol K, Morse SA, Mietzner T, Miller S., (2016). Jawetz, Melnick & Adelberg –
Microbiología Médica, México DF, México: McGraw Hill/ Interamericana editores.
2. MÜHLHAUSER M., RIVAS L. 2014. CLINICAL MICROBIOLOGY LABORATORY: BASIC
KNOWLEDGE TO A PHYSICIAN.Rev. Med. Clin. Condes, 25(3) 569-579.
3. WHO. 2016. Diagnostic Stewardship. Recuperado de
https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/251553/WHO-DGO-AMR-2016.3-
eng.pdf;jsessionid=0CB531FD6D15831479FD0C21A5AD43C5?sequence=1

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Alumno: ____________________________________________ Código: ___________

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Hoja de resultados

CONSULTAS PRELIMINARES

1. Esputo, sangre, heces, orina, muestra de garganta, muestra de del lugar de una herida,
pus, fluidos tisulares y líquido cefalorraquídeo

2. Si la bacteria estudiada en Gram + o Gram -, la forma, tamaño, agrupaciones detectadas,


cantidad, si se considera relevante, si están intra o extracelulares, si hay presencia de otro
microorganismo.

3. CMI: Es la cantidad mínima de un antimicrobiano que inhibe el crecimiento bacteriano


luego de 18 a 24 horas de ser cultivado, Es muy importante para saber si las bacterias
son sensibles, intermedias y resistentes. En caso de que sean sensibles podemos utilizar
el medicamento para combatir alguna infección y los resultados sean eficaces. En
resistentes, no elegir el antibiótico ya que no produciría buenos resultados y podríamos
alterar la microbiota normal del paciente o provocarle otros efectos adversos algo que no
es conveniente. De tal manera que en la práctica clínica nos ayuda a hacer uso adecuado
de los antibióticos.

4.

 La beta-lactamasa es una enzima producida por algunas bacterias y es responsable


de la resistencia de éstas ante la acción de antibióticos betalactámicos como las
penicilinas, las cefalosporinas, monobactamicos y carbapenémicos. Todos estos
antibióticos tienen un elemento en común dentro de su estructura molecular
denominado anillo betalactámico, un anillo químico de cuatro átomos. Las
betalactamasas por lo general son producidas por bacterias Gram negativas en forma
secretada.

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 Las beta-lactamasas de espectro extendido (BLEE), también llamadas beta-lactamasas


de espectro ampliado (BLEA), son enzimas producidas por bacilos gran negativos
fundamentalmente enterobacterias, con más frecuencia por E. coli y Klebsiella
pneumoniae. Son capaces de inactivar además de las penicilinas y a las cefalosporinas
de primera y segunda generación, a las oximino-cefalosporinas y al aztreonam.
Clásicamente, estas BLEE derivan de genes TEM-1, TEM-2 o SHV-1, por mutaciones que
alteran la configuración aminoacídica alrededor del sitio activo de estas betalactamasas,
lo cual les otorga la capacidad de ampliar su espectro de acción sobre los betalactámicos.

5. La lectura interpretada del antibiograma es una práctica habitual en el laboratorio de


microbiología como complemento de la interpretación o de la categorización clínica de los
resultados de sensibilidad. Consiste en el reconocimiento fenotípico de los mecanismos de
resistencia. Es útil en el control de calidad y en la validación de los resultados y se facilita con los
sistemas automáticos de estudio de sensibilidad y paquetes informáticos asociados.

1. ACTIVIDAD 1
Respuestas

2. ACTIVIDAD 2
Respuestas

3. ACTIVIDAD 3
Respuestas

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4. ACTIVIDAD 4
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5. ACTIVIDAD 5
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