P. 1
Indicadores biologicos y esterilización

Indicadores biologicos y esterilización

4.33

|Views: 44.187|Likes:
Publicado porJosé Manuel
FES Zaragoza, QFB BC, 2009-2, 1701, Indicadores Biologicos
FES Zaragoza, QFB BC, 2009-2, 1701, Indicadores Biologicos

More info:

Published by: José Manuel on May 17, 2009
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

05/14/2014

pdf

text

original

Indicadores Físicos, Químicos y biológicos para la Esterilización

Tecnología Farmacéutica II 1701 – Equipo 8

Bernal Albarrán Luis Daniel Pérez Pérez José Manuel Sánchez Flores Rosa María

1

Indicadores Físicos, Químicos y biológicos para la Esterilización

2008

Esterilización
La acción conseguida con la esterilización es la asepsia. Por tanto, un material aséptico es un material estéril. Lo contrario es séptico que significa que está contaminado por virus, bacterias y hongos. Con la esterilización se destruye toda forma de vida microbiana ya sea vegetativa o de resistencia, por lo que no se puede utilizar sobre personas. Los objetos que se someten a la esterilización son los utensilios críticos (instrumental quirúrgico, sondas urinarias, implantes) Esterilización Concepto estadístico Cuando una población bacteriana es sometida a un proceso de esterilización que le provoca la pérdida de la viabilidad, se observa una disminución progresiva en el número de microorganismos sobrevivientes en función del tiempo de exposición al agente esterilizante. La muerte microbiana sigue un comportamiento de tipo exponencial, por lo que se hace asintótico y nunca se llega a un número de microorganismos igual a cero. N = N0. e - Kt Donde N es el número de microorganismos viables, N0 es el número de microorganismos viables iniciales, k es la tasa de muerte (min-1) y t es el tiempo de exposición al agente. El coeficiente k es función de las condiciones de esterilización (temperatura, tenor de humedad, concentración del agente químico) y de la resistencia del microorganismo al proceso de esterilización. Si esta ecuación se transforma a base 10 resulta: N = N0. 10 - t / D En donde D (min) se denomina Tiempo de reducción decimal, esto es el tiempo requerido para reducir la población microbiana un 90% o un orden de magnitud. El valor de D se deduce cuando t=D y por lo tanto N=0.1 N0. Comparando las ecuaciones anteriores se llega a que: D = ln 10 / K = 2.303 / K Esto significa que D está inversamente relacionado con k. Entonces, menores valores de D significan una mayor tasa de muerte o una muerte más rápida. Graficando el logarítmo del número de microorganismos sobrevivientes en función del tiempo de exposición a un determinado agente esterilizante se obtiene una recta. La pendiente está dada por -1/D y la ordenada al origen es log N0. Por lo explicado anteriormente, la pendiente de la recta está determinada por las condiciones de esterilización y de la resistencia del microorganismo.

2

Indicadores Físicos, Químicos y biológicos para la Esterilización

2008

Cuando el log del número de sobrevivientes es menor a cero se habla de probabilidad de sobrevivencia. Por lo tanto cuando el valor de la probabilidad sea -1 significa que hay 0.1 microorganismos viables por unidad, o correctamente expresado una unidad contaminada por cada 10 unidades idénticas procesadas. Un producto se considera estéril cuando la probabilidad de encontrar unidades contaminadas es menor o igual a 10-6, esto es una unidad contaminada cada millón de unidades idénticas procesadas. A mayor número de microorganismos y/o resistencia de la población se necesitará mayor tiempo de esterilización, o lo que es lo mismo mayor tiempo para alcanzar la probabilidad de sobrevivencia. Durante el proceso de esterilización por calor debe tenerse en cuenta que el tiempo de esterilización comienza cuando se ha alcanzado la temperatura óptima en el interior del aparato (autoclave o estufa) y que generalmente el contenido de un autoclave puede requerir tiempos más largos para alcanzar la temperatura de esterilización. Hay diferentes métodos de esterilización: físicos (por medio de calor seco o húmedo) y químicos (utilizando óxido de etileno, glutaraldehído). Para controlar la esterilización existen indicadores físicos, químicos y biológicos. De todo ellos, es conocido el uso de Bacillus Estearothermophilus como indicadores biológicos para comprobar el grado de esterilización en autoclave. Controles de Esterilización
3

Indicadores Físicos, Químicos y biológicos para la Esterilización Son controles que se realizan sobre el método de esterilización. Monitorean o controlan si el proceso de esterilización funciona correctamente. En la actualidad no es suficiente someter los materiales al proceso de esterilización, sino que además se requiere cierto grado de seguridad en la eficiencia del procedimiento. Los controles de esterilización se pueden clasificar en tres grupos: Controles físico-químicos Controles biológicos Transferencia a medios de cultivo Test de promoción del crecimiento Test de bacteriostásis Filtración por membranas

2008

Controles de Esterilización

Monitorean el proceso de esterilización

Controles de Esterilidad

Monitorean el material esterilizado

1. Monitores físicos:
Son elementos incorporados al esterilizador como termómetros, manómetros de presión, sensores de carga, válvulas y sistemas de registro. Estos monitores físicos son de gran utilidad, pero no son suficientes como indicadores de esterilización. Deben ser calibrados periódicamente. Métodos físicos se dividen en: - Calor seco: flameado, incinerado y horno Pasteur. - Calor húmedo: Tindalización (calentamiento tres veces), uperización (hasta 150º C durante 1 a 20 segundos. Tratamiento de productos lácteos) y autoclave (vapor saturado a presión). - Radiaciones ionizantes: rayos X, rayos gamma y rayos ultravioleta (UV tiene una baja

4

Indicadores Físicos, Químicos y biológicos para la Esterilización capacidad de penetración. Destruye bacterias y esporas). - Filtración: Los filtros no destruyen las formas vitales, sino que las separan del resto. Ejemplos: filtros de Berkelfeld, de vidrio poroso, de membrana. Filtración por Membranas Se utiliza para determinar la esterilidad de medios de cultivo, soluciones de antibióticos, etc. Se filtran los medios y se procesa el filtro como en un control de esterilidad para determinar si hay microorganismos presentes.

2008

2. Indicadores químicos:
Los indicadores químicos son productos comerciales consistentes en sustancias químicas que cambian de color si se cumple un elemento clave del proceso de esterilización como por ejemplo la temperatura necesaria; un indicador es una sustancia natural o sintética que añadida a la muestra sobre la que se desea realizar el análisis produce un cambio físico que es apreciable por los sentidos (generalmente, un viraje de color). Este cambio en el indicador se produce debido a que durante el análisis se lleva a cabo un cambio en las condiciones de la muestra e indica el punto final de la valoración. Algunos indicadores requieren más de un parámetro como cierto tiempo de exposición y humedad para cambiar de color. Pueden ser fabricados de papel especial, cintas autoadhesivas o consistir en tubos de vidrio con líquidos especiales. Todos estos indicadores tienen la desventaja que pueden reaccionar cambiando de color aún cuando no se han dado los parámetros necesarios para obtener la esterilización. Los indicadores químicos son diferentes de acuerdo al proceso utilizado (calor seco, húmedo o gas).

3. Indicadores biológicos:
Un indicador biológico es una preparación caracterizada de un microorganismo específico resistente a un proceso de esterilización en particular. Los indicadores biológicos se utilizan como auxiliares en la operación de la calificación física de aparatos de esterilización, en el desarrollo y establecimiento de un proceso de esterilización validado para un producto, en la verificación periódica de esterilización validada de un equipo, materiales y componentes de empaque que se empleen en procedimientos asépticos y en programas de verificación periódica de ciclos de esterilización previamente establecidos y documentados. Los indicadores biológicos pueden presentarse principalmente en dos formas en las cuales se utiliza un cultivo de un microorganismo de una especie conocida. En una de las presentaciones, las esporas de adicionan a un soporte (disco o tira de papel filtro, vidrio o

5

Indicadores Físicos, Químicos y biológicos para la Esterilización plástico) y se empaca tanto para mantener la integridad del soporte inoculado, como para permitir que el agente esterilizante ejerza su efecto sobre el empaque individual. Otra presentación es cuando las esporas se adicionan a unidades de lote por esterilizar (producto sin inocular) o a unidades similares; el producto inoculado no afecta negativamente las características de germinación de las esporas viables. Cuando el producto por esterilizar es un líquido, en el cual no es práctico adicionar el indicador biológico a las unidades seleccionadas, las esporas viables pueden agregarse a un producto simulado cuya resistencia al proceso de esterilización no difiere a la presentada por el producto por esterilizar. Para utilizar efectivamente un indicador biológico, se precisa tener un conocimiento completo del producto por esterilizar y de sus componentes (materiales y empaque) y tener una idea general del número y tipos de microorganismos que constituyen la carga microbiana presente en el inoculó inmediatamente antes de la esterilización. Cuando un producto es más sensible a la esterilización se realiza una evaluación más extensa de la carga microbiana. La selección del indicador biológico es crítica y requiere del conocimiento de su resistencia al proceso específico de esterilización de tal manera que cuando es utilizado bajo características de operación representa un desafío al proceso de esterilización que excede al reto de la carga microbiana natural presente en el producto. Las esporas seleccionadas para utilizarse como indicadores biológicos de un proceso en particular, no necesariamente son adecuadas para emplearse en diferentes condiciones del mismo o en otros procesos de esterilización. Las características de un indicador biológico se definen utilizando aparatos especiales y perfectamente calibrados, bajo condiciones estrictamente establecidas. Es importante que todos los laboratorios usuarios de un indicador biológico dado tengan acceso a tales aparatos. Las características de resistencia en condiciones de uso de un indicador biológico pueden no ser idénticas a las mencionadas en la etiqueta, si se emplean condiciones y aparatos de esterilización diferentes, el usuario averigua el efecto de tales variaciones y utiliza apropiadamente el indicador biológico para el propósito requerido como en la verificación periódica de ciclos de esterilización o en la validación de un proceso de esterilización, esto es, certificar que la esterilización se llevo a cabo y con una letalidad adecuada. No obstante en la mayoría de los casos, los ciclos de esterilización pueden diseñarse usando como guía lo que indica la etiqueta y evaluando las modificaciones necesarias debidas a las diferencias ya mencionadas en las condiciones de esterilización del fabricante y del usuario. Mantener los aparatos y condiciones de esterilización con especificaciones constantes de un ciclo de esterilización a otro para un uso válido del indicador biológico.

2008

6

Indicadores Físicos, Químicos y biológicos para la Esterilización En los procesos de esterilización por vapor a ciertas temperaturas, se emplean comúnmente esporas de cepas apropiadas de Bacillus stearothermophilus (ATCC 7953), debido a la resistencia que presentan a esta forma de esterilización. En los procesos de esterilización por calor seco u óxido de etileno, se emplean comúnmente esporas de una subespecie de Bacillus subtillis (ATCC 9372). Las esporas de cepas de Bacillus pumilus (ATCC 27142), han sido utilizadas como indicadores biológicos para verificación periódica de procesos de esterilización por radiaciones ionizantes. La preparación de la suspensión concentrada de esporas de los microorganismos seleccionados, requiere del desarrollo de procedimientos apropiados que incluyan cultivos masivos, cosechas y mantenimiento de la suspensión de esporas. La suspensión concentrada contiene predominantemente formas inactivas (no germinativas) que se han mantenido en medios líquidos no nutritivos. Es necesario tomar precauciones para asegurar que la preparación de! indicador biológico no altera sustancialmente la resistencia al proceso de esterilización de los microorganismos indicadores. El funcionamiento del indicador biológico depende tanto de la cuenta inicial de esporas viables, como de su resistencia al proceso de esterilización. Es importante, por tanto, que el indicador biológico mantenga su interdependencia entre el número de esporas viables y las características de resistencia a través de su período de vigencia. Un indicador biológico preparado a partir de esporas de una cepa microbiana en particular y que se pretende; utilizar en una variedad de ciclos empleando el mismo método de esterilización, puede tener diferentes presentaciones: una clase que contenga un número relativamente grande de esporas por inoculo o acarreador, digamos 106 o 107, requiere que el grado de exposición a la esterilización, esto es, el número de valores D aplicados se determinen por la cuantía de la reducción de esporas viables a través de una cuenta real. Otros indicadores biológicos contienen solamente el número de esporas requerido para indicar que e! ciclo validado ha sido aplicado. El resultado final necesario sería presencia o ausencia de crecimiento microbiano cuando se cultiva la preparación del indicador biológico. No se realiza una cuenta de esporas particularmente. Otros indicadores biológicos pueden tener cantidades altas o bajas para aplicaciones especiales particulares para verificar periódicamente la esterilización por vapor de instrumental quirúrgico esterilizado en emergencias en el quirófano, cada forma de indicador biológico ha sido validado para cada aplicación. INDICADORES BIOLÓGICOS EN TIRAS DE PAPEL PARA ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO. Son Preparaciones de esporas viables obtenidas a partir de un cultivo derivado de una cepa específica de Bacillus subtillis subespecie niger (ATCC 9372), impregnadas en una tira de papel de calidad satisfactoria, (un papel de calidad adecuada puede ser un papel filtro de velocidad de filtración media puro y derivado del algodón; cualquier grado de oscurecí-

2008

7

Indicadores Físicos, Químicos y biológicos para la Esterilización miento sin desmenuzamiento no interfiere en su uso) empacadas individualmente en un recipiente adecuado permeable al aire caliente, caracterizado en su resistencia a la esterilización por calor seco y son empleados en programas para calificar, validar y verificar periódicamente les ciclos de esterilización por calor seco INDICADORES BIOLÓGICOS EN TIRAS DE PAPEL PARA ESTERILIZACIÓN POR VAPOR Son preparaciones de esporas viables obtenidas a partir de un cultivo derivado de una cepa especifica de Bacillus stearothermophilus impregnadas en una tira de papel de calidad satisfactoria (un papel de calidad apropiada puede ser un papel filtro de velocidad de filtración media, puro y derivado del algodón) empacadas individualmente en un recipiente adecuado fácilmente permeable por el vapor, la cepa se caracteriza por su resistencia a la esterilización por vapor. Estos indicadores son empleados para calificar, validar y verificar periódicamente ciclos de esterilización por vapor. Si el indicador biológico tiene una concentración de esporas declarada de 5 xlO-3 esporas a menos de 5 xlO6 esporas por tira y se sujeta a condiciones de esterilización por vapor a I21°C ± 0,5°C tiene un valor D entre 1,3 y 1,9 min, un tiempo de sobrevivencia no menor 3.9 min y un tiempo de muerte no mayor a 19 min. Si se tiene ora concentración de esporas declarada y se sujeta el indicador a esterilización por vapor de 121°C ± 0,5°C tiene un valor D entre 1.3 min y 1,9 min y los tiempos de muerte y de sobrevivencia que corresponden a los especificados en la Tabla 31 para varias concentraciones de esporas. Si los indicadores son recomendados para temperaturas de esterilización diferentes cumplen con las especificaciones anteriores cuando se sujetan a condiciones de esterilización de 121 ± 0.5°C. Evaluar al indicador biológico en una cámara provista de dispositivos que permitan verificar y controles que permitan regular la temperatura, el tiempo y la presión de vapor. Evaluar al indicador biológico en una cámara provista de dispositivos que permitan verificar y controles que permitan regular la temperatura, el tiempo y la presión de vapor. El contenido de aire dentro de la cámara es reemplazado completamente por vapor en un máximo de 10 s. hasta alcanzar una temperatura de 121,5°C ± 0,5"C con la correspondiente presión de vapor saturado, cuando la cámara se vacía se alcanza la presión atmosférica en no menos de 5 s Determinación de los tiempos de sobrevivencia y de muerte: tomar 200 muestras del indicador biológico cuatro recipientes adecuados, distribuirlos en la cámara de empaque individual repartidas en números iguales en dos o cuatro recipientes adecuados de esterilización, se calibra previamente a su uso con cámara expuestos a las condiciones de esterilización establecidas. La esterilización en una posición específica para que estén los recipientes pero sin muestras, durante por lo menos 60 min. Para realizar la prueba, precalentar la cámara a la temperatura especificada, mantenerse así durante 5 min

2008

8

Indicadores Físicos, Químicos y biológicos para la Esterilización Debe enfriarse la cámara y abrirse la puerta lo más pronto posible, una vez abierta la puerta, introducir inmediatamente él o los recipientes con las muestras, esta operación no dura mucho establecer la temperatura deseada y mantener ésta durante el tiempo seleccionado por más de 5 s. Aumentar la presión hasta obtener la temperatura por un período de exposición para la determinación de los tiempos de sobrevivencia y de muerte, se selecciona dependiendo de la concentración de esporas para un indicador , una temperatura de esterilización de 121°C± 0,5°C y un biológico con una concentración de esporas de 1 x 106 por tira valor D de 1,6 mm, el tiempo de exposición es de 5 min, transcurriendo éste, la cámara es enfriada lo más pronto posible, y el o los recipientes con las 100 muestras se extraen. Para determinar el tiempo de muerte, repetir el procedimiento inmediatamente con las 100 muestras restantes, en caso de ser necesario precalentar la cámara. Para el ejemplo dado exponer durante 16 min a la temperatura especificada. Terminado e! ciclo de prueba y de transcurrir 1 h, sembrar las ultras en tubos que contengan 10 mL de caldo de soyatripticaseína . Incubar los tubos entre 55°C y 60°C y observarlos diariamente, hasta completar siete días de incubación. La prueba es satisfactoria si todos los tubos sembrados con las muestras expuestas para determinar el sembrados con las muestras expuestas para determinar el tiempo de sobrevivencia muestran crecimiento específico de Bacillus stearothermophilus y si en ninguno de los tubos inoculados con las tiras empleadas para determinar tiempo de muerte presentan crecimiento. Selección de indicadores para procesos de esterilización específicos. La selección de un indicador biológico requiere el conocimiento de la resistencia del sistema indicador biológico con respecto al proceso de esterilización específico. Se debe establecer que el sistema indicador biológico ofrece mayor resistencia al proceso de esterilización que la correspondiente a la carga microbiana natural presente en el producto. El uso eficaz de indicadores biológicos en el ciclo de desarrollo, proceso y validación del producto y en el control de la producción de rutina de un proceso de esterilización requiere un profundo conocimiento del producto que se va a esterilizar y de sus componentes. En el desarrollo o la validación de un proceso de esterilización solo se deben usar los indicadores biológicos ampliamente reconocidos en la monografía del indicador biología específico. Calor húmedo: con frecuencia se utilizan esporas de cepas adecuadas de Bacillus stearothermophilus, Clostridium sporogenes, Bacillus subtilis y Bacillus coagulans. Calor seco: Algunas veces se emplean esporas de Bacillus subtillis. Radiación ionizante: las esporas de Bacillus pumilus se han usado para controlar los procesos de esterilización que emplean radiación ionizante; sin embargo, esta practica se esta abandonando.

2008

9

Indicadores Físicos, Químicos y biológicos para la Esterilización Óxido de etileno: habitualmente se emplean esporas de una subespecie de Bacillus subtilis. Peroxido de hidrógeno en fase de vapor: Bacillus sterothermophilus es el indicador biológico mas utilizado para validar el proceso. Transferencia Directa a Medios de Cultivo Se transfiere una parte de la muestra a medios de cultivos apropiados que permitan el crecimiento de cualquier contaminante. Tioglicolato para anaerobios y aerobios (37°C). Soya-Tripticaseína para aerobios (25°C). Las muestras representativas se incuban en estos medios durante un período de 14 días, al cabo del cual no se debe observar ningún tipo de crecimiento. Puede ocurrir que la muestra no se encuentre estéril pero que no se produzca crecimiento durante la incubación por algún motivo inherente al medio o a la muestra, por ejemplo presencia de algún inhibidor, etc. Promoción del Crecimiento Es un testigo del control de esterilidad. Son testigos que se utilizan para los medios de crecimiento del control ya que estos medios tienen capacidad de promover el crecimiento. Para estos testigos se utilizan microorganismos con exigencias nutricionales. Los medios deben ser inoculados con un bajo número de microorganismos, se incuban durante 7 días, al cabo de los que se debe observar un abundante crecimiento. Observación e interpretación de resultados. A intervalos durante el periodo de incubación, y al momento de su finalización, examinar los medios en busca de evidencias macroscópicas de crecimiento microbiano. Si no se hallan evidencias de crecimiento bacteriano, el producto examinado cumple con la prueba d esterilidad. Si se hallan pruebas de crecimiento microbiano, el producto examinado no cumple con la prueba d esterilidad, a menos de que pueda demostrarse claramente que la prueba resulto invalida por causas no relacionadas con el producto examinado. La prueba puede considerarse inválida solo si se cumplen una o más de las siguientes condiciones: Los datos de monitoreo microbiológico de las instalaciones para pruebas de esterilidad demuestran una falla. Una revisión del procedimiento analítico usado durante la prueba en cuestión revela una falla.

2008

10

Indicadores Físicos, Químicos y biológicos para la Esterilización Se halla crecimiento microbiano en los controles negativos. Después de determinar la identidad de los microorganismos aislados de la prueba, el crecimiento de esta especie (o especies) puede atribuirse de manera equivoca a fallas con respecto al material o a la técnica usados al realizar el procedimiento de la prueba de esterilidad. Si la prueba se declara inválida, se repetirá con el mismo numero de unidades de la prueba original. Si no se hallan pruebas de crecimiento microbiano en la prueba repetida, el producto examinado cumple con la prueba de esterilidad. Si se hallan pruebas de crecimiento microbiano en la prueba repetida, el producto examinado no cumple con la prueba d esterilidad. Bacteriostásis Es un control que se realiza para determinar si la muestra supuestamente estéril no posee propiedades bacteriostáticas. De esta forma se previenen falsos negativos pues no se produce crecimiento habiendo en la muestra microorganismos viables. Para este test se toman los medios de cultivo con microorganismos de ensayo y se siembran en las muestras a testear. Se incuban durante 7 días. Si se produce crecimiento esto indica que el material no contenía inhibidores. BIBLIOGRAFÍA 1. Comisión permanente de la farmacopea de los estados Unidos Mexicanos. 8va ed Secretaría de salud, 2004. 2. http://www.microbiologia.com; 18 de octubre del 2008; 16:35 h. 3. http://www.qb.fcen.uba.ar/microinmuno/Seminarioesterilizacion; octubre 20 del 2008; 15:30 h. 4. http://www.fortunecity.com/campus/dawson/196/indicadores; octubre 22 del 2008; 20:10h. 5. http://www.cfnavarra.es/salud/anales/textos/vol23; 23 de Octubre del 2008; 19:30 h. 6. http://escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones; 25 Octubre 2008; 19:20 h. 7. http://es.wikipedia.org/wiki/Indicador; 27 Octubre 2008; 16: 50 h. 8. http://esta2.com/2008/10/limpieza-desinfeccion; 27 Octubre 2008; 17:20 h. 9. Villalobos Escobar Sandra Guadalupe; Comparación de resultados de proceso de esterilización con dos indicadores biológicos; Revista enfermeras IMSS 2001; 9(3): 143-146 10. Barlassina Luis; El uso de indicadores biológicos en la esterilización; Revista Visión; octubre 1999; 4(14): 23-26.

2008

11

You're Reading a Free Preview

Descarga
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->