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UNIVERSIDAD POLITÉCNICA

DEL CENTRO

Alumnos: Ivana Clarisa Irineo Reyes, Cristell Alejandra Martínez,


José Escamilla

Materia: Fundamentos de Microbiología

CATÁLOGO DE MEDIOS

Matrícula: 004033,004028, 004041

Docente: Fanny Guadalupe Jáugueri González

Carrera: Ingeniería en Biotecnología

Grupo: 3-1

Fecha: 23 de junio de 2020


Índice

Introducción……………………………………………………….2
Universales …………………………………………………………4

Enriquecidos……………………………………………………….13

Selectivos……………………………………………………………24

Diferenciales……………………………………………………….32

De enriquecimiento……………………………………………44

Conclusión………………………………………………………..65

Referencias…………………………………………………………66

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Introducción
Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio (véase microbiología) que consta de
un gel o una solución que contiene los nutrientes necesarios para permitir, en
condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas. Según
lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones. Generalmente
se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya
preparados pueden encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido. El objetivo
último del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación.

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es


observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de
10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como: temperatura, grado de humedad y presión de
oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Existen rangos
de temperatura dónde la tasa máxima de crecimiento se encuentra entre 20 y 42 °C. A
esas bacterias se las conoce como mesófilas. 1Un medio de cultivo debe contener los
nutrientes mínimos para establecer un medio que contenga solamente los componentes
necesarios para el crecimiento2 y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante. (González Vega, M. E. (2012). El ñame (Dioscorea spp.). Características,
usos y valor medicinal. Aspectos de importancia en el desarrollo de su cultivo. Cultivos
tropicales, 33(4), 05-15.)

La primera vez que se utilizó los medios de cultivos fue cuando el micólogo Bretfel
consiguió cultivas y aislar esporas de hongos en medios solidos a base de gelatina, gracias
a que ese ambiente no era propicio para bacterias estas no pudieron contaminar el medio
de cultivo. No fue hasta el año 1878 en que Lister popularizó un método enfocado al
cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio líquido. Koch realizó sus
investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como soporte
nutritivo sólido, pero no tardó en recurrir al caldo de carne líquido, diseñado por

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Loeffler, al que, en 1881, añadió gelatina, logrando un medio sólido transparente ideal
para la observación de la morfología macroscópica de las colonias microbianas.

En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en relación
con los medios de cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el agar-agar
(polisacárido extraído de algas rojas) como solidificante. En 1887 un ayudante de Koch
llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se llaman desde entonces
placas de Petri, para sustituir a las clásicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas
que se usaban hasta entonces. (Ecured. (2009). Medio de Cultivo. 2020, de Ecured Sitio
web: https://www.ecured.cu/Medio_de_cultivo_(Microbiolog%C3%ADa))

Hoy en día a los medios de cultivos se les puede colocar diferentes ingredientes
pero los más importantes son el agua, las bases nutritivas, los carbohidratos, las sales
minerales, colorante o indicadores, factores de crecimientos, antibióticos (en algunos
casos) y lípidos, todos estos influyen de una gran forma al crecimiento de
microorganismos, pero si uno de ellos se encuentra en mayor cantidad de lo requerido
esto puede llegar a afectar mucho. (2016, Preparacion de medios de cultivo) Recuperado
de https://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf.

Cada uno de ellos tiene una función específica para poder ser útiles al momento del
cultivo y estos se clasifican de acuerdo a lo siguiente:

- Comunes o universales;
- Enriquecidos;
- Selectivos;
- Diferenciales;
- De enriquecimiento;
- De transporte.

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Universales
SU FINALIDAD ES EL CRECIMIENTO DE LA MAYOR PARTE DE LOS
MICROORGANISMOS POCO EXISTENTES. ES EL MEDIO MÁS
FRECUENTEMENTE UTILIZADO PARA MANTENER COLONIAS
MICROBIANAS. POR EJEMLO: AGAR COMÚN O CALDO COMÚN.

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CALDO CZAPEK-DOX MODIFICADO
USO:
Se usa comúnmente para el cultivo de hongos y Candida albicans. Es similar al agar
modificado de Czapek-Dox (Cat. 1015), sin el agar, y se utiliza para cultivar bacterias y
hongos que son capaces de usar nitrato de sodio como única fuente de nitrógeno.

MICROORGANISMOS
• Aspergillus saprófitos. Es un hongo filamentoso hialino, saprofito.
• Candida albicans. Es un hongo dimórfico.
• Staphylococcus aureus. Se caracteriza por: colonias lisas, brillantes y convexas.
• Bacillus subtilis. tienen forma de barra con bordes redondeados. Miden
aproximadamente 1 micra de ancho por 2-3 micras de largo.
• Saccharomyces cerevisiae. Es un microbio unicelular eucariota, de forma
globular, verde amarillento.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Sulfato ferroso 0,01
Cloruro potásico 0,5
Sacarosa 30
Nitrato de sodio 3
Glicerofosfato magnésico 0,5
Sulfato dipotásico 1
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 35 gramos de medio en un litro de agua destilada.
2. Mezclar bien y disolver calentando con agitación frecuente.
3. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo.
4. Dispensar en los recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121ºC durante
15 minutos.
5. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS Se presenta un color claro en el agar.

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CALDO DESTROSA Y PATATA
USO:
Es un medio liquido utilizado para cultivar hongos y levaduras clinicamente importantes
de alimentos y productos lacteos. Se puede complementar con acidos o antibioticos para
inhibir el crecimiento bacteriano, ademas del bajo pH que maneja.

MICROORGANISMOS
• Candida albicans. Es un hongo dimórfico.
• Aspergillus brasiliensis. Es un hongo productor de esporas que produce conidias
negras.
• Sacccharomyces cerevisiae. ES un microbio unicelular eucariota, de forma
globular, verde amarillento.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Dextrosa 20
Infusion de patatas 6.5
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 26.5 gramos del medio de un litro de agua destilada.
2. Mezclar bien y disolver calentando con agitacion frecuente.
3. Hervir durante un minuto hasta la disolucion completa.
4. Distribuir en recipientes apropiadas y esterilizar en autoclave a 121 C durante 15
minutos.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
El crecimiento de colonias fungicas se indica como turbidez. Se puede observar el
crecimiento de la superficie de los cultivos y la formacion de la pelicula.

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CALDO NUTRITIVO
USO:
El Caldo Nutritivo se utiliza para el cultivo general de una amplia variedad de
microorganismos que no sean muy exigentes nutricionalmente.

MICROORGANISMOS
• Enterobacter aerogenes. Bacteria Gram-negativa, La bacteria tiene una longitud
de aproximadamente 1-3 micras y es capaz de moverse a través de flagelos.
• Escherichia coli Bacilos Gram negativos, no esporulante.
• Salmonella typh. Son bacilos gram-negati vos, generalmente móviles por flagelos
perítricos.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Peptona de gelatina 5
Extracto de carne 3

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 8 gramos de medio en un litro de agua destilada.
2. Mezclar bien y disolver calentando con agitación frecuente.
3. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo.
4. Dispensar el medio en recipientes adecuados y esterilizar en autoclave a 121 ° C
durante 15 minutos.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Examinar los tubos para evaluar turbiedad.

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CALDO NUTRITIVO ESTÁNDAR I.
USO:
Es un medio adecuado para el cultivo de bacterias fastidiosas. Color del medio
deshidratado: beige. Color del medio preparado: ámbar.

MICROORGANISMOS
• Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae: Formado por cocos gram
positivos pertenecientes al filo firmicutes y al grupo de las bacterias ácido
lácticas. Estas bacterias crecen en cadenas o pares,
• Listeria monocytogenes: Bacteria que se desarrolla intracelularmente y es
causante de la listeriosis.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Dextrosa 1
Peptona 15
Cloruro sódico 6
Extracto de levadura 3
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

1. Suspender 25 gramos de medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y


disolver calentando con agitación frecuente.
2. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo.
3. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15
minutos.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Se observa una turbidez en el caldo si hayr precencia de microorganismos.

EL CALDO COLUMBIA
USO:
Se utiliza para el cultivo de microorganismos en general, ya que incluso los más
exigentes crecen en él.

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MICROORGANISMOS
• Neisseria meningitidis. Presencia de una cápsula polisacárida en la primera.
• Streptococcus pyogenes. Es una bacteria Gram positiva, normalmente anaerobia
facultativa, catalasa negativa, inmóvil, de forma esférica.
• Staphylococcus aureus. Colonias lisas, brillantes y convexas.
• Streptococcus pneumonia. Bacteria Gram positiva, normalmente anaerobia
facultativa, catalasa negativa, inmóvil, con forma ovalada, rodeada de una
cápsula

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Dextrosa 2,5
Sulfato ferroso 0,02
L-Cisteina clorhidrato 0,1
Mezcla de peptona 20
Carbonato sódico 0,6
Cloruro sódico 5
Sulfato magnésico anhidro 0,1
Digerido tríptico de corazón de ternera 3
TRIS hidroximetil aminometano HCL 2,86
TRIS aminometano 0,83
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 35 gramos del medio en un litro de agua destilada.
2. Mezclar bien y disolver por calentamiento agitando con frecuencia.
3. Hervir durante un minuto hasta su completa disolución.
4. Dispensar en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15
minutos.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Se observa turbidez en el medio y formación de burbujas con gases.

MEDIO LÍQUIDO SABOURAUD


USO:
Se emplea en procedimientos de prueba de esterilidad para
determinar la presencia de mohos, levaduras y microorganismos acidúricos.

MICROORGANISMOS
• Candida albicans. Es un hongo dimórfico.

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• Aspergillus brasiliensis. Es un hongo productor de esporas que produce conidias
negras.
• Escherichia coli. Bacilos Gram negativos, no esporulante.
• Lactobacillus casei. Los Lactobacillus casei se caracterizan por ser bacilos Gram
positivos, inmóviles y no forman esporas.
• Saccharomyces cerevisia. Es un microbio unicelular eucariota, de forma globular,
verde amarillento.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Dextrosa 20
Peptona de caseína 5
Peptona de carne 5
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 30 gramos de medio en un litro de agua destilada.
2. Mezclar bien y disolver por calentamiento agitando con frecuencia.
3. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo.
4. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121 ºC
durante 15 minutos.
5. NO SOBRECALENTAR, ya que el medio contiene altos niveles de
carbohidratos que pueden caramelizar (oscurecerse) y perder
efectividad.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Se presenta un color ámbar en el agar.

SABOURAUD GLUCOSA AGAR


USO:
Es un medio utilizado para aislamiento y
cultivo de hongos , con cloranfenicol y/o
gentamicina son medios selectivos para el
aislamiento de hongos de muestras clinicas
y no clinicas.

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MICROORGANISMOS
• Candida albicans. Es un hongo dimórfico.
• Saccharomyces cerevisiae. Es un microbio unicelular eucariota, de forma
globular, verde amarillento.
• Aspergillus niger. Es un hongo productor de esporas que produce conidias
negras.
• Penicillium roquefortii. Es un hongo Ascomycota de la familia Trichocomaceae
que se caracteriza, entre otros aspectos, por presentar conidióforos en forma de
cepillo
• Trichophyton mentagrophytes. Es uno de los tres hongos comunes que causan la
tiña en los animales de compañía.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Hidrolizado pancreatico de Caseina 5
Hidrolizado peptico de tejidos animales 5
Glucosa 40
Agar 15
Gentamicina 0,04
Cloranfenicol 0,4
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Licuar Sabouraud Dextrose Agar Deeps en tubos A mediante ebullicion en baño
Maria.
2. Enfrias a 45-50 C y verter en placas Petri.
3. Inocular muestrs representativas con los cultivos enumerados.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Las placas muestran colonias aisladas en las areas extendidas y crecimiento confluente
en areas de inoculacion densa. Se nota por el color y morgologia habitual es colonias
fungicas.

SPECIAL BAB. BLOOD AGAR BASE.


USO:
Medio de aislamiento rutinario con propiedades nutricionales excepcionales.

MICROORGANISMOS
• Haemophilus influenzae, anteriormente llamado bacilo de Pfeiffer o Bacillus
influenzae, son cocobacilos Gram-negativo no móviles descritos en 1892 por

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Richard Pfeiffer durante una pandemia de gripe. Es generalmente aerobio pero
puede crecer como anaerobio facultativo.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Mezcla de peptona seleccionada 21
Extracto de levadura 2
D-glucosa 0,5
NaCi 5
Sulfato de magnesio 0,045
Agar 10,5
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender arremolinando 39.0g de polvos en 1 litro de agua destilada o
desionizada. Autoclave a 121°C (15 p.s.i.) durante 15 minutos.
2. Enfriar a 50 C y mantener a esta temperatura en una cubeta.
3. Añadir el 5 a 7% de sangre destibrinada y estéril de caballo u oveja segun se
requiera.
4. Verter en las placas de cultivo (15 a 20ml en cada placa) y dejar solidificar.
5. Después de la preparación, las placas deben ser usadas inmediatamente o ser
conservadas en bolsas de plástico a 2 a 8°C durante máximo de una semana.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• Pseudomonas aeruginosa: Se observa crecimiento con pigmentación
• Haemophilus intluenzae: Crecimiento.

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Enriquecidos
ESTÁN COMPUESTOS DE UN MEDIO BASE COMO APOYO DEL
CRECIMIENTO AL CUAL SE LE PUEDE AGREGAR UN GRAN EXCESO
DE NUTRIENTES COMO SUPLEMENTOS NUTRITIVOS.

AGAR CHOCOLATE
USO:
El Agar Chocolate es un medio enriquecido no selectivo para cultivo y aislamiento de
microorganismos exigentes, especialmente Haemophilus spp de muestras clínicas y de
Neisseria.

MICROORGANISMOS
• Haemophilus spp, (influenzae) es un pequeño bacilo gram negativo inmóvil, que
no forma esporas, con requerimientos nutricionales exigentes, crece aeróbica o
anaeróbicamente

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• Neisseria, son diplococos, perteneciente a las proteobacterias beta, un gran
grupo de bacterias Gram-negativas.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Proteasa Peptona nº3 15
Hidrolizado de hígado 2, 5
Extracto de Levadura 5
Cloruro sódico 5
Agar 12
Factores de crecimiento 0,5
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 44 g del polvo en 1 litro de agua purificada.
2. Calentar con agitación frecuente y hervir durante un minuto para disolución
total.
3. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15
minutos. agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estéril (Britasheep) al
medio esterilizado, fundido y enfriado a 45-50 °C.
4. Calentar a 80 °C durante 10 minutos mezclando frecuentemente.
5. Dejar enfriar a 45-50 °C y distribuir en pla- cas de Petri estériles.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• Haemophilus influenzae Pequeñas colonias ( 1 mm) de aspecto perlado húmedo
y olor característico metálico
• Neisseria gonorrhoeae Pequeñas colonias mucoides de color blanco –grisáceo a
incoloras
• Neisseria meningitidis Colonias medias , mucoides y de color azul-grisáceo
• Granulicatella (Abiotrophia) adiacens* Pequeñas colonias de color gris-verdoso,
llegando a presentar un halo verdoso.

AGAR CHOCOLATE PARA LEVADURAS.


USO:
Es un tipo de agar sangre, en este caso la sangre se le ha aplicado un tratamiento de calor
para lisar los glóbulos rojos dándole una coloración más marrón, como de chocolate. Se
utiliza sobretodo para aislar a organismos levaduriformes.

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MICROORGANISMOS
• Organismos levaduriformes (Levaduras): son organismos unicelulares globosos,
ovales o alargados de 2 – 6 um. que presentan reproducción asexuada a través de
yemación, fisión binaria o procesos intermedios.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Proteasa Peptona nº3 15
Hidrolizado de hígado 2,5
Extracto de Levadura 5
Cloruro sódico 5
Agar 12
Factores de crecimiento 0,5
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Colocar los frascos cerrados en baño maría y calentar para fundir el medio de
cultivo sólido contenido en los mismos.
2. Enfriar entre 45-50 c, abrirlos y distribuir aproximadamente 15 ml en placas de
petri estériles.
3. Agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estéril.
4. Calentar a 80 c durante 10 minutos mezclando frecuentemente.
5. Dejar enfriar a 45-50 c y distribuir en placas de petri estériles.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Cualquier tipo de crecimiento debe compararse con los demás medios sembrados. En
muestras estériles es importante identificar los microorganismos aislados y muestras
que contengan flora microbiana. Observar el tipo de muestra y la flora patógena posible
a encontrar.

AGAR COLUMBIA BASE


USO:
Este es un medio de cultivo nutritivo que se utiliza para el crecimiento de diversos
microorganismos, al ser suplementado con sangre nos permite el crecimiento de hongos
y una clara visualizacion de las reacciones de hemólisis.

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MICROORGANISMOS
• Clostridium sporogenes .Es una especie de bacteria Gram-positiva, anaeróbica
en forma de bastón que produce endosporas subterráneas ovales y se encuentra
comúnmente en el suelo.
• Neisseria meningitidis. Gram-negativa, oxidasa-positiva, aeróbica, que
microscópicamente aparece como diplococos.
• Streptococcus pyogenes. Es una bacteria Gram positiva, normalmente anaerobia
facultativa, catalasa negativa, inmóvil, de forma esférica.
• Staphylococcus aureus. Colonias lisas, brillantes y convexas. Poseer un
endopigmento color amarillo- naranja a blanco porcelana color dorado al cual se
le conoce como ”aureus”.
• Campylobacter coli. Es un género de bacterias perteneciente a la familia. Las
especies de este género son bacilos Gram negativo con forma de coma y móviles
por la presencia de uno o dos flagelos polares.
• Streptococcus pneumoniae. s una bacteria Gram positiva, normalmente
anaerobia facultativa, catalasa negativa, inmóvil, con forma ovalada, rodeada de
una cápsula

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Peptona de carne 5
Tripteina 10
Extracto de levadura 5
Extracto de corazon 3
Almidón 1
Cloruro de sodio 5
Agar 15
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 44 g del polvo en 1 litro de agua purificada.
2. Calentar con agitacion frecuente y hervir durante un minuto de disolución total.
3. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121 C durante 15
minutos.
4. Agregar 5-10% de sangre ovina desfibrinada esterial al medio esterilizado,
fundido y enfriado a 45-50C
5. Homogenizar y distribuir en placas de Petri esteriles.

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INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
En este apartado deberá describir cómo se deben observar las colonias que se desarrollan
en el medio (puede incluir un par de imágenes como apoyo visualpara la descripción)

AGAR EXTRACTO DE MALTA


USO:
Medio utlizado para el cultivo y cuenta de hongos y levaduras. Contiene una alta
concentracion de maltosa y otros sacaridos que actuan como fuentes de energía.

MICROORGANISMOS
• Saccharomyces cerevisiae. Es un microbio unicelular eucariota, de forma
globular, verde amarillento.
• Candida albicans.Hongo dimórfico.
• Aspergillus brasiliensis. Cabezas conidiales de tonos negro, son globosas,
radiadas o divididas formando columnas de cadenas de conidios irregulares o
bien definidas

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Maltosa 12,75
Peptona 0,78
Glicerol 2,35
Dextrina 2,75
Agar bacteriológico 15
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 33.6 gramos del medio en un litro de agua purificada.
2. Mezclar bien y calentar con agitacion suave hasta su complleta disolucion y
hervir durante un minuto (no sobrecalentar).
3. Esterilizar en autoclave a 118 C durante 10 minutos.

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4. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50C y vaciar en recimientes apropiados
esteriles.
5. Calentar en baño maria el medio de cultivo para fundirlo.
6. Inocular de acuerdo a procedimientos internoss de laboratorio.
7. Incubar en condiciones aerobicas a 30+2 C.
8. Examinar de 18 a 24 o 72 horas.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Se presentaun enturbimiento en el color del agar.

AGAR INFUSIÓN CEREBRO


CORAZÓN (AGAR ICC)
USO:
Para el desarrollo de microorganismos exigentes como estreptococos y neumococos.
Color del medio preparado: Ámbar claro, ligeramente opalescente

MICROORGANISMOS
• El neumococo o Streptococcus pneumoniae es un microorganismo patógeno se
trata de una bacteria grampositiva de 1,2-1,8 µm de longitud, que presenta una
forma oval y el extremo distal lanceolado

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Agar bacteriológico 15
Infusión de corazón de vaca 10
Dextrosa 2
Fosfato disódico 2,5
Mezcla de peptona 10
Cloruro sódico 5
Infusión de cerebro de ternera 7,5

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INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 52 gramos del medio en un litro de agua destilada.
2. Mezclar bien y disolver con calor y agitación frecuente.
3. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo.
4. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Después de una incubación suficiente, las placas deben mostrar colonias aisladas en
áreas extendidas y crecimiento confluente en áreas de inoculación densa.

BASE DE AGAR SANGRE


CON TRIPTOSA
USO:
Medio altamente nutritivo especialmente desarrollado para preparar agar sangre que
mejora el desarrollo de organismos exigentes. Color del medio deshidratado, beige.
Color del medio preparado rojo cereza opaco.

MICROORGANISMOS
• Diplococo gram positivo de origen intestinal (Enterococcus). Clasificado como
Streptococcus del grupo D, en 1984 fue reclasificado en el género Enterococcus.
Pertenece a la familia Enterococcaceae, se han descrito 40 especies, de las que E.
faecalis y E. faecium son las aisladas con más frecuencia.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Agar bacteriológico 12
Extracto de carne 3
Cloruro sódico 5
Triptosa 10
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 30 gramos del medio en un litro de agua destilada.
2. Mezclar bien y disolver calentando con agitación frecuente.
3. Hervir durante un minuto.
4. Esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos.

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INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
1. Alfa-hemólisis: decoloración verdosa del medio.

2.Beta-hemólisis: zona clara rodeando a la colonia.

3.Gamma-hemólisis: sin cambios.

• Staphylococcus epidermidis Buen crecimiento Hemólisis: gamma


• Neisseria meningitidis Buen crecimiento Hemólisis (-)
• Streptococcus Buen crecimiento Hemólisis: beta
• Staphylococcus aureus Buen crecimiento Hemólisis: beta/gamma
• Streptococcus pneumoniae, Buen crecimiento Hemólisis: alfa

AGAR SANGRE PARA LEVADURAS


USO:
Es un medio enriquecido. Es la combinación de un agar nutritivo con sangre de
mamiferos a una concentración de 5-10%. Se usa para aislar principalmente
microorganismos como levaduras lipófilas

MICROORGANISMOS
• Levaduras lipófilas (Levaduras): El género Malassezia incluye levaduras lipófilas
que tienen como hábitat principal la piel de una gran variedad de mamíferos y
aves. Clásicamente se consideraba formado por dos especies, la especie
lipodependiente M. Furfur, característica de la piel del hombre y la especie no
lipodependientes M. Pachydermatis, asociada a los animales.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Infusión de músculo de corazón 375
Peptona 10
Cloruro de sodio 5
Agar 15
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 40 g del medio deshidratado en 1L de agua destilada.
2. Remojar entre 5-10 minutos.
3. Hervir durante un minuto.

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4. Los matraces deben taparse y colocarse directamente en autoclave.
5. Esterilizar a 121 c durante 20 minutos.
6. Enfriar entre 45-50 c añadir 5-10% de sangre desfibrinada estéril, homogeneizar
y vaciar en caja petri estéril.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• Hemólisis alfa: lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un halo de color
verdoso alrededor de la colonia de estudio.
• Hemólisis beta: lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante
alrededor de la colonia en estudio.
• Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El medio de cultivo no
presenta modificaciones de color y aspecto alrededor de la colonia de estudio.

MEDIO THAYER MARTIN MODIFICADO


USO:
Medio enriquecido para el aislamiento y cultivo selectivo para las especies Neisseria.
Medio preparado color marrón.

MICROORGANISMOS
• Neisseria es un género de bacterias, perteneciente a las proteobacterias beta, un
gran grupo de bacterias Gram-negativas. Las Neisseria son diplococos, que se
asemejan a granos de café al ser observados con el microscopio óptico

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Pluripeptona 15
Almidos 1
Fosfato dipotásico 4
Fosfato monopotásico 1
Cloruro de sodio 5
Agar 15
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
• Colocar los frascos de GC Agar Base (doble concentración) cerrados en baño
maría y llevar a ebullición para fundir el medio de cultivo sólido contenido en
los mismos.
• Una vez que se ha fundido el medio de cultivo, retirar cuidadosamente los
frascos del baño maría y dejar enfriar (temperatura aproximada 50 °C).

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• Cuando alcanzan esta temperatura, agregar por cada 50 ml de GC Agar Base
(doble concentración): 50 ml de solución de hemoglobina al 2%, 1 ml de Britalex
y 1 ml de la mezcla antimicrobiana V.C.N.T. reconstituidas tal como se indicó en
los pasos anteriores de estas instrucciones.
• Mezclar para homogeneizar.
• Distribuir en placas de Petri estériles y dejar solidificar. Importante: los
suplementos Britalex y V.C.N.T se agregan en concentración final al 1 % del
medio de cultivo.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Observar las características de las colonias. Las colonias de gonococos y meningococos
obtenidas en este medio selectivo son usualmente opa- cas, grisáceas, convexas, de 1-4
mm de diámetro. Luego de 48 horas de incubación pueden transformarse en colonias
mucoides.

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Selectivos
ESTE TIPO DE MEDIO SÓLO PERMITE EL CRECIMIENTO DE UN
GRUPO DE MICROORGANISMOS E INHIBIENDO EL DE OTROS. SE
UTILIZA PARA SELECCIONAR Y AISLAR MICROORGANISMOS A
PARTIR DE POBLACIONES MIXTAS.

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AGAR CNA (COLISTINA, ÁCIDO NALIDÍXICO)
USO:
Es un medio selectivo para bacterias Gram (+). Se usa también con frecuencia para
reacciones hemolíticas. Este medio se usa para el análisis de muestras de flora mixta,
como muestras genitales u orifaríngeas.

MICROORGANISMOS
• Es un medio selectivo especial para aislamiento de bacterias Gram positivas
como Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus y levaduras, pero inhibe el
desarrollo de bacterias Gram negativas como Pseudomonas y especies de la
familia Enterobacteriaceae.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Agar bacteriologico 15
Extracto de carne 3
Mezcla de peptona 20
Sulfato colistina 0.01
Fécula de maiz 1
Ácido nalidixico 0.015
Cloruro sódico 5
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Suspender 44 gramos del medio en un litro de agua destilada.
2. Mezclar bien y disolver calentando con agitación frecuente.
3. Hervir durante un minutohasta disolver por completo.
4. Esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos.

EVITAR EL SOBRECALENTAMIENTO. Enfriar a 45-50 °C y agregar asépticamente 5-


10% de sangre de oveja desfibrinada estéril, homogenizar suavemente y verter en placas
de Petri. Tener cuidado para evitar la formación de burbujas al agregar la sangre.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• Sin hemólisis: no hay cambio de color del medio alrededor de la colonia.
• Hemólisis: zona verdosa con contornos borrosos alrededor de la colonia.
• Hemólisis: zona transparente con contornos bien definidos alrededor de la
colonia.

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Agar Desoxicolato Citrato
USO:
Medio selectivo moderado y diferencial para el aislamiento de patógenos entéricos.

MICROORGANISMOS
Es diseñado especialmente para Salmonella y muchas especies de Shigella.

INGREDIENTES/FÓRMULA (GRAMOS POR LITRO)


Extracto de carne 10
Peptona de carne 5
Lactosa 10
Citrato Sódico 20
Tiosulfato sódico 5
Citrato Férrico 1
Desoxicolato Sódico 5
Rojo neutro 0,02
Agar-Agar 13,5
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1. Disolver 69,5 gramos en 1 litro de agua bidestilada.
2. Agitar calentando hasta ebullición.

No Autoclavar! No sobrecalentar! El color final del medio es rosa pálido, traslúcido, con
un fino precipitado de desoxicolato. No refundir!

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• Colonias rosas-rojas, con o sin centro negro: Escherichia, Enterobacter,
Klebsiella.
• Colonias incoloras, con o sin centro negro: Salmonella, Proteus.
• Colonias incoloras sin centro negro: Shigella, Pseudomonas.

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AGAR LACTRIMEL
USO:
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de hongos patógenos de lesiones o
infecciones superficiales de piel, cabello y/o uñas.

MICROORGANISMOS
• En Candida albicans 10231 Colonias de pequeñas a medianas, color blanco a
crema; zonas de amarillo medio o rojo en el medio alrededor de las colonias
• Trichophyton mentagrophytes9533 Moderado a denso. Colonias blancas
esponjosas, zonas rojas en el medio alrededor de las colonias
• Trichophyton equinum 22443 Moderado a denso Colonias blancas esponjosas,
zonas rojas en el medio alrededor de las colonias
• Aspergillus niger 16404 Inhibición de parcial a completa
• Saccharomyces cerevisiae 9763 Inhibición completa
• Escherichia coli 25922 Inhibición parcial a completa
• Pseudomonas aeruginosa 10145 Inhibición parcial a completa
• Staphylococcus aureus 25923 Inhibición parcial a completa

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Miel 10
Harina de trigo 10
Dextrosa 40
Leche descremada 14
Cloranfenicol 0,05
Agar 15
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
Mezclar todos los ingredientes y calentar a fuego lento hasta hervir. Esterilizar la mezcla
a 120°C durante 15 min.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• En Candida albicans: color blanco a crema; zonas de amarillo medio o rojo en el
medio alrededor de las colonias
• Trichophyton mentagrophytes: Colonias blancas esponjosas, zonas rojas en el
medio alrededor de las colonias T

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• Trichophyton equinum: Colonias blancas esponjosas, zonas rojas en el medio
alrededor de las colonias

Agar manitol salado


USO:
Este agar se utiliza para el aislamiento de estafilococos a partir de muestras clínicas, de
cosméticos y de pruebas de límite microbiano.

MICROORGANISMOS
Nos facilita el aislamiento de Staphylococcus aureus. Este medio posee una alta
concentración de cloruro de sodio que inhibe el crecimiento de la mayoría de las
bacterias.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Extracto de carne bocina 1.0
Digerido pancreático de caseína 5.0
Digerido péptico de tejido animal 5.0
Cloruro sódico 75.0
D-manitol 10.0
Rojo fenol 0-025
Agar 15.0
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

Suspender 111 g del polvo en 1 litro de agua purificada. reposar 5 minutos y calentar con
agitación frecuente, llevando a ebullición durante 1 o 2 minutos para disolución total.
distribuir en recipien-tes apropiados y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15
minutos.Enfriar y distribuir en placas de Petri estériles.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• En Microorganismos fermentadores de manitol: colonias de color amarillo
rodeadas o no de un halo amarillo.

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• Microorganismos no fermentadores de manitol: colonias del color del medio,
rojas rodeadas o no de halo rojizo-púrpura.

AGAR ROSA BENGALA+ CLORANFENICOL


USO:
Para el cultivo y aislamiento selectivo de hongos y levaduras. Color: rosa intenso. pH:
7,2±0,2

MICROORGANISMOS
• Aspergillus niger ATCC 1015 Buen crecimiento
• Candida albicans ATCC 10231 Buen crecimiento
• Escherichia coli ATCC 25922 Crecimiento inhibido

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Agar bacteriológico 15
Cloranfenicol 0,1
Sulfato magnésico 0,5
Rosa bengala 0,05
Peptona bacteriológica 5
Dextrosa 10
Fosfato potásico 1
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
Suspender 31,6 gramos de medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver
con calor y agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo.
Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 45-50 ºC, mezclar bien y
dispensar en placas.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• Aspergillus niger: Micelio blanco, esporas negras

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• Candida albicans: Colonia rosa, plana, voluminosa

Mac Conkey Agar


USO:
Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias gram negativas que
pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).

MICROORGANISMOS
Es diseñado para aislar selectivamente bacilos Gram negativos y entéricos (encontrados
normalmente en el tracto intestinal) y diferenciarlos sobre la base de la fermentación de
la lactosa.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Agar bacteriologico 15 Sales biliares 1.5
Cristal violeta 0.001 Peptona de gelatina 17
Lactosa 10 Rojo neutro 0.03
Mexcla de peptona 3 Cloruro sódico 5

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
Suspender 50 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 minutos. Calentar con
agitación frecuente y llevar a ebullición 1 a 2 minutos hasta disolver completamente.
Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15
minutos

.INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

• En Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias rosadas-rojizas. Puede


observarse halo de precipitación biliar.

PÁGINA 29
• Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio,
incoloras.

OGYE AGAR
USO:
Medio sólido para la detección y recuento de hongos (mohos y levaduras) a partir de
muestras de alimentos, formulado según normas ISO. pH final: 7,2 ± 0,2. Color:
Amarillo.

MICROORGANISMOS
• En Aspergillus niger: Correcto, Colonias algodonosas, amarillas en 3 días, negras
y esporuladas en 5 días. PR > 0,5, en concreto >50-150% de colonias respecto al
número de ufc certificadas e inoculadas en SDA ya validado.
• Penicillium aurantiogriseum: Correcto. PR > 0,5, en concreto >50-150% de
colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en SDA ya validado
• Candida albicans: Correcto. PR > 0,5, en concreto >50-150% de colonias respecto
al número de ufc certificadas e inoculadas en SDA ya validado
• Saccharomyces cerevisiae: Correcto. PR > 0,5, en concreto >50-150% de colonias
respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en SDA ya validado.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Extracto de levadura 5
D(+)Glucosa 20
Oxitetraciclina 0,10
Gentamicina 0,05
Agar 15

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INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1.- Disolver 45 g en 1 litro de agua destilada, llevar a ebullición y agitar para su completa
disolución.

2.- Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.

3.- Enfriar a 50 ºC aprox. y añadir asépticamente 100mg/litro de oxitetraciclina


esterilizada por filtración.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO


EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITEEL BOTE ANTES DE USAR.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Contar las levaduras (colonias no filamentosas) y los mohos (colonias filamentosas).

SABOURAUD DEXTROSE CAF AGAR


USO:
Medio de uso muy extendido para el aislamiento y recuento
de hongos (levaduras y mohos) en la industria alimentaria. pH final: 5,6 ± 0,2. Color:
Ámbar, ligeramente opalescente.

MICROORGANISMOS
• En Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.
• E.coli MKTA 25922, Inhibido.
• Aspergillus niger MKTA 16404, Correcto, Colonias negras y esporuladas en 5
días. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 73-475 %, pero de forma
selectiva.
• Saccharomyces cerevisiae MKTA 9763, Correcto. Con respecto a PCA
estandarizado*, recuento 95-170 %, pero de forma selectiva.
• Candida albicans MKTA 10231, Excelente. Con respecto a PCA estandarizado*,
recuento medio 122-144 %, pero de forma selectiva.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Agar bacteriológico 15
Cloranfenicol 0,5
Dextrosa 40
Mezcla de peptona 10

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1.- Suspender 65,5 gramos del medio en un litro de agua destilada.

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2.- Mezclar bien y disolver calentando con agitación frecuente.

3.- Hervir durante un minuto hasta disolver por completo.

4.- Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 118-121 ºC durante 15


minutos.

EVITAR EL SOBRECALENTAMIENTO, ya que facilita la hidrólisis de los componentes.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Las levaduras aparecen como colonias no filamentosas, a menudo mucosas. Los mohos
crecen con colonias filamentosas y de margen difuso.

Diferenciales
ON MEDIOS DE CULTIVOS QUE NOS PERMITEN DISTINGUIR ENTRE
VARIOS GÉNEROS Y ESPECIES DE MICROORGANISMOS

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AGAR CROMOGÉNICO CANDIDA
USO:
Medio cromogénico diferencial y selectivo para el aislamiento e identificación rápida de
Candida spp. de importancia clínica. pH: 6.1. Color: Ámbar claro, ligeramente
opalescente.

MICROORGANISMOS
• En Candida albicans: Buen crecimiento, colonia verde.
• Candida tropicalis: Buen crecimiento, colonia azul
• Candida krusei: Buen crecimiento, colonia morado.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Glucosa 20
Cloranfenicol 0,5
Peptona 10
Agar bacteriológico 15
Mezcla cromogénica 0,4

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1.- Suspender 45,9 gramos del medio en un litro de agua destilada.

2.- Mezclar bien y disolver calentando con agitación frecuente.

3.- Hervir durante un minuto hasta disolver por completo.

EVITAR SOBRECALENTAR. NO AUTOCLAVAR. Dispensar en placas de Petri.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Si están presentes PA-257480.05 - 3 - especies de Candida, las colonias presentarán un
color verde de claro a mediano (C. albicans), rosado claro a rosa con un borde blancuzco
(C. krusei) o bien azul verdoso a azul metálico con o sin halos violetas (C. tropicalis).
Otras especies de Candida y otras levaduras presentan un color malva de claro a oscuro
(rosado a violeta) o, si no se utilizan sustratos cromógenos, presentarán su color natural
de colonias (de crema a blanco).

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AGAR DIFERENCIAL ACETATO
USO:
Se emplea para la diferenciación de Shigella de E. coli y bacilos Gram negativos no
fermentativos. Así como, para evaluar la capacidad de un organismo para usar el acetato
como única fuente de carbono.

MICROORGANISMOS
La mayoría de las bacterias pueden usar citrato y acetato con la presencia de nitrógeno
orgánico. Agar Citrato de Simmons fue elaborado por Simmons para medir el uso de
citrato sin la presencia de nitrógeno orgánico. Trabulsi y Ewing reemplazaron el citrato
de sodio por acetato de sodio en su formulación del Agar Diferencial Acetato. Los
cultivos típicos de Shigella no pueden usar acetato y no pueden crecer; por lo tanto, el
medio permanece sin cambios.

La mayoría de Escherichia coli crece bien dentro de las 24-48 horas, pero algunas cepas
crecen más lento y pueden dar una reacción falsa negativa si los resultados se observana
las 24-48 horas solamente. El crecimiento es indicativo del uso de Acetato.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

Azul de bromotimol 0.08 Agar bacteriológico 20

Sulfato magnésico 0.1 Fosfato monoamónico 1

Acetato de sodio 2 Cloruro sódico 5

Hidrogenofosfato de potasio 1

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
Suspender 29 gramos de medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver
con calor y agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta disolver
completamente. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos Enfriar a 50 ºC,
mezclar bien y dispensar en recipientes apropiados.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Microorganismos Especificaciones Reacción característica

Escherichia coli ATCC 25922 Buen crecimiento Color Azul en el medio

Shigella sonnei ATCC 25931 Inhibición

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AGAR HARINA DE MAÍZ
USO:
Se utiliza en el cultivo y diferenciación de especies de Candida basándose en las
características miceliales. El Tween 80 se incorpora para demostrar la formación de
clamidoconidias

MICROORGANISMOS
• En Aspergillus niger MKTA 16404, Correcto, Colonias negras y esporuladas en 5
días.
• Candida albicans MKTA 10231, Correcto.
• Saccharomyces cerevisiae MKTA 9763, Correcto.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Agar bacteriológico 15
Infusión de harina de maíz 2

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
Suspender 17 gramos de medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver
calentando con agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta disolver por
completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC durante 15 minutos. Enfriar a 50ºC, mezclar
bien y dispensar en placas de Petri.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• Candida albicans: Clamidosporas (+)
• Aspergillus brasiliensis: Clamidosporas (-)
• Saccharomyces cerevisiae : Clamidosporas (-)

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AGAR HIERRO Y TRIPLE HELICASA (TSI)
USO:
Se emplea para la identificación y diferenciación de Enterobacteriaceae. Es un medio
diferencial utilizado para diferenciar las enterobacterias Gram-negativas entéricas
basado en la fermentación de carbohidratos y la producción de H2S

MICROORGANISMOS
La mezcla de peptona y el extracto de carne proporcionan nitrógeno, vitaminas,
minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. El extracto de levadura es una
fuente de vitaminas, particularmente del grupo B. TSI contiene tres carbohidratos
(dextrosa, sacarosa y lactosa) como fuentes de carbono y energía. Cuando se fermentan,
la producción de ácido se indica mediante el indicador rojo de fenol, siendo el color
amarillo para la producción de ácido y rojo para la alcalinización. El tiosulfato de sodio
se reduce a sulfuro de hidrógeno, que reacciona con la sal de hierro para dar el sulfuro
de hierro de color negro. El citrato de amonio férrico es un indicador de H2S. El cloruro
de sodio suministra electrolitos esenciales para el transporte y el equilibrio osmótico. El
agar bacteriológico es el agente solidificante.

El modo de acción es similar a Kligler Iron Agar que contiene dos azúcares. La adición
de sacarosa al 1% en TSI Agar permite diferenciar entre Proteus y Salmonella. La
fermentación de la sacarosa por Proteus convierte el color del indicador rojo de fenol en
la superficie inclinada de rojo a amarillo. Los miembros dextrosa positivos y lactosa
negativos del género Salmonella causan enrojecimiento de la superficie inclinada y
acidifican las profundidades de los tubos de agar.

La presencia de salmonelas se confirma provisionalmente si en la inoculación profunda,


pero no en el cultivo de superficie, hay un cambio de color de rojo a amarillo y,
generalmente, una formación de gas, con o sin producción de sulfuro de hidrógeno en
el agar. La confirmación precisa puede llevarse a cabo mediante las pruebas bioquímicas
y serológicas apropiadas.

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INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)
Agar bacteriológico 12 Citrato de amonio férrico 0.3

Glucosa monohidratado 1 Extracto de carne 3

Rojo fenol 0.025 Cloruro sódico 5

Tiosulfato de sodio 0.3 Sacarosa 10

Extracto de levadura 3 Lactosa monohidrato 10

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
Suspender 64,6 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver
con calor y agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta disolver
completamente. Dispensar en tubos y esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15
minutos. Deje enfriar en una posición inclinada para obtener fondos de 1,5-2,0 cm.
profundidad.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Observar el color del medio de cultivo y la producción de gas: 1- Superficie
alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente
fermenta la glucosa. 2- Superficie ácida/Profundidad ácida (pico amarillo/fondo
amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sa-carosa. 3- Superficie
alcalina/Profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azúcares. 4- La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo
indican que el microorganismo produce gas. 5- El ennegrecimiento del medio indica que
el microorganis-mo produce ácido sulfhídrico.

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AGAR LISINA HIERRO
USO:
Para estudios de la descarboxilación de lisina para la rápida diferenciación de Salmonella
arizonae.

MICROORGANISMOS
• En Shigella flexneri ATCC 12022 Buen crecimiento Plano inclinado rojo-morado,
• Salmonella arizonae ATCC 13314 Buen crecimiento Plano inclinado rojo-morado,
• Salmonella typhimurium ATCC 14028 Buen crecimiento Plano inclinado rojo-
morado,
• Escherichia coli ATCC 25922 Buen crecimiento Plano inclinado rojo-morado,
• Proteus mirabilis ATCC 25933 Buen crecimiento Plano inclinado rojo oscuro,
• Citrobacter freundii ATCC 8090 Buen crecimiento Plano inclinado rojo-morado,

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Agar bacteriológico 13.5
Dextrosa 1
Peptona de gelatina 5
Tiosulfato de sodio 0,04
Púrpura de bromocresol 0,02
Citrato de amonio férrico 0,5
L-lisina 10
Exracto de levadura 3
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
Suspender 33 gramos de medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver
calentando con agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta disolver por
completo. Dispensar en tubos y esterilizar en autoclave a 121 ° C durante 12 minutos.
Dejar enfriar en posición inclinada.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• En Shigella flexneri ATCC 12022 Buen crecimiento Plano inclinado rojo-morado,
Fondo amarillo, H2S (-)
• Salmonella arizonae ATCC 13314 Buen crecimiento Plano inclinado rojo-morado,
Fondo rojo-morado, H2S (+)
• Salmonella typhimurium ATCC 14028 Buen crecimiento Plano inclinado rojo-
morado, Fondo rojo-morado, H2S (+)
• Escherichia coli ATCC 25922 Buen crecimiento Plano inclinado rojo-morado,
Fondo rojo-morado, H2S (-)
• Proteus mirabilis ATCC 25933 Buen crecimiento Plano inclinado rojo oscuro,
Fondo amarillo, H2S (-)
• Citrobacter freundii ATCC 8090 Buen crecimiento Plano inclinado rojo-morado,
Fondo amarillo, H2S (+)

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AGAR UREA DE CHRISTENSEN
USO:
Se utiliza en la identificación de algunos dermatofitos, especialmente Trichophyton
rubrum de Trichophyton mentagrophytes y de algunas levaduras ( C. neoformans).

MICROORGANISMOS
• Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Buen crecimiento Ureasa (-): sin cambio de
color o amarillo
• Proteus vulgaris ATCC 13315 Buen crecimiento Ureasa (+): medio rojo o morado
• Klebsiella pneumonieae ATCC 13883 Buen crecimiento Ureasa (+): medio rojo o
morado
• Salmonella typhimurium ATCC 14028 Buen crecimiento Ureasa (-): sin cambio
de color o amarillo
• Escherichia coli ATCC 25922 Buen crecimiento Ureasa (-): sin cambio de color o
amarillo
• Tricophyton rubrum Ureasa (-)
• Tricophyton raubitscheckii (ureasa positiva
• Tricophyton kanei (ureasa positiva débil
• Tricophyton mentagrophytes (ureasa positiva

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Dextrosa 1
Agar bacteriológico 15
Peptona de gelaina 1
Fosfato monopotásico 2
Rojo fenol 0,012
Cloruro sódico 5

PÁGINA 39
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
Disolver 24 gramos del medio en 950 ml de agua destilada. Esterilizar en autoclave a 121
ºC durante 15 minutos. Enfriar a 50 ºC y agregar 50 ml de la Solución de Urea al 40%
(Cat. 5100). Mezclar bien y dispensar asépticamente en tubos estériles. Dejar que el
medio se solidifique en una posición inclinada para obtener fondos profundos. No
sobrecalentar y no volver a fundir el agar inclinado

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Las cepas ureasa positivas hacen virar en pocos días el indicador de pH, adquiriendo el
medio de cultivo un color rojizo. T. rubrum está considerado como un complejo de
especies. Un bajo porcentaje de cepas pertenecientes a esta especie se citan como ureasa
positivas. Para algunos autores estas cepas se podrían corresponder con las especies de
este complejo: T. raubitscheckii (ureasa positiva) y T. kanei (ureasa positiva débil. T.
mentagrophytes (ureasa positiva) y T. rubrum (ureasa negativa).

DERMATOPHYTE TEST MEDIUM


USO:
Medio de cultivo sólido, selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento e
identificación presuntiva de dermatofitos. Color: naranja. pH: 5.5

MICROORGANISMOS
• En Candida albicans: Buen crecimiento, colonia verde.
• Tricophyton mentagrophites: Buen crecimiento, colonia azul
• Tricophyton rubrum: Buen crecimiento, colonia morado.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)


Peptona de soja 10
Dextrosa 10
Cicloheximida 0,5
Clortetraciclina 0,1
Gentamicina sulfato 0,1
Rojo fenol 0,2
Agar-agar 15

PÁGINA 40
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
1.- Suspenda 40.7 g del medio en un litro de agua purificada.

2.- Caliente con agitación frecuente e hierva durante un minuto para disolver
completamente el medio.

3.- Autoclave a 121°C durante 15 minutos.

4.- Enfríe a 50°C y añada asépticamente gentamicina (0.1 g/L) y clortetraciclina (0.1 g/L).

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
• En Trichophyton mentagrophytes Colonias blancas esponjosas, zonas rojas en el
medio alrededor de las colonias
• Trichophyton equinum Colonias blancas esponjosas, zonas rojas en el medio
alrededor de las colonias
• Candida albicans ATCC 10231 Colonias de pequeñas a medianas, color de blanco
a crema; zonas de amarillo medio o rojo en el medio alrededor de las colonias

SANGRE AGAR BASE


USO:
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de numerosos microorganismos. Al ser
suplementado con sangre ovina, permite el crecimiento de microorganismos
nutricionalmente exigentes y la clara visualización de reacciones de hemólisis.

MICROORGANISMOS
La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo,
que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos
nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar
es el agente solidificante. El agregado de 5-10 % sangre ovina desfibrinada estéril
promueve el desarrollo de bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales y la
adecuada observación de las reacciones de hemólisis.

PÁGINA 41
INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)
Infusión de músculo de corazón 375
Peptona 10
Cloruro de sodio 5
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:
Suspender 40 g del polvo en 1 litro de agua purificada. dejar reposar 5 minutos y mezclar
perfectamente hasta obtener una suspen-sión homogénea. Calentar con agitación
frecuente y hervir 1 minuto para disolución total. Esterilizar a 121 ºC durante 20 minutos.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Observar las características de las colonias: Para el medio de cultivo conteniendo sangre,
observar las reacciones de hemólisis: Hemólisis alfa: lisis parcial de los glóbulos rojos. Se
observa un halo de color verdoso alrededor de la colonia en estudio. Es debido a la
oxidación de la hemoglobina a metahemoglobina (compuesto de color verdoso) por el
peróxido de hidrógeno generado por los microorganismos. Hemólisis beta: lisis total de
los glóbulos rojos. se observa un halo claro, brillante alrededor de la colonia en estudio.
Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El medio de cultivo no presenta
modificaciones de color y aspecto alre-dedor de la colonia en estudio

PÁGINA 42
De Enriquecimiento
SON MEDIOS LÍQUIDOS QUE CONTIENEN UN AGENTE QUE INHIBE
LAS ESPECIES NO DESEADAS PERO QUE FAVORECE EL
CRECIMIENTO IRRESTRICTO DEL AGENTE INFECCIOSO

PÁGINA 43
AGAR CLED
USO: EL AGAR CLED ES UN MEDIO DE CULTIVO NO INHIBITORIO
USADO EN EL AISLAMIENTO Y DIFERENCIACIÓN DE ORGANISMOS
URINARIOS. AL SER DEFICIENTE EN ELECTRÓLITOS, PREVIENE DEL
CRECIMIENTO EXAGERADO DE LAS ESPECIES DE PROTEUS. LA
CISTINA PROMUEVE LA FORMACIÓN DE COLONIAS ENANAS
DEPENDIENTES DE CISTINA. LOS FERMENTADORES DE LACTOSA
PRODUCEN COLONIAS AMARILLAS EN EL AGAR DE CLED; LAS NO
FERMENTADORAS DE LACTOSA DAN COLONIAS AZULES. TIENE UN
PH APROXIMADO DE 7.3.

MICROORGANISMOS

Organismos levaduriformes (Levaduras): son organismos unicelulares globosos, ovales


o alargados de 2 – 6 um. que presentan reproducción asexuada a través de yemación,
fisión binaria o procesos intermedios. Algunas levaduras forman pseudomicelios, que
son brotes que continúan unidos a la célula madre formando cadenas con constricciones
completas sin unidad citoplasmática. Las levaduras se desarrollan a temperaturas
óptimas entre 25 y 30°C y forman colonias lisas, de textura húmeda, cremosas o
membranosas (sin hifas aéreas) semejantes a las bacterias.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

• Peptona (4g/l(
• Polvo "Lab Lemco" (3g/l(
• Triptona (4g/l(
• Lactosa (10g/l)
• L-Cistina (128 mg/l)
• Azul de bromotimol (20 mg/l)
• Agar No. 1 (15g/l)
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

1. En una fiola con un litro de agua destilada disuelva 36,2 gr de agar CLED en
polvo. Después de 5 minutos de reposo, caliente el agar resuspendido,
mezclando constantemente hasta dejar hervir por 1 minuto.
2. Luego esterilizar a 121°C por 15 minutos en el autoclave. Culminado el tiempo, se
retira del autoclave y se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45°C.
Posteriormente se sirve entre 15 – 20 ml en cada placa de Petri estéril.
3. El procedimiento de servido de las placas se debe llevar a cabo dentro en una
campana de flujo laminar o frente al mechero de Bunsen para evitar su
contaminación.
4. Las placas servidas se dejan solidificar, se ordenan en un portaplaquero de forma
invertida y se guarda en nevera (2-8°C) hasta su uso.
5. El pH final del medio preparado debe quedar en 7,3 ± 0,2.

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INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

A las colonias crecidas en agar CLED se le deben hacer un Gram y dependiendo de las
características morfotintoriales del microorganismo se realiza un determinado
subcultivo. Si se observan levaduras se sembrará sobre un agar Sabouraud.

Figura 5. Colonias lactosa


fermentadoras (amarillas)
y NO
fermentadoras (azul)
Figura 4. Preparación de agar CLED
Agar Sabouraud
USO: El agar Sabouraud es un medio de cultivo que por sus características funciona
como medio de enriquecimiento para hongos y que en caso de contener cloranfenicol u
otro antibiótico, se convierte en un medio selectivo para los mismos. El medio contiene
peptonas1 y una elevada concentración de glucosa que favorece el crecimiento de los
hongos sobre las bacterias. Es utilizado para el cultivo de hongos, especialmente
dermatofitos, aunque también pueden desarrollarse en él cierto tipo de bacterias
filamentosas tales como Nocardia.

MICROORGANISMOS

Levaduras: Se llama levadura o fermento a un conjunto diverso de hongos, por lo general


microscópicos y unicelulares, capaces de iniciar los procesos de descomposición
(fermentación) de distintas sustancias orgánicas. La fermentación es el proceso que este
tipo de hongos lleva a cabo para obtener energía, y por lo general puede ser de dos tipos
distintos, de acuerdo al subproducto obtenido.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

• 40 g/L glucosa
• 10 g/L pluripeptona
• 15 g/L agar-agar
• 0,05 g/L [cloranfenicol]
• pH 5.6 como máximo

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

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1. Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada.
2. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver
completamente los ingredientes.
3. Evitar el sobrecalentamiento.
4. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos.
5. Distribuir y enfriar a temperatura ambiente antes de su utilización.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Los mohos aparecen con colonias filamentosas y las levaduras y bacterias con colonias
no filamentosas.

El bajo pH del medio resulta favorable para el crecimiento de los hongos y ligeramente
inhibitorio para las bacterias. En caso de requerirse un incremento en la inhibición del
crecimiento de bacterias, se recomienda añadir agentes antimicrobianos como la
gentamicina que inhibe el crecimiento de los microorganismos gram negativos o el
cloramfenicol que tiene un amplio espectro de acción.

Figura 6. Formación de Candida


albicans, levadura oportunista en
mucosas.

Figura 7. Rhodotorula glutinis


(rosa) y Penicillium candidum
(blanco) vistos por debajo.

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Base de Caldo Muller-Kauffmann
USO: Para el enriquecimiento selectivo de Salmonella a partir de carnes y otros
alimentos. La Base de Caldo Muller-Kauffmann es un caldo selectivo
recomendado para aislar Salmonella de heces de animales, aguas residuales
contaminadas, alimentos, leche, helados y productos pasteurizados a base de
huevo. El empleo de más de un caldo selectivo aumenta el aislamiento de
Salmonella a partir de muestras con múltiples tipos de sero.

Color del medio deshidratado: Beige. Color del medio preparado: Verde claro con
precipitado blanco.

MICROORGANISMOS

Salmonella del Orden Enterobacteriales y la Familia Enterobacteriaceae. Sus miembros


son bacilos Gram negativos, generalmente móviles por flagelos peritricos (excepto S.
Gallinarum), anaerobios facultativos no encapsulados y no esporulados.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

Extracto de carne 0,9

Carbonato cálcico 25

Peptona de carne 4,5

Bilis de buey 4,75

Cloruro sódico 4,5

Tiosulfato de sodio 40,7

Extracto de levadura 1,8

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

Suspender 82 gramos de medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver


calentando brevemente con agitación frecuente y enfriar rápidamente. EVITAR EL
SOBRECALENTAMIENTO. NO AUTOCLAVAR. Quedará un sedimento de carbonato
cálcico. Agregar asépticamente 20 ml/L de solución de Yodo y 10 ml/L de Solución de
Verde Brillante al 0,1%. Distribuir en tubos o matraces después de homogeneizar el
posible precipitado. Una vez agregado, NO RECALENTAR. Utilizar en el medio el mismo
día en que se produce.

PÁGINA 47
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

Depende del tipo de salmonella, va a tornarse el color del caldo, como se puede
observar en la presente imagen:

Condalab. . Consultado el 20 de junio de 2020. URL:.

Caldo de Enriquecimiento GN (Hajna).

USO: Caldo de Enriquecimiento GN (Hajna) fue desarrollado por Hajna para el


enriquecimiento selectivo de microorganismos entéricos Gram-negativos. GN significa
Gram-negativo. Está destinado para su uso en la detección de Salmonella spp. y Shigella
spp. de muestras clínicas y no clínicas. Color del medio deshidratado: Crema. Color del
medio preparado: ambar.

MICROORGANISMOS

BACTERIAS INTESTINALES:

Shigella spp: Shigella es un género de bacterias con forma de bacilo perteneciente a la


familia Enterobacteriaceae, son Gram negativas, inmóviles, no formadoras de esporas e
incapaces de fermentar la lactosa, que pueden ocasionar diarrea en los seres vivos. Son
coliformes fecales anaerobias facultativas con fermentación ácido-mixta.

PÁGINA 48
Salmonella spp: se ubica dentro del Orden Enterobacteriales y la Familia
Enterobacteriaceae. Sus miembros son bacilos Gram negativos, generalmente móviles
por flagelos peritricos (excepto S. Gallinarum), anaerobios facultativos no encapsulados
y no esporulados.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

Dextrosa 1

D-manitol 2

Dihidrogenofosfato de potasio 1,5

Cloruro sódico 5

Citrato de sodio 5

Desoxicolato de sodio 0,5

Triptosa 20

Hidrogenofosfato de potasio 4

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

Suspender 39 gramos del medio en un litro de agua destilada.

Mezclar bien y disolver calentando con agitación frecuente.

Hervir durante un minuto hasta disolver por completo.

Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15


minutos.

Almacenamiento Temp. Min.:2 ºC Temp. Max.:25 ºC

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

En la imagen se puede visualizar el primer tubo el cual es el medio de


control, el segundo tubo constituye el crecimiento de bacterias, este
presenta mal olor, turbidez en el color ambar.

Microsoft Word - tabla MEDIOS de cultivo.doc. Consultado el 19 de junio de 2020. URL:


http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/34/medios-de-cultivo.pdf

PÁGINA 49
Caldo Destrosa y Patata
USO: es un medio liquido utilizado para cultivar hongos y levaduras clinicamente
importantes de alimentos y productos lacteos. Se puede complementar con acidos o
antibioticos para inhibir el crecimiento bacteriano, ademas del bajo pH que maneja. La
infusion de patata fomenta el gran crecimiento de hongos y moho.

MICROORGANISMOS

• Candida albicans .
• Aspergillus brasiliensis.
• Sacccharomyces cerevisiae.
INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

• Destrosa 20
• Infusion de patatas 6.5
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

1.Suspender 26.5 gramos del medio de un litro de agua destilada.


2.Mezclar bien y disolver calentando con agitacion frecuente.
3.Hervir durante un minuto hasta la disolucion completa.
4.Distribuir en recipientes apropiadas y esterilizar en autoclave a 121 C durante 15
minutos.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

El crecimiento de colonias fungicas se indica como turbidez. Se puede observar el


crecimiento de la superficie de los cultivos y la formacion de la pelicula.

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LISTERIA FRASER BROTH (BASE)
USO: Caldo de Enriquecimiento para Listeria (ISO 11290-1:1996, ISO 11290-2:2000)

Color. DESHIDRATADO: Polvo crema. PREPARADO: Amarillo fosforescente.

MICROORGANISMOS

La listeria, es una bacteria que se encuentra en la tierra y el agua. Puede encontrarse en


una variedad de alimentos crudos, así como en alimentos procesados y hechos con leche
no pasteurizada. Son bacilos gram-positivos cortos, regulares, no esporulados ni
ramificados, que suelen observarse en disposición individual o formando cadenas cortas.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

• Peptona de carne 5.00


• Peptona de Caseina 5.00
• Extracto de Levadura 5.00
• Extracto de carne 5.00
• Cloruro sódico 20.00
• Fosfato disódico 12.00
• Fosfato monopotásico 1.30
• Esculina 1.00
• Cloruro de Litio 3.00

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

Disolver 57.4 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Autoclavar a 121 ºC durante 15


minutos. Tras enfriar por debajo de 50 ºC, disolver 20 ml de suplemento estéril Fraser-
Citrato Férrico Amónico (SDA112) y 0, 10 ó 20 ml (recuento, enriquecimiento primario o
enriquecimiento secundario, respectivamente) de Suplemento estéril de antibióticos
Fraser-UVM2 (SDA111). Remover suavemente.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

tubo1= medio de control (amarillo),

tubo 2= Hay presencia de Listeria si el medio se tornara de un color de


un color oscuro (negro).

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Medio de enriquecimiento LIM Broth
USO: Lim Broth (caldo Lim) se utiliza para el enriquecimiento selectivo de
estreptococos del grupo B (Streptococcus agalactiae), en especial a partir de muestras
genitales.

MICROORGANISMOS

El Streptococcus B hemolítico del grupo B (SGB), también llamado Streptococcus


agalactiae, es un coco gram positivo que coloniza tanto el tracto genitourinario como
gastrointestinal de los seres humanos

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

Infusión de corazón de (sólidos)....................................... 3,1 g


Peptonas......................................................................... 20,0 g
Dextrosa............................................................................ 2,0 g Cloruro
sódico................................................................... 2,0 g Fosfato
disódico................................................................ 0,4 g Carbonato
sódico.............................................................. 2,5 g Extracto de
levadura....................................................... 10,0 g Colistina
............................................................................ 0,01 g Acido
nalidíxico................................................................. 0,015 g

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

El Kit viene formado por un tubo con fondo cónico, faldón y tapón a rosca conteniendo
2 ml de caldo LIM, y un escobillón flocado estándar. Envasados en un peel pack de
plástico + papel médico con la información básica y las instrucciones impresas.
Escobillón estéril por radiación.

INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS

En el primer tubo se observa el


crecimiento de Streptococcus
agalactiae, se puede observar el
medio turbio u opaco, comparado
con el medio de control (segundo
tubo).

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Sabouraud Glucosa Agar
USO: es un medio utilizado para aislamiento y cultivo de hongos , con cloranfenicol y/o
gentamicina son medios selectivos para el aislamiento de hongos de muestras clinicas y
no clinicas. La alta concentracion de glucosa y el pH acido favorece a los hongos frente
a las bacterias en su desarrollo.

MICROORGANISMOS

• Candida albicans.
• Saccharomyces cerevisiae.
• Aspergillus niger.
• Penicillium roquefortii.
• Trichophyton mentagrophytes.
INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

• Hidrolizado pancreatico de Caseina 5


• Hidrolizado peptico de tejidos animales 5
• Glucosa 40
• Agar 15
• Gentamicina 0.04
• Cloranfenicol 0.4
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

1. Licuar Sabouraud Dextrose Agar Deeps en tubos A mediante ebullicion en baño


Maria.
2. Enfrias a 45-50 C y verter en placas Petri.
3. Inocular muestrs representativas con los cultivos enumerados.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Las placas muestran colonias aisladas en las areas extendidas y crecimiento confluente
en areas de inoculacion densa. Se nota por el color y morgologia habitual es colonias
fungicas.

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De transporte
SON CAPAZ DE MANTENER VIVA UNA MUESTRA O CEPA DE
MICROORGANISMOS POR UN PERIODO PROLONGADO,
MANTENIENDO A LOS MICROORGANISMOS VIVOS Y SOBRE TODO
SIN ALTERAR SU CONCENTRACIÓN.

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Agar BIGGY
USO: USO EL AGAR BIGGY (POR SUS SIGLAS EN INGLÉS BISMUTH GLUCOSE
GLYCINE YEAST) es un medio selectivo y diferencial utilizado para e aislamiento
e identificacion presuntiva de especies de candida. Se recomienda inoculación
directa en el medio de cultivo cuando se toma una muestra de Líquido intra-
ocular. El agar BIGGY es una modificación de la fórmula desarrollada por
Nickerson, quien realizo estudios sobre la reducción de suifito por especies de
Candida. La diferenciación está basada en la morfologia colonial y la
pigmentación tipica que se presenta en este medio

MICROORGANISMOS

Chlamydia trachomatis (clamidia), (cándida es un género de hongo del tipo levadura)


bacteria que pertenece al género Chlamydia, familia Chlamydiaceae, orden
Chlamydiales. Es una bacteria intracelular obligado que infecta sólo a humanos; causa
tracoma y ceguera por Conjuntivitis crónica, infecciones óculogenitales y neumonías.
Algunos individuos desarrollarán el artritis reactiva, que no tiene cura.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

Glicina. 10.0g

Citrato de amonio y bismuto. 5.0g

Sulfito de sodio. 3.0 g

Extracto de levadura. 1.0 g

Dextrosa 10.0 g

Agar bacteriológico.16.0g

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

Suspender 45 g del medio en un litro de agua purificada. Mezclar bien y calentar con
agitación suave hasta su completa disolucióny hervir durante un minuto. NO
ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Dejar enfriar a una temperatura entre. 45-50'Cy vaciar
en placas de Petri estériles.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Candida aibicens Colonlas de color cafe oscuro o negro sin difusión en el media con
ligera presencia de micelio y tamaño mediano

Colonias ligreamente ascuras con centro negro y Cendida tropicals 1369 Budno billante,
de tamaño mediano. Después de 72 hrs, el pigmento se difunde en el medio

Las colonias de Candida kefyr son grandes de color rojo oscuro, planas con ligero
crecimiento micelial. Las colonias de Candida krusei son grandes, planas, rugosas de
color negro con brillo metálico, borde café y halo amarilo. Las colonias de Candida

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parakrusei son medianas, planas rugosas, cafe-rojizas, con crecimiento micelial amarillo.
Las colonias de Candida stellatoidea son medianas, planas, de color café oscuro, con
muy pequeña presencia de micelio Algunas bacterias pueden crecer en el medio y
producir un precipitado café, estas pueden ser discriminadas mediente un examen
microscóplico

Agar Dextrosa Sabouraud EP/USP/ISO


USO: Agar Dextrosa Sabouraud se puede utilizar para cultivar levaduras, mohos
(como hongos patógenos, particularmente aquellos asociados con infecciones
de la piel) y microorganismos acidúricos. Este medio también se usa para
determinar el contenido microbiano y fúngico de l Para diagnóstico clínico, el
tipo de muestras son todos los tipos de muestras (cabello, piel, uñas, etc...).

-Si las muestras están formadas por raspados de piel, cabello o uñas, colocar el
material en el centro de la superficie del medio.os cosméticos y para la
evaluación micológica de los alimentos.

MICROORGANISMOS

Crecimiento de Microsporum nanum, del raspado subungueal.

Microsporum nanum, hongo patógeno de la familia Arthrodermataceae. Es un tipo de


dermatofito que causa infección en tejidos queratinizados muertos, como piel, cabello y
uñas. Microsporum nanum se encuentra en todo el mundo y es tanto zoofílico como
geofílico.

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

Dextrosa 40

Agar bacteriológico 15

Mezcla de digerido péptico de tejido animal y pancreático de caseína (1:1) 10

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INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

Suspender 65 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver
con calor y agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta la disolución completa.
Distribuir en recipientes adecuados y esterilizar en autoclave a 118-121 ºC durante 15
minutos. NO SOBRECALENTAR, ya que facilita la hidrólisis de los componentes y que
el medio permanezca blando

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Candida albicans- Buen crecimiento Colonias blancas

Aspergillus brasiliensis- Buen crecimiento Micelio blanco, esporas negras.

Saccharomyces cerevisiae- Buen crecimiento Colonias crema abovedadas

Agar Extracto de Levadura Peptona Dextrosa YPD


USO: este agar se usa para mantener y desarrollar levaduras en procedimientos de
microbiologia molecular. El agar YDP contiene dextrosa, sales y proteinas, lo que
favorece el crecimiento de Saccharomycees cerevisiae y reduce los tiempos de
crecimiento.

MICROORGANISMOS

• Saccharomyces cerevisiae.
INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

• Agar 15
• Dextrosa 20
• Peptona 20
• Extracto de levadura 10

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INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

1. Suspender 65 gramos de medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y


disolver calentando con agitación frecuente.
2. Hervir durante un minuto hasta disolver
por completo. Esterilizar en autoclave a
121ºC durante 15 minutos. Enfriar a 45-50
ºC y dispensar en placas.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

• Se observan colonias blancas en la placa de


petri en el crecimiento de Saccharomyces
cerevisiae.

Amies
USO: este medio es una modificación del medio de Cary Blair, que a su vez lo es del de
Stuart. Se utiliza fosfato inorganico y carbon vegetal neutro farmaceutico. Ademas añade
iones calcio y magnesio, que ayudan a conservar la permeabilidad de la bacterias.

MICROORGANISMOS

• Corynebacterium: son bacilos grampositivos, inmóviles, aerobio facultativos,


pertenecientes al filo actinobacteria.
• Streptococcus pyogenes: es una bacteria Gram-positiva que crece en cadenas de
cuatro a diez células.
• Streptococcus pneumoniae: es un microorganismo patógeno capaz de causar en
humanos diversas infecciones y procesos invasivos severos.
INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

• Agar N° 2 7.5
• Cloruro cálcico 0.1
• Cloruro magnésico anhidro 0.1
• Cloruro potásico 0.2
• Dihidrogenofosfato de potasio 0.2
• Cloruro sódico 3
• Hidrogenofosfato de sodio 1.1
• Tioglicolato de sodio 1

INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

1. Suspender 13,2 gramos del medio en un litro de agua destilada.


2. Mezclar bien y disolver con calor y agitación frecuente.

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3. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo.
4. Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

El desarrollo de moderado o abundante crecimiento


bacteriano, tercer o cuarto cuadrante de la placa
respectivamente, podría indicar una etiología
bacteriana de la infección. Al crecimiento de escasas
colonias de algún patógeno, se le debe dar importancia.
Estos hallazgos deben correlacionarse con el examen
directo (Gram). Describir los hallazgos de células
inflamatorias y de alteración de la flora habitual, como
es el caso del aumento de bacilos gramnegativos
fusiformes y espiroquetales que orientan el diagnóstico hacia una Angina de Vincent; así
mismo reportar la presencia de células levaduriformes, hifas y pseudohifas.

Cay-Blair
USO: este medio se recomienda para la recoleccion y transporte de muestras fecales y
rectales, manteniendo la viabilidad de bacterias gram negativas como la Salmonella y
Shigella en muestras fecales. Este medio tiene un bajo potencial de oxidacion-reduccion
que asegura la supervivencia bacteriana durante largos peridos de tiempo. Tiene un bajo
contenido de nutrientes y un tampon fosfato, junto con el tioglicolato sodico, que inhibe
el crecimiento masivo de cepas como Escheria Coli y Klebsiella aerogenes.

MICROORGANISMOS

• Shigella flexneri: es una bacteria Gram negativa de la familia Enterobacteriaceae


y pertenece al serotipo B de Shigella.
• Neisseria meningitidis: generalmente denominada meningococo, es una bacteria
gramnegativa que puede causar meningitis y otras formas de enfermedad
meningocócica.
• Haemophilus influenzae: anteriormente llamado bacilo de Pfeiffer o Bacillus
influenzae, son cocobacilos Gram-negativo no móviles.
• Neisseria gonorrhoeae: es un diplococo Gram negativo, oxidasa positivo, que
causa la gonococia, una enfermedad de transmisión sexual que se presenta en
los humanos.
• Bordetella pertussis: es un cocobacilo gram negativo, aerobio estricto, no
productor de esporas, con fimbrias, capsulado, del género Bordetella.
INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

• Agar 5.5
• Fosfato disodico 1.1
• Tioglicolato de sodio 1.5

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• Cloruro calcico 0.09
• Cloruro sodico 5
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

1. Suspender 13.2 gramos del medio en un


litro de agua destilada. Mezclar bien.
2. Calentar con agitacion frecuente y hervir
hasta disolver por completo.
3. Dispensar en tubos de ensayo con tapon de
rosca y colocar en vapor fluido durante 15
minutos.
4. Dejar enfriar a una temperatura ambiente
y apretar los tapones para evitar la perdida
de agua.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

El color del medio deshidratado es beige y preparado es blanco opalescente, y con


presencia microbiana se pinta de un rosa palo.

CHROMagar Candida Medium

USO: medio para el aislamiento y la identificación de Candida albicans, C. tropicalis y


C. krusei a partir de muestras clínicas. Inhibe el crecimiento de bacterias y también
puede utilizarse como medio de aislamiento selectivo para otras especies de levaduras y
para hongos filamentosos.

MICROORGANISMOS

Candida albicans, C. tropicalis y C. krusei.

La cándida es un género de hongo del tipo levadura, y existen muchas especies diferentes
de las cuales solo unas cuantas provocan infecciones

INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

Cromopeptona 10,0 g

Glucosa 20,0

Mezcla cromógena 2,0

Cloranfenicol 0,5

Agar 15,0

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INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el
PA-257480.05 - 2 - calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha
de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de
incubación recomendados. Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse
durante una semana siempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura
entre 2 y 8 °C.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Candida albicans-Crecimiento de bueno a excelente; colonias de color verde claro a


mediano

Candida albicans-Crecimiento de bueno a excelente; colonias de color verde claro a


mediano

Candida krusei-Crecimiento de bueno a excelente; colonias grandes y planas, de color


de rosado claro a rosa, con un borde blancuzco

Candida tropicalis-Crecimiento de bueno a excelente; colonias de azul grisáceo a azul


verdoso o azul metálico, con o sin halos violetas en el medio circundante

Candida tropicalis-Crecimiento de bueno a excelente; colonias de color gris azulado, con


o sin halos de color violeta

Pseudomonas aeruginosa-Inhibición de parcial a completa

Sin inocular De incoloro a beige claro, transparentes.

BBLTM CHROMagarTM Candida Medium. resource.aspx. Consultado el 22 de junio de


2020 https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8810

PÁGINA 61
Stuart
USO: es un medio semi solido para el transporte y conservacion de muestras biologicas
cuando no es posible una inoculacion inmediara en un medio de cultivo. Apto para el
cultivo de gonococos, estreptococos, enterobacterias, etc. Contiene tioglicolato sodico
para retrasar la oxidacion y permite una mejor recuperacion de anaerobios, el cloruro de
calcio actua como un agente amortiguador que mantiene el equilibrio osmotico del
medio.

MICROORGANISMOS

• Streptococus pyogenes: es una bacteria Gram-positiva que crece en cadenas de


cuatro a diez células.
• Bacteroides fragilis: es una bacteria obligatoriamente anaerobia, gramnegativa,
en forma de bastón.
• Pseudomonas aeruginosa: es una especie de bacterias Gram-negativas, aeróbicas,
con motilidad unipolar. Es un patógeno oportunista en humanos y también en
plantas.Como otras Pseudomonas, P. aeruginosa secreta una variedad de
pigmentos como piocianina, fluoresceína y piorrubina
INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

• Agar n. 3. 3
• Azul de metileno 0.002.
• Tioglicoato de sodio 1
• Cloruro calcico 0.1.
• Glicerofosfato sodico 10
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN:

1. Suspender 14.1 gramos del medio en un litro de agua


destilada.
2. Mezclar bien y disolver calentando con agitacion
frecuente.
3. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo.
4. Dispensar en tubos con tapon de rosca y esterilizar en
autoclave a 121 C durante 15 minutos.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

El color del medio deshidratado es color crema, mientras que


preparado es azul en la superficie.

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Stuart para bacterias Gram negativas
USO: El medio de transporte de Stuart es utilizado para la recolección, transporte y
preservación de muestras microbiológicas , y permite mantener la viabilidad de los
microorganismos presentes en la muestra sin que exista un crecimiento significativo. Se
utiliza también para el transporte de muestras de secreciones oculares, óticas, faríngeas,
vaginales, uretrales, heridas y abscesos. Los microorganismos permanacen viables de 6
días a 8 semanas.

MICROORGANISMOS

• Streptococcus pneumoniae: es un microorganismo patógeno capaz de causar en


humanos diversas infecciones y procesos invasivos severos.
• Bacilo de Klebs-Loffer: es el bacilo causante de la difteria. C. diphtheriae es una
bacteria Gram positiva, aerobia, catalasa positiva y quimioorganotrofa
INGREDIENTES/FÓRMULA (gramos por litro)

• Glicerofosfato sódico 10
• Thioglicolato sódico 1
• Cloruro cálcico 0.1
• Azul de Metileno 0.002
• Agar-agar bacteriológico tipo Europeo 3
INSTRUCCIONES DE PREPARACIÓN

1. Disolver 14,1 g del medio en 1 litro de agua destilada.


2. Calentar agitando hasta ebullición para su disolución.
3. Dispensar en tubos o en escobillones y autoclavar a 121ºC durante 15 minutos.
4. Enfriar rápidamente y almacenar el medio preparado a 2-8ºC.
5. El medio final debe ser azul en su superficie.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Para evaluar el funcionamiento del medio Stuart se pueden


inocular cepas conocidas y mantenidas a 25°C, tales como:
Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC
19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424, Neisseria
meningitidis ATCC 13090, Streptococcus pneumoniae ATCC
6301. En todos los casos se espera recuperar al microorganismo
en cuestión, preservada por 24 horas.

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Conclusión
Cada uno de los medios de cultivo está hecho para distintos tipos de necesidades dentro

del laboratorio microbiológico, ya sea para transportarlos de algún lugar a otro o para

saber diferenciar uno de otro. Los medios realmente para que nos puedan servir con un

tipo de bacteria o microorganismos que queramos encontrar necesita tener especificado

cada uno de los componentes que en el necesita, es decir, que si queremos que sea solo

para un tipo de familia o para un microorganismo especifico este necesita contener los

componentes exactos y a una concentración apropiada para poder favorecer su

crecimiento.

Los medios de cultivo nos dan a entender que tan variadas o exclusivas son los

microorganismos ya que no todos crecen en las mismas condiciones de vida, unos

necesitan un medio acido, otras de un medio alcalino, unas necesitan oxigeno mientras

que otras no y así un inmenso mundo de microorganismos.

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Referencias.
• Ficha técnica: Caldo Czapek-Dox Modificado. Condalab. Consultado el 21 de
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