Jorge Perea Armijo 2014-2015

2014

ANEXO PRCTICAS MICOLOGA

OLOGA Y
PARASITOLOGA
PRCTICAS 17 Y 18:
18 ESTUDIO HONGOS MICELIALES Y
LEVADURIFORMES
LEVADURIFORMES.
Esta prctica va dirigida al diagnstico de los hongos el cual se basa en el clnico y en el
de laboratorio.

1. Diagnstico directo.

TOMA DE
MUESTRAS

VISUALIZACIN
MICROSCPICA
DIRECTA

CULTIVO Y
AISLAMIENTO

IDENTIFICACIN

FUNGIGRAMA Y
OTRAS TCNICAS

No invasivas: Cutneas, exudados, esputo, heces, orina...

orina
Invasivas: Sangre (Fungiemia), LCR, biopsias, abscesos...
abscesos

KOH (20%). Permite ver a bajos aumentos e identificar filamentos y esporas.

Azul de lactofenol.
Blanco calcofluor. Con un microscopio de fluorescencia, se ven de color brillante.
Tinta china. Por ejemplo, para Cryptococcus Neoformans.
Neoformans

Medios no selectivos. Pueden crecer bacterias pero lo suelen hacer ms rpido que
los hongos, por lo que es perjudicial. Por ejemplo, Agar Sabouraud + dextrosa.
Medios selectivos. Por ejemplo, Agar Sabouraud + dextrosa + cloranfenicol o
tambin se puede aadir actidiona. El cloranfenicol elimina bacterias y la actidiona,
hongos oportunistas.
Medios enriquecidos (Agar Sangre).
Medios cromognicos.

AUXONOGRAMA APIID 32C. Consiste en

n determinar la capacidad de consumir un
nutriente u otro por parte del hongo.
Sistemas enzimticos.

Deteccin de antgeno.
Deteccin de metabolitos.
PCR y Maldi-Tof.

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2. Diagnstico indirecto.
directo.
Se utilizan pruebas serolgicas, deteccin de anticuerpos antimicelo y el -D-glucano.
Del esquema expuesto anteriormente, lo ms importante es explicar los apartados de
Cultivo e identificacin y, por ello, se va a profundizar principalmente en stos.

CULTIVO E IDENTIFICACIN.
IDENTIFICACIN

Los hongos pueden crecer en Agar Sangre pero hay que tener en cuenta el concepto de
hongo dimrfico aplicable a determinados hongos. Sin embargo, se suele utilizar
tambin Agar Sabouraud en diferentes variantes: slo, con cicloheximida y con
cloranfenicol u otros antibacterianos. Para la identificacin de un hongo, se pueden
utilizar diferentes medios o tcnicas.
a) Medio de PIM.
Es un medio de aislamiento de Prototecas. El componente esencial
esencial es la 5-Fluorcitosina
5
que inhibe a las levaduras y permite el crecimiento de dicho hongo.
b) Medio de DIXON.
Tiene el tween que representa alrededor del 80% del medio y es componente esencial.
Con este medio, se detecta fundamentalmente Malassezia.
c) CHROMAgar
Agar Candida. Se trata de un medio cromognico.

CULTIVO AGAR SABOURAUD + CLORANFENICOL

CULTIVO EN CHROMAgar
VERDE

AZUL

ROSA RUGOSA

VIOLETA

OTROS

CULTIVO EN CHROMAgar (Correspondencia del color con el hongo).

C. Albicans
C. Dublinensis

C. Tropicalis

C. Krusei

C. Glabatra

Pruebas de
asimilacin

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d) Sistemas enzimticos. Por ejemplo, Cryptococcus Neoformans es ureasa,

nitrato-reductasa
reductasa y fenol oxidasa positivos.

AGAR HARINA DE MAIZ

PRESENCIA DE HIFAS
Artroconidias

Ureasa positiva:
Tricosporum
Ureasa negativa:
Geotrichum

Blastoconidias

Candida

AUSENCIA DE HIFAS
Ureasa positiva

Nitratos negativo:
Cryptococcus.
Nitratos positivo: C.
Neoformans.

Ureasa negativa
(Agar para
artrosporas)

Sacharomyces

e) Auxonograma.
Consiste en la adiccin de nutriente y observar si el microorganismo los consume o no.
En esta prueba, se aade alrededor de 100 microlitos a cada pocillo y se mantiene a 2828
30C durante 24-72
72 horas. Si el contenido del pocillo se vuelve turbio, ser positivo y, si
es transparente, negativo.
Los pocillos se distribuyen en tros y, dependiendo de la posicin del pocillo dentro de
esta agrupacin, su puntuacin ser diferente. As, si el primer pocillo se vuelve turbio,
vale 1 punto, si es el del medio 2 puntos y, si es el tercero, 4 puntos, siendo un mximo
de 7 puntos cada tro.
f) Fungigrama (Sensititre Yeast-One).
Yeast
Consiste en una microdilucin en placa que nos permite determinar la CMI
(concentracin mnima inhibitoria). El medio empleado es el RPMI donde crecen todos
los hongos y el inoculo necesario es 05 escala de Mac Farland el cual se aade al
medio.
Es importante destacar el efecto paradjico que ocurre en esta prueba el cual consiste
en que, a una determinada concentracin, el antifngico es eficaz contra ese hongo y
ste no crece pero hay casos en los que a mayor concentracin
concentracin de ese antifngico, el
hongo s puede crecer. Adems, tambin puede suceder que si aumentamos nuevamente
la concentracin, el hongo no crece.
Se utiliza un indicador que es el Azul de Alamar el cual aparece azul si es negativo y
rosa si es positivo. Esta prueba viene representada la siguiente forma:

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A1: Control (aparecer rosa).

A2-A11: Anidulafungina.
B1-B11: Micafungina.
C1-C11: Caspofungina.
D1-D11: 5-Fluorcitosina.
E1-E11: Posaconazol.
F1-F11: Voriconazol.
G1-G12: Itraconazol.
H1-H12: Fluconazol.
12A-12F: Anfotericina B.

PRCTICAS 20: DIAGNSTICO DE LAS AMEBAS Y

FLAGELADOS INTESTINALES.
1. ENTAMOEBA HISTOLYTICA.
Su forma de trofozoito presenta un
ectoplasma hialino con pseudpodos. Es
mvil y tiene un ednoplasma con restos
tisulares y hemates. El ncleo es excntrico
con grumos de cromatina en disposicin en
rueda de carro. Se puede observar en fresco,
con lugol o con tincin tricrmica que nos
permite diferenciarla de Entamoeba Coli.
La forma de trofozoito puede sufrir una disminucin del ectoplasma y del endoplasma,
dando lugar a un prequiste el cual terminar formando el quiste, responsable de la
patogenia la cuales suele ser la como disentera amebiana o amebiosis intestinal. El
quiste es esfrico, carece de ectoplasma, con 1-4 nucleos (no ms de 4) que depende de
la madurez. Adems, tienen grumos de glucgeno que se disponen en forma de barras,
denominados cuerpos cromatoidales.

2. ENTAMOEBA COLI.
Su forma de trofozoito se presenta como una masa
ameboide incolora. Sus movimientos son
tpicamente lentos con formacin de pseudpodos
anchos y cortos. En el interior de su endoplasma,
se pueden apreciar vacuolas y el ncleo sin la
disposicin de rueda de carro. Su forma de quiste
se diferencia de E. Histolytica en que presenta ms
de 4 ncleos.

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3. IODAMOEBA BTSCHLII.
Su forma de trofozoito tiene un ncleo compacto sin cromatina perifrica mientras que
el quiste presenta una nica vacuola y un nico ncleo compacto.

4. ACANTHAMOEBA CASTELLANI.
En la fase de trofozoito, presenta proyecciones fusiformes finas y otras caractersticas
similares a los anteriores. En su forma de quiste, ste tiene una doble pared en el que el
endocisto es la interna y la exocisto es la externa y arrugada. Puede producir queratitis o
meningoencefalitis granulomatosa crnica.

5. NAEGLERIA FOWLERI.
El trofozoito tiene pseudpodos hemisfricos lisos y presenta una etapa biflagelada
mientras que el quiste es similar a los anteriores. Puede producir meningoencefalitis
fulminante.

6. GIARDIA LAMBLIA.
El trofozoito tiene forma piriforme y,
lateralmente, de cuchara. Tiene 4 parejas de
flagelos en su porcin inferior lo que le da un
aspecto de careta o medusa. El quiste, tiene
forma de elipse, con 2-4 ncleos y un
elemento central en forma de barra.

7. TRICHOMONAS VAGINALIS.
Tiene forma de pera con un ncleo, un axoestilo, un penacho de flagelos y una
membrana ondulante.

8. BALANTIDIUM COLI.
Su forma de trofozoito tiene protoplasma con una vacuola digestiva y est rodeado de
cilios. Presenta un citostoma, citofaringe y citopigio. Tiene 2 ncleos, uno grade
arrionado y otro pequeo redondeado. El quiste no tiene cilios pero s el ncleo
arrionado.

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PRCTICA 21 DIAGNSTICO FLAGELADOS SANGUNEO.

CLASIFICACIN.

Segn el ciclo biolgico puede ser monoxeno o heteroxeno en relacin a la presencia

de uno o varios huspedes respectivamente. Tambin se pueden clasificar de la
siguiente forma:
-

Sarcodinas: Amebas.
Mastigophora: Flagelados.
Ciliophora: Ciliados.
Apicomplexa (reproduccin sexual y asexual).

FASES DE DESARROLLO DE HEMOFLAGELADOS.

1. Fase amastigote (Leishmania).

El cuerpo es ovalado, translcido, pierde el
flagelo y tiene una accin intracelular sobre el
sistema retculo endotelial.
2. Fase promastigote.
El corpsculo basal se antepone ms. Presenta
un flagelo, por lo que es mvil y se desarrolla
a nivel extracelular. Adems, la membrana
ondulante desaparece.
3. Fase epismatigote.
El corpsculo basal y el flagelo estn detrs
del ncleo y la membrana ondulante se acorta.
4. Fase tripomastigote.
Presenta una serie de elementos como son: ncleo, kinetoplasto, corpsculo basal,
blefaroplasto, membrana ondulante y grnulos de volutina.

LEISMANIA DONOVANI.

Su ciclo biolgico requiere un husped y un

parasito vector. El vector presenta la fase
promastigote y, luego, en el ser humano pasa a
la fase de amastigote. Posteriormente, el vector
(Flebotomus) vuelve a producir la fase de
promastigote. Este protozoo produce una lesin
cutnea (Botn de Oriente) y otra visceral
(Kala-azar).

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TRIPANOSOMIASIS

1. TRIPANOSOMIASIS AFRICANA.

Complex T. Brucei

o T. Brucei Gambiense Glosina Palpalis (Enfermedad del sueo).

o T. Brucei Rhodesiense Glosina Morsitans.
o T. Brucei Brucei No patgeno.

2. TRIPANOSOMIASIS AMERICANA CENTRAL Y DEL SUR

T. Cruzi. El vector se trata de una
especie hematfaga de la familia
Reduvidae y que puede ser el
Triatoma, Rhodnius Este protozoo
produce la enfermedad de Chagas.

APICOMPLEXA.

En este grupo encontramos a

Babesia,, que pertenece a la subclase
Piroplasma, y Plasmodium que se
engloba dentro de la subclase
Coccidia.

COCCIDIOS INTESTINALES.
INTESTINALES

Se incluyen Ciclospora, Isospora (produce enteritis benigna) y Cryptosporidium.

Cryptosporidium ste
ltimo es monoxeno, produce diarrea y se detectan sus ooquistes en las heces

PRCTICAS 22:
22 DIAGNSTICO DE ESPOROZARIOS.
1. PLASMODIUM.
PLASMODIUM
Pertenece a la subclase Coccidia y se
trata de protozoos hemticos. Son
exclusivamente
intracelulares
durante casi todo su ciclo biolgico.
En su ciclo metagentico,
metagentico puede
haber
generacin
asexual
(esquizogonica en el hombre) y
sexual (esporogonica en Anopheles
hembra).
Produce el paludismo
smo en el que
aparece, tras un periodo de incubacin de 2-3
2 3 semanas, fiebre, anemia,
hepatoesplenomegalia La fiebre se produce tras la liberacin de los plasmodios por la

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ruptura de los hemates infectados. Estos plasmodios vuelven a infectar a otros hemates
y as sucesivamente. La fiebre tiene una periodicidad segn el Plasmodium:

P. Knowlesi: Cada 24 horas.

P. Oval y P. Vivax: Cada 48 horas. Es una fiebre terciaria.
P. Malariae: Cada 72 horas y es una fiebre cuaternaria.
P. Falciparum: Irregular.

El diagnstico se puede realizar mediante gota gruesa y extensin en porta, deteccin

de antgeno por inmunocromatografa o PCR. El tratamiento es cloroquina o
primaquina. A continuacin, se observa una tabla de diagnstico diferencial entre las
distintas especies de Plasmodium segn las caractersticas del eritrocito infectado.

ERITROCITO

DIAGNOSTICO DIFERENCIAL
Tamao
Ovulados
Redondeados
Anillo
Grnulos de Schrfner
Grnulos de Maurer

P. Ovale y P. Vivax
P. Ovale
P. Vivax
P. Vivax (1), P. Malariae y P. Falciparum
P. Ovale y P. Vivax
P. Falciparum

2. TOXOPLASMA.
El hospedador es el gato mientras que el hospedador intermedio es el hombre u otro
animal. Produce un cuadro discreto con fiebre pero adquiere relevancia en embarazadas
y en inmunodeprimidos El diagnstico se realiza mediante deteccin de anticuerpos o
PCR del lquido amnitico en embarazadas.

3. BABESIA.
Parasitan aves, mamferos y hombre. La fase sexual se produce en garrapatas del gnero
Ixodes. La clnica es parecida al paludismo pero si periodicidad de la fiebre, siendo el
tratamiento similar. En relacin al examen microscpico, se utiliza Giemsa.

PRCTICAS 23:
INTESTINALES.

DIAGNSTICO

DE

NEMATODOS

1. ENTEROBIUS VERMICULARIS.
Presenta una extremidad oral con una cpsula bucal con 2 aletas ceflicas y 3 labios.

Macho. Es ms pequeo. El extremo posterior incurvado y tiene una espcula

copulatoria sin gobernculo.
Hembra. Es ms grande. Extremo posterior recto y afilado. La vulva se
encuentra en el tercio medio.
Huevos. Ovoides, asimtricos e incoloros. Tienen un lado plano y otro cncavo.

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El ciclo biolgico consiste en la ingestin de los huevos por parte del ser humano y, en
el intestino delgado, las larvas aparecen, dando lugar a hembras y machos. La hembra
permanece en el tubo digestivo y, durante la noche, sale por el orificio anal para la
puesta de huevos, Luego, asciende nuevamente por el tubo digestivo.

2. ASCARIS LUMBRIOCOIDES.
Presenta una cavidad bucal con 3 labios finamente dentiagudos. Tiene tendencia a
formar ovillos en el tubo digestivo que puede dar lugar a una obstruccin intestinal.

Macho. Mide 15-30 cm, el extremo posterior est incurvado y tiene 2 espculas
copulatoria dentro de una vaina.
Hembra. Mide 20-35 cm (es ms grande) y tiene una vulva mediocentral.
Huevos. Capa externa mamelonada y de color amarillento.

El ciclo biolgico consiste en que el huevo infestante penetra en el tubo digestivo. Sale
la larva y atraviesa la pared del tubo digestivo. Tras esto, llega al pulmn, rompe los
capilares, llega a los alveolos y el esputo deglutido vuelve al tubo digestivo. All, ya
maduro, se reproduce, produciendo huevos en el interior del intestino y no saliendo al
exterior.

3. TRICHURIS TRICHURA.
Es asimtrico con una porcin anterior fina y otra posterior gruesa.

Macho. Mide 30-45 mm con un extremo caudal enrollado.

Hembra. Mide 35-50 mm (ms grande) con un extremo caudal redondo y romo.
Huevos. Simtrico con forma de barril o de limn con un color amarillento.
Tiene 2 prominencias bipolares sin teir con apariencia de tapn mucoidal.

El ciclo biolgico consiste en la entrada del huevo en el tubo digestivo y las larvas se
liberan. Luego, ponen los huevos en el intestino delgado, por lo que s se detectan en
heces.

4. ANCYLOSTOMA DUODENALE.
Presenta una boca con ganchos para fijarse en la mucosa. El macho (6-8mm) tiene una
bolsa copuladora en el extremo posterior con espculas. La hembra tiene un extremo
posterior afilado. En relacin al huevo, ste tiene la superficie lisa y, en su interior, 4-10
blastomeras.
El ciclo biolgico consiste en la entrada por va cutnea (heridas) y, a travs del sistema
linftico, llega al tubo digestivo donde pone los huevos, por lo que tambin se detectan
los huevos en las heces.

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5. ANISAKIS
Tiene labios anchos sin dentculos. Las hembras son ms grandes y los huevos
esfricos. El ciclo biolgico consiste en la ingesta de pescado cruda.

PRCTICAS 24 DIAGNSTICO NEMATODOS TISULARES.

1. TRICHINELLA SPIRALIS.
Este nematodo presenta una orbicular sin papilas y un esfago capilar con cloaca. Tanto
el macho como la hembra presentan los rasgos generales de los nematelmintos pero
cabe destacar que son vivparas (no se vern huevos).
La ingesta de los quistes hace que las larvas se liberen en el tubo digestivo. De ah, se
suelen diseminar pero con cierto tropismo hacia el msculo estriado (diafragma,
lengua). El organismo responde llevando a cabo una reaccin alrededor de la larva
con el objetivo de encapsularla y aislarla.

2. MICROFILARIA.
La entrada se realiza por la picadura de un vector y, de ah, va por el sistema linftico,
difundiendo por el resto del organismo. Sin embargo, se asienta en los vasos linfticos,
produciendo una obstruccin con su correspondiente edema que se conoce como
elefantiasis.

PRCTICAS 25: DIAGNSTICO DE TREMATODES.

En esta prctica, se va a ver a los Platelmintos (helmintos planos) que forman un
conjunto muy heterogneo desde el punto de vista biolgico. Tienen un cuerpo plano
limitado por un tegumento variable con una cavidad, parnquima laxo y diferentes
rganos con funciones del sistema nervioso, tubo digestivo o aparato genital.
Concretamente, se van a estudiar a los Trematodos o Disgnidos.

1. FASCIOLA.
Tiene una ventosa oral y otra
ventral al igual que el resto de
Trematodos. Presenta un tubo
digestivo en Y cerrado al final que
nos identifica la forma adulta.

F. Heptica. Cono ceflico

y forma folicea.
F. Buski. No cono ceflico.
Tanto ste como el anterior,
el tero tiene huevos.

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Las manifestaciones clnicas son hepatomegalia, eosinofilia, ictericia de intensidad

variable y posibles abscesos de dolor heptico. El diagnstico consiste en la deteccin
de huevos en la muestra. El tratamiento es triclabendazol y biotinol.

2. SCHISTOSOMA.
El gusano macho es grueso y
corto. Su superficie es rugosa y se
evagina en su forma central, dando
el canal ginecoforo. Cabe destacar
que los machos y las hembras son
iguales en todas las especies.
Produce la Schistosomiasis que se
pueden dividir en 2 fases:

a) Fase aguda.
Dermatitis por cercaria. Aparece 24-48 horas tras la inoculacin. Se caracteriza por
una lesin maculo-papular a veces con fiebre.
Fiebre de Katayama. Aparece de 2-4 semanas con una fiebre alta, eosinofilia,
hepatoesplenomegalia y urticaria.

b) Fase crnica.
Eschistomiasis urinaria (S. Haematobium). Produce disuria, hematuria (por rotura del
capilar tras la salida del huevo) y graves lesiones urinarias como estenosis uretral o
papilomas vesicales.
Eschistomiasis intestinal (S. Japonicum). Diarreas sanguinolentas y graves lesiones
como engrosamiento del colon con granulomas y papilomas intestinales.
En todas las patologas, se puede asociar una infeccin por Salmonella. En cuanto al
diagnstico, puede ser por visualizacin de los huevos en heces u orina o, bien,
mediante pruebas serolgicas. El tratamiento es el praziquantel.

RESUMEN
ESPECIE

HUEVOS

2 HUESPED

PATOLOGIA

F. Heptica

No operculado

Vegetales

Fasiolasis

F. Buski

No operculado

Vegetales

D. Intestinal

Clonorchis Sinensis

No operculado

Peces

Clonorquiosis

Paragonimus West.

No operculado

Cangrejos

Paragominiasis

S. Haematobium

Operculado

No

Bicharsiasis vesical

S. Mansonii
S. Japonicum

Operculado
Operculado

No
No

Bicharsiasis
intestinal

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PRCTICAS 25: DIAGNSTICO DE CESTODES.

1. TAENIA.
Los Cestodos son planos y

Segmentacin anterior que es la cabeza o esclex en

monoicos. A diferencia de los
trematodes, son segmentados y
la que tiene el rstelo y algunos ganchos. Tiene un
muy grandes.
cuello que es la zona metablicamente activa por la
que crece y, el resto, presenta el estrbilo formado
por anillos denominados proglotides las cuales son diferentes:

Sexualmente inmaduros. Prximos al cuello.

Sexualmente maduros. En la zona central y a cada lado est el poro genital.
Grvidos. Estructura final que contiene los huevos. Tiene un solo tero.

A travs de las heces, se liberan las progltides grvidas, pudiendo contaminar pastos.
De ah, puede llegar a los cerdos donde se forma la oncosfera que eclosiona y por va
hemtica llega a los msculos estriados, cardacos Tambin, puede ocurrir en vacas y
en el hombre, produciendo un parasitismo tisular y no intestinal.
Produce la teniasis y la cisticercosis. La primera suele ser asintomtica o con
manifestaciones digestivas mientras que la segunda destaca la Cistercosis Cellulosae
por T. Solium y otras con cierto tropismo por msculo o SNC. El diagnstico se realiza
mediante visualizacin de los huevos, anlisis de anillos, deteccin de antgeno

LONGITUD (m)
PROGLTIDES
ESCOLEX
VENTOSAS
ROSTELO
GANCHO
FORMA DE SALIR
POROS GENITALES
UNILATERALES
OVARIO
RAMAS UTERINAS

T. SOLIUM

T. SAGINATA

T. ASIATICA

2-8
700-1000
Armado
4
Presente
Doble corona

4-12
1000-2000
Inerme
4
Ausente
Ausente

4-8
200-1000
Inerme
4
Presente/ausente
Ausente

PROGLTIDES MADURAS
Pasivamente
Aislados
Alternancia
Alternancia regular
irregular
3
2
5-13
15-30

Aislados
ND
2
11-30

CICLO BIOLOGICO
HOSPEDADOR
DEFINITIVO
HOSPEDADOR
INTERMEDIARIO
UBICACIN GUSANO
ADULTO

Hombre

Hombre

Hombre

Cerdo, jabal,
hombre

Bvidos

Cerdos, bvidos,
hombre?

Duodeno

Duodeno-Yeyuno

ND

FUENTE DE
INFECCIN

Msc. esqueltico,
cardaco, cerebro,
vsceras

Msc. Esqueltico,
cardaco y vsceras

Hgado

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2. EQUINOCOCCUS GRANULOSUS.
Presentan un menor tamao. El rstelo y la ventosa son iguales que T. Solium. Adems
tiene un cuello y un estrbilo con 3 progltides: sexualmente inmadura, sexualmente
maduro y tero bilobulado. Este cestodo slo est presenta en el ser humano en su etapa
de quiste hidatdico.
El diagnstico es clnico, radiogrfico y serolgico. El tratamiento es quirrgico.