Manual de Tecnicas de Laboratorio Completo

ANTICUERPOS VS CISTICERCO EN LCR O SUERO
INTRODUCCION La cisticercosis se adquiere por la ingestin de huevos de la Taenia solium que es endmica en Amrica Latina, Asia y frica. El hombre es el husped definitivo. Los huevos ingeridos de Taenia solium si son ingeridos por el hombre, se pueden convertir en cisticercos. La infeccin humana es el resultado de la ingestin accidental de los
huevos con los alimentos o agua siguiendo la va oral-fecal. La larva (cisticerco) partiendo del intestino, invade la va sangunea y puede localizarse en el sistema nervioso, msculos, ojo o tejido celular subcutneo. Las infecciones varan desde un solo cisticerco hasta millares de ellos. La sintomatologa depende de la cantidad de cisticercos, de su localizacin y de la intensidad de la reaccin del husped. En el cerebro, la infeccin puede provocar ataques o sntomas de una lesin expansiva .
INTERPRETACION CLINICA La positividad de esta prueba nos dice que en ese momento se esta cursando con un cisticerco en el organismo, ya con tomografias y radiografia se podr identificar donde se localiza y poder dar un tratamiento, o en el mejor de los casos la extraccin. Cabe destacar que si se esta cursando con la infeccin el organismo produce anticuerpo que es la forma en que el organismo pretende fagocitarlo, siendo resultados positivos, hasta antes de su calcificacin por que despus de ello aunque se corra la prueba esta ser negativa, debido a la calcificacin de tenia solium y por lo tanto ya el nulo ataque del organismo.
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FUNDAMENTO DE LA TECNICA
Los posos de prueba son recubiertos con al antgeno de T. solium. Durante la primera incubacin con la dilucin del suero del paciente algunos anticuerpos (si estn presentes) reaccionaran con el antgeno produciendo la unin antgenoanticuerpo. Despus de lavar para remover el resto de la muestra, la enzima conjugada es agregada. Si los anticuerpos se unieron a los posos, la enzima conjugada se unir a estos anticuerpos. Despus de otra serie de lavados, un cromgeno (tetrametilbencidina o TMB) es agregada. Si la enzima conjugada esta presente, la peroxidasa catalizar una reaccin que consume el peroxido y
cambia el cromgeno de transparente a azul. Adicionar la solucin Stop para terminar la reaccin y cambiar el color azul por un amarillo. Esta reaccin puede ser leda visualmente o con un lector de ELISA.
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DESARROLLO DE LA TECNICA (IVD Research, Inc.) (Cisticercosis FERUM Microwell ELISA)
1. Hacer una dilucin 1:64 con el suero del paciente y el buffer de dilucin (5 l de muestra y 315l de buffer). 2. Tomar el nmero de posos necesarios (a para los controles ms el nmero de muestras) y colocarlas en la base. 3. Agregar 100l (2 gotas) del control negativo en el poso #1, 100l en el poso #2 y 100 l de la dilucin (1:64) de la muestra o muestras en el poso o posos restantes. 4. Incubar a temperatura ambiente por 10 minutos. 5. Vaciar el contenido del poso y hacer 3 lavados con la solucin de lavado diluida 6. Agregar 2 gotas de enzima conjugada a cada poso 7. Incubar a temperatura ambiente por 5 minutos. 8. Vaciar el contenido del poso y lavar 3 veces con la solucin de lavado. 9. Agregar 2 gotas del Cromgeno a cada poso. 10. Incubar a temperatura ambiente por 5 minutos. 11. Una prueba positiva presenta una coloracin azul, mientras que una prueba negativa se mantiene incolora.
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COMPOSICION DE REACTIVOS Microposos: contiene antgenos de T. solium Enzima conjugada: 11 6 ml de protena A conjugada a peroxidasa Control positivo: 2 ml de suero positivo de conejo. Control negativo: 2 ml de suero negativo humano. Cromgeno: 11 ml de TMB Solucin de lavado concentrada: 25 ml de buffer concentrado y surfactante. Buffer: 30 ml de solucin buffer. Solucin Stop: 11 ml 1M de cido fosfrico.
CONSERVACION DE REACTIVOS Almacenar los reactivos entre 2-8C. La solucin de lavado puede ser almacenada a temperatura ambiente.
MUESTRAS Suero Liquido cefalorraqudeo obtenida por un medico
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BIBLIOGRAFIA:
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLNICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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CIDO RICO EN SUERO

INTRODUCCION El cido rico es el principal producto del catabolismo de las purinas en el
hombre, se forma a partir de la xantina por la accin de la xantinooxidasa. Un promedio aproximado en el hombre es de 3.4-7 mg/dL y en la mujer 2.4-5 mg/dL de cido rico en el cuerpo. Este procede de tres orgenes: 1. Catabolismo de las nucleoprotenas ingeridas. 2. Catabolismo de nucleoprotenas endgenas. 3. Transformacin directa de los nucletidos endgenos de la purina. Aproximadamente un 60 % de la reserva es la respuesta diariamente por formacin y excrecin. La mayor parte de formacin de cido rico tiene lugar en el hgado, el cual presenta gran actividad de xantinooxidasa, al igual que la mucosa intestinal. La mayor parte se excreta por rin y una proporcin menor por el tracto intestinal.
INTERPRETACION CLINICA Se encuentran valores elevados en algunos casos de gota, por alteraciones renales, deshidratacin, tratamiento con diurticos, ingestin de cido nicotnico, aspirina en bajas dosis, sales de plomo, excesiva destruccin celular, leucemia, linfoma, policitemia, neoplasia, infarto al miocardio prolongado, anemia hemoltica, hipotiroidismo, diabetes inspida, acidosis, reciente ingestin de alcohol, dietas para perder peso, anemia perniciosa, necrosis celular, psoriasis, y aumento de triglicridos. Se encuentran niveles disminuidos por ingestin de altas dosis de aspirina , dosis masivas de vitamina C, porfiria aguda intermitente, hipouricemia familiar, hiponatremia, diabetes.
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El cido rico presente en la muestra origina, segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, se forma un compuesto coloreado que se cuantifica por espectrofotometra.
Alantoina + CO2 + 2 H 2O2 cido rico + O2 + 2 H 2O uricasa
peroxidasa 2 H 2O2 + 4 A min oantipina + DCFS Quinonai min a + 4 H 2O
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DESARROLLO DE LA TECNICA ACIDO URICO (BioSystems)
1. Atemperar a temperatura ambiente. 2. Pipetear en tubos de ensayo:
Agua destilada Patrn cido rico Muestra Reactivo (A)
Blanco 12.5L 500 L
Patrn 12.5L 500 L
Muestra 12.5L 500 L
3. Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25C) o durante 5 minutos a 37C.
4. Leer la absorbancia del patrn y de la muestra a 520 nm frente al blanco. El color es estable al menos 30 minutos.
CALCULOS: La concentracin de cido rico en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula general: A muestra x C patrn x Factor dilucin muestra = C muestra A patrn
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COMPOSICION DE REACTIVOS Presentacin de 500 ml A. Reactivo: fosfatos 100 mmol/L, detergente 1.5 g/L, diclorofenolsulfonato 4 mmol/L, uricasa> 0.12 U/ml, ascorbato oxidasa> 5 U/ml, peroxidasa> 1 U/ml, 4 aminoantipirina 0.5 mmol/L, pH 7.8. 1. Patrn de cido rico: cido rico 6mg/dL. patrn primario acuoso.
CONSERVACIN DE REACTIVOS Conservar 2 -8C El reactivo y el patrn son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminacin durante su uso. Indicaciones de deterioro. Reactivo. Presencia de partculas, turbidez absorbancia de blanco superior a 0.200 a 520 nm (cubeta de 1 cm.). Patrn. Presencia de partculas o turbidez.
MUESTRAS Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estndar. El cido rico en suero o plasma es estable 7 das a 2-8 C. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren. No refrigerar.
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BIBLIOGRAFIA:
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLNICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
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CIDO RICO EN ORINA
INTRODUCCION El cido rico es el principal producto del catabolismo de las purinas en el el tracto
hombre, se forma a partir de la xantina por la accin de la xantinooxidasa La mayor parte se excreta por rin y una proporcin menor por intestinal. La concentracin de cido rico en orina es de 250 a 750 mg 24 horas .
INTERPRETACION CLINICA Es de utilidad en la elevacin del metabolismo del cido rico en la gota, con la sobre eliminacin en el tratamiento de la gota y para investigar la hiperuricosuria en pacientes con clculos renales.
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FUNDAMENTO DE LA TECNICA (BioSystems)
El cido rico presente en la muestra origina, segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, se forma un compuesto coloreado que se cuantifica por espectrofotometra.
Alantoina + CO2 + 2 H 2O2 cido rico + O2 + 2 H 2O uricasa
peroxidasa 2 H 2O2 + 4 A min oantipina + DCFS Quinonai min a + 4 H 2O
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DESARROLLO DE LA TECNICA (BioSystems) 1. Atemperar a temperatura ambiente. 2. Pipetear en tubos de ensayo: Blanco 12.5L Patrn 12.5L 12.5L 500 L 500 L 500 L Muestra
Agua destilada Patrn cido rico Muestra orina dilucin 1/10 Reactivo (A)
3. Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25C) o durante 5 minutos a 37C. 4. Leer la absorbancia del patrn y de la muestra a 520 nm frente al blanco. El color es estable al menos 30 minutos.
CALCULOS: La concentracin de cido rico en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula general: A muestra x C patrn x Factor dilucin muestra = C muestra A patrn
COMPOSICION
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A. Reactivo: fosfatos 100 mmol/L, detergente 1.5 g/L, diclorofenolsulfonato 4 mmol/L, uricasa> 0.12 U/mL, ascorbato oxidasa> 5 U/mL, peroxidasa> 1 U/mL, 4 aminoantipirina 0.5 mmol/L, pH 7.8. A. Patrn de cido rico: cido rico 6mg/dL. patrn primario acuoso.
CONSERVACIN Conservar 2 -8C El reactiv y el patrn son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminacin durante su uso. Indicaciones de deterioro. Reactivo. Presencia de partculas, turbidez absorbancia de blanco superior a 0.200 a 520 nm (cubeta de 1 cm.). Patrn. Presencia de partculas o turbidez
MUESTRAS Orina de 24 horas y realizar una dilucin de la orina 1/10 con agua destilada antes del ensayo. El cido rico en orina es estable 4 das a temperatura ambiente si se ajusta el pH a > 8 con NaOH: No refrigerar.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLNICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
ALBMINA SRICA
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INTRODUCCION
La protena ms abundante en el plasma, que habitualmente constituye los dos tercios de las protenas totales del plama. La albmina sirve tambin como deposito mvil de aminocidos desde el hgado, donde es sintetizada a otros tejidos. La vida media de la albmina es de 19 das. Sntesis casi exclusiva heptica. El hgado tiene la capacidad de producir 120 mg/kg de albmina por da. Es una fraccin proteica que se forma en el hgado y cuyas funciones primordiales son el transporte de diferentes elementos (tiroxina, bilirrubina, penicilina, cortisol, estrgenos, cidos grasos libres, cumarina, calcio y sostn de la presin onctica. Su concentracin normal est comprendida entre 3.5 y 5 g/100 ml de suero. Pero si la hipoalbuminemia, que es manifiesta de toda disproteinemia. Hay 3 factores que pueden disminuir su concentracin: 1. por perdidas cuantiosas o frecuentes (hemorragias albuminuria persistente- paracentesis- catabolismo excesivo), 2. por sntesis defectuosa, como ocurre en la mayor parte de la hepatopatas. 3. Y por carencia de materia prima, como en la hipoalimentacin. La manera mas frecuente de determinar la albmina consiste en su capacidad de fijara colorantes, como el azul de bromocresol, despus de haber sido separada de las globulina por precipitacin o por precipitacin de estas ultimas por corriente elctrica(electroforesis).
INTERPRETACION CLINICA Incrementos de albmina se observan en procesos de deshidratacin (pseudohiperalbuminemia). 33
Las variaciones diurnas de la albmina son paralelas al calcio; valores inferiores a 2g/dl se acompaan de edemas. El uso prolongado del torniquete en la extraccin de sangre hace elevar los niveles de albmina ala igual que la posicin erecta.
La disminucin de los niveles de albmina srica son consecuencias de una disminucin en la sntesis o aumento del catabolismo. Es frecuente en mala absorcin, obstruccin intestinal, enfermedad heptica difusa (cirrosis, hepatitis crnica activa), fiebre reumtica y otras enfermedades sistmicas (infecciones graves, pancreatitis, colagenopatas). Otras patologas que cursan con hipoalbuminemia son: Quemaduras sndrome nefrtico (perdida masiva de protenas ) enfermedad de Crohn Whipple Ehipoproteinemia idiomtica familiar enfermedad de Cushing.
Valores de referencia: Normal: 3.5 5.0 g/100 ml Orina 24 horas.
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La Albmina se combina con el verde de bromocresol a pH ligeramente cido, producindose un cambio de color del indicador, de amarillo verdoso a verde azulado proporcional muestra ensayada. a la concentracin de albmina presente en la
DESARROLLO DE LA TECNICA ( SPINREACT )
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1) Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.
2) Pipetear en una cubeta:
R (l) Patrn (l) Muestra (l)
Blanco 500 L ---
Patrn 500 L 2.5 --
Muestra 500 L -2.5
3) Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (15-25C).
4) Leer la absorbancia (A) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable 1 hora a temperatura ambiente.
CALCULOS (A) Muestra x 5 (conc Patrn) = g/dl de albmina en la muestra (A) Patrn
COMPOSICION DE REACTIVOS
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R: Verde bromocresol pH 4.2
50 mmol/L
ALBUMIN CAL : Patrn primario acuoso de Albmina 5 g/dL
CONSERVACION Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 28C, protegidos de la luz y se evita la contaminacin durante su uso. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Una vez abierto es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. Presencia de partculas y turbidez Absorbancia (A) del blanco a 630nm 0.40
MUESTRAS Suero o plasma libre de hemlisis: Estabilidad 1 mes a 2-8 C o 1 semana a 15-25C.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-EPERAMATO, A. NOMENLATOR DE LABORATORIO CLNICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
ALBMINA EN ORINA
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INTRODUCCION La protena ms abundante en el plasma, que habitualmente constituye los dos tercios de las protenas totales del plama. La albmina sirve tambin como deposito mvil de aminocidos desde el hgado, donde es sintetizada a otros tejidos. Normalmente hay una escasa cantidad de protena en la orina, hasta unos 150 mg/24 horas o 10 mg/dl, segn el volumen de orina. Las protenas derivan del plama y de las vas urinarias. Las protenas plasmticas con un peso molecular inferior a 500,000 o 600,000 pasan a travs de la membrana glomerular y suelen ser reabsorbidas por las clulas tubulares proximales. La albmina con un peso molecular de 69,000 es aparentemente filtrada, pero solo en cantidades muy pequeas. Se excretan tambin protenas fijadoras de retinol, 2microglobulina o inmunoglobulinas. Analizando la cantidad de protenas excretadas durante un periodo de 24 horas se obtiene informacin til sobre el diagnostico de la neuropata y la respuesta al tratamiento. Las personas sanas pueden exceder de los niveles normales durante el ejercicio o con la deshidratacin .La proteinuria es un hallazgo constante despus de un ejercicio intenso y puede aparecer en ausencia de enfermedad de las vas urinarias, en pacientes con hemorragia o deplecin de sal y en las enfermedades febriles. Esto puede producir deshidratacin y una isquemia renal relativa. La deteccin de una cantidad anormal de protena en la orina es un indicador fiable de enfermedad renal, porque la protena tiene un nivel mximo de reabsorcin muy bajo de manera que un aumento en la filtracin o de l produccin satura rpidamente el mecanismo de reabsorcin. Cuando la proteinuria se confirma, se practica una recogida de 24 horas para determinar la secrecin de protenas, lo que indica el grado de proteinuria. Analizando la cantidad de protenas excretadas durante un periodo de 24 horas se obtiene informacin til sobre el diagnostico de la neuropata y la respuesta al tratamiento.
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INTERPRETACION CLINICA Entre las patologas de excrecin de albmina se encuentra: Enfermedad glomerular: por definicin, la enfermedad produce proteinuria. Una perdida o reduccin de la carga negativa de la pared del capilar glomerular permite a ala albmina pasar al interior del espacio de Bowman en grandes cantidades , mas de lo que puede ser reabsorbida por la clulas tubulares proximales, la enfermedad glomerular produce a menudo una proteinuria intensa, superior a los 3 0 4 g/da. La presencia de pequeas cantidades de albmina en la orina de los diabticos insulinodependientes se correlaciona con una neuropata diabtico muy incipiente. Patrn glomerular Como se pierde albmina del suero por la orina, se pierde tambin otra protenas de tamao o carga similares , como antitrombina, transferan, prealbmina, 1-glucoprotena cida y 1- antitripsina, protenas que habitualmente se retiene en plasma. Como la funcin tubular puede ser todava normal, las protenas plasmticas muy pequeas son en gran parte reabsorbidas. Cuando se encuentra albmina o protenas ms pequeas, el patrn indica una alteracin patolgica mnima y tiene un pronstico mejor. A medida que aparecen protenas mayores la proteinuria es menos selectiva, lo que indica mayores alteraciones morfolgicas con neuropata membranosa y glomrulo nefritis proliferativa. El cido sulfosaliclico se utiliza como precipitante, la turbidez resultante se mide foto mtricamente. Con el cido sulfosalicilico la turbidez producida con la albmina es de 2.4 veces la que se produce con la globulina. Aumentos en orina se observan en toxemia del embarazo e insuficiencia cardiaca congestiva.
Valores de referencia: Normal: 30 300 mg/24 HRS. Orina 24 horas.
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La deteccin de una cantidad anormal de protena en la orina reabsorcin muy bajo de manera que un aumento en la filtracin
es un o de la
indicador fiable de enfermedad renal, porque la protena tiene un nivel mximo de produccin satura rpidamente el mecanismo de reabsorcin. Analizando la cantidad de protenas excretadas durante un periodo de 24 horas se obtiene informacin til sobre el diagnostico de la neuropata y la respuesta al tratamiento. La Albmina se combina con el verde de bromocresol a pH ligeramente cido, producindose un cambio de color del indicador, de amarillo verdoso a verde azulado proporcional muestra ensayada. a la concentracin de albmina presente en la
DESARROLLO DE LA TECNICA ( SPINREACT )
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5) Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.
6) Pipetear en una cubeta:
R (l) Patrn (l) Muestra (l)
Blanco 500 L ---
Patrn 500 L 2.5 --
Muestra 500 L -2.5
7) Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (15-25C).
8) Leer la absorbancia (A) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable 1 hora a temperatura ambiente.
CALCULOS (A) Muestra x 5 (conc Patrn) = g/dl de albmina en la muestra (A) Patrn Se reporta como albumina de 24 HRS. Y sus unidades de mg / 24 HRS.
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COMPOSICION DE REACTIVOS R: Verde bromocresol pH 4.2 50 mmol/L
ALBUMIN CAL : Patrn primario acuoso de Albmina 5 g/dL
CONSERVACION Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 28C, protegidos de la luz y se evita la contaminacin durante su uso. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Una vez abierto es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. Presencia de partculas y turbidez Absorbancia (A) del blanco a 630nm 0.40
MUESTRAS Orina centrifugada de 24 hrs.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLNICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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AMIBA EN FRESCO Y CITOLOGIA DE MOCO FECAL

INTRODUCCION Esta prueba es importante porque nos permite descartar principalmente en los nios la causa de la diarrea que presentan orientando hacia un proceso de origen bacteriano o viral. Se determinan los siguientes parmetros: y mononucleares. Amibiasis intestinal, es producida por el protozoario Entamoeba histolytica, es una enfermedad endmica en nuestro medio. Parsita en el colon y tiene un perodo latente para manifestarse entre 48 horas y 4 meses. Lacera la mucosa intestinal y tiene manifestaciones extraintestinales. Es agente etiolgico del 25 % de los estados diarreicos. INTERPRETACION CLINICA La presencia de azucares reductores involucra una causa que es la intolerancia a la glucosa. La presencia de sangre esta se reportara por cruces dependiendo de la coloracin que se ve a en la muestra, su presencia dependiendo de la intensidad de la coloracin se debe a que se presenta un cuadro de lesin de la mucosa gstrica. La presencia de la celularidad se dar por porcentaje dependiendo del porcentaje presentado se vera el, origen viral o bacteriano de la infeccin o si cursa con un proceso mixto (bacteriano y viral a la vez) porcentaje de celularidad.Dentro de las pruebas de laboratorio recomendadas para el abordaje de la enfermedad diarreica, se encuentra en primer lugar la citologa del moco fecal, que nos orienta si la etiologa es viral o bacteriana, ya que el reporte de ms de l0 leucocitos por campo orienta a una etiologa infecciosa; si estos son predominantemente mononucleares puede pensarse en etiologa viral, pero si el predominio es de polimorfonucleares, su etiologa ser probablemente bacteriana. azucares reductores, sangre oculta, pH, amiba en fresco, lugol, abundancia celular, porcentaje de polimorfonucleares
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FUNDAMENTO DE LA TCNICA
Las infecciones estomacales es una de las principales infecciones que atacan a los nios durante los primeros aos de su vida. De este modo en el ambiente existen diferentes microorganismos que causan infecciones, un rubro de diversidad de estas infecciones son de tipo bacteriano y viral, cabe sealar que este es un mtodo que ayuda a la identificacin del cuadro que cursa el nio, mediante la determinacin de el origen debidas a de las infecciones quistes o trofozoitos de Entamoeba histolytica, y algunos rinovirus,
mediante los azucares reductores, determinacin de pH, sangre oculta y celularidad que nos muestra un criterio que ayuda al diagnostico sobre el cuadro de infeccin que se presente. pH: el papel de ensayo contiene los indicadores rojo de metilo, fenolftalena y azul de bromotimol y reacciona especficamente con los iones H+.
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DESARROLLO DE LA TECNICA 1. 2. 3. Se procede a tomar la muestra rectal mediante una sonda con solucin salina isotnica. Se coloca la muestra en un tubo a temperatura de 37 C. Se procede a colocar muestra de moco fecal en una laminilla la cual se realizara la observacin de la amiba en fresco, se coloca una gota y se cubre. 4. En otra laminilla se colocar otra gota de muestra de moco fecal, se adicionara una gota de lugol, y posteriormente cubreobjetos. 5. Se observa en el microscopio a 40x, para la bsqueda de quistes y trofozoitos de Entamoeba histolytica. 6. En estas mismas laminillas se logra la observacin de celularidad mediante la determinacin de secar y teir con hemocolorante) polimorfonucleares y mononucleares presentes en la muestra.( se puede realizar un extendido del moco dejar cubrir con un
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COMPOSICION
Lugol para la observacin de los quistes o trofozoitos Cubreobjetos.
CONSERVACION Conservar los kit hasta la fecha que marque el lote el cual se encuentre en uso
MUESTRAS Muestras frescas de moco fecal extrado con sonda de solucin salina por la parte rectal.
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BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLNICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
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AMILASA EN SUERO
INTRODUCCION La amilasa es una enzima hidrolizada que se produce principalmente en el pncreas y en pequeas cantidades en las glndulas salivales y trompas de Falopio. Las clulas acinares pancreticas las segregan, van al conducto pancretico y luego al duodeno. En el intestino participa en de la digestin de los carbohidratos para descomponerlos en azucares simples. La destruccin de dichas clulas o la obstruccin del conducto pancretico dan lugar a que esta enzima pase al torrente circulatorio. El rin es el rgano que se encarga de la eliminacin de la amilasa. INTERPRETACION CLINICA En el 80% de las pancreatitis agudas, sus niveles estn elevados a las 24 horas. Igualmente en la patologa pancretica como pseudoquistes, ascitis pancretica absceso, carcinoma o trauma. En el embarazo eh tpico cuyas trompas segregan amilasa, se encuentra rpidamente elevada y es un signo de gran valor en la diferenciacin de apendicitis aguda, salpigitis aguda y embarazo ectpico roto. Las cifras pueden ser mayores de 500 U/L. la morfina y los opiceos la elevan hasta 900 U/L. En la pancreatitis aguda su mxima intensidad se alcanza a las 24 36 horas y decae a la normalidad a los 2 o 3 das. Valores normales en un adulto es de 60 a 150 U/L
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FUNDAMENTO DE LATECNICA
El mtodo utiliza como sustrato un p-nitrofenilmaltoheptaosido bloqueado por benzilidina. Dos enzimas indicadoras son empleadas: la glucoamilasa para escindir los productos de la reaccin amilasa, y la -glucosidasa para liberar el p-nitrofenol. La glucosa terminal del Sustrato se bloquea qumicamente para prevenir la escisin por las enzimas indicadoras.
bI-GpNP G2-5-pNP
amilasa
bI-G2-5 + G2-5-pNP glucosa-pNP-glucsido
glucoamilasa
-glucosidasa
NP-glucsido
-glucosidasa
glucosa + pNP
bl-GpNP = pNP/ maltchepkaosido bloqueado
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DESARROLLO DE LA TECNICA ( RANDOX)
1. Pipetear en la cubeta:
Muestra Sustrato
10 l 500 l
2.Mezclar , leer la absorbancia inicial al cabo de 60 seg y empezar a cronometrar el tiempo simultneamente. Leer al cabo de 1, 2 y 3 min.
CALCULOS Para calcular la actividad de amilasa utilizar la siguiente frmula: UI = 5544 X A 405 nm/min
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COMPOSICION DE REACTIVOS
Tampn: Cloruro clcico Cloruro sdico
5.0 mmol/l 5.0 mmol/l
Sustrato: Glucoamilasa pN-maltoheptaosida bbq -glucosidasa
5 U/ml 0.8 mmol/l 12 U/ml
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Reconstituir el contenido de un vial de Sustrato 2 con el volumen adecuado de Tampn 1. Transferir todo el contenido a la botella tampn 1, enjuagando el vial 2 varias veces. Estable durante 21 das conservado entre 2-8C.
MUESTRAS Suero o plasma heparinizado.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLNICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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AMILASA EN ORINA
INTRODUCCION La amilasa es una enzima hidrolizada que se produce principalmente en el pncreas y en pequeas cantidades en las glndulas salivales y trompas de Falopio. Las clulas acinares pancreticas las segregan, van al conducto pancretico y luego al duodeno. En el intestino participa en la digestin de los carbohidratos para descomponerlos en azucares simples. La destruccin de dichas clulas o la obstruccin del conducto pancretico dan lugar a que esta enzima pase al torrente circulatorio. El rin es el rgano que se encarga de la eliminacin de la amilasa.
INTERPRETACION CLNICA En de gran utilidad en la evaluacin de la pancreatitis, sus niveles permanecen elevados por 4 das o ms y se puede dosificar en muestra espontnea de orina. Valores normales en un adulto es de 4 a 30 U/2 horas.
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El mtodo utiliza como sustrato un p-nitrofenilmaltoneptaosida bloqueado por benzilidina. Dos enzimas indicadoras son empleadas: la glucoamilasa para escindir los productos de la reaccin amilasa, y la -glucosidasa para liberar el p-nitrofenol. La glucosa terminal del sustrato se bloquea qumicamente para prevenir la escisin por las enzimas indicadoras.
bI-GpNP
amilasa
bI-G2-5 + G2-5-pNP
G2-5-pNP
glucoamilasa
glucosa-pNP-glucsido
-glucosidasa
NP-glucsido
-glucosidasa
glucosa + pNP
bl-GpNP = pNP/ maltchepkaosido bloqueado
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DESARROLLO DE LA TECNICA (RANDOX)
1. Diluir la orina 1:2 con solucin NaCl 0.9 % . 2. Pipetear en la cubeta
Muestra Sustrato
10 l 500
3. Mezclar, leer la absorbancia inicial al cabo de 60 seg. y empezar a cronometrar el tiempo simultneamente. Leer al cabo de 1, 2 y 3 min.
CALCULOS Para calcular la actividad de amilasa utilizar la siguiente frmula: UI = 5544 X A 405 nm/min Multiplicar el resultado por 3.
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COMPOSICION DE LOS REACTIVOS
Tampn: Cloruro clcico Cloruro sdico
5.0 mmol/l 5.0 mmol/l
Sustrato: Glucoamilasa pN-maltoheptaosida bbq -glucosidasa
5 U/ml 0.8 mmol/l 12 U/ml
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Reconstituir el contenido de un vial de Sustrato 2 con el volumen adecuado de Tampn 1. Transferir todo el contenido a la botella tampn 1, enjuagando el vial 2 varias veces. Estable durante 21 das conservado entre 2-8C.
MUESTRAS Orina
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BIBLIOGRAFIA
1. EBERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLNICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
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ANTICUERPOS ANTINUCLEARES
INTRODUCCION Los anticuerpos antinucleares se originan durante la evolucin de diferentes enfermedades del tejido conjuntivo tipo inmunolgico. Traducen un defecto de regulacin del sistema inmunitario y se han descrito ms de 40 especies. Los anticuerpos que se creen que son caractersticos del Lupus Eritematoso Sistmico (SLE) son estn dirigidos a la DNP (Desoxiribonucleprotena). Estos se cree son los responsables de la formacin de las clulas LE. Esto ocurre de forma inusual en un 75-80% de los pacientes diagnosticados con SLE. No es necesario tener una prueba positiva de clulas LE, para el diagnstico de SLE, en algunos individuos es negativa a pesar de presentar los sntomas de la enfermedad.
INTERPRETACION CLNICA Es de gran importancia en el diagnostico de enfermedades que producen autoanticuerpos, entre ellas el lupus. En esta afeccin son tiles empleando substratos especiales como las clulas Hep de Crithidia Luciliae
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El principio de la prueba de aglutinacin en ltex IMMUNO/LEX-sLE, es cuando las partculas de ltex recubiertas con DNP son puestas en contacto con un suero que contiene anticuerpos antinucleares, ocurre la aglutinacin, lo cual indica una reaccin positiva. El tiempo de reaccin es de un minuto.
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DESARROLLO DE LA TECNICA ( IMMUNOSTICS)
1. Atemperar los reactivos y suero control. 2. Los controles positivo y negativo deben correrse con cada serie de muestras. 3. Mezclar vigorosamente el reactivo IMMUNO/LEX-sLE durante 30 seg para evitar la agregacin de las partculas de ltex. No usar vortex. 4. Depositar con la pipeta dispensadora 30 l de muestra en un crculo de la placa. 5. Coloque una gota (aproximadamente 30l) del reactivo IMMUNO/LEX-sLE en la placa de prueba, en el mismo crculo donde se coloco la muestra del paciente. 6. Mezclar ambas con un aplicador. 7. Agitar por un minuto con un rotator o con la mano y observar con luz directa. 8. Comparar la reaccin de la muestra con los controles positivo y negativo. 9. Observar la aglutinacin al de un minuto.
RESULTADOS Una aglutinacin de las partculas de ltex es un resultado positivo (empieza a hacerse visible a los 30 segundos y se completa la aglutinacin antes del minuto). Una reaccin dbil presenta una muy fina granulacin o una unin parcial. Los resultados deben ser ledos antes de 1 minuto porque reacciones no especficas pueden ocurrir despus de este tiempo.
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Reactivo INMUNO/LEX Ltex-DNP: Partculas de ltex recubiertas DNP. Azida de sodio (0.1%) usado como conservador.
con
Control positivo diluido (suero humano) y estabilizado con buffers y azida sdica como conservador.
Control negativo (suero humano) diluido y estabilizado con buffers y azida sdica como conservador.
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Almacenar reactivo y controles de 2-8C. No congelar. Antes de usar reactivos y controles deben atemperarse.
MUESTRAS
Preferentemente suero. Las muestras deben ser refrigeradas o congeladas si la prueba no se realiza de inmediato. Una contaminacin bacteriana puede causar falsos positivos.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO TCLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994,
2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLIENICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
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ANTICUERPOS VS HIV TIPO 1 Y 2

INTRODUCCION En 1981 se descubri el Sndrome de inmunodeficiencia adquirida denominado SIDA, cuyo agente etiolgico es el VIH (Virus de inmunodeficiencia humana). En la actualidad se conocen 2 clases, el HIV-1 que es responsable del SIDA en nuestro medio y en el mundo con excepcin de frica Occidental donde se identifico el HIV-2. El HIV pertenece a los retrovirus que tienen periodos prolongados de incubacin, desde el momento en que se infecta hasta el desarrollo de los sntomas. Se ha estimado que el periodo de incubacin despus de contraerlo por transfusin de sangre es de 8.23 aos en adultos y de 1.97 en nios menores de 5 aos. El virus ataca especficamente a los lifocitos T cooperadores; los destruye y los microorganismos oportunistas atacan el organismo y producen la muerte. Despus de un periodo de incubacin de varias semanas o meses el HIV origina en el organismo donde se encuentra anticuerpos especficos. El primero en aparecer es el anti p-24, como respuesta a la protena p-24 base de las glicoprotenas de la envoltura, despus aparecen otros anticuerpos contra protenas del ncleo viral que se denominan gp-160, gp-120 y gp-41. Las concentraciones de anticuerpos siguen aumentando, hasta llegar al perodo de estabilizacin que persiste hasta la muerte. El HIV slo se puede obtener por 3 mecanismos: Relaciones sexuales: (hetero u homosexuales) Por la sangre : (transfusiones, agujas infectadas) Placentaria: (madre infecta al lactante) INTERPRETACION CLNICA Un resultado positivo indica que la persona se encuentra infectada por el VIH.
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Las protenas recombinantes representando las regiones de las protenas de la cubierta del HIV-1 y HIV-2, la glicoproteina gp41, gp120 (HIV-1) y la glicoproteina gp36 (HIV-2) respectivamente son inmovilizadas en la regin de prueba de la tira de nitrocelulosa. Estas protenas tambin se unen al oro coloidal y se impregnan por debajo de la regin de prueba del cartucho. Una banda delgada de la
membrana de nitrocelulosa tambin se sensibiliza como una regin control. Durante la prueba se aplican dos gotas de suero, plasma o sangre total al rea de muestra, seguido de dos gotas de buffer de lavado y se deja que reaccionen. Los anticuerpos IgG, especficos para las protenas recombinantes del HIV-1 y HIV-2, reaccionaran con los antgenos unidos a las partculas de oro coloidal. El complejo partculas de oro coloidal-anticuerpos se mueve cromatogrficamente a travs de la membrana a las regiones de prueba y control del cartucho de prueba.
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DESARROLLO DE LA TECNICA (NEOGEN VIH 1Y2, ADVANCE QUALITY RAPID VIH 1Y2) 1. Si cualquier muestra/reactivo se ha almacenado en refrigeracin, permita que se atemperen 20 minutos a temperatura ambiente. 2. Utilizando una de las pipetas (suero/plasma/sangre total). proporcionadas tome la muestra
3. Colocando la pipeta sobre el rea de muestra adicione dos gotas de muestra cuidadosamente. 4. adicione dos gotas del reactivo de lavado al rea de muestra. 5. permitan que transcurran exactamente 10 minutos para que la reaccin ocurra. El resultado se debe leer exactamente al final de los 10 minutos de tiempo de incubacin.
NOTA: Los resultados son estables durante 5-10 minutos.
NEGATIVO Una lnea en el rea de control (C) nicamente indica un resultado negativo. POSITIVO Una lnea de cualquier intensidad en el rea de prueba (T), una segunda lnea en el rea de control (C) indica un resultado positivo. INVALIDO Ausencia de una lnea en el rea de control (C). La prueba se debe de repetir con un cartucho nuevo independientemente de que aparezca una lnea en el rea de prueba (T).
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COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Cartuchos de prueba: contiene una banda de prueba que consta de una almohadilla dorada impregnada con un conjugado de protena VIH y oro coloidal, una tira de nitrocelulosa con protenas recombinantes VIH inmovilizadas como lnea de prueba y un reactivo vinculante de anticuerpos como lnea de control. Reactivo de lavado: reactivo individual para suero o plasma.
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS
El equipo de prueba y la solucin de lavado se puede almacenar de 275300K (2-30C). Los componentes del equipo no se deben de utilizar despus de su fecha de caducidad.
MUESTRAS Pueden realizarse las pruebas en suero o plasma. Las muestras pueden almacenarse durante 7 das descongelaciones reiteradas. entre 2 y 8C. Evite congelaciones y
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICCION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. EHERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, IENTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
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ANTICUERPOS VS BRUCELA (ROSA DE BENGALA)

INTRODUCCION La Brucelosis es producida por Brucella abortus del ganado vacuno, suis de los cerdos y melitensis de las ovejas y cabras. Presenta una fase aguda de pocos signos especficos y una fase crnica asociada a febrculas, debilidad, dolores vagos. En el curso de la enfermedad se desarrollan tres clases de anticuerpos: IgM: primeros en aparecer, son detectables 8 a 10 das despus del comienzo de los sntomas clnicos hasta 10 meses ms tarde. En la brucelosis crnica estn ausentes, as como en las recadas o reinfecciones. IgG: ms tardos, se elevan de forma gradual y conjuntamente con las IgM durante el primer mes de la fase aguda. Pueden existir IgG incompletas, no aglutinantes y por ello denominadas bloqueantes, tanto en la fase aguda como crnica. Estos anticuerpos incompletos poseen mayor afinidad por el antgeno impidiendo la unin de ste a los anticuerpos con capacidad aglutinante. IgA: la respuesta IgA es prcticamente paralela al aumento del resto de las inmunoglobulinas. Con capacidad aglutinante y en algunas ocasiones bloqueante. Los principales test serolgicos para el diagnstico de brucelosis son: Rosa de Bengala: pone de manifiesto IgM e IgG.
INTERPRETACION CLNICA Se positiviza despus de una semana de iniciarse la enfermedad, pero su negativizacin no la excluye pues hay muchos casos de brucelosis crnica que evolucionan con reaccin negativa. Tiene mucho valor el ttulo 1/80 y superiores, pues no es reaccin sensible. Se ven algunos casos con ttulos elevados, que slo traducen la capacidad antignica, pero no la intensidad de la enfermedad.
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Se utiliza un antgeno de Brucella abortus biotipo 1 (cepa 99S o cepa 1119-3) acidificado regulado y teido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la deteccin de aglutininas especficas de Brucella. Esta prueba puede ser utilizada para un diagnstico temprano.
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DESARROLLO DE LA TECNICA (LICON) 1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero. 2. Utilizando la pipeta automtica adicione 30l de la muestra del paciente en un crculo de la placa. 3. Mezcle suavemente el Antgeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogneo, despus coloque 30 l en la placa de prueba, en el mismo crculo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador. (usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles. 4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos. 5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado. Importante: despus de este tiempo la lectura ya no es vlida. La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenz a mezclar. Este es un tiempo lmite ptimo en el que se da un espacio para la observacin de ciertas aglutininas que se revelan lentamente y que de otra manera se pueden omitir, adems de que se pueden presentar reacciones no especficas. No aglutinacin Suero Negativo Cualquier cantidad de aglutinacin presencia de anticuerpos especficos. Suero positivo. Un resultado positivo dependiendo de la cantidad del titulo nos indicara la
presencia o la recensin de la infeccin por Brcela.
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COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Antgenos Rosa de Bengala Control Positivo de Brucella Control Negativo de Brucella
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS El reactivo y los controles son estables de 2-8C hasta sus respectivas fechas de caducidad.
MUESTRAS Se recomienda que nicamente se utilice suero. Evite la hemlisis o lipemia de las muestras ya que esto puede interferir en el resultado.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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ANTICUERPOS VS VIRUS DE HEP. C
INTRODUCCION
El virus de la Hepatitis C (HCV) es un virus ARN que utiliza la va parental como principal forma de transmisin, siendo responsable del 80-90% de las hepatitis postransfusionales. La infeccin es en la mayor parte de los casos asintomtica, aunque entre el 50-75% de la hepatitis postransfusionales evolucionan a cronicidad, con aparicin de cirrosis (20%) o hepatocarcinoma. El estudio de anti-HCV se utiliza para la identificacin de individuos en riesgo de estar infectados por este virus, como ayuda al diagnstico de la hepatitis C crnica y en el cribado obligatorio de hemodonaciones. No es necesaria su investigacin sistemtica en embarazadas.
INTERPRETACION CLINICA Su positividad indica nicamente contacto con el virus, pero no diferencia las posibles situaciones clnicas. La presencia de anti-HCV en cuadros de hepatitis crnica es altamente sugestiva de hepatitis C crnica, aunque no permite establecer el diagnstico con certeza. La aparicin de anticuerpos es tarda, encontrndose niveles detectables 4 5 meses despus de producirse la infeccin con una media de 23 semanas y en algunos casos en un tiempo superior a los 6 meses o al ao, por lo que su negatividad no descarta la infeccin. Pueden persistir mucho tiempo despus de producirse la curacin clnica, siendo detectable durante ms de 5 aos.
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Se basa en una prueba de tipo flujo lateral de dos pasos para la deteccin rpida cualitativa por inmunoensayo para la deteccin del anticuerpo del HCV en suero humano. Una membrana de nitricelulosa es preimpregnada con antgenos recombinados de HCV en las zona test y con anticuerpos de anti-protena A en la zona del Control del Casete. Durante la prueba la muestra de suero reacciona con el Oro Coloidal conjugado que ha sido preimpregnado en la prueba. La unin de ambas avanza a lo largo de la membrana por accin capilar y reacciona con los antgenos recombinados de HVC y generarn la aparicin de una lnea rojiza indicando la positividad de resultados. La ausencia de la lnea de test indicara un resultado negativo. La lnea de control C siempre deber aparecer
independientemente de la presencia del anticuerpo de HCV y sirve como un sistema de Control de Calidad de la prueba.
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DESARROLLO DE LA TECNICA (ADVANCED QUALITY)
1. Saque el casete del sobre y colquelo en un rea de trabajo adecuada. 2. Agregue 10 l de suero en el crculo S del casete utilizando una pipeta calibrada. 3. 2 gotas (100 l) de solucin buffer en el crculo D del cassette. 4. Interprete resultados transcurridos 15 minutos despus de haber iniciado la prueba. 5. No interprete el resultado despus de 20 minutos. 6. La aparicin de dos lneas rojizas (una en la zona de Test T y otra en la zona de control C) sugieren que la muestra evaluada contiene anticuerpos especficos de HVC. La intensidad de coloracin de la lnea de Test ser un indicativo de nivel de anticuerpos presentes en la muestra. 7. La presencia de nicamente una lnea rojiza en la zona de control C sugiere que no hay existencia de anticuerpos de HVC en la muestra evaluada y el resultado es NEGATIVO. 8. Se invalidar la prueba en caso de que no aparezca ninguna lnea en el cassette o en el caso de que nicamente aparezca en la lnea de Test T sin que se confirme la aparicin de la lnea de Control C despus de transcurridos 10 minutos. Repita la prueba con otro casete.
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COMPOSICION DE LOS REACTIVOS 2/3 Solucin Buffer 3/3 Instructivo
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Almacene el equipo a temperaturas entre 8 y 28 C. No congele el equipo ni lo exponga por arriba de 30 C. la solucin buffer tendr la apariencia de precipitado lechoso si se almacena a temperaturas bajas. Se recomienda tenerlo a temperatura ambiente antes de proceder a su uso. La estabilidad del equipo se mantendr hasta la fecha de expiracin mencionada en la caja del equipo. No utilice la prueba despus de su fecha de caducidad.
MUESTRAS Separe el suero por centrifugacin. Las muestras podrn permanecer refrigeradas hasta por 3 das a temperaturas entre 2-8C. En caso de que no se utilice inmediatamente la muestra, se pondr a congelar a -20C. Evitar congelar y descongelar la muestra en repetidas ocasiones.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERERERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGADO, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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ANTIESTREPTOLISINA O
INTRODUCCION Los estreptococos son cocos grampositivos, esfricos, ovoides o en forma de lanceta observados a menudo en parejas o cadenas. Son anaerobios facultativos. Los estreptococos tipo A elaboran ms de 20 exotoxinas distintas, incluyendo una enzima denominada estreptolisina O que tiene la capacidad de lisar los hemates, comportndose como antgeno. El organismo reacciona produciendo un anticuerpo neutralizante antiestretolisina O (ASO) el que aparece entre 8 y 30 das despus del comienzo de infeccin por dicho estreptococo. La presencia y el nivel de estos anticuerpos en una muestra de suero pueden reflejar la naturaleza y severidad de la infeccin.
INTERPRETACION CLINICA Un nivel detectable de 200 IU/ml de anticuerpos de Antiestreptolisina-O usualmente es el lmite normal superior, ya que menos del 15-20% de los individuos sanos presentan ttulos mayores de 200IU/ml al probar sus sueros. Los ttulos elevados de ASO pueden estar asociados con espondilitis anquilosante, glomerulonefritis, fiebre escarlatina y tonsilitis. Generalmente Reumatoide excepto durante episodios agudos. Los ttulos se modifican en la convalecencia, siendo inferiores cuando el tratamiento es acertado. Los niveles altos de beta-lipoprotena dan falsos resultados elevados y los antibiticos y adrenocorticosteroides, bajos. En amigdalitis, sepsis puerperal y erisipela por estreptococo A, los ttulos estn elevados. no se encuentra incremento de los niveles de ASO en el suero de los pacientes con Artritis
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Esta prueba
de Estreptolisina
utiliza una suspensin buffer estabilizada de
partculas de ltex de poliestireno recubiertas con Estretolisina O. Cuando el reactivo de ltex se mezcla con una muestra de suero que contenga anticuerpos hacia Estreptolisina O, ocurre la aglutinacin. El reactivo de ltex es producido de manera de que la aglutinacin tome lugar nicamente cuando el nivel de anticuerpos hacia Estreptolisina O sea igual o mayor a 200 IU/ml, este es un nivel indicativo de enfermedad por estudios clnicos y epidemiolgicos.
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DESARROLLO DE LA TECNICA (Stanbio) A. Mtodo Cualitativo 1. Lleve los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. 2. Agite suavemente el frasco del reactivo de ltex para dispersar y resuspender las partculas de ltex. No agitar excesivamente. 3. Aada una gota de la muestra del paciente no diluida utilizando una de las pipetas desechables, en un crculo de la placa. Tambin coloque una gota de los controles positivo y negativo en otros crculos separados dentro de la misma placa. 4. Agite suavemente el frasco de ltex. Coloque una gota del reactivo de ltex junto a la gota de la muestra de suero en cada una de los crculos ocupados. 5. Mezcle ambas gotas con el agitador /mezclador desechable incluido, cubriendo por completo toda la superficie del crculo. 6. Agite manualmente la placa por 1:25 minutos de manera que la mezcla rote dentro de los crculos no coloque la placa en un rotor automtico a 80-100 r.p.m.
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B. Mtodo Semi-Cuantitativo Esta reaccin puede ser utilizada para estimar la concentracin de ASO utilizando una serie de diluciones. 1. Colocar 4 tubos y en cada uno de ellos agregar 100 l de la solucin buffer. 2. En el tubo No. 1 agregar 100 l del suero del paciente y mezclar. 3. Pasar 100 l del tubo No. 1 al tubo 2 y mezclar. 4. Repetir esta operacin hasta el tubo No. 4 5. Despus, cada dilucin se prueba con el ltex como se describi en la seccin A. Mtodo Cualitativo NOTA: EN CASO DE RESULTAR POSITIVO EL METODO CUALITATIVO SE REALIZA EL METODO SEMI-CUANTITATIVO
a. Mtodo Cualitativo La presencia de aglutinacin indica una concentracin de ASO mayor a 200 IU/ml +/- 20% en la muestra. Aquellas muestras en las que no haya presencia de aglutinacin contienen concentraciones de ASO menores a 200 IU/ml. b. Mtodo Semi-Cuantitativo Se reporta la dilucin mayor hasta que se observe aglutinacin. El contenido de ASO de la muestra del paciente se toma de la siguiente tabla: Dilucin de la Aglutinacin 1:2 1:4 1:8 1:16 Concentraciones de ASO IU/ml (+/- 20%) 400 800 1600 3200
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COMPOSICION DE REACTIVOS ASO Reactivo de ltex, Cat. 1126 (Tapa Blanca) Suspensin de partculas de ltex de poliestireno recubiertas con Estretolisina-O en un buffer salino. ASO Control positivo, Cat. No. 1127 (Tapa Roja) Suero humano estabilizado, conteniendo ms de 200 IU/ml de Antiestreptolisina-O. Control Negativo, Cat. No. 1192E (Tapa Verde) Suero humano estabilizado, conteniendo menos de 100 IU/ml de Antiestreptolisina-O. Buffer Glicina-Salina (20x) Concentrado, Cat. 1191 Solucin de glicina y cloruro de sodio, pH 8.2 +/- 0.1.
CONSERVACION DE REACTIVOS Los reactivos son estables cuando se almacenan de 275-281 K (2-8C) hasta la fecha de caducidad marcada en las etiquetas respectivas. Prepare el Buffer Glicina-Salina aadiendo 5 ml del concentrado en un matraz volumtrico y diluya a 100 ml con agua destilada o desionizada. NO CONGELAR.
DESARROLLO DE LA TECNICA (Spinreact) A. Mtodo Cualitativo 7. Lleve los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. 8. Aada una gota (50 l) de la muestra del paciente utilizando una de las pipetas desechables, en un crculo de la placa. Tambin coloque una gota de los controles positivo y negativo en otros crculos separados dentro de la misma placa.
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9. Agite suavemente el frasco de ltex. Coloque una gota (50 l) del reactivo de ltex junto a la gota de la muestra de suero en cada una de los crculos ocupados. 10. Mezcle ambas gotas con el agitador /mezclador desechable incluido, cubriendo por completo toda la superficie del crculo. 11. Agite la placa por 2 minutos de manera que la mezcla rote dentro de los crculos coloque la placa en un rotor automtico a 80-100 r.p.m.
B. Mtodo Semicuantitativo 1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa. 2. Colocar en una gradilla 8 tubos y numerarlos. 3. Depositar al tubo No. 1 diluyente diluido del frasco No. 4. y a todos los dems tubos 4. Despus agregar 50 L del suero problema mezclar perfectamente y de nuevo tomar 50 L y mezclar se repite de nuevo hasta acabar con los tubos. 5. en la placa se depositan 50 L de los tubos y se rotulan dependiendo de la dilucin. 6. Se aade una gota del reactivo No. 1 en cada dilucin. Se mezclan perfectamente bien durante 1:25 minutos. 7. Se realiza la lectura bajo una fuente de luz directa.
Interpretacin: El titulo del suero ser la ultima dilucin que presente agregados macroscopicos(aglutinacin).
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Tubo 1 Dilucin 1:20 + + +
2 1:40 + + +
3 1:80 + +
4 1:160 +
5 1:320 +
6 1:640 -
7 1:1280 -
8 1:2560 -
RESULTADO: Titulo de ASO X 200 = UI/ml
c. Mtodo Cualitativo La presencia de aglutinacin indica una concentracin de ASO mayor a 200 IU/ml +/- 20% en la muestra. Aquellas muestras en las que no haya presencia de aglutinacin contienen concentraciones de ASO menores a 200 IU/ml. d. Mtodo Semi-Cuantitativo Se reporta la dilucin mayor hasta que se observe aglutinacin. El contenido de ASO de la muestra del paciente se toma de la siguiente tabla: Dilucin de la Aglutinacin 1:2 1:4 1:8 1:16 Concentraciones de ASO IU/ml (+/- 20%) 400 800 1600 3200
COMPOSICION DE REACTIVOS ASO Reactivo de ltex, Cat. 1126 (Tapa Blanca) Suspensin de partculas de ltex de poliestireno recubiertas con Estretolisina-O en un buffer salino. ASO Control positivo, Cat. No. 1127 (Tapa Roja) Suero humano estabilizado, conteniendo ms de 200 IU/ml de Antiestreptolisina-O. Control Negativo, Cat. No. 1192E (Tapa Verde) 86
Suero humano estabilizado, conteniendo menos de 100 IU/ml de Antiestreptolisina-O. Buffer Glicina-Salina (20x) Concentrado, Cat. 1191 Solucin de glicina y cloruro de sodio, pH 8.2 +/- 0.1.
CONSERVACION DE REACTIVOS Los reactivos son estables cuando se almacenan de 275-281 K (2-8C) hasta la fecha de caducidad marcada en las etiquetas respectivas. Prepare el Buffer Glicina-Salina aadiendo 5 ml del concentrado en un matraz volumtrico y diluya a 100 ml con agua destilada o desionizada. NO CONGELAR.
MUESTRAS Se recomienda utilizar nicamente suero. Las muestras deben estar completamente coaguladas sin contener partculas ni trazas de fibrina despus de que se descongelen. No inactive con calor el suero ni los controles. Evite el congelamiento/descongelamiento repetido de las muestras.
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BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGADO, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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ANTIGENO DE SUPERFICIE DE HEPATITIS B

(HBsAg, antgeno Australia)
INTRODUCCION La hepatitis B es una de las mayores causas de hepatitis en la poblacin mundial. Las personas que son portadoras del virus pueden no tener sndrome, pero pueden ser fuentes de infeccin. La Hepatitis B es causada por un hepadnavirus (DNA). HBsAg es una protena de estructura compleja que se sintetiza en exceso en el citoplasma del hepatocito. Es detectable en sangre circulante como parte integrante del virin y en otras dos formas diferentes, de distinta morfologa y tamao pero con actividad de HBsAg. El gen S codifica para tres protenas de la envoltura: S, Pre-S2 y Pre-S1. Estas 3 protenas configuran la parte ms externa del virus.
INTERPRETACION CLINICA
HBsAg es el primer marcador viral que aparece en sangre despus de la infeccin por VHB. Puede presentarse la positividad entre las 2-12 semanas siguientes a la exposicin del virus e incluso antes de que produzca la elevacin de las enzimas hepticas o aparezcan los sntomas clnicos. Si la infeccin evoluciona favorablemente HBsAg desaparece en los 3-6 meses posteriores al comienzo de la enfermedad. Su positividad despus del sexto mes define la situacin clnica de hepatitis crnica, pudindose encontrar tambin en portadores asintomtico.
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La prueba Bio-Hbs-Ag en tira est diseada para la deteccin rpida cualitativa del Antigeno de superficie B en suero Humano.
Esta
prueba
esta
elaborada
partir
de
tecnologa
de
inmunoensayo
cromatogrfico de flujo lateral conteniendo una membrana filtrante preimpregnada con anticuerpos anti-HBsAg y reactivos de oro coloidal activados con anticuerpos anti-HBsAg. En la prueba de tira existen dos regiones a lo largo de la membrana, la zona en donde se obtiene el resultado, denominada regin Test T y la regin de Control C, donde se verifica que el desarrollo de la prueba haya sido satisfactorio.
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DESARROLLO DE LA TECNICA (OnSite HBsAg) 1. Saque el cassette del sobre y colquela en un rea de trabajo adecuada. 2. Codifique la tira utilizada para que coincida con los datos de la muestra del paciente. 3. Coloque suficiente suero en un micro-contenedor, recomendando la utilizacin de un recipiente plstico desechable de 10mm. 4. Tome la tira e introduzca el extremo que tendr contacto con el suero, teniendo precaucin de que no se sumerja ms all de la lnea delimitada por las flechas. 5. Resultados altamente positivos aparecern a partir del segundo tercer minuto. Muestras positivas conteniendo una menor concentracin de Positividad podrn tardar hasta 15 minutos en aparecer. No interprete resultados despus de transcurrir 30 minutos. 6. En la regin Test T aparecer una lnea de color rojiza como resultado de la presencia de HBsAg en la muestra evaluada. En caso contrario, no aparecer ninguna lnea en dicha regin. En la regin de control C siempre aparecer una lnea de color rojiza independientemente de un resultado positivo o negativo, como indicador interno de Control de Calidad de la prueba Limpie profundamente el rea de trabajo despus de haber hecho las pruebas con hipoclorito de sodio equivalente. La prueba Bio-HBsAg es capaz de detectar la presencia de HBsAg en suero humano a partir de concentraciones de 1 ng/mL mayores.
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1. Un sobre metalizado conteniendo una tira para la deteccin de HbsAg en suero humano, incluyendo un sobre con desecante como proteccin de la prueba contra la humedad ambiental. 2. Instructivo de uso.
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS La prueba Bio-HBsAG debe almacenarse a temperaturas entre 8-28 C. No congele el equipo ni exponga la prueba a temperaturas extremas. La estabilidad del equip es de 24 meses despus de la fecha de manufactura. Su lote y expiracin aparecen etiquetados sellados en la caja del equipo.
MUESTRA 1. Separe el suero evitando utilizarlo en caso de turbidez. 2. Evitar abrir el sobre metalizado conteniendo la prueba hasta el momento de su utilizacin.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGADO, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PEANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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ANTIGENO PROSTATICO ESPECFICO

INTRODUCCION El antigeno especfico prosttico (PSA) se produce en el citoplasma de las clulas epiteliales, conductos y alvolos de la prstata y en cantidades mnima se ha encontrado en glndulas mamarias normal en la lactancia, leche materna, glndulas salivales, sudorparas y en fluidos vaginales. Las cantidades son tan pequeas que no le resta especificidad al antigeno en relacin con la prstata. Es una glicoproteina que tiene actividad enzimtica tipo proteico, cuya funcin es licuar el lquido seminal. Se considera como un marcador tumoral, de gran utilidad complementado con el tacto rectal, sin que sus cifras normales o altas sean patognomnicas, pero s de gran ayuda al urlogo.
INTERPRETACION CLINICA En todo hombre mayor de 35 aos, es de tanta utilidad como lo es el Papanicolaou femenino en la prevencin del carcinoma cervical. Nivel normal con tacto rectal sin alteraciones, es compatible con salud prosttica. Por sistema inmunomtrico las cifras estn en el rango de 0.4 a 150 ng/ ml. Por sistema de inmunoanalisis se expresa en milsimas de miligramo. Niveles hasta 9.9 ng/dl son el la gran mayora de los casos, compatibles con proceso adenomatosos, sin ser dato seguro. Se debe incrementar en tiempo su dosificacin y un aumento por encima de 0.75 ng/dl aos es altamente sospechoso de malignidad. Niveles superiores dan mucha posibilidad de que hay un proceso carcinomatoso evolutivo. Tener en cuenta que carcinoma intracapsular que se inicia, puede tener cifras normales de antgeno y que hay casos descritos de cifras elevadas, sin carcinoma. Es un valioso signo semiolgico en el estudio prosttico. Despus de ciruga o quimioterapia en carcinoma, su dosificacin, debe verificarse a los 3 y 6 meses. El aumento progresivo de sus niveles se anticipa al estado clnico.
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FUNDAMENTO DE LA TECNICA Este anlisis socia el mtodo inmuno-enzimtico de tipo sndwich en 2 etapas con una deteccin final mediante fluorescencia (ELFA). El cono desechable sirve a la vez como fase slida y como sistema de pipeteo. Los otros reactivos estn listos para su empleo y previamente repartidos en el cartucho. El instrumento realiza automticamente todas las etapas del anlisis. Consisten en una sucesin de ciclos de aspiracin/bombeo del medio reactivo. La muestra se aspira y bombea varias veces a travs del interior del cono. Esta operacin permite a los anticuerpos fijados sobre el mismo capturar el antgeno especfico de la prstata, presente en la muestra. Los componentes no fijados se eliminan mediante lavado. El anticuerpo conjugado a la fosfatasa alcalina se incuba en el cono en el que se fija al antgeno especfico de la prstata. Sucesivas etapas de lavado eliminan el conjugado sin fijar. Durante la etapa final de deteccin, el sustrato (4-Metil-umbeliferil-fosfato) es aspirado y bombeado a travs del cono. La enzima del conjugado cataliza la reaccin de hidrlisis de este substrato en un compuesto (4-Metil-umbeliferona) cuya fluorescencia emitida se mide a 450 nm. El valor de la seal de fluorescencia es proporcional a la concentracin de antgeno especfico de la prstata presente en la muestra. Al final del anlisis, el instrumento calcula los resultados automticamente con relacin a una curva de calibracin memorizada y despus los imprime.
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DESARROLLO DE LA TECNICA (BioMrieux)
1. Sacar nicamente los reactivos que se vayan a usar, y dejarlos atemperar 30 minutos a temperatura ambiente antes de su empleo. 2. Utilizar un cartucho TPSA y un cono TPSA para cada muestra, control o calibrador a ensayar. Verificar que la bolsa de conos sea vuelto a cerrar cuidadosamente despus de cada utilizacin. 3. Teclear o seleccionar TPSA sobre el instrumento para introducir el cdigo del anlisis. El calibrador se identificar obligatoriamente como S1 y debe analizarse en doble para ser memorizado. Si se analiza el control ser identificado como C1. 4. Homogeneizar el calibrador, el control y las muestras con ayuda de un agitador tipo vrtex. 5. Distribuir 200 l de calibrador, muestra o control en el pocillo de muestras. 6. Colocar en el instrumento los conos y los cartuchos de reactivos en las posiciones indicadas en la pantalla. Verificar meticulosamente la concordancia de los cdigos (colores y letras) con las etiquetas. 7. Iniciar el anlisis. Todas las etapas son controladas automticamente por el aparato. Los resultados se obtienen en unos 60 minutos. 8. Al final del anlisis, retirar los conos y los cartuchos del instrumento. 9. Eliminar los conos y los cartuchos usados en un recipiente apropiado.
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60 cartuchos TPSA 60 conos TPSA Control TPSA Calibrador TPSA Disolvente muestra
STR SPR C1 S1 R1
Listos para su empleo Conos sensibilizados con inmunoglobulinas monoclonales de ratn anti-PSA Suero humano + PSA humano + conservantes Suero humano + PSA humano + conservantes Suero de ternera + nitrato sdico 0.9 g/l
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Conservar el equipo VIDAS TPSA a 2-8C. No congelar los conos y los cartuchos. Mantener los reactivos a 2-8C. Despus de cada utilizacin volver a cerrar la bolsa con su deshidratante para mantener la estabilidad de los conos. Todos los componentes son estables hasta la fecha de caducidad indicada sobre la etiqueta del envase, si se conservan en condiciones indicadas.
MUESTRAS Suero o plasma humano (heparinato de litio o EDTA)
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, EALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGADO, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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ANTIGENO PROSTATICO ESPECFICO FRACCIN LIBRE

INTRODUCCION El antgeno prosttico especfico (APE) es una protena producida por la prstata. La cantidad de este antgeno producido puede ayudar a detectar y controlar el progreso del cncer de prstata. La cantidad de APE aumenta en general cuando existe cncer de prstata. El anlisis de APE permite diagnosticar el cncer de prstata ms temprano. Tambin sirve para verificar como responde la prstata al tratamiento una vez diagnosticado el cncer. Desde 1993, la Sociedad Americana y la Asociacin de Urologa de los Estados Unidos han recomendado su determinacin en hombres mayores de 50 aos o a partir de los 40 aos en aquellos sujetos con alto riesgo de desarrollar esta enfermedad. Las personas que tienen valores de APE entre 4 a 10 ng/mL deben tener un seguimiento estrecho ya que en este rango uno de cada 4 hombres pueden tener cncer de prstata. En estas personas puede realizarse una determinacin de antgeno prosttico especfico libre, el cual permite la deteccin de cncer de prstata en etapas iniciales. El APE puede encontrarse elevado en pacientes con crecimiento prosttico benigno, infecciones de la prstata, retencin urinaria aguda y razones fisiolgicas. Los valores normales oscilan entre 0-4 ng/dl. Los valores mayores a 10 ng/ml son ms sugestivos de cncer de prstata. INTERPRETACION CLINICA La fraccin libre de Antgeno prosttico especfico permite diferenciar de una mejor manera a los hombres con enfermedad prosttica benigna de aquellos con cncer de prstata. La fraccin libre del antgeno prosttico especfico se asocia con cncer de prstata ,es especfica y sensible con antgeno entre 4 y 10 ng/dl. Se ha modificado el nmero de biopsias para incrementar el ndice de deteccin.
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El principio de determinacin asocia el mtodo inmunoenzimtico sndwich a una deteccin final por fluorescencia (ELFA). El cono de un solo uso sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo. Los otros reactivos de la reaccin inmunolgica estn listos al empleo y previamente distribuidos en el cartucho. Todas las etapas de la prueba se realizan automticamente por el sistema. La muestra es aspirada y expulsada varias veces del interior del cono. Esta operacin permite a los anticuerpos fijados sobre el cono capturar la fraccin libre del antgeno especfico de la prstata, presente en la muestra. Los componentes no unidos se eliminan por lavados. Los anticuerpos conjugados con la fosfatasa alcalina se incuban entonces en el cono donde se fija al antgeno especfico de la prstata. Las continuacin el conjugado no fijado. Durante la etapa final de revelado, el sustrato (4-Metil-umbeliferil-fosfato) es aspirado y despus expulsado del cono, la enzima del conjugado cataliza la reaccin de hidrlisis de este substrato en un producto (4-Metil-umbeliferona) cuya fluorescencia emitida se mide a 450 nm. El valor de la seal de fluorescencia es proporcional a la concentracin de la fraccin libre de antgeno especfico prosttico presente en la muestra. Al finalizar la prueba, los resultados se calculan automticamente por el sistema VIDAS respecto a una curva de calibracin memorizada, despus se imprimen. etapas de lavado eliminan a
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DESARROLLO DE LA TECNICA (BioMrieux)
1. 2.
Sacar nicamente los reactivos necesarios, temperatura ambiente antes de utilizar.
dejarles
30 minutos a
Utilizar un cartucho FPSA y un cono FPSA para cada muestra, control o calibrador a analizar. Verificar que la bolsa de los conos ha sido correctamente cerrada despus de cada utilizacin. Teclear o seleccionar FPSA sobre el sistema para introducir el cdigo de la prueba. El calibrador se identificado obligatoriamente como S1 debe ser utilizado en doble para ser memorizado. Si el control debe ser analizado se identificar como C1. Homogeneizar con la ayuda de un agitador tipo vrtex el calibrador, el control o la muestra. Distribuir 200 l de calibrador, muestra o control en el pocillo de la muestra. Colocar en el sistema los conos y los cartuchos en las posiciones indicadas en la pantalla. Verificar bien la concordancia de los cdigos (colores y letras) sobre la etiqueta. Iniciar el anlisis. Todas las etapas se generan automticamente por el sistema. Los resultados se obtienen en unos 60 minutos. Al final del anlisis, retirar los conos y los cartuchos del sistema. Eliminar los conos y los cartuchos utilizados en un recipiente apropiado.
3.
4. 5. 6.
7. 8. 9.
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30 cartuchos TPSA 30 conos TPSA Control TPSA Calibrador TPSA
STR SPR C1 S1
Listos para su empleo Conos sensibilizados con inmunoglobulinas monoclonales de ratn anti-PSA Suero humano + PSA humano (fraccin libre) + conservantes Albmina bovina + PSA humano (fraccin libre) +azida sdica 0.9g/l
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Conservar el equipo VIDAS TPSA a 2-8C. No congelar los conos y los cartuchos. Mantener los reactivos a 2-8C. Despus de cada utilizacin volver a cerrar la bolsa con su deshidratante para mantener la estabilidad de los conos.
1. Todos los componentes son estables hasta la fecha de caducidad indicada sobre la etiqueta del envase, si se conservan en condiciones
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AZUCARES REDUCTORES
INTRODUCCION Los azcares reductores estn representados principalmente por la lactosa y glucosa. Se consideran indicadores de infeccin viral, infecciosa o indeterminada en los procesos diarreicos, especialmente en los nios, como tambin indicadores de diarrea en los nios de pecho por deficiencia de disacaridasa, manifestada por no desdoblar la lactosa de la leche materna. La reaccin es una prueba cualitativa, donde se obtienen conocida de materia fecal. diferentes colores,
segn el reactivo empleado que puede ser azul, verde o amarillo, a una dilucin
INTERPRETACION CLINICA Se consideran indicadores de infeccin viral, infecciosa o indeterminada en los procesos diarreicos, especialmente en los nios, como tambin indicadores de diarrea en los nios de pecho por deficiencia de disacaridasa, manifestada por no desdoblar la lactosa de la leche materna.
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La determinacin de los azucares reductores, se basa en la reaccin especfica de la glucosa-oxidasa/peroxidasa (mtodo GOD/POD).
Glucosa oxidasa
Glucosa + O2 + H2 O
glucnico + H2 O2
Peroxidasa
2H2 O2 + 4-Aminoantipirina + fenol
Quinoamina + 4H2 O2
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DESARROLLO DE LA TCNICA
1. Se procede a tomar la muestra rectal mediante una sonda con solucin salina isotnica.
2. Se procede a colocar la muestra en un tubo a temperatura de 37 C.
3. Se coloca una gota de la muestra en la almohadilla de glucosa de las tiras reactivas Combur Test
4. Si la coloracin cambia de amarillo a verde reductores.
es positivo a azucares
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. EHERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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BILIRRUBINAS
INTRODUCCION La Bilirrubina es un producto de desdoblamiento del Hem y alrededor del 70 % de la misma deriva de los eritrocitos envejecidos. Alrededor del 5% proviene de los citocromos citoplasmticos y mitocondriales hepticos, algo, de los citocromos renales y tambin algo de los eritrocitos defectuosos destruidos en la medula sea antes de ser liberados. La bilirrubina circula en el plasma fijada a la albmina extrada por el hgado donde se conjuga por esterificacion de una o de las dos cadenas laterales de cido propinico a mono o diconjugado. El conjugado principal en el hombre es el diglucoronido, que constituye del 70 % al 90 % del pigmento biliar total. La enzima encargada de la conjugacin glucronida es la bilirrubin-uridn-difosfato (UDP)glucoroniltransferasa. El mtodo mas ampliamente utilizado en la determinacin de bilirrubina es la diazoreaccin, que distingue dos fracciones, la de la reaccin directa y la de la reaccin indirecta. La bilirrubina directa (soluble) reacciona inmediatamente con el diazoreactivo de Erlich (reaccin directa), mientras que otra forma de bilirrubina lo hace slo despus de la adiccin de alcohol. La bilirrubina directa se relaciona con la bilirrubina conjugada. La mayora de los mtodos miden slo la bilirrubina total y la directa, presumiendo que la diferencia representa la bilirrubina no conjugada (indirecta o insoluble). La concentracin normal de bilirrubina total en adultos es de 0.2 a 1.0 mg/100 ml, en recin nacidos 0.5 a 1.2 mg/100 ml, neonato de0.5 a 1.5 mg/ 100 ml, lactante de 0.3 a 1.2 mg/100 ml y en nio de 0.2 a 1.0 mg/100 ml Normalmente, los niveles de bilirrubina total y no conjugada son ms altos en los hombres que en las mujeres. La bilirrubina total es la cantidad de bilirrubina directa y bilirrubina indirecta que circula en el organismo y la bilirrubina directa es la responsable del tinte amarillo que toma la piel cuando sus niveles se elevan. Cuando existe una concentracin de bilirrubina elevada, a base de que la bilirrubina soluble que sea capaz de pasar el filtro renal, como es la bilirrubina conjugada o directa, sta pasa a la orina en concentraciones directamente proporcional al grado de bilirrubinemia. INTERPRETACION CLINICA La bilirrubina se encuentra elevada cuando existe dao hepatocelular, ya sea de tipo inflamatorio, txico o neoplsico, obstruccin del rbol biliar intraheptico o extrahepatico, enfermedades hemolticas , ictericia neonatal fisiolgica, sndrome de Crigler-Najjar, enfermedad de Gilbert, sndrome de Dubin-Johnson, sndrome de Rotor y en la intolerancia a la fructosa.
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Las muestra que tenga hemlisis elevaran los niveles de estas, una vez obtenida la muestra trabajarla de inmediato por que la luz degrada la bilirrubina produciendo valores falsamente disminuidos de la misma. La bilirrubina conjugada en los recin nacidos que desarrollan colestasis se eleva mas pronto que la bilirrubina indirecta.
La bilirrubina directa presente en la muestra reacciona con el cido sulfanlico diazoado, originando un complejo coloreado que puede determinarse
espectrofotomtricamente. La cetrimida solubiliza
la bilirrubina indirecta
permitiendo su reaccin junto con la fraccin directa. Los trminos directa y total se refieren a las caractersticas de reaccin en presencia o ausencia de solubilizantes (aceleradores). La bilirrubina directa e indirecta equivale solo de forma aproximada a las fracciones conjugada y no conjugada.
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DESARROLLO DE LA TCNICA (BioSystems) Reactivos proporcionados: Reactivo AT para Bilirrubina total ( solo funciona como blanco de reactivo) Reactivo AD para Bilirrubina directa (solo funciona como blanco de reactivo) Reactivo B Preparacin de reactivos: Reactivo de trabajo para bilirrubina total: Mezclar 1 volumen del reactivo B ms 4 volmenes del reactivo AT o bien mezclar 100 l del reactivo B mas 400 l del reactivo AT Reactivo de trabajo para bilirrubina directa: Mezclar 1 volumen del reactivo B ms 4 volmenes del reactivo AD o bien mezclar 100 l del reactivo B ms 400 l del reactivo AD BILIRRUBINA TOTAL
1. Pipetear en tubos de ensayo:
Reactivo de trabajo Blanco de reactivo (AT)
500 l 500 l
Muestra 50 l 50 l
2. Agitar bien y dejar durante 2 minutos a temperatura ambiente.
3. Leer absorbancia (A) de las muestras a 540 nm muestra
frente al Blanco de
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BILIRRUBINA DIRECTA
1) Pipetear en tubos de ensayo:
Reactivo de trabajo Blanco de reactivo (AD)
500 l 500 l
Muestra 50 l 50 l
2) Agitar bien y dejar reaccionar durante exactamente 5 minutos a 37C.
4. Leer absorbancia (A) de las muestras a 540 nm muestra
frente al Blanco de
CLCULOS:
La concentracin de bilirrubina en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula: A Muestra A Blanco Muestra
X C patrn = C muestra
A Patrn
Para las lecturas efectuadas con cubetas de 1 cm, se puede aplicar el siguiente factor: (A Muestra A Blanco Muestra) x 7.74 = C Muestra
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COMPOSICION DE LOS REACTIVOS AT: Reactivo. Acido sulfanlico 29 mmol/L, cido clorhdrico 0.2 mol/L, cetrimida 50mmol/L. AD: Reactivo. cido sulfanlico 35 mmol/L, cido clorhdrico 0.24 mol/L B: Reactivo. Nitrito sdico 1.16 mmol/L
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Conservar a 15-30C Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminacin durante su uso.
MUESTRAS Suero recogido mediante procedimiento estndar.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
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BIOMETRIA HEMATICA
INTRODUCCION En la actualidad una de las enfermedades que ms se observa en la poblacin independientemente de la raza o condicin social es la anemia. Cuando la Hemoglobina disminuye en la sangre, se reduce la llegada de oxgeno a los tejidos, lo que trae consecuencia una disminucin en la obtencin energtica de las clulas; la astenia y la disnea son las manifestaciones clnicas de este fenmeno. La biometra hemtica o citomtria hemtica es un estudio que nos da informacin a cerca del estado de salud de la persona. La anemia en estudios de laboratorio se caracterizado disminucin de los niveles normales de hemoglobina y otros parmetros en la sangre. Los recuentos de eritrocitos, leucocitos y plaquetas se expresan cada uno como concentraciones (clulas por unidad de volumen de sangre). La unidad de volumen para los recuentos celulares se expres originalmente como milmetros cbicos (mm3) debido a las dimensiones lineales de la cmara Hematocitomtrica (recuento celular).el Internacional Comit for Standarditazation in Hematology recomienda que la unidad de volumen sea el litro. Mediante parmetros sencillos como es la determinacin del nmero total de eritrocitos, la hemoglobina, el hematocrito, volumen globular medio, la concentracin corpuscular de hemoglina, la concentracin corpuscular media de hemoglobina, hematocrito, recuento plaquetario y recuentos de los leucocitos, nos dan la informacin del estado del paciente. Adems que el anlisis es microscpico evaluando como se observan los eritrocitos ya que si presentan alguna anormalidad este estudio sirve para identificar algunas patologas como la esferosis hereditaria, la talasemia, la policitemia vera y las leucemias. INTERPRETACION CLINICA La biometra hematina nos muestra la informacin sobre como se encuentra el estado del paciente mediante la determinacin de los parmetros antes mencionados que aunados a la informacin que presenta el paciente en el momento de la toma de la muestra y de la condicin en que se le toma nos da informacin detallada de que si cursa con un proceso de anemia ya sea debida a mala nutricin, incapacidad de algunas enzimas o defectos hereditarios como en el caso de talasemias, policitemias veras, leucemias, aplasia medular, displasia medular, etc.
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FUNDAMENTO DE LA TECNICA METODO DE DETECCION DC Para la determinacin de las formula blanca y roja, se ocupa un mtodo automatizado por el equipo KX-21, debido a que en la actualidad los mtodos automatizados tiene un menor grado de error, adems de que el equipo cuenta con un sistema de calibracin interno, se realiza la calibracin mediante sueros calibradores los cuales muestran valores altos, normales y bajos. La muestra de sangre es aspirada, medida con un volumen
predeterminado, diluida en una proporcin especfica y llevada hasta cada transductor. La cmara transductora tiene una diminuta abertura. En ambos lados de la abertura hay electrodos entre los cuales fluye corriente directa. Las clulas sanguneas suspendidas en la muestra diluida pasa a la zona de la abertura causando una resistencia a la corriente directa que cambia entre los electrodos. Como la resistencia de la corriente directa cambia, la medida de las clulas sanguneas es detectada como pulsos elctricos. Las clulas sanguneas son calculadas contando los pulsos y un histograma con el tamao de las clulas sanguneas es trazado por determinacin de los pulsos. Analizando un histograma es posible obtener varios datos de anlisis.
115
Para la determinacin de cada uno de los elementos que componen la Biometra Hemtica ver:
VER TECNICA DE PLAQUETAS VER TECNICA DE FORMULA BLANCA VER TECNICA FORMULA ROJA
116
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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BUSQUEDA DE AMIBA EN FRESCO
INTRODUCCION Muchas parasitosis son asintomticas o producen sntomas muy leves. En los exmenes sistemticos de sangre y de materia fecal se descubren numerosos casos de infecciones. Se conocen aproximadamente 70 especies de parsitos que pueden infectar al ser humano. Ms de la mitad de estos se detectan examinando muestras de materia fecal debido a que habitan en el aparato gastrointestinal y las zonas circundantes. De los parsitos que pueden detectarse en las heces fecales, cerca de 33% son protozoarios unicelulares y 66% son gusanos multicelulares. Slo seis o siete de los protozoarios intestinales tienen importancia clnica.
INTERPRETACION CLINICA Amibiasis intestinal, es producida por el protozoario Entamoeba histolytica, es una enfermedad endmica en nuestro medio. Parsita en el colon y tiene un perodo latente para manifestarse entre 48 horas y 4 meses. Lacera la mucosa intestinal y tiene manifestaciones extraintestinales. Es agente etiolgico del 25 % de los estados diarreicos.
118
Las infecciones estomacales en los nios es una de las principales infecciones que atacan a los nios durante los primeros aos de su vida.
De este modo en el ambiente existen diferentes microorganismos que causan infeccin en nios, un rubro de diversidad de estas infecciones son de tipo
bacteriano y viral, cabe sealar que este es un mtodo que ayuda a la identificacin del cuadro que esta cursando el nio, mediante la determinacin de por identificar el origen de las infecciones debidas a quistes o trofozoitos de
Entamoeba histolytica, y algunos rinovirus, mediante los azucares reductores, determinacin de pH, sangre oculta y celularidad que nos muestra un criterio que ayuda al diagnostico sobre el cuadro de infeccin que se presente.
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DESARROLLO DE LA TECNICA
1. Se procede a tomar la muestra rectal mediante una sonda con solucin salina isotnica.
2. Se procede a colocar la muestra en un tubo a temperatura de 37 C.
3. Se toma un portaobjetos y con la ayuda de una pipeta pasteur se colocara 2 gotas del moco fecal.
4. Una gota se cubrir con un cubreobjetos solamente y la otra se le colocara una gota de lugol, para que esta permita la observacin de los quistes o trofozoitos de Entamoeba histolytica.
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COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Lugol
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Colocar el reactivo a temperatura ambiente, y protegido de la luz Ya que en temperaturas extremas el reactivo se evapora y se precipita.
MUESTRAS Muestra de moco fecal, tomadas con un sonda con solucin salina isotnica.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
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CALCIO IONIZADO
INTRODUCCION El calcio existe dentro de la sangre en forma libre ( calcio ionizado) y ligado a la fraccin de albmina. El calcio srico habitual, mide ambas formas. Cuando el nivel de albmina srico esta por debajo o alto refleja en la misma forma en el calcio srico. Por cada gramo que rebaje el nivel srico de la albmina, se rebaja en 0.8 mg el calcio fuera de la deshidratacin, son el hiperparatiroidismo y los tumores malignos. El calcio en sangre esta presente casi exclusivamente en el plasma. El calcio existe en el suero (en el plasma) en tres formas de distintas:
1.
Calcio libre o Ionizado que es la forma fisiolgicamente activa
y representa alrededor del 50% del calcio total. 2. Alrededor del 5% del calcio total forma complejos con toda
una variedad de aniones, particularmente fosfato y citrato.
3. grado.
Y el 45% restante de calcio fijado a las protenas del plasma, pero tambin a la globulina en limitado
especialmente a la albmina,
123
Los niveles estn comprendidos en hiperparatiroidismo, excesiva vitamina D e hiperparatiroidismo aberrante. Niveles disminuidos en hipoparatiroidismo, deficiencia de Vitamina D y pseudohipoparatiroidismo. El calcio ionizado srico depende de la temperatura , siendo recomendable su medicin a 37 C. aunque el suero como el plasma y la sangre total pueden ser muestras adecuadas para la determinacin de calcio ionizado, los han demostrado disminuir la anticoagulantes como la heparina y el citrato concentracin del calcio. La acidosis promueve un incremento del nivel de calcio ionizado , mientras que la alcalosis provoca la correspondiente disminucin.
INTERPRETACION CLINICA Si bien la mayor parte del calcio en la sangre esta ligado a protenas o a especies aninicas de menor tamao, la fraccin biolgicamente activa del calcio es calcio inico libre. A travs de su papel en diferentes reacciones enzimticas y en los mecanismos de transporte de membrana, el calcio inico tiene una importancia vital para la coagulacin de la sangre, la conduccin nerviosa, la transmisin neuromuscular, as como la contraccin muscular, el exceso de calcio inico (hipercalcemia) puede desembocar en coma. Otros sntomas reflejan transtornos neuromusculares como hiperreflexia y/o anomalas neurolgicas como neurastenia, depresin o psicosis. La deficiencia de calcio inico (hipocalcemia) con frecuencia se traduce en calambres (tetania) , en un menor latido cardaco y en una funcin ventricular izquierda reducida. Una hipocalcemia prolongada, puede traducirse en desmineralizacin sea (osteoporosis) que puede llevar a fracturas espontneas. Las mediciones de calcio inico son de gran utilidad en: transfusin de sangre citratada, transplantes de hgado, ciruga a corazn abierto, hipocalcemia neonatal, enfermedades renales, hiperparatiroidismo, malignidad, hipertensin y pancreatitis.
124
El calcio inico se mide por potenciometra electrnica ioniselectiva. En el clculo de resultados con respecto al calcio inico, la concentracin se relaciona con el potencial a travs de la ecuacin de Nernst.
Los resultados se miden a 37C
utilizando cartuchos que requieren control
trmico, y se corrigen a 37C utilizando cartuchos que no requieren control trmico. Las caractersticas de funcionamiento de los sensores son equivalentes en todas las configuraciones de cartucho.
125
DESARROLLO DE LA TCNICA ( i-STAT ) 1. Se requiere el aparato i-STAT, un cartucho atemperado donde se localiza la zona de insertar muestra. 2. En la zona de la muestra debe quedar una gota y se debe de cerrar el cartucho e introducirlo inmediatamente al aparato, el cual se activa automticamente. 3. Introducir el num. del operario, los datos de identificacin del paciente 4. Con los datos anteriores el i-STAT muestra un desplegado despus de determinado tiempo con los valores que calcul. 5. Al final de la determinacin solamente se retira el cartucho 6. Para convertir un resultado de mmol/l a mg/dl, multiplique por 4 (factor).
126
Cada cartucho de i-STAT contiene un electrodo de referencia, sensores para la medicin de analitos especficos y una solucin de calibrado acuosa tamponada de concentracin conocida. En los cartuchos que disponen de un sensor para la medicin de calcio inico, la solucin de calibrado contiene 1.25 mmol/l de calcio inico. Na + (134mmol/L), K+ (4mmol/L), Ca++ (1mmol/L), CO2 (28mmHg) pH : H+(7.4).
Mantener los cartuchos entre 2-8C. Los cartuchos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja.
MUESTRAS Suero
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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CALCIO SRICO
INTRODUCCION El calcio ocupa el quinto lugar entre los ms abundantes elementos minerales del cuerpo humano. Aproximadamente, el esqueleto contiene un 98 % de los 1.000 a 1.200 g de calcio presentes en el adulto, principalmente en forma de hidroxiapatita, formada por una red cristalina compuesta de calcio, fsforo e hidrxido. Del calcio restante, alrededor de la mitad se halla presente en el lquido extracelular y el resto, en una diversidad de tejidos, particularmente en el msculo esqueltico. El calcio desempea un papel vital en la coagulacin, la conduccin neuromuscular, el mantenimiento del tono normal y la excitabilidad del msculo esqueltico y cardaco. El calcio esta implicado en la sntesis de glndulas exocrinas y endocrinas , la preservacin de la integridad de la membrana celular y su permeabilidad, particularmente en lo que se refiere al intercambio entre sodio y potasio, el proceso de la visin y acontecimiento intracelulares complejos que implican la protena fijadora de calcio. El calcio en sangre esta presente casi exclusivamente en el plasma. El calcio existe en el suero (en el plasma) en tres formas de distintas: 4. Calcio libre o Ionizado que es la forma fisiolgicamente activa y representa alrededor del 50% del calcio total 5. Alrededor del 5% del calcio total forma complejos con toda una variedad de aniones, particularmente fosfato y citrato 6. Y el 45% restante de calcio fijado a las protenas del plasma, especialmente a la albmina , pero tambin a la globulina en limitado grado. Las distribuciones relativas de tres formas son alteradas como resultado de cambios, ya sea el pH de los lquidos extracelulares o en la concentracin de protenas. El mantenimiento de la homeostasis del calcio implica la participacin de tres rganos importantes: El intestino delgado Los riones Y el msculo esqueltico. La glndula mamaria resulta importante durante la lactancia, al igual que le feto y la placenta durante la gestacin. La homeostasis del calcio esta regulada por varias hormonas que actan principalmente sobre los rganos ms importantes relacionados con el metabolismo del calcio. INTERPRETACION CLINICA Niveles aumentados se observan en hiperparatiroidismo, metstasis sea, intoxicacin Vitamina D, sarcoidosis , enfermedad de Adisson, mieloma, deshidratacin, inmovilizacin prolongada ,factor familiar (hipercalcemia).
129
Niveles disminuidos se observan en Hiperfosfatemia por insuficiencia renal, deficiencia de Vitamina D, malaabsorcin de pancretica, hipoproteinemia, en osteoporosis la calcemia no sufre variaciones generalmente.
El Arsenazo III se une especficamente al calcio formado un complejo coloreado a 650 nm.
Ca ++ + Arsenazo III
Complejo coloreado
La cantidad de calcio presente en la muestra es directamente proporcional a la intensidad del complejo coloreado formado.
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DESARROLLO DE LA TCNICA (RANDOX)
Agua destilada Muestra Calibrador Reactivo 1
Reactivo Blanco 7.5 l ----------500 l
Calibrador --------7.5 l 500 l
Muestra ----7.5 l ----500 l
2. Mezclar y leer la absorbancia de la muestra (A muestra) y calibrador (A calibrador) frente al reactivo blanco al cabo de 5 minutos.
CALCULO A muestra Concentracin = A calibrador x valor del calibrador
131
Reactivo Arzenazo III: 90 mmol/l pH 5.9 384 mol/l
Acetato sdico Arsenazo Estabilizadores no reactivos
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Todos los reactivos estn listos para usar. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25C.
MUESTRAS Suero/plasma
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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CALCIO URINARIO
INTRODUCCION
El calcio ocupa el quinto lugar entre los ms abundantes elementos minerales del cuerpo humano. Aproximadamente, el esqueleto contiene un 98 % de los 1.000 a 1.200 g de calcio presentes en el adulto, principalmente en forma de hidroxiapatita, formada por una red cristalina compuesta de calcio, fsforo e hidrxido. Del calcio restante, alrededor de la mitad se halla presente en el lquido extracelular y el resto, en una diversidad de tejidos, particularmente en el msculo esqueltico. El calcio desempea un papel vital en la coagulacin, la conduccin neuromuscular, el mantenimiento del tono normal y la excitabilidad del msculo esqueltico y cardaco. El calcio esta implicado en la sntesis de glndulas exocrinas y endocrinas , la preservacin de la integridad de la membrana celular y su permeabilidad, particularmente en lo que se refiere al intercambio entre sodio y potasio, el proceso de la visin y acontecimiento intracelulares complejos que implican la protena fijadora de calcio.
INTERPRETACION CLINICA La disminucin de calcio en la orina aparece en el hipoparatiroidismo, pseudohipoparatiroidismo, osteomalacia, raquitismo, enfermedad celaca, hipoparatiroidismo, neoplasia maligna de hueso, metstasis osteoblsticas, nefritis aguda y muchos casos de nefrosis. Puede determinar una disminucin de calcio en orina los anticonceptivos orales, estrgenos bicarbonatos, litio, neomicina. Existen interferencias qumicas las sales de calcio provocan un aumento tanto en suero como en orina, (posible contaminacin del agua destilada). Su disminucin en orina alcalina, debido a presencia de sales de calcio precipitadas. 134
El Arsenazo III se une especficamente al calcio formado un complejo coloreado a 650 nm.
Ca ++ + Arsenazo III
Complejo coloreado
La cantidad de calcio presente en la muestra es directamente proporcional a la intensidad del complejo coloreado formado.
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DESARROLLO DE LA TCNICA (RANDOX)
Agua destilada Muestra Calibrador Reactivo 1
Reactivo Blanco 7.5 l ----------500 l
Calibrador --------7.5 l 500 l
Muestra ----7.5 l ----500 l
4. Mezclar y leer la absorbancia de la muestra (A muestra) y calibrador (A calibrador) frente al reactivo blanco al cabo de 5 minutos.
CALCULO A muestra Concentracin = A calibrador x valor del calibrador
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Reactivo Arzenazo III: 90 mmol/l pH 5.9 384 mol/l
Acetato sdico Arsenazo Estabilizadores no reactivos
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Todos los reactivos estn listos para usar. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25C.
MUESTRAS Suero/plasma
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BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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CELULAS DE LUPUS
INTRODUCCION En el ao 1948 Hargraves descubri una clula en la mdula sea con caractersticas especiales, de presentar inclusiones definidas y constantes, considerndola como un cuerpo de inclusin plido y homogneo localizado a un lado del ncleo de neutrofilo que lo fagocita. Observ este elemento con mucha regularidad en pacientes afectados de Lupus Eritematoso y lo bautiz con el nombre de Clulas L.E. Este elemento se presenta como una manifestacin de la globulina gamma G, que es un anticuerpo contra la protena del ncleo celular representada en el cido desoxirribonucleico.
INTERPRETACION CLINICA Esta prueba es especfica, pero no tiene gran sensibilidad por cuanto es negativa en el 30% de los pacientes de lupus. La corticoterapia, que a menudo se aplica prontamente a estos enfermos, inhibe la formacin de las clulas LE. Por lo tanto en la actualidad no tiene tanto valor diagnstico y es necesario utilizar otras pruebas. Tambin se puede observar la formacin de clulas LE en otras enfermedades autoinmunes y muchas veces difciles de distinguir clnicamente del lupus, como en colagenopatas, reumatoide, hepatitis crnica como un apresolian e isoniacida cuando esclerodermia progresiva y se asocia con dilantina y artritis
reumatoidea. Por ello en la actualidad la determinacin clsica de las clulas LE ha sido desplazada por otras pruebas cada vez mas sensibles y especficas, entre las que se destacan los anticuerpos antinucleares.
139
Las clulas LE son polimorfonucleares que han fagocitado material nuclear alterado proveniente de la destruccin del ncleo de otros leucocitos por el llamado factor LE (factor nuclear). Este factor (IgG anti-ADN) se fija a la superficie del ncleo y determina alteraciones de la cromatina. El material nuclear alterado recubierto de anticuerpos y complemento es fagocitado por los polimorfonucleares neutrfilos. La prueba es positiva cuando se observan leucocitos en cuyo citoplasma se hallan ncleos fagocitados de otras clulas con aspecto desestructurado y parcial o totalmente hialinizados.
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1. Se coloca la muestra de sangre a temperatura de 37 C durante 1 hora.
2. Posteriormente se coloca en un mortero el paquete globular y se triturara lo ms que se pueda.
3. Una vez triturada la muestra esta se coloca en un tubo de wintrobe la cual se centrifugara por 20 minutos.
4. Ya centrifugada se desecha el sobrenadante y del paquete de los glbulos blancos se realiza un frotis.
5. Se fija y se tie con hemocolorante rpido y se observa en el microscopio.
Se observara en el caso de clulas LE positivo neutrfilos fagocitando neutrfilo (aspecto de roseta) o en su defecto juntos los neutrfilos pero fagocitando.
141
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS No se necesita de algn reactivo en especial, ni kit especial solo un tubo rojo estril, mortero, y tubos de Wintrobe. Hemocolorante
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Mantener a temperatura ambiente.
MUESTRAS Se extrae una muestra de sangre completa
142
BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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CITOQUIMICO DE LQUIDO DE ASCITIS

INTRODUCCION Proviene de la acumulacin de lquido en la cavidad peritoneal, por la interaccin de mltiples factores. Es un ultrafiltrado del plasma, cuya formacin depende del equilibrio entre la presin hidrostticas capilar, y la presin onctica plasmticas, la permeabilidad capilar y la resorcin linftica. El lquido asctico puede corresponder a un exudado o a un trasudado y es de importancia su diferenciacin, que en algunos casos aclara la etiologa del proceso. En su patogenia interviene primordialmente el incremento de la presin portal y la reabsorcin renal del sodio que se encuentra elevada, originndose un volumen plasmtico aumentado y exceso de produccin de linfa. El trasudado generalmente se debe a una acumulacin excesiva de lquido sin inflamacin, generalmente estril y que tiene varios mecanismos. Predomina una reduccin de la presin osmtica coloidal debida a hipoproteinemia, aumento de la permeabilidad capilar y presin venosa, retencin de agua, disminuyndose la presin linftica y de los tejidos con obstruccin de los linfticos, originndose un trasudado que se localiza en los intersticios tubulares, llegando en ocasiones a un volumen de varios litros. Los exudados son producidos por mecanismos infecciosos, originados por bacterias, infecciones virales, micticas o parasitarias con caractersticas diferentes. Los parmetros que se determinan en el citoqumico del lquido de ascitis son: volumen, aspecto, color, densidad, pH, red de fibrina, leucocitos, polimorfonucleares, eritrocitos, PCR, glucosa, DHL, amilasa, fosfatasa alcalina y protenas. INTERPRETACION CLINICA ASPECTO Y COLOR: El lquido peritoneal normal es claro, de color amarillo plido y de escasa cantidad (inferior a 50 ml) Una aspiracin con sangre microscpica o un lquido teido de sangre debe de distinguirse de una puncin traumtica. Esta ultima muestra de forma caracterstica aclaracin con la aspiracin continuada. Un lquido opaco o turbio puede deberse a una apendicitis, pancreatitis, estrangulacin o infarto intestinal, perforacin intestinal tras un traumatismo o peritonitis bacteriana espontnea.
144
Un liquido lechoso puede ser debido un derrame quiloso o seudo quiloso. Los derrames quilosos verdaderos pueden estar causados por una lesin o un bloqueo del conducto torxico debido a, adherencias o cirrosis heptica. LEUCOCITOS: En el examen microscpico para distinguir, las ascitis debidas a una cirrosis no complicada de una peritonitis bacteriana espontnea (PBE) causada por el paso de bacterias desde la sangre hasta el liquid asctico, se ha utilizado el recuento leucocitario total. EL recuento leucocitario del liquido ascitico puede cambiar intensamente debido a desviaciones del lquido extracelular, durante la diuresis, el recuento leucocitario del liquido puede aumentar esta tambin puede hacer cambios en el gradiente albmina srica liquido asctico. ERITROCITOS: Presentes en poca cantidad en los trasudados y en cantidad variable en los exudados. pH: El pH en lquido asctico se ha utilizado para distinguir la PBE de las ascitis no complicadas, un pH inferior a 7.3 o un gradiente pH arterial-asctico mayor de 0.1 ofrecen una sensibilidad y una especificad mayor. RED DE FIBRINA: Esta presente en los exudados. En el anlisis qumico se determina: PROTEINAS: el gradiente albmina srica-liquido asctico puede ser til para clasificar los derrames peritoneales como trasudados o exudados. No obstante la concentracin de protenas en la peritonitis bacteriana espontnea puede ser relativamente baja. GLUCOSA: un valor inferior a 60 mg/ml se observa en el 30 50 % de los casos de pacientes con peritonitis tuberculosa y el 50 % en pacientes con carcinoma peritoneal. Un cociente de glucosa en lquido / srico inferior a 1.0 puede producir se peritonitis bacteriana espontnea, y alrededor del 30 % de los trasudados del liquido asctico. AMILASA: esta elevada en mas del 90 % de pacientes con pancreatitis aguda, traumatismo pancretico. Puede producirse un aumento debido a la perforacin gastroduodenal, en la trombosis venosa mesentrica aguda, en la estrangulacin intestinal o en necrosis. FOSFATASA ALCALINA: del lquido asctico (el doble del lmite superior en plasma) se presenta en pacientes con estrangulacin o perforacin del intestino delgado. LACTATO DESHIDROGENASA (LDH) el liquido ascitico a menudo se encuentra elevada en peritonitis bacteriana espontnea, a pesar de que la actividad de la LDH en el lquido asctico puede esta elevado en derrames neoplsicos.
145
El liquido de ascitis es un ultrafiltrado del plasma, cuya formacin depende del equilibrio entre la presin hidrosttica capilar, y la presin onctica la permeabilidad capilar y la resorcin linftica. En su patogenia interviene primordialmente el incremento de la presin portal y la reabsorcin renal del sodio que se encuentra elevada, originndose un volumen plasmtico aumentado y exceso de produccin de linfa. El lquido puede corresponder a un exudado o a un trasudado y es de plasmtica,
importancia su diferenciacin, que en algunos casos proceso.
aclara la etiologa del
146
1. Se calcula el volumen aproximado de la muestra.
2. Se observa la muestra y se describe el aspecto y color.
3. Se mide la densidad y el pH con tiras reactivas.
4. Se deposita muestra en la cmara de Neubauer para el conteo de leucocitos, eritrocitos.
5. Se centrifuga la muestra y se observa si presenta red de fibrina.
6. Del sobrenadante se hacen las determinaciones de glucosa, PCR, DHL, amilasa, fosfatasa alcalina y protenas. VER TCNICA DE CADA PARAMETRO
7. Del sedimento se realiza un frotis, se tie y se observa el porcentaje de polimorfonucleares.
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Reactivo de Glucosa, Protena C Reactiva, Deshidrogenasa lctica, Amilasa, Fosfatasa Alcalina y cido sulfosalicilico ( protena) Hemocolorante
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Ver conservacin de cada reactivo que se utiliza en esta determinacin en las respectivas hojas de este manual.
MUESTRAS Lquido peritoneal o de ascitis.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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CITOQUMICO DE LQUIDO BILIAR

INTRODUCCIN Aproximadamente cada da, penetran en el duodeno de 500 1000 ml de bilis. Este es de color amarillo prdo o verde y suele ser alcalina, con un pH de 7 -8.5. Adems de las sales biliares, principalmete glicocolato sdico y taurocolato, la bilis contiene bilirrubina, colesterol, fosfolpidos y diversas sales inorgnicas. La fosfatasa alcalina la nica enzima presente en una cantidad significativa de bilis, esta desprovista de funciones digestivas. BILIS: La coloracin amarilla a a verde es el resultado de la presencia de bilis, que en ocasiones es regurgitada al estmago normal y a menudo acompaa una sobreproduccin de nuseas durante la intubacin. No obstante las cantidades elevadas de bilis constituyen un hallazgo anmalo, que suele indicar lesiones obstructivas del intestino delgado distales a ampolla de Vater. Para obtener bilis estimulada se realiza intubacin duodenal y la posicin de la sonda se confirma fluoroscpicamente. Se recogen tres fracciones de bilis en envases separados. La primera en aparecer, la bilis A es ligeramente amarilla y acuosa y se presenta en cantidades de 5 -20 ml. Es la bilis que se origina en el conducto comn. La bilis B es viscosa y amarillo parda oscura, y aparece sbitamente en 1-3 min, tras la A. La bolis B que normalmente se encuentra en cantidades de 30-75 ml, se origina en la vescula biliar. Tras la bilis B, la bilis se vuelve de nuevo de color amarillo plido y acuosa (bilis C) y presumiblemente procede del conducto heptico y de las radiculas intrahepaticas.
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INTERPRETACIN CLNICA Se ha sugerido que la deteccin de colesterol o cristales de bilirrubinato en la bilis duodenal podria distinguir a los pacientes con clculos o sin clculos biliares. CRISTALES DE COLESTEROL: son cristales transparentes y rectangulares o romboidales. La presencia de cristales de colesterol en la bilis de la vescula biliar tiene una sensibilidad del 87 %, una especificidad de 97 % y un valor pronstico del 97 %. CRISTALES DE BILIRRUBINATO CALCICO: son amorfos de color amarillo o anaranjado. Estos cuando se encuentran presentes solos tiene una sensibilidad del 71 %, una especificidad del 93 % y un valor pronstico positivo de 78 %. ARENILLA BILIAR: es de color rojo pardo oscuro. Su hallazgo es sugestivo de colelitiasis o clculos en algn punto de las vas biliares. La inflamacin de las vas biliares se acompaa a menudo de detritos floculentos, que con frecuencia estn formados por clulas epiteliales teidas de bilis, leucocitos y agregados de bacterias. En ocasiones el cultivo de la bilis estimulada es informativo. Sin embargo la interpretacin a menudo es difcil y depende de la evaluacin cualitativa y cuantitativa de los cultivos.
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FUNDAMENTO La ausencia del bilis B se asocia con colecititis avanzada, colelitiasis con obstruccin del conducto cistico o una colecistectomia reciente. Sin embargo la ausencia de bilia B no constituye un prueba de insuficiencia de la vescula biliar y el hallazgo debe confirmarse mediante otras tcnicas diagnsticas.
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DESARROLLO 1. Se calcula el volumen aproximado de la muestra 2. Se describe el aspecto y color 3. Se mide la densidad y el pH a travs de la tira reactiva (Combur) 4. Se deposita parte de la muestra en la cmara de Neubauer y se realiza el conteo de: leucocitos y eritrocitos 5. Se hace observacin en fresco para la observacin de: cristales de colesterol, bilirrubinato, arenilla biliar y bacterias 6. Se centrifuga la muestra y del sedimento se hace el frotis y teir con la tincin rpida para la observacin de la abundancia celular de PMN
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COMPOSICION DE LOS REACTIVO Hemocolorante Tira reactiva (Combur)
CONSERVACIN Indicada en cada reactivo
MUESTRAS Lquido biliar
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BIBLIOGRAFA 5. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994,
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CITOQUIMICO DEL LQUIDO CEFALORRAQUIDEO INTRODUCCION Aproximadamente el 70 % del liquido cefalorraqudeo (LCR) se forma en los plexos coroideos ventriculares a travs de un proceso combinado de secrecin activa y ultra filtracin a partir del plasma. Alrededor del 30 % se forma como liquido intersticial, elaborado dentro de los espacios intercelulares del cerebro y la medula espinal. Una resorcin a travs de las vellosidades aracnoideas de los senos durales. El volumen del LCR en adultos es aproximadamente de 90 a 150 ml. La velocidad de formacin en adultos es de unos 500 ml/da 0 20 ml/hora. Se distinguen dos barreras hematoencefalicas morfolgicamente distintas que impiden el paso de los constituyentes al plasma, incluyendo las protenas, al LCR. La concentraciones en el LCR de determinadas sustancias estn reguladas dentro de estrechos lmites por ejemplo: potasio, hidrogeno, magnesio, y calcio. La glucosa, la urea, y la creatinina difunden libremente, pero requieren varias horas para encontrar una situacin de equilibrio. Las protenas difunden con lentitud a travs de un gradiente de concentracin desde el plasma al LCR, a velocidades que disminuyen a medida que aumenta el tamao de las molculas. El papel principal de la puncin lumbar es el diagnostico de la meningitis bacteriana, micotica, micobacteriana y amebiana. Debido a su alta especificidad, resulta til para diagnosticar en proceso malignos relacionados con las meninges. INTERPRETACION CLINICA ASPECTO Y COLOR: El LCR normal es cristalino, con un aspecto y una viscosidad comparables a los del agua. Los leucocitos (mas de 200 clulas/L: turbidez ligera) y los eritrocitos (400 clulas 40 /l turbidez ligera) pueden producir un LCR opaco o turbio. La turbidez puede ser causada por microorganismos (bacterias, hongos, amebas). La sangre microscpica plantea el problema de la diferenciacin entre una puncin traumtica y una hemorragia suncranoidea o una intracerebral. En el aspecto post-centrifugado la hemorragia subaracnoidea se asocia con xantocroma, causada por la liberacin de hemoglobina a partir de los eritrocitos hemolizados. La xantocroma se refiere al color rosa plido a anaranjado o amarillo en el sobrenadante del LCR centrifugado. FIBRINA: La formacin de cogulos se produce por un aumento del fibringeno asociado con procesos como una puncin traumtica, un bloqueo subaracnoideo, una meningitis supurada y una meningitis tuberculosa.
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En el recuento leucocitario el rango normal aceptado es de 0-5 clulas (linfocitos y monocito)/L en adultos. El rango normal para recin nacidos es un poco mas alto, de unos 0- 30 mononucleares /L. La cuenta leucocitaria aumenta cuando existen padecimientos inflamatorios, hemorragia, neoplasias y traumatismos. RECUENTO DIFERENCIAL: Neutrfilos: aumenta en meningitis bacteriana, meningitis mictica, primeras fases de meningitis viral, primeras fases de tuberculosis, tumor metasttico, leucemia granuloctica. Linfocitos: cuenta leucocitaria de 300 a 500 con predominio de linfocitos indica meningitis viral y asptica, sfilis del sistema nervioso central, meningitis tuberculosa, tumor o absceso cerebral, esclerosis mltiple, meningitis mictica y parasitaria, sarcoidosis meningea. Monocitos: con 40% o ms son frecuentes en hemorragia subaracnoidea, toxoplasmosis. Eosinfilos: el criterio para una eosinofilia de importancia clnica debe ser de 10% y puede deberse a una invasin por helmintos, infecciones por hongos, infeccin por rickettsias. En el anlisis qumico se encuentran: Protenas totales: las protenas normalmente difunden desde el plasma al LCR, la mayora de las protenas sricas pueden encontrarse en el LCR, incluyendo fibringeno y -lipoproteinas en bajas concentraciones .la concentracin de prealbmina y trasferan son relativamente elevadas, comparadas con la del plasma. Protena C reactiva. Para el diagnostico diferencial de la meningitis bacteriana frente a la vrica. Glucosa: la glucosa se considera normal cuando se encuentra por encima de 40 mg/dl en un paciente en ayunas con glucosa plasmtica normal. Una disminucin se asocia con meningitis aguda o crnica, que puede ser bacteriana, tuberculosa, micotica, amebiana o parasitaria. un aumento de la glucosa no sugiere patologa del SNC sino la sospecha de un aumento de glucosa plasmtica dentro de las 2 horas precedentes a la puncin. VDRL una prueba de VDRL reactiva afirma una neurosifilis. CLORO: Cualquier situacin que altera el nivel de cloro plasmtico afecta tambin el nivel en LCR. Es importante para el diagnstico de meningitis tuberculosa y meningitis bacteriana en las cuales el cloro disminuye.
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El lquido cefalorraqudeo es un lquido transparente incoloro que se produce dentro de las cavidades o ventrculos del cerebro por el plexo coroides y por el plasma sanguneo que se derrama. El lquido cefalorraqudeo tiene los mismos componentes que el plasma en igual o menor concentracin, con excepcin del cloruro. Sin embargo, existen
enfermedades que alteran la barrera hematoenceflica lo que permite el paso de sustancias anormales hacia el lquido cefalorraqudeo. El papel principal de la puncin lumbar es el diagnostico de la meningitis bacteriana, micotica, micobacteriana y amebiana. Debido a su alta especificidad, resulta til para diagnosticar en proceso malignos relacionados con las meninges.
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2. Se observa la muestra y se describe el aspecto.
3. Se deposita muestra en la cmara de Neubauer para el conteo de leucocitos, eritrocitos y crenocitos.
4. Se centrifuga la muestra y se observa el aspecto postcentrifugado.
5. Se observa si presenta red de fibrina.
6. Del sobrenadante se hacen las determinaciones de glucosa, PCR, cloro, VDRL y protenas. VER TECNICA DE CADA PARAMETRO 7. Del sedimento se realiza un frotis, se tie y se hace el diferencial de linfocitos, neutrfilos, monocitos, virocitos y eosinfilos.
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Reactivo de Glucosa, Reactivo de Protena C Reactiva, Reactivo de V.D.R.L., Reactivo de cido saliclico (protena) y cloro. Hemocolorante
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Ver conservacin de cada reactivo que se utiliza en esta determinacin. En las respectivas hojas de este manual
MUESTRAS Liquido cefalorraqudeo.
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BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
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CITOQUIMICO DE LIQUIDO DE DIALISIS

INTRODUCCION Con la Dilisis Peritoneal la sangre se "limpia" dentro del cuerpo utilizando la membrana peritoneal como filtro. El peritoneo es una membrana delgada que forma un saco alrededor de rganos como el hgado, estmago e intestinos. El interior de esta membrana se llama "cavidad peritoneal". Cuando se coloca un lquido de dilisis dentro de la cavidad peritoneal, la membrana acta como un filtro. Los productos de desecho y el lquido extra pasan a travs de las pequeas aberturas del filtro (el peritoneo) al lquido dializante. Los desechos y el lquido extra se retiran del cuerpo y se eliminan. Por medio de ciruga menor, se coloca un pequeo catter en la cavidad peritoneal. Slo unos centmetros de catter quedan fuera del cuerpo; la mayor parte queda dentro. En Dilisis Peritoneal se denomina "intercambio" al proceso mediante el cual el lquido que estaba una serie de horas en el espacio peritoneal se drena por gravedad y es reemplazado por nuevo lquido. Las sustancias que atraviesan la membrana peritoneal son las de pequeo peso molecular: urea, potasio, cloro, fosfatos, bicarbonato, calcio, magnesio, creatinina, cido rico. Las sustancias de peso molecular elevado no consiguen atravesar el peritoneo . Utilizando estos principios fisiolgicos, la dilisis lo que hace es infundir en la cavidad peritoneal un liquido dializante de composicin similar al lquido extracelular, y dejndolo un tiempo en el interior del peritoneo. Siguiendo el gradiente osmtico, se producir la difusin y osmosis de txicos y electrolitos desde la sangre al lquido introducido.
Si se desea eliminar ms volumen de agua del paciente, se aade glucosa a la solucin de dilisis, y esta diferencia de osmolaridad entre el plasma y el lquido producir ultrafiltrado. La eficacia de este mtodo puede verse afectada cuando existan cambios en la permeabilidad de la membrana peritoneal (ej: infeccin, irritacin...), o disminucin del flujo sanguneo peritoneal o alteracin del flujo sanguneo capilar (ej: vasoconstriccin, vasculopatas...).El objetivo de la dilisis es eliminar lquido del organismo, depurar toxinas endgenas y exgenas y normalizar las alteraciones electrolticas.
La solucin dializante tiene una composicin similar al plasma, como ya dijimos.
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Existen diferentes lquidos en el mercado (Peritofundina R , PeritoflexR, BaxterR..), siendo los ms utilizados los que tienen las siguientes concentraciones (Tabla 2:composicin de los lquidos de dilisis peritoneal).
La diferencia bsica est en la concentracin de glucosa que contienen. La cantidad se aumenta para conseguir eliminar ms lquido del paciente. Existen tambin soluciones con una concentracin de glucosa de 4,25 gr/100 ml.
COMPOSICIN DE LQUIDOS DE DILISIS PERITONEAL ISOOSMOLAR OSMOLARIDAD GLUCOSA SODIO CLORO CALCIO MAGNESIO LACTATO 358 mOsm/l 1,5 gr/100 ml 134 mmol/l 103,5 mmol/l 1,75 mmol/l 0,5 mmol/l 3,5 mmol/l HIPEROSMOLAR 398 mOsm/l 2,3 gr/100 ml 134 mmol/l 103,5 mmol/l 1,75 mmol/l 0,5 mmol/l 3,5 mmol/l
Tabla 2. Composicin de los lquidos de dilisis peritoneal
Al lquido de dilisis se le aadir tambin heparina, con el fin de evitar que se formen cogulos de fibrina. La cantidad que se aade es de 1u.i. de Heparina Sdica al 1% por cada mililitro de lquido de dilisis. Se pueden aadir antibiticos, para reducir as el riesgo de infeccin (Tabla 3:tipos de antibiticos usados en dilisis peritoneal)
ANTIBITICOS PERITONEAL EN DILISIS
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Amikacina Ampicilina Aztreonam Cefotaxima Ceftazidima Ceftriaxona Cefuroxima
Ciprofloxacino Clindamicina Eritromicina Gentamicina Imipenen Vancomicina
Tabla 3. Tipos de antibiticos usados en dilisis peritoneal La determinaciones y observaciones que se hacen en el lquido de dilisis sonooolumen, aspecto y color, densidad, pH, conteo de eritrocitos y leucocitos, determinacin de glucosa, protenas y un diferencial de polimorfonucleares. INTERPRETACION CLINICA Se realiza para observar y vigilar los cambios que se dan en la composicin del lquido que se introduce, ya que se trata de un lquido extracorporeo y no se pueden tener valores de referencia.
La dilisis peritoneal es un mtodo de depuracin sangunea extrarrenal de solutos y toxinas. Est basada en el hecho fisiolgico de que el peritoneo es una membrana vascularizada semipermeable, que mediante mecanismos de
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transporte osmtico y difusivo, permite pasar agua y distintos solutos desde los capilares sanguneos peritoneales al lquido dializado.
2. Se observa la muestra y se describe el aspecto y color.
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4. Se deposita muestra en la cmara de Neubauer para el conteo de leucocitos y eritrocitos.
5. Se centrifuga la muestra.
6. Del sobrenadante se hacen las determinaciones de glucosa, y protenas. VER TECNICA DE CADA PARAMETRO
Reactivo de Glucosa y cido sulfosalicilico ( protena) Hemocolorante
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS 166
Ver conservacin de cada reactivo que se utiliza en esta determinacin. En las respectivas hojas de este manual
MUESTRAS Liquido de dilisis.
BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
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3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
CITOQUIMICO DE LQUIDO PLEURAL
INTRODUCCION Las dos capas de la pleura suelen estar separadas por una pequea cantidad de liquido que facilita el movimiento de una contra la otra. se ha estimado que la cantidad de liquido es de 1 a 15 ml. Este liquido esta producido por la pleura parietal y es absorbido por la pleura visceral segn un proceso continuo. Se forma por filtracin den plasma a travs del endotelio capilar, la presin osmtica plasmtica y la permeabilidad capilar. Las protenas no se absorben a travs de los capilares vasculares, sino a travs de los linfticos. Las acumulaciones de liquid en el espacio pleural se denominan derrames. Los trasudados son acumulaciones de lquido debidas a un aumento de la presin hidrosttica de los capilares pleurales a una disminucin de la presin onctica
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plasmtica. Las causas incluyen la insuficiencia cardiaca congestiva, la cirrosis heptica y el sndrome nefrtico. Los exudados suelen estar causados por un aumento de la permeabilidad capilar o una disminucin de la reabsorcin linftica. Las causas que influyen en la aparicin de los exudados incluyen las infecciones pleurales, las neoplasias y los procesos inflamatorios no spticos como la enfermedad reumtica.
INTERPRETACION CLINICA ASPECTO: Los trasudados son claros, de color amarillo plido y no coagulan. Un lquido opaco o turbio puede deberse a grandes cantidades de leucocitos asociados con infeccin bacteriana, tuberculosis, enfermedad reumtica o fiebre reumtica. Un lquido lechoso es caracterstico de derrames quilosos (obstruccin o lesin del conducto torcico con extravasacin del quilo en la cavidad pleural) o pseudoquilosos ( rotura de lpidos celulares en los derrames crnicos). pH: La combinacin de un pH bajo y una glucosa disminuida es caracterstica del derrame paraneumnico complicado. Un pH muy bajo inferior a 6.3 es caracterstico de rotura esofgica. Otras causas de disminucin del pH incluyen artritis reumatoide, tumores malignos, tuberculosis, la pleuritis lpica y el pseudoquiste pancretico. RECUENTO CELULAR: Los recuentos de eritrocitos apenas tienen valor en el diagnstico diferencial. No obstante, el recuento de eritrocitos y el hematocrito pueden ofrecer una documentacin de utilidad para los lquidos con sangre macroscpica. Los recuentos leucocitarios se han utilizado para distinguir los trasudados de los exudados. RECUENTO DIFERENCIAL: En derrames provocados por inflamacin aguda debida a neumona, infarto pulmonar y pancreatitis se ha observado un predominio de polimorfonucleares, sin embargo en 10% de trasudados tambin se presenta una elevada proporcin de polimorfonucleares. En los derrames provocados por tuberculosis, linfoma, en el quilotrax verdadero, en la inflamacin subaguda, en el lupus eritematoso sistmico y en los derrames urmicos se ha visto un incremento de mononucleares. GLUCOSA: Una disminucin puede producirse por en la pleuritis reumtica, en el empiema, en el derrame neoplsico, en la pleuritis tuberculosa y en la pleuritis lpica. 169
PROTEINAS: Poseen cierto valor en el diagnstico diferencial de los trasudados frente a los exudados. DHL: Una DHL muy elevada se asocia con un derrame paraneumnico complicado con la pleuritis reumtica y con algunos derrames malignos.
Este liquido esta producido por la pleura parietal y es absorbido por la pleura visceral segn un proceso continuo. Se forma por filtracin del plasma a travs del endotelio capilar, la presin osmtica plasmtica y la permeabilidad capilar.
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Las acumulaciones de lquido en el espacio pleural se denominan derrames. Los trasudados son acumulaciones de lquido debidas a un aumento de la presin hidrosttica de los capilares pleurales a una disminucin de la presin onctica plasmtica. Las causas incluyen la insuficiencia cardiaca congestiva, la cirrosis heptica y el sndrome nefrtico.
1. Se calcula el volumen aproximado de la muestra
2. Se observa la muestra y se describe el aspecto.
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5. Se centrifuga la muestra y se observa el aspecto del postcentrifugado.
6. Del sobrenadante se hacen las determinaciones de glucosa, DHL y protenas. VER TECNICA DE CADA PARAMETRO
7. Del sedimento se realiza un frotis, se tie y se observa el porcentaje de polimorfonucleares y mononucleares.
Reactivo de Glucosa, Reactivo de Deshidrogenasa lctica, cido sulfosalicilico ( protena) Hemocolorante
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CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Ver conservacin de cada reactivo que se utiliza en esta determinacin. En las respectivas hojas de este manual
MUESTRAS Liquido pleural
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
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3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
CITOQUIMICO DE LQUIDO SINOVIAL
INTRODUCCION La membrana sinovial reviste los mrgenes de las articulaciones diartrodiales, de la bolsa y de las vainas del tendn sinovial, pero cubre los cartlagos o meniscos articulares. Estn cubiertas por una capa de clulas cilndricas altas, encargadas de secretar el cido hialuronico, que proporciona la mucina sinovial que da al lquido su viscosidad caracterstica. El lquido sinovial se produce por dilisis del plasma a travs de la membrana sinovial y la secrecin de un complejo cido hialuronico. A este filtrado se aaden solo pequeas cantidades de protenas. a este filtrado se aaden solo pequeas cantidades de protenas totales e inmunoglobulinas en el liquido sinovial son aproximadamente de un tercio a la mitad del plasma, mientras que la de la glucosa y de cido rico son comparables a las del plasma. El paciente ha de estar en ayunas desde 6 horas antes o mas para permitir un equilibrio entre la glucosa entre el plasma y el liquido sinovial.
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Entre el examen macroscpico se encuentran el volumen total, La viscosidad el aspecto y el color del liquido sinovial.
INTERPRETACION CLINICA El examen macroscpico empieza con el registro de total del volumen de 1-4 ml en cada articulacin. ASPECTO Y COLOR: del lquido normal son cristalinos y amarillos plidos debe de observarse en un tubo de vidrio contra un fondo blanco. La turbidez puede deberse a leucocitosis, un nmero masivo de cristales gotitas de grasa, fibrina o cogulos de clulas sinoviales en degeneracin. RECUENTO CELULAR TOTAL Una aplicacin del recuento leucocitario en lquido sinovial es el diagnstico de la artritis bacteriana. RECUENTO DIFERENCIAL El lquido sinovial normalmente contiene alrededor de un 65% de fagocitos mononucleares (monocitos e histiocitos) aproximadamente 15% de linfocitos y alrededor de 20% de neutrfilos .cuando se observa una neutrofilia ( ms de 80%) se asocia a artritis bacteriana gota por cido rico y artritis reumatoide. En artritis reumatoide se puede observar un elevado porcentaje de los linfocitos, la eosinofilia se observa en carcinoma metasttico, fiebre reumtica aguda, en artritis reumatoide. Anlisis qumico: Prueba de coagulacin de la mucina la adicin de cido actico al lquido provoca un cogulo de mucina que puede clasificarse como leve, adecuado, insuficiente. GLUCOSA: es por lo general de 0-10 mg/dL ms baja que la del plasma. Niveles disminuidos suelen definirse como glucosa en lquido sinovial menor de 40 mg/dL 0 diferencia plasma-liquido sinovial mayor de 10 mg/dL. La actividad glucoltica de los leucocitos en lquidos sinoviales de elevado contenido celular puede producir un descenso falso, si la determinacin no se realiza al cabo de 1 hora. Protenas: en numeroso proceso se produce un aumento de las protenas totales en lquido sinovial, incluyendo la artritis reumatoide, la gota y la artritis sptica. Este incremento tal vez refleja un aumento de la permeabilidad vascular, junto con un aumento de la sntesis de inmunoglobulinas dentro de las membranas sinoviales.
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CIDO RICO: sirve para darse cuenta de cmo est la relacin en plasma. FACTOR REUMATOIDE: Sirve para descartar una enfermedad aguda crnica.
El lquido sinovial tiene caractersticas propias en los derrames traumticos, artrosis, infecciones, gota y artritis reumatoide, por lo que su estudio puede
suministrar datos relacionados con la etiologa de un proceso articular.
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Su extraccin esta justificada cuando se desea establecer un diagnostico, en caso de una artritis de etiologa desconocida y manifiesta derrame. Y en las artritis infecciosas, donde el cultivo puede establecer un diagnstico.
2. Se observa la muestra y se describe el aspecto y color
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4. Se centrifuga la muestra y se observa el aspecto del postcentrifugado
5. Del sobrenadante se hacen las determinaciones de glucosa, cido rico, factor reumatoide y protenas.
7. Se hace la determinacin en sangre de Glucosa, Protenas y Acido rico. VER TECNICA DE CADA PARAMETRO
Reactivo de Glucosa, Reactivo de cido rico, Reactivo de factor reumatoide, y cido sulfosalicilico ( protena)
Hemocolorante
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CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Ver conservacin de cada reactivo que se utiliza en esta determinacin. En las respectivas hojas de este manual.
MUESTRAS Liquido sinovial
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, NTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN LABORATORIO, QUINTA EDICIN EITORIAL MEDICA CLINICA DEL
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CLORO SERICO
INTRODUCCION Expresa los niveles de cloruros del organismo con cifras normales entre 98 y 106 mEq/L. los cloruros totales del suero se componen de cloruro de sodio, potasio , calcio y magnesio, siendo los ms importantes los de Na y K. derivan de los alimentos , se absorben casi completamente en el intestino y se excretan por la orina y el sudor. Desempean un papel en el equilibrio cido bsico y en el sostenimiento del equilibrio normal del agua. Generalmente se encuentran elevados en procesos de acidosis y disminuidos en procesos de alcalosis. La hipercloremia de los cardacos tratados con cloro de amonio o el suministro excesivo de solucin salina, se torna grave cuando los niveles sobrepasan la cifra de 125 mEq/L. La hipocloremia cuando llega a los lmites de 80 mEq. Es grave. Es producida por hipoventilacin, vmitos abundantes permanentes, diarreas copiosas , sudoracin profusa , dietas ricas en grasas. 180
INTERPRETACION CLINICA El cloro aumenta en la deshidratacin, diabetes inspida, intoxicacin con salicilato, acidosis tubular renal, insuficiencia renal aguda e hiperfuncin corticosuprarrenal. Los niveles de cloro disminuyen en los vmitos prolongados, sudoracin excesiva, secrecin gstrica, intoxicacin hdrica, sndrome de secrecin inadecuada de ADH.
FUNDAMENTO DE LA TECNICA El analizador ILyte mide el cloro en fluidos biolgicos, utilizando tecnologa de electrodos selectivos de iones. El electrodo de cloro de flujo continuo incluye un tubo plstico, especialmente formulado para ser selectivo a los iones de cloro. El potencial de cada electrodo es medido con relacin a un voltaje fijo y constante establecido por el electrodo de referencia de cloruro de plata y plata. Un electrodo selectivo de iones desarrolla un voltaje que vara con la concentracin del in al cual responde. La relacin entre el voltaje desarrollado y la concentracin del in detectado es logartmico, como es expresado por la ecuacin Nernst: E = E + (RT / nF) Log ( C) Donde: E= El potencial del electrodo en la solucin de la muestra E= El potencial desarrollado bajo condiciones normales RT/ nF= Una temperatura dependiente constante que condiciona la/las
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inclinacin (es). n= 1 para cloro Log= Funcin de logaritmo base diez = Coeficiente de actividad del in medido en la solucin C= Concentracin del in medido en la solucin Se utiliza un mtodo comparativo de medida. Primero, el analizador mide el potencial desarrollado cuando la muestra es bombeada a travs de los electrodos. Despus, Estndar A es bombeado a travs de los electrodos. La diferencia entre los dos potenciales se relaciona logartmicamente con la concentracin de iones de cloro en la muestra, dividida por sus respectivas concentraciones en la solucin Estndar. Ya que se conoce la diferencia de los potenciales y la concentracin de iones de cloro en la solucin Estndar, el analizador puede calcular la concentracin de los iones en la solucin de muestra.
DESARROLLO DE LA TECNICA (I Lyte)
1. 2. 3. 4.
Calibrar el aparato; oprimir YES para CALIBRAR AHORA? Tras una calibracin exitosa el analizador ILyte presentar en la pantalla ANALIZAR SANGRE? Cuando aparece ANALIZAR SANGRE? Oprima YES. La sonda de muestra baja y aparece SONDA EN SANGRE? En la pantalla. Coloque el envase de muestras sobre la SONDA DE MUESTRAS asegrese que el hueco de la sonda esta bajo la superficie de la muestra durante toda la operacin de muestras. Oprima YES. La muestra es aspirada dentro del analizador ILyte. Sostenga el envase de la muestra en su sitio hasta que el analizador 182
5.
levante automticamente la SONDA DE MUESTRA. Si se aspira aire, aparecer AIRE EN MUESTRA en la pantalla. Repita el anlisis de muestra. Una vez que la muestra quede ubicada automticamente dentro de los electrodos, comienza el anlisis y la pantalla mostrar ANALIZANDO. 6. Cuando se completa el anlisis, los resultados aparecen en la pantalla y son impresos automticamente.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Solucin patrn A 400 ml [Na+ 140mmol/L, K+ 4.0 mmol/L, Cl- 125.0 mmol/L] Solucin patrn B 130 ml [Na+ 35.0 mmol/L, K+ 1.6 mmol/L, Cl- 41.0 mmol/L] Buffer/ Tampn Conservante Agente humectante Solucin de lavado 50 ml Bifluoruro de Amonio [ 0.1 mol/L] Contenedor de desechos Solucin de lavado
183
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Los reactivos deben mantenerse de 18 a 25C.
MUESTRAS Suero, plasma. Las muestras refrigeradas deben ser llevadas a temperatura ambiente. Los especimenes de sangre deben ser extrados con cuidado para evitar hemlisis.
BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
184
COLESTEROL DE ALTA DENSIDAD (HDL)

INTRODUCCION La HDL es una pequea partcula que consta de un 50% de protena (sobre todo apoA-I y apoA-II, pero tambin algo de apoC y apo E), el 20 % de colesterol ( en su mayor parte esterificado), en un 30% de fosfolpidos y slo indicios de triglicridos. La HDL puede separarse en dos subclases principales (HDL 2 y HDL3) que varan en cuanto a la densidad, tamao posiblemente tambin papel fisiolgico. La HDL son sintetizadas por el hgado y el intestino como partculas discordes nacientes que contienen colesterol y fosfolpido. Se cree que la HDL es el vehculo para el transporte inverso del colesterol. Acumula colesterol de las membranas celulares y otras lipoprotenas y se convierte en una partcula esfrica dentro de la de la partcula, composicin y
185
circulacin a travs de la accin de la LCAT y el movimiento de los corpsculos de colesterol formados en el ncleo de la partcula de HDL. En el hombre los HDLsteres de colesterol son transportados a la VLDL y la IDL y subsiguientemente metabolizados a travs de los receptores residuales de LDL.
INTERPRETACION CLINICA Los estudios epidemiolgicos demuestran la relacin inversa entre los niveles de HDL-colesterol y la incidencia y prevalencia de cardiopata coronaria. La medida de colesterol-HDL sirve para determinar el riesgo de cardiopata coronaria, habindose sugerido que por cada disminucin de 5 mg/dl de HDL-colesterol por debajo de la media, el riesgo de cardiopata coronaria aumenta en un 25%. Los factores que pueden estar relacionados con niveles de HDL-colesterol por encima del termino medio comprenden el ejercicio habitual, el consumo de una dieta equilibrada y la abstinencia de alcohol y tabaco.
Mediante un reactivo precipitante de protenas, se logran precipitar las lipoprotenas de baja densidad y las de muy baja densidad (LDL y VLDL)
186
quedndose en el sobrenadante las lipoprotenas de alta densidad, donde se determina el colesterol ligado a las mismas.
DESARROLLO DE LA TCNICA (spinreact)
1. Dosificar en tubos de centrfuga: Muestra R. A. (precipitante) 1.0 ml 100 l 0.5 m/L ( 500 l) 50 l
2. Mezclar, dejar reposar 10 minutos a temperatura ambiente. 3. Centrifugar 20 minutos a 4000 rpm 2 minutos a 1200 rpm. 4. Determinar el colesterol del sobrenadante. 187
Pipetear en tubos de ensayo: Semimicrodeterminacin Blanco Muestra ---20 l 1.0 ml 1.0 ml
Sobrenadante R.B (colesterol)
5. Mezclar e incubar 5 minutos a 37 C 10 minutos a temperatura ambiente. 6. Leer a 505 nm 546 nm frente al blanco de reactivos.
CALCULO: Hg 546 D. Opt. Muestra x 475 = mg/dl HDL-colesterol A 505 nm D. Opt. Muestra x 320 = mg/dl HDL-colesterol Factor de conversin : mg/dl x 0.0258 = mmol/L (SI)
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Reactivo A: Acido fosfotngstico Cloruro magnsico Reactivo B: Reactivo colesterol. 14 mmol/L 2 mmol/L
CONSERVACION DELOS REACTIVOS Utilizar el reactivo precipitante sin diluir.
188
Estable a 4-8C, hasta su fecha de caducidad. El reactivo B es opcional para la determinacin colesterol.
MUESTRAS Suero o plasma.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 189
COLESTEROL DE BAJA DENSIDAD (LDL)

INTRODUCCION Las LDL constituyen alrededor del 50% de la masa total de lipoprotenas en el plasma humano. Las partculas son mucho ms pequeas que las lipoprotenas ricas en triglicridos. Alrededor del 25% de la masa de LDL son protenas apoB-100 con indicios de apoC. Se piensa que la oxidacin de las LDL contina en el microambiente de las paredes arteriales donde los sistemas antioxidantes son deficientes. Todas las clulas de la pared arterial (clulas endoteliales, clulas musculares lisas y macrfagos) pueden modificar las LDL. La formacin de clulas espumosas a partir de los macrfagos derivados de monolitos no es causada por las LDL nativas, sino por las LDL modificadas por reacciones qumicas de oxidacin iniciadas y propagadas por los radicales libres. Debido a que la oxidacin de las LDL es un proceso mediado por radicales libres y puede ser inhibido por antioxidantes, la deficiencia en estos puede constituir un factor de riesgo para la enfermedad cardiovascular.
190
Las LDL muestran algunas otras propiedades que promueven aterognesis, aparte de su rpida captacin por los macrfagos. Las LDL oxidasas son quimiotcticas para los macrfagos circulantes, facilitan la adhesin de los monolitos al endotelio y su entrada al espacio subendotelial. Adems, las LDL oxidasas pueden inducir a las clulas de la pared arterial a producir factores quimiotcticos, molculas de adhesin, citocinas y factores de crecimiento que pueden desempear un papel en el desarrollo de la placa. Las LDL oxidasas pueden inhibir la liberacin de xido ntrico y la resultante vasodilatacin dependiente de endotelio. Otro tipo de evidencia relacionada con los procesos de oxidacin y disfuncin endotelial, sugiere la alteracin en la relajacin dependiente del endotelio generada por el desequilibrio entre la produccin de mediadores vasodilatadores, particularmente el xido ntrico y vasoconstrictores. El xido ntrico inhibe la agregacin plaquetaria, la adhesin e infiltracin leucocitaria, la proliferacin de las clulas del msculo liso vascular y previene la oxidacin de las LDL. INTERPRETACION CLINICA Se encuentran valores elevados de LDL-colesterol principalmente en hiperlipoproteinemias tipo IIa y IIb, sndrome nefrtico, xantomatosis, diabetes, hipotiroidismo, ictericia obstructiva, hiperlipidemia familiar idioptica. Se encuentran valores disminuidos de LDL-colesterol principalmente en las hipoproteinemias y en la abetalipoproteinemia.
CALCULO:
EL COLESTEROL DE BAJA DENSIDAD (LDL) SE CALCULA MEDIANTE LA FORMULA DE FRIEDEWALD:
191
Triglicridos LDL-COLESTEROL = Colesterol Total 5 - (HDL-colesterol)
NOTA: Para aplicar la frmula es necesario hacer la determinacin de Colesterol total y Triglicridos.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-
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PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
COLESTEROL TOTAL
INTRODUCCION Es un elemento indispensable en la produccin de esteroides, sntesis de hormonas femeninas (estrgenos) principal componente de la bilis, catalizador activo de intercambios celulares, interviene activamente en la sntesis de los andrgenos e indispensable en la formacin de membranas celulares. Esta integrada por tres lipoprotenas denominadas segn su densidad: VLDL (13 %) very low density lipoprotein constituida en un 52% de triglicrido. Son materia prima para fabricar LDL (70%) low density lipoprotein , por su baja densidad se depositan fcilmente en las capas intimas arteriales y son las que forman la ateroesclerosis .
193
HDL (17%) high density lipoprotein es nuestra aliada. Conviene tenerla lo ms elevada posible porque es la que interviene para remover la LDL de las arterias.
Se estimula su formacin con el ejercicio, abstencin del cigarro, alcohol solamente social y poco o nada de grasa animales. La VDL constituye una gran parte lo que conocemos como triglicridos, grasa que modela el organismo y es reserva orgnica. La LDL se forma en el hgado y la podemos aumentar ingiriendo grasa animales en abundancia. INTERPRETACION CLINICA Se observa niveles aumentados en hipotiroidismo, diabetes incontrolada, sndrome nefrtico. Dieta rica en colesterol, hipertensin, ateroesclerosis, estrs, y nefrosis. Se observan niveles disminuidos en hipertiroidismo, anemia perniciosa, enfermedad heptica. Es indispensable para una cifra sin errores, tener 14 horas de ayuno y no haber ingerido grasa animales 48 horas antes. No se debe modificar el rgimen alimenticio una semana antes, para obtener un dato real.
Tanto el colesterol libre como el esterificado presente en la muestra originan, segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometria.
194
Col. esterasa
Colesterol esterificado + H2 O
Col. oxidasa
Colesterol cido graso Colestenona + H2 O2

peroxidasa
Colesterol + O2 + H2 O 2 H2 O2 + 4-Aminoantipirina + Fenol
Quinonaimina + 4 H 2 O
DESARROLLO DE LA TCNICA (BioSystems) 1. Atemperar el reactivo a temperatura ambiente. 2. Pipetear en tubos de ensayo blanco Patrn colesterol(s) _____ Muestra _____ Reactivo (A) 500 l Patrn 5L _____ 500 l Muestra _____ 5L 500 l 195
3. Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25 C) o durante 5 minutos a 37C. 4. Leer la absorbancia (a) del patrn y de la muestra a 500 nm frente al blanco. El color es estable durante al menos 2 horas. CLCULOS La concentracin de colesterol en la muestra se calcula a partir de la siguiente formula general: A muestra X C patrn = A patrn C muestra
Valores de referencia Optimo 200 mg/dL Moderado 200- 239 mg/dL Elevado > 240 mg/dL
A. Reactivo B. Patron
COD 11805 1x50ml 1x5 ml
COD 11505 1x 200 ml 1x 5 ml
COD 11506 1x 500 ml 1x 5 ml
COD 11539 1x 1L 1x5 ml
A . reactivo, pipes 35 mmol/L, colato sdico 0.5 mmol/l, fenol 28 mmol/L , colesterol esterasa >0.2U/mL , colesterol oxidasa >0.1 U/mL, peroxidasa >0.8 U/mL, 4-aminoantipirina 0.5 mmol/L, pH7.0 S patrn de colesterol 200 mg/ dl (5.18 mmol/L). patron primario acuoso.
196
CONSERVACION DELOS REACTIVOS Conservar a 2-8 C. Presencia de partculas , turbidez absorbancias de blanco superior a 0.200 a 500 nm
MUESTRAS Suero o plasma recogidos mediante procedimiento estndar.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 197
3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICINA 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
COOMBS DIRECTO
INTRODUCCION En la anemia hemoltica adquirida y en la eritroblastosis fetal, existen unos anticuerpos compuestos por Globulina Gamma , que se encuentran adheridos a la membrana del eritrocito. Se denominan anticuerpos incompletos, monovalentes, conglutinantes, anticuerpos de la albmina o anticuerpos hiperinmunes. Tienen la propiedad de aglutinar en presencia de un suero antigamaglobulnico que se
198
prepara inyectndole a conejos o cabras, globulina humana, obtenindose un suero contra dicha globulina. En recin nacidos de madre Rh negativa, si se tienen eritroblastosis o estn sensibilizados, sus anticuerpos revisten a los eritrocitos y aglutinan directamente con el suero antigamaglobulnico. Esto se denomina Prueba de Coombs Directa Positiva. Cosa anloga sucede en pacientes con anemia hemoltica.
INTERPRETACION CLINICA Las causas ms frecuentes de su positividad son: anemia hemoltica autoinmune, la enfermedad hemoltica del recin nacido, postransfusional (eritrocitos incompatibles), tambin se aprecian pruebas dbilmente positivas en los pacientes que tienen un nivel alto de gammaglobulina, como ocurre en la artritis reumatoidea, leucemia, mieloesclerosis, sarcoidosis, lupus eritematoso, anemia aplstica y ocasionalmente paludismo.
Pone de manifiesto los anticuerpos incompletos, los cuales no provocan aglutinacin visible. Utiliza un antisuero conseguido con el conejo inmunizado
199
frente a la globulina humana y que puesto en contacto con el antgeno, recubierto de anticuerpos incompletos (que visible. son globulinas), provocar su aglutinacin
1. Se hacen lavados de los eritrocitos a investigar. 2. Se mezclan con el suero de Coombs y se centrifuga, si hay aglutinacin es Coombs directo positivo. 3. Si es negativo, se incuban por 30 minutos a 37C,
200
4. Se centrifuga. 5. Si no hay aglutinacin es Coombs directo negativo
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Anti-IgG-C3d Poliespecfico Murine monoclonal Solucin Salina 0.9%
201
Se debe refrigerar de 2-8 C.
MUESTRAS Eritrocitos del paciente
BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
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3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
COOMBS INDIRECTO
INTRODUCCION
Cuando existen anticuerpos incompletos circulantes como en algunas anemias hemolticas, sensibilizaciones por transfusiones y muy especialmente en la inmunizacin materno-fetal por factor Rh, estos anticuerpos se pueden descubrir por medio de la prueba de Coombs Indirecta, que detecta dichos anticuerpos desde los primeros meses de embarazo y cuya determinacin
203
peridica en caso de encontrarse presentes, es de capital importancia para tomar una medida acertada al final del embarazo.
INTERPRETACION CLINICA Se utiliza principalmente para: Deteccin de anticuerpos en un suero problema: el suero dirigidos contra un antgeno eritrocitario especfico. Determinacin de fenotipos: un anticuerpo de especificad conocida se incuba con los hemates problema para identificar en estos antgenos especficos de grupo sanguneo. Pruebas Cruzadas: el suero de un paciente se incuba con los hemates de un posible donador para detectar anticuerpos que podran reducir la supervivencia de los hemates transfundidos. del paciente es incubado con hemates de fenotipo conocido para detectar en aqul anticuerpos
204
Se basa en el principio de que los anticuerpos antiglobulina humana inducen la aglutinacin de los hemates recubiertos por globulinas. Detecta los anticuerpos que reaccionan nicamente en un medio que los potencializa.
1. Se obtiene el suero del paciente a investigar la presencia de anticuerpos irregulares. 2. Se buscan eritrocitos grupo O solucin salina. Rh positivos, se lavan 3 veces con
205
3. A los eritrocitos lavados se les mezcla con el suero a investigar los anticuerpos irregulares y se incuban 30 minutos a 37C. 4. Se centrifugan y se observa si existe aglutinacin. Si existe aglutinacin se reporta como Coombs Indirecto Positivo 5. Si no existe aglutinacin se lavan 3 veces con solucin salina. 6. A los eritrocitos lavados se les agrega Reactivo de Coombs (AntiAnticuerpos) se incuban 30 minutos a 37C. 7. Despus se centrifuga y se observa si hay aglutinacin. 8. si existe la aglutinacin se reporta como Coombs Indirecto POSITIVO. Si no existe aglutinacin en el ltimo paso se reporta como Coombs Indirecto NEGATIVO
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Solucin salina 0.9% Reactivo de Coombs
206
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Reactivo de Coombs de 2-8 C Solucin salina mantenerse a temperatura ambiente.
MUESTRAS Sangre completa
BIBLIOGRAFIA
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994
207
2.
AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. EL LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANAMG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
3.
4.
COPROPARASITOSCOPICO UNICO Y SERIADO

INTRODUCCION Para conservar la salud, es indispensable eliminar del cuerpo los productos digestivos de desecho, a estos productos se les denomina materia fecal o heces fecales. En muchas enfermedades gastrointestinales se examina la materia fecal, que es muy til para detectar parasitosis. Las enfermedades parasitarias contribuyen de forma importante a los problemas mdicos, econmicos y sociales del mundo. En los pases subdesarrollados la incidencia de algunas infecciones ha aumentado en estos ltimos aos; muchas parasitosis son asintomticas o producen sntomas muy leves. En los exmenes sistemticos de sangre y materia fecal se descubren numerosos casos de infecciones insospechadas. 208
Se conocen aproximadamente 70 especies de parsitos que pueden infectar al ser humano. De los parsitos que pueden detectarse en las heces fecales, cerca del 33% son protozoarios unicelulares y 66% son gusanos multicelulares. Slo seis o siete de los protozoarios intestinales tienen importancia clnica, pero casi todos los gusanos son potencialmente patgenos. El mtodo coproparasitoscpico de Faust fue descrito en 1938 basndose en: la flotacin con salmuera dada por Bass en 1906 usada para recuperacin de helmintos. En 1910 el mismo Bass introdujo la centrifugacin en su tcnica de flotacin con salmuera. En 1924 Lane ide un refinamiento para la tcnica combinada de centrifugacin-flotacin con salmuera. Faust y cols posteriormente realizaron pruebas con diferentes soluciones encontrndose que la de zinc con densidad 1.18 Baum, era un medio adecuado para la flotacin de quistes de protozoarios y huevos de helmintos. Esta tcnica es la preferida por la generalidad de los laboratorios de anlisis clnicos. Es una tcnica econmica, fcil de realizar, no requiere mucho tiempo y hace una buena concentracin de quistes, huevos y larvas. El diagnstico de parasitosis comienza con el examen de los huevecillos y del parsito mismo.
INTERPRETACION CLINICA Entre los protozoos destacan por su frecuencia de observacin en heces, las amebas, los flagelados del tipo de las lamblias, Tricomonas, los ciliados como el Balantidium coli, pueden aparecer en las formas activas o quistes. Las helmintiasis intestinales se basan en el hallazgo del parsito o de sus huevos en las heces. Es indiscutible la capacidad patgena de cualquiera de los parsitos sealados.
FUNDAMENTO DE LA TCNICA Mtodo de Faust por flotacin
209
Este mtodo combina los principios de flotacin y gravitacin. Se basa en la densidad del sulfato de zinc que es 1.18 Baum, que por tener mayor peso que algunas formas parasitarias ocasionan que estas floten, adems no produce deformacin de los mismos.
DESARROLLO DE LA TECNICA Mtodo de Faust por flotacin 1. Se hace una suspensin homognea con aproximadamente 1 g ( aprox. del tamao de un guisante) de materia fecal y 10 ml de agua. 2. 3. Se centrifugan los tubos a 2000 r.p.m. durante 2 minutos. Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con agua.
210
4.
Centrifugar nuevamente. Se repite la misma operacin hasta que el sobrenadante se observe limpio.
5.
Se decanta el sobrenadante, se agrega 2 3 ml de solucin de sulfato de zinc, resuspender todo el sedimento, se completa todo el volumen con ms solucin de sulfato y se centrifuga a 2000 r.p.m. durante 2 minutos.
6.
Con el asa recin flameada se recoge la muestra de la pelcula superficial que se encuentra en el menisco y se deposita en el portaobjetos; que previamente tena una gota de lugol, se mezcla y se recubre con el cubreobjetos.
7. 8.
La preparacin se observa con objetivos de 10x y 40x. La obtencin de la muestra por examinar con el asa de alambre, se debe hacer enseguida de la centrifugacin, pues la permanencia de las formas parasitarias por ms de una hora en la solucin puede provocar su deformacin y sedimentacin.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Solucin al 33% de sulfato de zinc con una densidad de 1.180 Lugol
CONSERVACION DELOS REACTIVOS
211
Mantener a temperatura ambiente. Es necesario verificar la densidad de la solucin de sulfato de zinc peridicamente, o de preferencia prepararla cada tercer da, segn el volumen de trabajo.
MUESTRAS Materia fecal. En un coproparasitoscpico seriado son 3 muestras de diferentes das. Un coproparasitoscpico nico se debe llevar en un frasco limpio, la muestra debe ser del tamao de una nuez.
BIBLIOGRAFIA
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ212
2.
PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, FRANCES. MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICIN, EDITORIAL McGRAW-HILL INTERAMERICANA, MEXICO, 1997.
4.
CREATINCINASA (CK TOTAL)

INTRODUCCION Esta enzima tambin se denomina ATP-creatin N-fosfotransferasa, cataliza la siguiente reaccin:
NH CH3 O N NH CH3
CK
-
H2 N-C-N-CH2 COO- + ATP ADP
O- P N C -N-CH2 COO- +
213
OH
Creatina
Creatin fosfato
Reaccin catalizada por la creatin-fosfocinasa (CK) principios del anlisis y significacin de los niveles normales en suero. Su concentracin en msculo esqueltico y en el miocardio es muy elevada, y se encuentra en el cerebro en cantidades apreciables, mientras que en otros rganos solo hay pequeas cantidades y en el hgado nada. La CK puede dividirse en tres isoenzimas: MM o CK3, BB o CK1 y MB o CK2. Los estudios de las isoenzimas ayudan a distinguir si la CK se origina del corazn o del msculo esqueltico.
INTERPRETACION CLINICA Numerosos estudios han mostrado que los valores de la CK estn elevados en pacientes con infarto de miocardio; en 24 horas. Distrofia muscular progresiva, miopata alcohlica y delirium tremens, pero son normales en pacientes con hepatitis y otras formas de enfermedad heptica. Otras causas de la elevacin de la CK son el ejercicio, las inyecciones intramusculares y a veces las reacciones psicticas agudas. en el infarto del miocardio la elevacin comienza poco despus de la crisis (4 6 h despus) y alcanza el punto mximo
214
Este es un mtodo estndar optimizado segn las recomendaciones de la Deutschen Gesellscaft fur Klinische Chemie.
Fosfato de creatina + ADP Glucosa + ATP

HK
CK
Creatina +
+ ADP
ATP
Glucosa-6-P
G6P-DH
Glucosa-6-P +
NADP+
Gluconato-6P + NADPH + H+
DESARROLLO DE LA TCNICA (RANDOX) 1. Precalentar el reactivo a 37C 2. Pipetear en la cubeta:
215
37 C Enzimas/Coenzimas/Sustrato Muestra 500 l 10 l
3. Leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar el tiempo simultneamente.
4. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 minutos.
CALCULOS: Para calcular la actividad de la CK utilizar las frmulas siguientes: 37C U/I = 8045 x A340 nm/min
1. Tampn/Glucosa : Tampn Imidazol Glucosa Mg Acetato EDTA 2. Enzimas/Coenzimas/Sustrato
0.10 mol/l pH 6.7 20 mmol/l 10 mmol/l 2.0 mmol/l
216
ADP AMP Pentafosfato de diadenosina NADP HK G6P-DH N-Acetilcistena Fosfato de creatina
2.0 mmol/l 5.0 mmol/l 10 mol/l 2.0 mmol/l 2.5 U/ml 1.5 U/ml 20 mmol/l 30 mmol/l
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Tampn: Estables hasta la fecha de caducidad si se conservan de 2-8 C. Enzimas: Estables durante 3 semanas entre 2-8C 3 das entre 15-25C. Ya reconstituidos.
MUESTRAS Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma.
BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994
217
2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA
CREATINCINASA-MB
INTRODUCCION
La isoenzima MB se encuentra en el miocardio; el corazn produce aproximadamente un 40 % de esta. Su concentracin en msculo esqueltico y en el miocardio es muy elevada, y se encuentra en el cerebro en cantidades 218
apreciables, mientras que en otros rganos solo hay pequeas cantidades y en el hgado nada. La presencia de CK-MB en los sueros indica una lesin de miocardio y se observa en todos los pacientes durante el perodo de 48 horas despus de un infarto agudo de miocardio. Tras un infarto agudo aparece en un periodo aproximado de 4 a 8 horas, alcanza un mximo de 12 a 24 horas y puede persistir durante todo el resto del perodo inicial de 72 horas.
INTERPRETACION CLINICA Los aumentos de CK-MB se presentan en enfermedades miopticas y
enfermedades inflamatorias del corazn. En infarto de miocardio la fraccin de actividad total es la CK-MB es >0.6, mostrando picos de rpido ascenso y descenso. las determinaciones seriadas
219
Prueba de inmunoinhibicin: se incorpora un anticuerpo dentro del reactivo CK. Este anticuerpo se unir e inhibir la actividad de la subunidad M de la CK-MB. Esto significa que slo se va a medir la actividad en suero de la subunidad B. Si la unidad es multiplicada por un factor de 2, se obtendr la actividad de la CK-MB en suero.
DESARROLLO DE LA TCNICA (RANDOX) 1. Precalentar el reactivo a 37 C 2. Pipetear:
220
Muestra Enzimas/ coenzimas/ Sustrato/ Anticuerpo
Semi-micro 10 l 500
2. Mezclar, dejar reposar a la temperatura de 37C durante 9 minutos. 3. Aadirlo a una cubeta y leer la absorbancia A 1. 4. Leer la absorbancia A2 al cabo de 5 min. Exactos
A = A2 A1 CLCULOS
Longitud de onda 340nm/min
CK MB (U/I) 8254 x A
1. Tampn/Glucosa : Tampn Imidazol Glucosa Mg Acetato EDTA
0.10 mol/l pH 6.7 20 mmol/l 10 mmol/l 2.0 mmol/l 2.0 mmol/l 5.0 mmol/l 10 mol/l
2. Enzimas/Coenzimas/Sustrato ADP AMP Pentafosfato de diadenosina
221
NADP HK G6P-DH N-Acetilcistena Fosfato de creatina Anticuerpo (CK-M)
2.0 mmol/l 2.5 U/ml 1.5 U/ml 20 mmol/l 30 mmol/l
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Tampn: Estables hasta la fecha de caducidad si se conservan de 2-8 C. Enzimas: Estables durante 3 semanas entre 2-8C 3 das entre 15-25C. Ya reconstituidos.
MUESTRAS Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE 222
MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN LABORATORIO, QUINTA EDICIN EITORIAL MEDICA CLINICA DEL
CREATININA
INTRODUCCION Se forma en los msculos a partir del fosfato de creatina y un 2% de dicha sustancia se convierte diariamente en creatinina. Es excretada principalmente por los riones y una pequea parte con las heces. La creatinina no modifica su nivel en suero, ni con la dieta, ejercicio, edad, sexo, ni procesos catablicos. La cifra normal esta comprenda entre 0.5 y 1.5 mg/dL, y es proporcional a la masa muscular, factor que determina una 223
concentracin normal ms baja en la mujer entre 0.5 y 1.30 mg/dL. Sus aumentos van generalmente parejos con los de la urea, pero se demora ms tiempo en subir. Cuando en la insuficiencia renal con uremia se encuentran cifra superiores a 5 mg/100 ml, el pronostico es mortal y la muerte sobreviene en poco tiempo.
INTERPRETACION CLINICA En las nefritis agudas puede elevarse rpidamente, pero es de escaso valor pronstico, porque es reversible aunque no exista neuropata. En las obstrucciones urinarias, sus niveles se elevan considerablemente, pero poseen la particularidad de que no tienen valor pronstico y bajan con facilidad cuando desaparece la obstruccin. Esto se observa en obstrucciones producidas por adenoma prosttico, anuria refleja, clculos uretrales, etc. Su disminucin srica se presenta en el embarazo y en estados de caquexia por reduccin de la masa muscular. el aumento. Se encuentran cifras aumentadas en la nefrosis por txicos y en la insuficiencia cardiaca avanzada,
El ensayo de la creatinina esta basado en la reaccin de la creatinina con el picrato alcalino descrito por Jaff.
224
La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del mtodo. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra ensayada.
DESARROLLO DE LA TECNICA (SPINREACT)
1. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente al blanco de reactivo.
2. Pipetear en una cubeta:
Reactivo (l)
Blanco 500
Patrn 500
Muestra 500 225
Patrn (l) Muestra (l)
---
50 --
-50
3. Mezclar y poner en marcha el cronmetro.
4. Leer a 492 nm la absorbancia (A1) al cabo de 30 segundos y al cabo de 90 segundos (A2) de la adicin de la muestra. 5. Calcular A = A2 A1
CALCULOS: A Muestra x 2 (Conc. Patrn) = mg/dl de creatinina en la muestra A Patrn
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS R1 Reactivo Pcrico : Acido pcrico 17.5 mmol/l R2 Reactivo Alcalinizante: Hidrxido sdico 0.29 mmol/l
CREATININE CAL: Patrn primario acuoso de Creatinina 2 mg/dl
226
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 28C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. No utilizar reactivos fuera de su fecha de caducidad.
MUESTRAS Suero o plasma heparinizado. Estabilidad de la creatinina: al menos 24 horas a 2-8 C
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A.
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NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
CRISTALOGRAFIA
Las secreciones cervicales tienen toda funcin femenina, ligada su fisiologa a factores hormonales. Los estrgenos segregados en la fase preovulatoria, elevan el epitelio endocervical y segregan mucus hasta la cantidad de 300 mg/100ml al da, en los das preovulatorios, aumentando la cantidad de agua. Por accin del cloruro de sodio, dichos mucus desecado cristaliza en forma de helechos (fern-like) y dicho fenmeno se considera como una seal de estmulo estrognico. Esto ocurre, si no existe ningn proceso inflamatorio endocervical que altere la composicin del mucus.
228
Durante la fase lutenica, desaparece el estmulo folicular y la cristalizacin no se produce. Este hecho tiene aplicacin prctica en el diagnostico de un foliculo perisitente, pues se encuentra en las dos presuntas fases de cristalizacin y para afirmar ciclos anovulatorios, si previamente se ha obtenido la cristalizacin en la primera fase del ciclo y persiste al final de este. El lquido amnitico esta producido por la membrana amnitica, el cordn umbilical fetal y los sistemas fetales gastrointestinal, respiratorio y renal. La orina fetal, probablemente constituye el principal origen de lquido amnitico despus del primer trimestre. El contenido de agua del lquido deriva tanto de la madre como del feto.
INTERPRETACION CLNICA La cristalografa del lquido amnitico nos representa la perdida de dicho lquido
229
En los diferentes fluidos y secreciones que se encuentran en el organismo, al momento de presentarse una desecacin estos tienden a precipitar en forma de cristales, los cuales pueden ser estudiados. Al secarse el lquido amnitico, se presenta el fenmeno de cristalizacin en el cual al haber precipitacin de estos se observan como helechos.
1. Poner a la paciente en Posicin ginecolgica.
230
2. Se extrae lquido amnitico con una jeringa.
3. La muestra se deposita en una laminilla y se hace un frotis
4. Dejar secar y observar al microscopio.
5. Si es positivo se observan cristales en forma de helecho.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994,
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2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
CUANTIFICACION DE HGC
INTRODUCCION Es una de las sub.-unidades de la gonadotropina corinica, producida por el trofoblasto normalmente. Cantidades insignificantes pueden producirse en tumores no trofoblasticos , como en carcinoma de ovario, pncreas, estomago ,
232
hgado pulmn , seno, sarcomas, mielomas, leucemias y linfomas , sin trascendencia en su especificidad. De gran utilidad en el diagnostico precoz del embarazo, en su control, en la mola hidatiforme, coriocarcinoma, carcinoma embrionario del testculo embarazo ectpico control de mola y coriocarcinoma despus de tratamiento. En la primera semana de embarazo se encuentran hasta 30 mUI/mL. Se incrementan la produccin con un nivel del doble cada 72 horas, con cifras normalmente superiores, hasta la novena semana donde alcanza hasta 304,000 mUI/mL. Posteriormente bajan sus unidades paulatinamente hasta el sexto mes de embarazo (50.000 mUI/ml) y luego ascienden al noveno mes a 106.200 umUI/mL. Esta concentracin normal permite por medio de la cuantificacin de las unidades internacionales apreciar la evolucin del embarazo.
INTERPRETACION CLNICA Cifras superiores a 350.000 mUI/mL en el primer trimestre o 150.000 mUI/mL despus del cuarto mes hacen diagnostico. Despus del tratamiento si ha sido por curetaje, generalmente a los 3 meses no hay nivel dosificable. En los primeros 15 Daz baja a 1.000mUI/mL y luego lo hace paulatinamente. Si el tratamiento es por histerectoma, a los dos meses debe haber negatividad total. Debe verificarse control una vez en el primer trimestre.
FUNDAMENTO DE LA TECNICA El principio de determinacin asocia el mtodo inmunoenzimtico sndwich a una deteccin final por fluorescencia (ELFA). El cono de un solo uso sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo. Los otros reactivos de la reaccin inmunolgica estn listos al empleo y distribuidos 233
en el cartucho. Todas las etapas de la determinacin se realizan automticamente por el sistema. Estn constituidos por una sucesin de ciclos de aspiracin/expulsin del medio reaccional. En una primera etapa, la muestra es tomada y transferida al pocillo con los anticuerpos anti-hCG marcados con fosfatasa alcalina (conjugado). La mezcla muestra/conjugado es aspirada y expulsada varias veces del cono para aumentar la velocidad de reaccin. De esta forma el antgeno se liga por una parte a las inmunoglobulinas fijadas sobre el cono y por otra parte al conjugado formando un sndwich. Durante una segunda etapa, se saturan los sitios de la hCG Las etapas de lavado eliminan los componentes no fijados. Durante la etapa final de deteccin, el sustrato (4-Metil-umbeliferil-fosfato) es aspirado y despus expulsado del cono. La enzima del conjugado cataliza la hidrlisis de este substrato en un producto fluorescente (4-Metil-umbeliferona) cuya fluorescencia emitida es medida a 450 nm. La intensidad de la fluorescencia es proporcional a la concentracin del antgeno presente en la muestra. Al finalizar la prueba, los resultados se calculan automticamente por el sistema VIDAS respecto a una curva de calibracin memorizada, despus se imprimen. an libres por aspiracin y expulsin del conjugado contenido en el quinto pocillo del cartucho.
DESARROLLO DE LA TECNICA (BioMrieux) 1. Sacar nicamente los reactivos necesarios, temperatura ambiente antes de utilizar. dejarles 30 minutos a
234
2.
Utilizar un cartucho HCG y un cono HCG para cada muestra, control o calibrador a analizar. Verificar que la bolsa de los conos ha sido correctamente cerrada despus de cada utilizacin.
3.
Teclear o seleccionar HCG sobre el sistema para introducir el cdigo de la prueba. El calibrador se identificado obligatoriamente como S1 debe ser utilizado en doble para ser memorizado. Si el control debe ser analizado se identificar como C1.
4. 5. 6.
Homogeneizar con la ayuda de un agitador tipo vrtex el calibrador, el control o la muestra. Distribuir 100 l de calibrador, muestra o control en el pocillo de la muestra. Colocar en el instrumento los conos y los cartuchos en las posiciones indicadas en la pantalla. Verificar bien la concordancia de los cdigos (colores y letras) sobre la etiqueta.
7. 8. 9.
Iniciar el anlisis. Todas las etapas se generan automticamente por el sistema. La duracin de la prueba es de aproximadamente 30 minutos. Al finalizar el anlisis, retirar los conos y los cartuchos del instrumento. Eliminar los conos y los cartuchos utilizados en un recipiente apropiado.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS 60 cartuchos HCG 60 conos HCG STR Listos para su empleo
SPR Conos sensibilizados con inmunoglobulinas monoclonales de ratn anti-HCG
235
Control HCG Calibrador HCG
C1 S1
Suero humano + hCG humano + conservantes Suero de Ternera + hCG humano + conservantes
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Conservar el equipo VIDAS HCG a 2-8C. No congelar los conos y los cartuchos. Mantener los reactivos a 2-8C. Despus los conos. Todos los componentes son estables hasta la fecha de caducidad indicada sobre la etiqueta del envase, si se conservan en condiciones indicadas. de cada utilizacin volver a cerrar la bolsa con su deshidratante para mantener la estabilidad de
BIBLIOGRAFIA
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1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
2.
3.
4.
CUANTIFICACIONDE PLAQUETAS
INTRODUCCIN Las plaquetas son clulas las ms pequeas ms pequeas de la sangre. Estas clulas son enucleadas, redondas u ovaladas, planas y con forma de disco. La actividad de las paquetas es necesaria para la coagulacin de la sangre, integridad vascular y vasoconstriccin y su adherencia y agregacin es
237
indispensable por que se forme un tapn que ocluya las roturas en los vasos pequeos. El desarrollo de la paqueta se realiza principalmente en la mdula sea. Su vida media es de aproximadamente 7.5 das. Normalmente, 66% de las plaquetas se localiza en la circulacin de la sangre y 33% se localiza en el bazo. INTERPRETACIN Es til para estudiar los trastornos hemorrgicos que acompaan a las hepatopatas, trombocitopenia, uremia y tratamiento con anticoagulantes, as como despus de las enfermedades que se acompaan de insuficiencia de la mdula sea. Otras pruebas que estudian la funcin plaquetaria son el tiempo de sangrado (mide la actividad de las plaquetas, su adherencia y el contenido plaquetario de factor 3) y otras pruebas especiales como la agregacin plaquetaria. Se observa un exceso de plaquetas (trombocitemia / trombocitosis )en: Cncer Leucemia mielgena y granulocitica Policitemia vera y trombocitosis primaria Esplenectoma Traumatismo, ejercicio Asfixia Artritis reumatoide y otras enfermedades de la colgena. Deficiencia de hierro y despus de anemias hemorrgicas. Infecciones agudas, enfermedades inflamatorias Enfermedad de Hodgkin, linfoma. Pancreatitis crnica Tuberculosis Recuperacin de la supresin de mdula sea( trombocitopenia)
FUNDAMENTO DE LA TECNICA 238
Mtodo de Deteccin DC Para la determinacin de las formula blanca y roja, se ocupa un mtodo automatizado por el equipo KX-21, debido a que en la actualidad los mtodos automatizados tiene un menor grado de error, adems de que el equipo cuenta con un sistema de calibracin interno, se realiza la calibracin mediante sueros calibradores los cuales muestran valores altos, normales y bajos. La muestra de sangre es aspirada, medida con un volumen
predeterminado, diluida en una proporcin especfica y llevada hasta cada transductor. La cmara transductora tiene un diminuto hoyo llamado abertura. En ambos lados de la abertura hay electrodos entre los cuales fluye corriente directa. Las clulas sanguneas suspendidas en la muestra diluida pasa a la zona de la abertura causando una resistencia a la corriente directa que cambia entre los electrodos. Como la resistencia de la corriente directa cambia, la medida de las clulas sanguneas es detectada como pulsos elctricos. Las clulas sanguneas son calculadas contando los pulsos y un histograma con el tamao de las clulas sanguneas es trazado por determinacin de los pulsos. Analizando un histograma es posible obtener varios datos de anlisis.
DESARROLLO DE LA TECNICA ANLISIS DE PLAQUETAS EN EL KX-21N 1. La sangre es aspirada del tubo de muestra hasta el rotor de la vlvula. 239
2. 4.0l de sangre medida por el rotor de vlvula hacen una dilucin 1:500 con 1.996 ml de diluyente, trayendo la mezcla a la cmara como muestra diluida.
3. De la dilucin 1:500, 40 l son medidos por la rotor de la vlvula y la muestra, es diluida en 1 2500 con 1.960 ml de diluyente, que es
transportada a la cmara transductora de Eritrocitos/plaquetas (RBC/PLT).
4. 250 l de la muestra que esta en la cmara transductora RBC/PLT es aspirada a la zona de abertura. En este momento los eritrocitos y plaquetas son contados por el mtodo de deteccin DC.
5. Al mismo tiempo el hematocrito (HCT) es calculado por el mtodo de deteccin de pulsos de eritrocitos ms altos.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Estromatolyser: lisante CELLPACK: Lquido de dilucin
240
CONSERVACION DELOS REACTIVOS Mantener a temperatura ambiente y libre de alguna contaminacin .
MUESTRAS Muestra de sangre con EDTA.
BIBLIOGRAFIA
241
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994
2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA INTRODUCCION En el individuo sano, la respuesta de la insulina a una dosis abundante de glucosa oral es casi inmediata. Alcanza su mximo entre 30 y 60 minutos despus y se
242
normaliza durante las siguientes 3 horas. En este caso, existe suficiente insulina como para metabolizar la glucosa ingerida al inicio de la prueba. Cuando los resultados de la glucosa pospandrial y de ayuno son limtrofes, la prueba de tolerancia a la glucosa ayuda a descartar diabetes sacarina; tambin puede formar parte de la investigacin de la hipertrigliceridemia, neuropata, impotencia, neuropata semejante a diabetes. Esta prueba se debe realizar especialmente en individuos con: antecedentes familiares, obesidad, episodios de hipoglucemia, antecedentes de infecciones recurrentes (abscesos)., antecedentes de parto con productos macrosmicos, bitos, muerte neonatal, trabajo de parto prematura y abortos Para obtener datos fidedignos deben observarse rigurosamente varias normas. La prueba se debe posponer si el paciente enferma, incluso de padecimientos frecuentes como gripe. La tolerancia disminuye con la edad en razn de 10 a 15 mg/dl, por cada decenio despus de los 50 aos. Las cifras ms significativas se obtienen en la primera y segundas horas. INTERPRETACION CLINICA Los valores anormales de la prueba de tolerancia a la glucosa se basan en la Clasificacin Internacional de Diabetes Sacarina (Mellitus) y en las categoras de intolerancia a la glucosa: Para hacer un diagnstico de diabetes sacarina, deben ser anormales cuando menos dos cifras de prueba de tolerancia a la glucosa. En casos de diabetes manifiesta, no se secreta insulina; la glucosa elevada persiste durante toda la prueba. En casos de diabetes manifiesta, no se secreta insulina; la glucosa elevada persiste durante toda la prueba. La cifra de glucosa que sobrepasa los lmites normales pero que permanece por debajo de los criterios diagnsticos para diabetes o alteracin en la tolerancia a la glucosa, se debe considerar como situacin no diagnstica. La tolerancia a la glucosa disminuye con glucemia elevada en casos de : diabetes sacarina, hipertiroidismo, exceso de ingestin de glucosa, hiperlipidemia tipo III, IV y V, hemocromatosis, enfermedad de Cushing, lesiones del sistema nervioso central y feocromocitoma.
CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA
243
Ayunas Primera hora despus de estmulo Dos horas despus del estmulo Tres horas despus del estmulo
76 110 111 126 > 126 Hasta 140
Glucosa basal pacientes normales Alteracin en el metabolismo Pacientes diabticos Glucosa pospandrial
Los pacientes cuyos niveles de glucosa se sitan entre lo normal y lo diabtico son clasificados en una categora denominada tolerancia alterada a la glucosa.
244
Dosificaciones peridicas en el transcurso de algunas horas de glucosa, despus de estimular el pncreas con una dosis de glucosa, permiten analizar en forma prctica y global el metabolismo de los glcidos, diagnosticar hipoglucemias funcionantes, diabetes latentes no diagnosticadas o comportamiento de las ya establecidas.
245
1. Anote el peso del paciente. La dosis de glucosa depende del peso corporal y se calcula de la siguiente manera: 1.75 grs. X Kg. de peso Embarazadas 100g de glucosa. 2. Tome una muestra basal. 3. Cinco minutos despus de que se le haya tomado la muestra, beber una descarga de glucosa (siempre y cuando el valor de glucosa basal haya salido menor a 125 mg/dl, en caso de que fuera elevada se debe informar al paciente que no se le puede administrar ya que se le provocara un shock hiperglucmico).
4. Despus de la ingestin de glucosa, se toman muestras de sangre a los 30, 60, 90, 120, 150 y 180 minutos. 5. Se lleva a cabo la determinacin de glucosa de cada una de las muestras. VER TECNICA DE GLUCOSA
246
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS A: Fosfatos 100 mmol/L, glucosa oxidasa >10 U/mL , peroxidasa >1 U/mL, 4-aminoantipirina 0.4 mmol/L, pH 7.5 S: Patrn de glucosa /urea/creatinina. Glucosa 100 mg/dL(5.55 mmol/L, urea 50 mg/dL, creatinina 2 mg/dL. Patrn primario acuoso.
CONSERVACION DELOS REACTIVOS Conservar a 2-8 C
El reactivo y el patrn son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserve bien cerrados y se evite la contaminacin durante su uso.
MUESTRAS Suero o plasma.
El suero debe de separarse de los elementos celulares lo antes posible para evitar la gluclisis.
La glucosa en suero o plasma es estable 5 das
a 2-8 C. Los
anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
DEPURACION DE CREATININA
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INTRODUCCION El anlisis de orina y de sangre son los dos medios ms corrientes para valorar la funcin renal. Aunque el examen de orina es un excelente mtodo de exploracin, antes de que aparezcan anormalidades detectables puede producirse una importante prdida de masa funcional. Es posible encontrar muy poca anormalidad en el anlisis de orina a pesar del marcado deterioro renal. Una funcin renal normal depende de cuatro aspectos de la fisiologa del rin: El flujo sanguneo renal debe ser suficiente, el filtrado glomerular ha de ser suficiente, la funcin tubular renal debe ser normal y no debe haber ninguna obstruccin apreciable al flujo de excrecin de la orina. La funcin renal global y algunos aspectos de su fisiologa pueden determinarse mediante la medicin simultnea de las concentraciones de sustancias a la vez en la sangre y en la orina. Midiendo sustancias tales como la creatinina en la orina (O) y el volumen de orina formado durante 24 horas (V), as como la concentracin de la creatinina en suero (S). El aclaracin del suero es proporcional al nmero total de glomrulos, que son proporcionales a la masa parenquimatosa renal. El rea de la superficie corporal puede determinarse a partir de nomogramas o de frmulas que relacionan el peso del cuerpo con el rea de la superficie.
INTERPRETACION CLINICA La depuracin de creatinina bajo esta en relacin con el flujo sanguneo renal disminuido, shock, deshidratacin, hemorragias, insuficiencia cardiaca congestiva, sndrome nefrtico, glomerulonefritis, pielonefritis, mieloma mltiple, enfermedad de Wilson, insuficiencia heptica, paludismo, eclampsia. Incrementos en la depuracin de creatinina se deben a un volumen minuto cardiaco elevado, quemaduras, embarazo, estados hipercatablicos.
249
La creatinina es una sustancia que es excretada fcilmente por los riones en el individuo sano. La produccin endgena de creatinina es constante siempre y cuando la masa muscular permanezca integra. La depuracin de creatinina constituye una cuantificacin especfica de la funcin renal, principalmente de la filtracin glomerular. Mide la velocidad con la que el rin depura creatinina de la sangre. La depuracin de una sustancia se define como el volumen imaginario (ml/ min) de plasma por la cual una sustancia hubiera sido totalmente extrada para que el rin excretara esa misma cantidad en 1 minuto.
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1. Recoleccin de muestra de orina de 24 horas y toma sangunea. 2. Datos del paciente as como peso y talla. Determinacin de creatinina en orina: (SPINREACT) 3. Medir el volumen urinario (ml), diluir la muestra 1/50 con agua destilada y mezclar. 4. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente al blanco de reactivo. 5. Pipetear en una cubeta: Reactivo (l) Patrn (l) Muestra (l) Blanco 500 --Patrn 500 50 -Muestra 500 -50
6. Mezclar y poner en marcha el cronmetro. 7. Leer a 492 nm la absorbancia (A1) al cabo de 30 segundos y al cabo de 90 segundos (A2) de la adicin de la muestra. 8. Calcular A = A2 A1 CALCULOS: A Muestra x 2 (Conc. Patrn) = mg/dl de creatinina en la muestra A Patrn Multiplicar el resultado obtenido por 50 ( factor de dilucin)
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COMPOSICION DE LOS REACTIVOS R1 Reactivo Pcrico : Acido pcrico 17.5 mmol/l R2 Reactivo Alcalinizante: Hidrxido sdico 0.29 mmol/l
CREATININE CAL: Patrn primario acuoso de Creatinina 2 mg/dl
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 28C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. No utilizar reactivos fuera de su fecha de caducidad.
MUESTRAS Orina de 24 horas. Estabilidad 7 das a 2-8C.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
DESHIDROGENASA LACTICA (DHL)
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INTRODUCCION Es una enzima intracelular, esta enzima cataliza la oxidacin reversible de lactato a piruvato. Esta ampliamente distribuida en tejidos de mamferos y es ms abundante en el miocardio, rin, hgado y msculo. Es una enzima inespecfica que se eleva notablemente en el carcinoma diseminado, en el 75% de las hepatitis agudas, en las anemias hemolticas por perdida de esta enzima en los eritrocitos y por la misma causa en anemias megaloblsticas. Tiene 5 isoenzimas que se pueden separar por electroforesis cada una de estas isoenzimas se distingue de las otras mediante procedimientos serolgicos, electroforticos y otros de orden qumico. Las isoenzimas de la LDH se designan en la prctica de acuerdo con su movilidad electrofortica. La fraccin con mayor movilidad se denomina LDH1 , la que tiene menos movilidad andica se conoce como LDH5 y las otras tres como LDH2, LDH3 y LDH4. Las 5 isoenzimas tienen el mismo peso molecular, pero difieren en la carga que contienen. Cada isoenzima es un tetrmero constituido por 4 subunidades, existen 2 tipos de estas subunidades designados respectivamente H y M. La fraccin LDH5 se encuentra en el hgado y msculo estriado. En el miocardio y eritrocitos la fraccin LDH1.
INTERPRETACION CLINICA En el infarto del miocardio su nivel se eleva entre las 12 y 24 horas postinfarto y tiene su mxima concentracin entre 2 y 4 das despus, permaneciendo elevada entre 8 y 14 das con una frecuencia del 83%. La concentracin normal flucta entre 100 y 220 unidades y se pueden observar cifras de 1.500 unidades a los 5 das de infarto, en procesos malignos hasta 2.500 U, en hepatitis aguda de 1.000 U y en anemias megaloblasticas hasta 2.000 U. Cuando la cifra de LDH disminuye significa que la respuesta al tratamiento contra el cncer es buena.
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Este mtodo es el original de Buhl y Jackson modificado por Wacker, quienes optimizaron las condiciones de reaccin.
La LDH especficamente cataliza la oxidacin de lactato a piruvato con la subsecuente reduccin del NAD a NADH. La velocidad a la cual se forma la NADH es proporcional a la actividad de la LDH. El mtodo descrito determina el aumento de la absorbancia por minuto a 340 nm.
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DESARROLLO DE LA TECNICA (LICON)
1. PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO: REACTIVO BUFFER (R1) ENZIMA (R2) PROCEDIMIENTO: 37 C por 3 min 500 l 500 l 100 l
Reactivo de trabajo
2. Adicionar 25 l de muestra e incubar por 1 min a 37 C. 3. Leer a 340 nm
CALCULOS: U/I = 3376 x A 340 nm/min
VALORES NORMALES: ADULTOS : Hombres 80 285 U/l Mujeres 103 227 U/l
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Buffer de LDH (R1) Lactato L-litio 2Metil-2-Amino-1-Propanol pH 8.8 100mmol/L 600 mmol/L
Enzima LDH (R2) NAD+ 6 mmol/L
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS El reactivo de trabajo es estable por 2 meses a 2-8C o un da a temperatura ambiente.
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BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
ELECTROLITOS SERICOS 258
INTRODUCCION Los electrolitos son iones que existen en los lquidos corporales. En el lquido extracelular (LEC) el catin principal en el Na + y los aniones principales, Cl- y HCO-3 y K. El metabolismo resulta afectado en cierto grado por las concentraciones relativas y absolutas de estos electrolitos, que constituyen importantes factores determinantes de la osmolalidad, del estado de hidratacin y del pH del lquido tanto intracelular como extracelular. Adems, los potenciales de membrana (incluyendo y el funcionamiento normal del tejido el msculo cardaco) estn regulados nervioso y el msculo por las diferentes
concentraciones de los electrolitos en el liquido intracelular y extracelular. El sodio es el principal catin del lquido extracelular y la principal partcula osmtica fuera de la clula. El potasio es el principal catin intracelular, solo el 2% del potasio total del cuerpo es extracelular El cloro es el anion extracelular principal, es ingerido absorbido y el exceso es excretado por la orina. La mayor parte de calcio esta almacenado en el esqueleto y los dientes, cerca del 50% del calcio sanguneo esta ionizado, el resto unido a protenas. Casi todo el fsforo esta combinado con calcio en el hueso (85%) el resto se localiza en las clulas, la mayor parte de fsforo existe en forma de fosfatos o steres. El nivel de fosfato se mide en relacin con el nivel de calcio porque entre ambos existe una relacin inversamente proporcional. El magnesio esta concentrado en los huesos, cartlago y dentro de las clulas y su funcin es permitir al organismo utilizar el ATP como fuente energtica.
DESARROLLO DE LA TCNICA 259
PARA LA DETERMINACIN DE ELECTROLITOS SERICOS CONSULTAR LA TECNICA
VER LA METODOLOGIA DE SODIO
VER LA METODOLOGIA DE POTASIO
VER LA METODOLOGIA DE
CLORO
VER LA METODOLOGIA DE CALCIO
VER LA METODOLOGIA DE FOSFORO
VER LA METODOLOGIA DE MAGNESIO
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BIBLIOGRAFIA
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
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EOSINOFILOS EN MOCO NASAL
INTRODUCCION La alergia y las alteraciones atpicas, como el asma bronquial y la rinitis estacional (fiebre de heno), se caracterizan por la presencia de eosinofilia. Estas reacciones inmunolgicas estn controladas por la IgE, que provoca la degranulacin del mastocito y el basofilo, liberando un factor quimiotctico para los eosinfilos. La funcin principal de los eosinfilos es liberar el contenido de los grnulos o reactivar el oxigeno generado por las mismas membranas celulares para lesionar al organismo diana o clula agresora. Los eosinfilos se encuentran en sangre perifrica, medula sea,
esputo(en el asma bronquial) y excreciones nasales y conjuntivales(en la fiebre del heno). La eosinofilia hemtica suele ser leve o moderada.
INTERPRETACION CLINICA En los casos del asma el recuento absoluto de eosinfilos ha resultado til para el tratamiento , puesto que el nivel de eosinfilos se relaciona positivamente con el rendimiento pulmonar , indica la idoneidad de la esteroideotrapia y puede indicar tambin la presencia de infecciones complicantes.
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La funcin principal de los eosinfilos es liberar el contenido de los grnulos o reactivar el oxigeno generado por las mismas membranas celulares para lesionar al organismo diana o clula agresora. Los esinofilos se encuentran en sangre perifrica, medula sea, esputo (en el asma bronquial) y excreciones nasales y conjuntivales(en la fiebre del heno). La eosinofilia hemtica suele ser leve o moderada
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DESARROLLO DE LA TECNICA El paciente se debe presentar sin haberse aseado la nariz desde que se levanto. 1. Sentar al paciente y explicarle que se le va a practicar un raspado de las fosas nasales y que va a sentir una sensacin de estornudo acompaado de una sensacin de lagrimeo. 2. Se toma un hisopo estril y se introduce en una de las fosas nasales hasta donde el paciente lo soporte; se gira para obtener muestra del moco de esa zona; posteriormente se hace un extendido de la muestra sobre la laminilla y se identifica la laminilla si es narina derecha o izquierda. 3. Se realiza la misma metodologa con la otra narina y si es que no se obtiene la muestra adecuada al primer intento de raspado, se vuelve realizar el objetivo es obtener una buena muestra de las narinas. 4. Cuando se extienden se dejan secar y se fija con alcohol, despus se procede a teir con el hemocolorante rpido.
Y se observa en el microscopio primero en 40 X y se identifican a las clulas del revestimiento de las fosas nasales se observan grandes, se reporta por # de la abundancia celular que se observen por polimorfonucleares, mononucleares y eosinofilos. campo, y en porcentaje los
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS 264
Hemocolorante rpido
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS En lugar fresco y seco.
MUESTRAS Moco nasal
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BIBLIOGRAFIA
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996 FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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EOSINOFILOS EN MOCO BRONQUIAL
INTRODUCCION La funcin principal de los eosinfilos es liberar el contenido de los grnulos o reactivar el oxigeno generado por las mismas membranas celulares para lesionar al organismo diana o clula agresora. La alergia y las alteraciones atpicas como el asma bronquial y la rinitis estacional se caracterizan por la presencia de eosinofilia. Los esinofilos se encuentran en sangre perifrica, medula sea, esputo (en el asma bronquial) y excreciones nasales y conjuntivales (en la fiebre del heno). La eosinofilia hemtica suele ser leve o moderada.
Prueba de utilidad en la investigacin de parasitosis y enfermedades alrgicas. En eosinofilias pulmonares como el Sndrome de Leffler se caracteriza por repetidos exudados pulmonares transitorios acompaados de tos, que muchas veces producen un esputo que contiene eosinfilos. El sndrome desaparece en algunas semanas y puede ser provocado por ciertos medicamentos, antgenos inhalados o infestacin helmntica durante periodos de diseminacin, cuando los parsitos pasan de la sangre a los pulmones.
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La funcin principal de los eosinfilos es liberar el contenido de los grnulos o reactivar el oxigeno generado por las mismas membranas celulares para lesionar al organismo diana o clula agresora. Los esinofilos se encuentran en sangre perifrica, medula sea, esputo (en el asma bronquial) y excreciones nasales y conjuntivales (en la fiebre del heno). La eosinofilia hematica suele ser leve o moderada
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1. Se recolecta el esputo en un frasco estril, procurando que no contenga saliva. 2. Se toma un hisopo estril y se introduce en el frasco donde este la muestra, se gira para obtener muestra del moco; posteriormente se hace un extendido de la muestra sobre la laminilla y se identifica la laminilla.
3. Cuando se extienden se dejan secar y se fija con alcohol, despus se procede a teir con el hemocolorante rpido.
Y se observa en el microscopio primero en 40 X y se identifican a las clulas, se reporta por # de la abundancia celular que se observen por campo, y en porcentaje los polimorfonucleares, mononucleares y eosinofilos.
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COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Hemocolorante
CONSERVACION DELOS REACTIVOS Consrvese en un lugar limpio y fresco.
MUESTRAS Muestra de aspirado bronquial, esputo.
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BIBLIOGRAFIA
1.
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AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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EXAMEN GENERAL DE ORINA INTRODUCCION

Los fines de las pruebas de laboratorio para evaluar la funcin renal son: detectar la presencia de una alteracin de origen renal, localizar el sitio de alteracin y cuantificar el grado de daos. La deteccin de la alteracin puede lograrse con el anlisis de orina de rutina, adems de la urea y creatinina. Antes proceder a cualquier prueba, es preciso evaluar en la muestra de orina su aceptabilidad. Las diversas consideraciones incluyen un etiquetado apropiado, una muestra apropiada para le prueba solicitada, una conservacin apropiada, signos visibles de contaminacin y cualquier retraso en su transporte hasta el laboratorio. En pacientes peditricos y en personas con insuficiencia renal aguda puede ser necesario procesar un volumen de orina inferior al estandarizado. En estos casos, debe incluirse una nota en la hoja de solicitud y utilizarse un factor de dilucin para ajustar todas las valoraciones cuantitativas. Algunos aspectos que se deben tener en cuenta en el examen general de orina: Color : el color amarillo de la orina es debido en gran parte al pigmento urocromo y a pequeas cantidades de urobilinas y uroeritina, Se considera que la excrecin de urocromo es proporcional al metabolismo basal y aumenta durante la fiebre, la tirotoxicosis y la caquexia. Una orina clara en una persona normal es consecuencia de una elevada ingesta de lquidos. La orina es mas oscura cuando se retiene liquido. Por tanto, el color indica el grado de hidratacin. Olor: la orina tiene un olor ligeramente aromtico de origen indeterminado. El olor es en especial importante para reconocer muestras que, contaminadas por bacterias durante el reposo, son amoniacales, ftidas e inadecuadas para el examen de laboratorio. La ausencia de olor en orina de los enfermos con insuficiencia renal aguda es un signo de necrosis tubular aguda mas que de insuficiencia prerrenal. Volumen de orina: la determinacin del volumen de orina a distintos intervalos puede resultar til para el diagnostico clnico. El volumen diario medio en un adulto normal es de 1200 a 1500 ml y oscila entre un mnimo de 600 y un mximo de 2000 ml. Peso especifico y osmolalidad: el rin varia el volumen de la orina excretada y su concentracin de solutos para mantener la homeostasia de los lquidos corporales y de los electrolitos. Para esto los riones producen una orina mucho mas concentrada que el plasma del cual procede.
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INTERPRETACIN CLNICA Los diferentes parmetros evaluados nos orientan hacia la posible patologa: Se excreta glucosa en casos de Diabetes Mellitus Cetonas, cuando la capacidad de los tejidos es superada y tienen que excretarse por orina. Sangre en glomerulonefritis, lesin del tracto urinario (tumor en la vejiga e infeccin uretral) Bilirrubina: cuando la bilirrubina srica esta aumentada, se asocia a trastornos hepticos. Urobilingeno: Enfermedad hemoltica grave. Nitritos: presencia de bacterias que reducen nitrato a nitrito. Leucocitos: procesos inflamatorios de origen infeccioso o de otro tipo. Clulas epiteliales: Un incremento representa inflamacin dependiendo el lugar donde proceden. Clulas tbulo renal: dao tubular por pielonefritis, necrosis tubular. Cilindros eritrocitarios: procesos patolgicos relacionados con
glomerulonefritis. Cilindros leucocitarios: infeccin renal y procesos inflamatorios Cilindros epiteliales: se presentan durante infecciones virales. Cristales de cido rico: se presentan en la gota o en la nefritis crnica. Cristales oxalato de calcio: una gran cantidad indica presencia de clculos. Cristales de leucina: en cirrosis terminal, hepatitis viral Cristales de colesterol: en cuadros nefrticos Cristales de fosfato de calcio: forman clculos Cristales de triple fosfato: pueden formar clculos Bacterias: indica infeccin en el tracto urinario Levaduras: se presentan en pacientes diabticos. 273
FUNDAMENTO DE LA TCNICA Multistix 10 SG Glucosa: esta prueba se basa en una doble reaccin secuencial de enzimas. Una enzima la glucosa oxidasa cataliza la formacin de cido glucnico y perxido de hidrogeno a partir de la oxidacin de la glucosa. Una segunda enzima , la peroxidasa, cataliza la reaccin del perxido de hidrgeno con un cromgeno de yoduro de potasio, el cual es oxidado produciendo colores que van del verde al caf. La prueba es especfica para glucosa. No se conoce otra sustancia que excretada en la orina d un resultado positivo. El rea reactiva no reacciona con lactosa, galactosa, fructosa o metabolitos reductores de medicamentos. Esta prueba puede ser utilizada para determinar si la sustancia reductora encontrada en orina es glucosa. Bilirrubina: Se basa en el acoplamiento de la bilirrubina con la dicloroanilina diazotizada en un medio fuertemente cido. El color es crema para resultados negativos y vara dentro de distintos tonos claros de color caf para resultados positivos. Normalmente no se detecta bilirrubina en orina, an por los mtodos ms sensibles. Cualquier cantidad de bilirrubina se considera anormal y se requiere de una evaluacin ms a fondo. Cetona: Esta prueba se basa en la reaccin del cido acetoactico con el nitroprusiato de sodio. Algunas orinas con gravedad especfica alta o pH bajo pueden dar resultados positivos incluyendo trazas las lecturas negativas producen un color caf claro y las positivas colores que van de rosa hasta prpura. Gravedad especfica o densidad: Se basa en el cambio aparente de pKa de ciertos polielectrolitos pretratados en relacin con la concentracin inica. En presencia de un indicador, los colores varan desde un verde-azul oscuro en orinas con concentracin baja, pasando por tonalidades verde, hasta un verdeamarillo en orinas de alta concentracin inica. Esta prueba permite la determinacin de la densidad entre 1.000 y 1.030. Sangre: Esta prueba se basa en la similitud entre la actividad de la peroxidasa y la actividad de la hemoglobina, las cuales catalizan la reaccin del di-hidroperxido de di-isopropilbenceno y la 3,3,5,5-tetrametilbencidina. El color resultante vara del amarillo naranja hasta verde oscuro o azul en orinas con altos niveles de sangre. El color verde homogneo indica la presencia de hemoglobina o mioglobina libre ya que la prueba es igualmente sensible a estas dos sustancias. El desarrollo de puntos verdes indica la presencia de eritrocitos intactos, la escala visual permite detectar trazas o cantidades moderadas de no bemolizados.
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pH: Se basa en un principio de doble indicador que produce una amplia gama de colores, cubriendo los lmites de pH urinario por completo. Los colores desarrollados van del naranja al amarillo y del verde al azul. El rea de prueba de pH mide valores de 5.0-8.5 en forma visual y de 5.0-9.0 en forma instrumental. Las lecturas de pH no se alteran no se alteran por las variaciones de amortiguadores urinarios. Protena: Esta prueba se basa en el principio de error proteico de los indicadores. A un pH co9nstante el desarrollo de cualquier color verde es debido a la presencia de protena. El rango de colores va de amarillo para negativo, pasando por verde amarillo y verde a verde-azul para resultados positivos. Normalmente se excreta una cantidad mnima de protena por el rin, pero no se detecta por mtodos convencionales. Un color comparable a cualquier bloque de mayor al color de trazas, indica proteinuria significativa. El rea reactiva es ms sensible a la albmina que a las globulinas, hemoglobina, protena de Bence Jones y mucoprotena, por lo tanto un resultado negativo no descarta la presencia de otras protenas. Urobilingeno: Se basa en una modificacin de la reaccin de Ehrlich, en la cual el p-dietilaminobenzaldehdo en combinacin con un intensificador de color reacciona con el urobilingeno en concentraciones tan bajas como 0.2 mg/dl que aproximadamente equivale a 0.2 unidades Ehrlich. Nitritos: Depende de la conversin de nitratos a nitritos, por la accin de bacterias Gram negativas en la orina. A pH cido del rea reactiva, los nitritos de la orina reaccionan con cido p-arsanlico para formar un compuesto de diazonio. Este compuesto a su vez se acopla con el 1,2,3,4-tetrahidrobenzo(h)quinolin-3-ol para producir un color rosa. La prueba es especfica para nitritos por lo que no reacciona con ninguna otra sustancia normalmente excretada en la orina. La intensidad del color no es proporcional a la cantidad de bacterias presentes; un resultado negativo no prueba que no haya bacteriuria. Leucocitos: Los leucocitos granulocitos contienen esterasas que catalizan la hidrlisis del derivado ster cido aminopirrol, liberando 3-hidroxi-5-fenil pirrol. Este compuesto de pirrol reacciona con una sal de diazonio. El color de la reaccin negativa es crema y violeta para las reacciones positivas.
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El estudio microscpico del sedimento urinario no solo permite determinar la posible presencia de una enfermedad renal, sino indicar el tipo de lesin o el estado de actividad de una lesin preexistente.
DESARROLLO DE LA TCNICA 1. Sumergir brevemente la tira de ensayo en la orina (1 segundo como mximo). 2. Al retirar la tira, escurrir el exceso de orina en el borde del frasco. 3. Colocar la tira de ensayo en el analizador como se indica en el manual del operador. Si se efecta una lectura visual, comparar los colores, transcurridos 60 segundos (en caso de analizar leucocitos tras 60-120 segundos). 4. Una vez que el analizador acepte la tira de ensayo, est se mide por fotometra de reflectancia. Los resultados se calculan automticamente y se imprimen en forma de reporte como normal, neg., pos o indicando los valores de concentracin. 5. Centrifugar la muestra durante 5 minutos a 3500 r.p.m. 6. Decantar el sobrenadante 7. Mezclar el sedimento 8. Depositar una gota en un portaobjetos y posteriormente un cubreobjetos 9. Observar en el microscopio en 40x
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COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Densidad: cido etilenglicol-bis-(beta-aminoetil)-N,N,N, N-tetractico; azul de bromotimol. pH: azul de bromotimol, rojo de metilo, fenolftalena. Leucocitos: ster de cido indoxilcarbnico, metoximorfolinobenceno sal de diazonio. Nitritos: 3-hidroxi-1,2,3,4-tetrahidro-7,8-benzoquinolina, sulfanilamida. Protena: 3,3,5,5-tetraclorofenol-3,4,5,6-tetrabromosulfoftalena. Glucosa: 3,3,5,5-tetrametilbencidina, GOD, POD Cuerpos cetnicos: nitroprusiato de sodio Urobilingeno: 4-metoxibenceno tetrafluoroborato de diazonio. Bilirrubina: 2,6-diclorobenceno tetrafluoroborato de diazonio Sangre: 3,3,5,5-tetrametilbencidina, 2,5-dimetil-2,5-dihidroperoxihexano.
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Guardar el envase a una temperatura entre 2-30C. Las tiras de ensayo permanecen estables en su envase original sin abrir hasta la fecha de caducidad (fin de mes) especificada en la caja.
MUESTRAS Emplear orina fresca sin centrifugar.
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La muestra de orina no debe dejarse estar por ms de dos horas antes de analizarla. En caso de dejar reposar por ms tiempo, mezclar bien antes de usar.
BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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FACTOR REUMATOIDE
El factor reumatoide esta integrado por anticuerpos contra el Fc., que es un fragmento de la inmunoglobulina IgG. Usualmente son anticuerpos IgM, pero pueden ser tambin IgG o IgA. El factor reumatoide esta presente en el suero de la mayora de los pacientes afectados de artritis reumatoidea y se puede investigar por nefelometra o prueba de ltex que es la mas fcil y comn. En la prueba de ltex, el reactivo es una suspensin de partculas de polietileno, sensibilizadas con inmunoglobulina humana. Dichas partculas ponen de manifiesto la reaccin antigeno-anticuerpo, que se manifiesta si el factor reumatoide del paciente es superior a 10 UI/mL en una franca aglutinacin.
INTERPRETACIN CLINICA En las primeras fases de la enfermedad pueden ser bajos. Tambin se pueden observar positividades bajas en otras enfermedades como mononucleosis infecciosa, lupus eritematoso, endocarditis, tuberculosis, sfilis, cncer, infecciones virales.
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La sangre de muchos pacientes con artritis reumatoide contiene un anticuerpo tipo macroglobulina llamado factor reumatoide. La evidencia indica que los factores reumatoides son anticuerpos antiglobulina gamma Los factores reumatoides (FR) sericos provocan una aglutinacin de las partculas de ltex recubiertas con gamma-globulina humana.
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DESARROLLO DE LA TCNICA (SPINREACT) Mtodo cualitativo 1. Dejar atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente . 2. Depositar 50 L de la muestra a ensayar y una gota de cada control en los circulos separados de la tarjeta visualizadora. 3. Homogeneizar el reactivo A con suavidad antes del ensayo. Mantener el vial del reactivo (A) en posicin vertical y aadir a cada crculo una gota de reactiv (A) prxima a la muestra a analizar. 4. Mezclar con ayuda de un palillo desechable , procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del circulo. Emplear palillos distintos para cada muestra a analizar. 5. Agitar la tarjeta a 100 r.p.m. durante 1:25 minutos . INTERPRETACIN Examinar microscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin inmediatamente despus de retirar la placa del agitador RESULTADO POSITIVO
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La presencia de aglutinacin
indica una concentracin de FR en el suero
agregados macroscpicos (aglutinacin comparable al control positivo). RESULTADO NEGATIVO Ausencia de agregados macroscpicos (sin aglutinacin, comparable control negativo). al
Mtodo Semicuantitativo 8. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa. 9. Colocar en una gradilla 8 tubos y numerarlos. 10. Depositar al tubo No. 1 diluyente diluido del frasco No. 4. y a todos los dems tubos 11. Despus agregar 50 L del suero problema mezclar perfectamente y de nuevo tomar 50 L y mezclar se repite de nuevo hasta acabar con los tubos. 12. en la placa se depositan 50 L de los tubos y se rotulan dependiendo de la dilucin. 13. Se aade una gota del reactivo No. 1 en cada dilucin. Se mezclan perfectamente bien durante 1:25 minutos. 14. Se realiza la lectura bajo una fuente de luz directa.
Interpretacin: El titulo del suero ser la ultima dilucin que presente agregados macroscopicos(aglutinacin).
Tubo 1 Dilucin 1:20
2 1:40
3 1:80
4 1:160
5 1:320
6 1:640
7 8 1:1280 1:2560 282
+ + +
+ + +
+ +
RESULTADO: Titulo de FR X 8 = UI/ml
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS A. Reactivo: suspensin de partculas de ltex globulina humana azida sdica 0.95 g/dL. sensibilizadas con gamma,
C-. control negativo: suero conteniendo menos de 30 IU/mL. C+. control positivo: suero humano conteniendo mas de 30 IU/mL.
CONSERVACION DELOS REACTIVOS Conservar a desechables. 2-8C, excepto las tarjetas visualizadoras y los palillos
MUESTRAS Suero recogido mediante procedimientos estndar 283
Los FR en suero son estables 2 das a 2-8 C
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZ-PERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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FORMULA BLANCA
INTERPRETACION CLINICA La biometra hemtica es una prueba de deteccin bsica y constituye pruebas la tcnica de laboratorio que se pide con ms frecuencia. Los datos que proporciona constituye informacin diagnostica muy valiosa sobre el sistema hematolgico y otros aparatos del cuerpo, pronostico, respuesta al tratamiento y recuperacin. Consta de una serie de pruebas que determinan el nmero, variedad, porcentaje, concentracin y calidad de las clulas sanguneas. Los glbulos blancos o leucocitos se dividen en dos grupos principales: granulocitos y agranulocitos. Los granulocitos reciben su nombre por los grnulos que contienen en el citoplasma los neutrfilos, basfilos y eosinfilos. Sin embargo, cada una de estas clulas contiene un ncleo multilobulado, por lo que tambin se denominan leucocitos polimorfonucleares. Los que no son granulocitos, esto es, linfocitos y monolitos, no contienen grnulos y sus ncleos tampoco son lobulados. No son necesariamente esfricos, por lo que tambin se denominan leucocitos mononucleares.
INTERPRETACION CLNICA
285
La cuenta leucocitaria
constituye una gua muy til sobre la gravedad de la
enfermedad. En distintos tipos de padecimientos , se observan los patrones especficos de la respuesta leucocitaria.
La leucocitosis (cuenta leucocitaria mayor de 10,000/ L o 103 / mm3 / L) suele deberse al aumento de un solo tipo de glbulo blanco y recibe el nombre del tipo de clula que predomina: Leucocitosis neutroflica o neutrofilia. Leucocitosis linfoctica o linfocitosis. Leucocitosis eosinofilica o eosinofilia. Leucocitosis monoltica o monocitosis. Leucocitosis basfila o basofilia.
El aumento de leucocitos circulantes rara vez se debe a un aumento proporcional de los leucocitos de todos los tipos. Si esto sucede, suele deberse a hemoconcentracin.En algunas enfermedades (como sarampin, tos ferina y sepsis), la elevacin de los leucocitos es tal que aparenta leucemia. La leucocitosis temporal (reaccin leucemoide) debe distinguirse de la leucemia y en este ultimo caso la leucocitosis es permanente y progresiva. Se produce leucocitosis en las infecciones agudas en las que el nmero de
leucocitos depende de la intensidad de la infeccin, la resistencia del paciente su edad y la deficiencia y reserva de la mdula sea.
286
La leucopenia (reduccin de los leucocitos por debajo de 4000 mm 3 )se produce durante: infecciones virales, algunas bacterianas, infecciones Hiperesplenismo. Depresin de mdula sea por frmacos. Trastornos primarios de la mdula sea: leucemia, anemia perniciosa, anemia aplstica, sndromes mielodisplsicos, enfermedad de Kostman, agenesia reticular, hipoplasia de cartlago y cabello, sndrome de Shachman-Diamond, sndrome de Chdiack-higashi. muy graves.
Se ocupa para la determinacin de las formula blanca y roja, se ocupa un mtodo automatizado que el KX-21, debido a que en la actualidad los mtodos automatizados tiene un menor grado de error, adems de que este aparato tiene un sistema de calibracin interno, se le realiza calibracin mediante unos sueros calibradores con todos los datos que analizamos son alto, normal y bajo. La muestra de sangre es aspirada, medida con un volumen
predeterminado, diluida en una proporcin especfica y llevada hasta cada transductor. La cmara transductora tiene un diminuto hoyo llamado abertura. En ambos lados de la abertura hay electrodos entre los cuales fluye corriente directa. Las clulas sanguneas suspendidas en la muestra diluida pasa a la zona de la abertura causando una resistencia a la corriente directa que cambia entre los electrodos. Como la resistencia de la corriente directa cambia, la medida de las clulas sanguneas es detectada como pulsos elctricos. Las clulas sanguneas son calculadas contando los pulsos y un histograma con el tamao de las clulas sanguneas es trazado por determinacin de los pulsos. Analizando un histograma es posible obtener varios datos de anlisis.
287
DESARROLLO DE LA TCNICA (KX-21) 1. Se pone a mezclar la muestra de sangre con EDTA. 2. El aparato del KX-21 tiene una aguja succionadora en la cual se introduce la muestra, esta aguja debe de quedar mas menos en el centro del tubo y no debe tocar el fondo del tubo. 3. Una vez puesto la muestra en posicin se oprime un botn verde junto a la aguja succionadora y se espera a que aspire. 4. Realiza una aspiracin e inmediatamente se quita el tubo de muestra con el cuidado de no tocar la pieza que baja para aspirar completamente todo la muestra de la aguja. 5. El resultado se visualiza en la pantalla de estado, y la impresin con todos los datos. ANLISIS EN EL KX-21N PARA LEUCOCITOS 1. La sangre es aspirada del tubo de muestra dentro del rotor de la vlvula. 2. 6 l de sangre medida por el rotor de vlvula son transferidos a la cmara transductora de Glbulos blancos (WBC), solo con 1.994 ml de diluyente. Al mismo tiempo 1.0 ml de lisante WBC/HGB es agregado para preparar una dilucin 1:500. 3. Cuando la solucin esta hecha reacciona en aproximadamente 10 segundos, los glbulos rojos (RBC) son hemolizados y las plaquetas comprimidas, la membrana de los glbulos blancos las inmoviliza. Al mismo tiempo la hemoglobina es convertida al colorante rojo metahemoglobina. 4. De la muestra diluida/hemolizada en la cmara transductora de glbulos blancos (WBC), aproximadamente 1 ml es transferido a la celda de flujo HGB. 288
5. 500 l de la muestra en que esta en la cmara transductora WBC es aspirada hacia la abertura. Los pulsos de la clulas sanguneas cuando pasan por la zona de abertura son contadas por el mtodo de deteccin DC. 6. En la celda de flujo de Hemoglobina (HGB) a 555 nm de longitud de onda, irradian una luz que es aplicada a la muestra en la celda de flujo de HGB. La concentracin de la muestra es medida como absorbancia. Esta absorbancia es comparada con la del diluyente solo, que fue medido antes de la adicin de la muestra, calculando el valor de la hemoglobina.
Estromatolyser: lisante CELLPACK: Lquido de dilucin
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BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
290
FORMULA ROJA
INTRODUCIN En la evaluacin de esta serie, se considera el conteo de eritrocitos, hematocrito (porcentaje del volumen total ocupado por eritrocitos), hemoglobina (concentracin total de hemoglobina), e ndices de glbulos rojos como VCM (Tamao de los eritrocitos), CMB (cantidad de HGB en 100 ml de eritrocitos), HCM (concentracin de Hb promedio en cada eritrocitos) y plaquetas. Tanto el nmero de eritrocitos, como el hematocrito son parmetros que evalan la cantidad de glbulos rojos en la sangre. Disminucin en los valores, es una condicin llamada anemia, que puede ser originada por disminucin de la hematopoyesis, destruccin celular, prdidas directas o en forma facticia por dilucin sangunea. Por el contrario el resultado de la medicin de estos parmetros puede estar aumentado, condicin llamada policitemia o poligloburia. El mejor parmetro para evaluar si la cantidad de eritrocitos es adecuada para el organismo, es evaluar si pueden cumplir su funcin: llevar oxgeno a la periferia del organismo. Otra parte importante consiste en el examen directo al microscopio de la sangre, este permite afinar el diagnstico y encontrar anormalidades en los eritrocitos como: anisocitosis (variacin en el tamao), microcitos (eritrocitos pequeos), macrocitos (eritrocitos grandes), tipocroma (coloracin plida), poiquilocitos (variacin anormal de la forma), ovalocitos (clulas ovaladas), etc. INTERPRETACION CLINICA El diagnstico de anemia se establece al encontrar una cantidad de Hb menor a lo esperado. La anemia se puede clasificar en: Anemias hipocrmicas (microciticas): alteracin en sntesis de hemoglobina. Disminucin de hierro: perdida de sangre, aumento de los requerimientos, dieta inadecuada, mala absorcin. Alteracin en sntesis de globinas: talasemias 291
Alteracin en sntesis de hem: anemia sideroblstica
Anemias normociticas normocromicas (disminucin en el nmero de eritrocitos) Hemorragia aguda, hemlisis Hipoplasia medular, infiltracin medular Disminucin de produccin de eritropoyetina: I. renal, I. heptica Enfermedades crnicas. Anemias macrocticas (alteracin en sntesis de compuestos nucleares) Deficiencia vitamina B12 Deficiencia cido flico. FUNDAMENTO DE LA TECNICA
METODO DE DETECCION DC Se ocupa para la determinacin de las formula blanca y roja, se ocupa un mtodo automatizado que el KX-21, debido a que en la actualidad los mtodos automatizados tiene un menor grado de error, adems de que este aparato tiene un sistema de calibracin interno, se le realiza calibracin mediante sueros calibradores con todos los datos que analizamos son alto, normal y bajo. La muestra de sangre es aspirada, medida con un volumen
predeterminado, diluida en una proporcin especfica y llevada hasta cada transductor. La cmara transductora tiene un diminuto hoyo llamado abertura. En ambos lados de la abertura hay electrodos entre los cuales fluye corriente directa. Las clulas sanguneas suspendidas en la muestra diluida pasan a la zona de la abertura causando una resistencia a la corriente directa que cambia entre los electrodos. Como la resistencia de la corriente directa cambia, la medida de las clulas sanguneas es detectada como pulsos elctricos. Las clulas sanguneas son calculadas contando los pulsos y un histograma con el tamao de las clulas sanguneas es trazado por determinacin de los pulsos. Analizando un histograma es posible obtener varios datos de anlisis
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Histograma RBC (ancho de distribucin de eritrocitos): RDW-SD: Medida del ancho de la curva de los RBC al 20 % de la altura relativa a la base. Rango normal: 35 47. RDW-CV: Medida tomada a la altura de 1 SD(60.65) de la curva de distribucin de los RBC y este es el valor dividido por MCV y convertido a %. Rango normal: 11.514.5%
DESARROLLO DE LA TECNICA 1. Se pone a mezclar la muestra de sangre con EDTA. 2. El aparato del KX-21 tiene una aguja succionadora en la cual se introduce la muestra, esta aguja debe de quedar mas menos en el centro del tubo y no debe tocar el fondo. 3. Una vez que la muestra esta en posicin se oprime un botn verde junto a la aguja succionadora y se espera a que aspire. 4. Realiza una aspiracin e inmediatamente se quita el tubo de muestra con el cuidado de no tocar la pieza que baja para aspirar completamente todo la muestra de la aguja. 5. El resultado se visualiza en la pantalla de estado, y la impresin con todos los datos.
ANLISIS DE ERITROCITOS EN EL KX-21N 6. La sangre es aspirada del tubo de muestra hasta el rotor de la vlvula. 7. 4.0l de sangre medida por el rotor de vlvula hacen una dilucin 1:500 con 1.996 ml de diluyente, trayendo la mezcla a la cmara como muestra diluida. 8. De la dilucin 1:500, 40 l son medidos por la rotor de la vlvula y la muestra, es diluida en 1 2500 con 1.960 ml de diluyente, que es transportada a la cmara transductora de Eritrocitos/plaquetas (RBC/PLT). 293
9. 250 l de la muestra que esta en la cmara transductora RBC/PLT es aspirada a la zona de abertura. En este momento los eritrocitos y plaquetas son contados por el mtodo de deteccin DC. 10. Al mismo tiempo el hematocrito (HCT) es calculado por el mtodo de deteccin de pulsos de eritrocitos ms altos.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Estromatolyser: lisante CELLPACK: Lquido de dilucin
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BIBLIOGRAFIA
2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
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FOSFATASA ALCALINA INTRODUCCIN

La fosfatasa alcalina es una enzima que se origina principalmente en el hueso, hgado y placenta, con cierta actividad en los riones e intestinos. Se le denomina alcalina debido a que funciona mejor a un pH de 9.0 La fosfatasa alcalina es una hidrolasa con muy poca especificidad de sustrato. Se encuentra presente en casi todos los tejidos del cuerpo especialmente en epitelio intestinal, tmulos renales, hueso, hgado y placenta. Su localizacin celular es la membrana. En el suero de individuos normales el origen de la fosfatasa alcalina es heptico y seo al 50 %. El estudio de las isoenzimas sricas de la fosfatasa alcalina es en ocasiones muy til para conocer la causa de una elevacin de sta enzima. Existen 5 isoenzimas (formas mltiples) principales de esta enzima: heptica, sea, intestinal, renal y placentaria. Se diferencian entre ellas por su estructura molecular y por sus propiedades fsico-qumicas, antignicas y catalticas. La fraccin biliar parece ser un complejo de la enzima con restos moleculares procedentes de la ruptura de la membranas de lo hepatocitos o de las clulas del tracto biliar. Las fracciones de origen cancerosos tienen algunas propiedades fsico-qumicas muy semejantes a las de la fraccin placentaria.
INTERPRETACIN Tiene dos aplicaciones clnicas muy tiles: En enfermedad obstructiva heptica y enfermedad metablica sea, asociada a incremento de la actividad osteoblstica.
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En enfermedad obstructiva heptica se produce una elevacin srica importante sobre todo si la obstruccin es extraheptica. En enfermedad parenquimatosa heptica la elevacin es en general muy discreta. Los aumentos moderados de esta enzima suelen acompaar a la hepatitis viral. En ausencia de ictericia, un aumento de nivel de fosfatas alcalina puede ser una buena indicacin de lesiones hepticas como tumores del hgado y trastornos hepticos debido a frmacos. En enfermedades metablicas seas, constituye prcticamente la nica enzima que tiene utilidad diagnstica,. Se encuentra elevada principalmente en la enfermedad de Pager, en el raquitismo, osteomalacia (elevacin muy discreta)) y en el hiperparatiroidismo con implicacin sea. En metstasis seas solo se produce elevacin de la fosfatasa alcalina en aquellas metstasis que dan lugar a lesiones a lesiones osteoesclerticas.
La Fosfatasa alcalina hidroliza el 4-nitrofenilfosfato para formar 4-nitrofenol y fosfatos. El 4- nitrofenol es amarillo a un pH de 10.4 con una absorbancia mxima a 405 nm. El rango en el cual se forma el p-nitrofenol es directamente proporcional a la actividad de la Fosfatasa Alcalina. 4-Nitrofenil fosfato+ H2O
ALP
4 nitrofenol + Fosfato
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DESARROLLO DE LA TCNICA (LICON)
1. Preparar el reactivo de trabajo a razn de 5 partes de buffer (R1) y 1 parte de substrato (R2); 500 l buffer y 100 l de substrato. 2. Incubar a 37 C por 3 minutos. 3. PIPETEAR:
MUESTRA REACTIVO DE TRABAJO
10 l 500 l
4. Mezclar y leer a 405 nm 5. U/I = 2764 x A 405 nm/min 6. VALORES DE REFERENCIA HOMBRE/ MUJER: 34 114 U/l
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Buffer de Fosfatasa Alcalina Reactivo 1: 2 amino-2-metil-1-propanol pH 10.4 Cloruro de magnesio 0.35 mol/L 2.00 mmol/L
Sulfato de Zinc EDTA

Substrato Fosfatasa alcalina Reactivo 2: 4-Nitrofenil fosfato
1.00 mmol/L 2.00 mmol

16.0 mmol/L
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Conservar a 2-8C. El reactivo de trabajo es estable por 4 semanas a 2-8C temperatura ambiente a 15-25 C. Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminacin durante su uso. 299 y 5 das a
MUESTRAS Suero o plasma recogido mediante procedimientos estndar.
BIBLIOGRAFIA
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997.
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FSFORO EN ORINA INTRODUCCIN

El fosfato de los alimentos es absorbido en la parte alta del intestino delgado, fenmeno que depende en parte de la relacin calcio/fosfato en los alimentos. Normalmente una tercera parte o casi del fosfato de los alimentos, en lugar de absorberse, se excreta con la heces; dos tercios se absorben, y finalmente se excretan con la orina. Mas de 90 por 100 del fosfato del filtrado glomerular se absorbe en el tbulo proximal; cuando la concentracin plasmtica de fosfato baja hasta 2 mg/100 ml, o menos, se reabsorbe todo lo que se filtra por el glomrulo, y ya no se encuentra fosfato en la orina. En la uremia y en las enfermedades crnicas del rin es frecuente que se mida la concentracin de fosfato, pues puede haber retencin de fosfato que contribuye a la acidosis.
INTERPRETACIN
La orina de 24 horas, los resultados se basan en la relacin existente entre la depuracin de creatinina y la depuracin de fosfato. Se encuentra hiperfosfatemia en toda insuficiencia renal crnica, en la acromegalia donde su nivel aumentado est en la relacin con la actividad del adenoma, en el hipoparatiroidismo, fracturas evolutivas, hipervitaminosis D y en las crisis de la enfermedad de Addison.
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FUNDAMENTO
Mtodo directo para la determinacin de fsforo inorgnico. El fsforo inorgnico reacciona en medio cido con molibdato amnico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de fsforo inorgnico presente en la muestra ensayada.
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DESARROLLO DE LA TCNICA (SPINREACT) 1. Diluir la muestra 1/10 con agua destilada. Mezclar. Multiplicar el resultado por 10 (factor de dilucin). 2. Pipetear en una cubeta:
R (L) Patrn (L) Muestra (L)
BLANCO 500 ---
PATRN 500 5 --
MUESTRA 500 -5
3. Mezclar e incubar 5 minutos. 4. Leer la absorbancia (A) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo.
CLCULOS (A) Muestra Orina 24 horas: (A) Patrn x 5 x vol. (dL) orina/24 h = mg/24 h
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COMPOSICIN DE LOS REACTIVOS

Molibdico: Molibdato amnico 0.40 mM cido sulfrico (SO4H2) 210 mM Detergente
CONSERVACIN DE LOS REACTIVOS A 2-8C, protegidos de la luz. Una vez abierto es estable 1 mes
MUESTRAS Orina (24 horas) Recoger la orina en recipientes contenido 10 ml de cido clorhdrico al 10 % para evitar la precipitacin de fosfatos.
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BIBLIOGRAFIA
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
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FSFORO EN SUERO
INTRODUCCIN La mayor parte del fosfato que existe en el suero es inorgnico y existe en dos formas inicas: fosfato monohidrgeno y dihidrgeno. Sus proporciones varan con el pH, estando en una proporcin de 4:1 a pH = 7.4. Las cifras de fosfato total del suero no se alteran al modificarse el pH. El fsforo en un elemento importante en el organismo, en los huesos, bajo forma de fosfato, representa casi 12 por 100 del peso seco, principalmente como un complejo de fosfato de calcio de tipo de hidroxiapatita. Es tambin componente indispensable de muchos sistemas metablicos de intercambio de energa, como los nucletidos trifosfato y difosfato de adenosina, la fosfocretina del msculo, y el 6-fosfato de glucosa. El fosfato total del plasma se compone de fosfatos inorgnico, steres de fosfato, fosfatos de lpidos y fosfatos de nucletidos; sin embargo en el laboratorio de anlisis clnicos solo se mide el fosfato inorgnico, pues la relacin entre los cambios de otras fracciones y los problemas qumicos es lejana. INTERPRETACIN CLINICA La hiperfosfatemia es ms frecuente en casos de disfuncin renal y uremia ya que el fosfato es regulado por los riones: insuficiencia renal, hipoparatiroidismo, hipocalcemia, consumo excesivo de alcalinos, consumo excesivo de vitamina D, tumores seos, acromegala, hepatopata. Hipofosfatemia en casos de : hiperparatiroidismo, raquitismo u osteomalacia, deficiencia de vitamina D, coma diabtico, hiperinsulinismo, hepatopata, dilisis, vmitos, desnutricin acentuada.
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Mtodo directo para la determinacin de fsforo inorgnico. El fsforo inorgnico reacciona en medio cido con molibdato amnico formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de fsforo inorgnico presente en la muestra ensayada.
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DESARROLLO DE LA TCNICA (SPINREACT)
1. Pipetear en una cubeta: BLANCO 500 --PATRN 500 5 -MUESTRA 500 -5
R (L) Patrn (L) Muestra (L)
2. Mezclar e incubar 5 minutos.
3. Leer la absorbancia (A) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo.
CLCULOS
Suero :
(A) Muestra ------------------ x 5 ( Conc. Patrn) = mg/dl (A) Patrn
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COMPOSICIN DE LOS REACTIVOS
Molibdico: Molibdato amnico 0.40 mM cido sulfrico (SO4H2) 210 mM Detergente
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS A 2-8C, protegidos de la luz. Una vez abierto es estable 1 mes
MUESTRAS Suero o plasma
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BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
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GASOMETRIA ARTERIAL INTRODUCCION

La relacin entre los componentes cidos y bsicos es indispensable para el correcto equilibrio de las funciones enzimticas, endocrinas, hemticas, metablicas de anabolismo y catabolismo. Cuando esta interaccin se pierde, el organismo trata de corregirla por medio de sus mecanismos renal y respiratorio y segn el predominio de uno de los factores, la alteracin se llama acidosis o alcalosis de acuerdo con los radicales prominentes y es metablica o respiratoria segn el mecanismo que intervenga. Toda clula verifica combustiones como consecuencia de su metabolismo y produce entre otros elementos CO 2 que normalmente vamos a poner en el exterior por medio de la respiracin. Cuando ingresa a la circulacin encuentra un medio acuoso y con la anhidrasa carbnica origina el cido carbnico que al descomponerse origina el anhdrido carbnico. En general una parte del cido ingresa a la sangre arterial y la gran mayora se elimina en forma de CO 2. El organismo para establecer el equilibrio cido-bsico, se vale de procedimientos denominados tampones, los cuales acidifican o neutralizan entre los ms importantes estn: Complejo respiratorio: Controla parte del CO 2 elaborado en el metabolismo celular sacndolo hacia el exterior mediante la espiracin evitando que tengamos mucha materia prima para elaborar el cido carbnico que acidifica la sangre. Cuando hay demasiado CO2 pulmonar porque algn mecanismo le impide salir este CO 2 permanece y aumenta su presin, obtenindose una PCO 2 aumentada, y originando una baja de pH, es decir produciendo una acidosis respiratoria. Mecanismo Proteico: Las protenas plasmticas pueden comportarse como aniones anfotricos, es decir pueden captar el hidrgeno y desprenderlo. Factor Renal: Normalmente el organismo produce un exceso de cidos que se eliminan por va renal originando un pH urinario que normalmente flucta entre 4.5 y 6.5. Los mecanismos intrarrenales representados por la absorcin del bicarbonato, acidificacin de los tampones, produccin de amoniaco (NH 4), desempea un gran papel en el equilibrio cido-bsico, alcalinizndolo o acidificndolo. pH sanguneo: Los mecanismos respiratorio y renal son los que intervienen en la regulacin del equilibrio cido-base, pero tambin se cuenta con otros elementos como son los fosfatos del plasma, el fosfato del eritrocitos, diferentes bicarbonatos y los iones de potasio, calcio, sodio y cloro. La sangre es alcalina, cuando se pierde el equilibrio ya sea para producir acidosis o alcalosis, aparecen los desequilibrios cido-bsico, si es moderada y cuenta con buena integracin fisiolgica, tanto renal como respiratoria, el organismo por si solo la compensa, pero si los factores desencadenantes son muy intensos, el organismo no es capaz de restablecer el equilibrio.
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PCO2: Nos va a informar la cantidad de cido carbnico presente en la circulacin; si hallamos una cifra superior a la normal (nivel del mar 40 mmHg ) indica que el organismo puede fabricar ms cido carbnico y si a este le sumamos un pH bajo el paciente se encuentra en acidosis respiratoria; pero con un pH bajo y PCO 2 normal o disminuida nos indica que la acidosis es metablica. FiO2. Fraccin inspirada de oxgeno, se considera en cifras redondas de 21 % ; este oxgeno va a ejercer cierta presin sobre las paredes de los vasos, pero en forma directamente proporcional a la presin baromtrica ambiente PO2: El oxgeno se transporta en la sangre de dos maneras: disuelto y combinado con hemoglobina. La mayor parte es transportado por la hemoglobina. La fuerza que ejerce un gas a travs de la membrana pulmonar depende de su presin parcial. La presin parcial refleja la cantidad de O2 que pasa de los alvolos pulmonares al torrente sanguneo y recibe la influencia directa de la FiO 2. Valora la capacidad que tienen los pulmones para oxigenar la sangre y se utiliza para evaluar la efectividad de la oxigenoterapia; indica la capacidad que tiene los pulmones para difundir O2 a travs de la membrana alveolar y de llevarla hasta la sangre circulante. CO2 TOTAL: En el plasma, ms del 95% del contenido total de CO2 proviene del bicarbonato (HCO3-), que se regula en los riones, el 5% restante es resultado del mismo gas disuelto y del cido carbnico. Este estudio constituye una medicin general de la alcalinidad o acidez de la sangre arterial, venosa o capilar. HCO3: La cantidad de iones HCO3 - solo explica la mitad de la capacidad amortiguadora total de la sangre. Tiene funciones importantes como componente del sistema amortiguador bicarbonato y tambin como transporte de CO2 de los tejidos a pulmones. SATURACION DE OXIGENO (SO2): En sangre arterial 95% ms; recin nacido 40 a 90%. Este estudio es la relacin que hay entre el contenido real de oxgeno (O2) de la hemoglobina comparado con la capacidad mxima transportadora de O2 de la misma. El porcentaje de SO2 mide la relacin que existe entre el O2 y la hemoglobina. No indica el contenido de O2 en la sangre arterial. La capacidad de O2 es la cantidad mxima de este mismo que se puede combinar con la hemoglobina. EXCESO DE BASE: Se cuantifica el exceso o la deficiencia total de bases para iniciar el tratamiento clnico de las alteraciones cido-base (especficamente aquellas no respiratorias). Tambin se le llama base amortiguadora de sangre total y es la suma de la concentracin de aniones amortiguadores (en meq/L) contenidos en la sangre completa. Estos aniones son el ion bicarbonato (HCO3-) de los eritrocitos y la hemoglobina, las protenas plasmticas y los fosfatos plasmticos y eritrocitarios.
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INTERPRETACION CLNICA El mecanismo respiratorio esta regulado por el centro respiratorio medular y esta afectado por los valores de PCO2, PH, PO2 y Temperatura. Se presentan diferentes trastornos dependiendo del origen y el pH. En acidosis metablica (carencia de HCO3-, el pH esta disminuido). Se presenta produccin excesiva de cidos orgnicos o reduccin en la eliminacin por ejemplo en el fallo renal, acidosis tubular. Se compensa cuando el pH ha vuelto a la normalidad y todava hay carencia de HCO 3-. Se induce la hiperventilacin. Alcalosis metablica: (exceso de HCO3-, pH aumentado). Induce la hipoventilacin, es decir retencin de CO 2. se presenta por administracin excesiva de lcalis, perdida excesiva de cido clorhdrico del estomago como en vmitos prolongados, agotamiento de K + como en el Sndrome de Cushing. Acidosis respiratoria: (exceso de H 2CO3, retencin de CO2). Se provoca por bronconeumona, enfisema pulmonar, fibrosis pulmonar. La compensacin se da por aumento en la reabsorcin de HCO 3 y aumento en la excrecin de H+. Alcalosis respiratoria: (disminucin de CO2). Se presenta en fiebre, temperaturas externas latas, histeria, anoxia, condiciones que causan aumento en la velocidad o profundidad de respiracin. Trastornos mixtos
Acidosis respiratoria metablica Alcalosis respiratoria metablica Acidosis respiratoria metablica Alcalosis respiratoria metablica Acidosis metablica metablica y acidosis HCO3y alcalosis HCO3y alcalosis HCO3y acidosis HCO3y alcalosis PCO2 PCO2 PCO2 PCO2
HCO3 variable
PCO2 variable
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FUNDAMENTO DE LA TCNICA (i-STAT)
El PCO2 se mide por potenciometra directa. En el clculo de resultados con respecto al PCO2, la concentracin se relaciona con el potencial a travs de la ecuacin de Nernst. Los resultados se miden a 37C cuando se utilizan cartuchos que exigen control trmico, y se corrigen a 37 C cuando se utilizan cartuchos que no exigen control trmico. Las caractersticas de funcionamiento de los sensores son equivalentes en todas las configuraciones de cartucho.
Cuando un cartucho incluye sensores tanto para pH como para PCO2, se puede calcular el bicarbonato (HCO3), el dixido de carbono total (TCO2) y el exceso de base (BE).
Log HCO3 = pH + log PCO2 7.608 TCO2 = HCO3 + 0.03 PCO2 BEelec = HCO3 24.8 + 16.2 (pH 7.4)
315
DESARROLLO DE LA TECNICA (i-STAT)
1. Se extrae la muestra de sangre arterial con la ayuda de una jeringa que contiene heparina de sodio, aproximadamente 2-3 ml y se mezcla. 2. Atemperar el cartucho. 3. Se desechan las primeras gotas de muestra y se llena el cartucho en la zona indicada, cerrar e introducirlo al equipo que posteriormente se activa automticamente. 4. En pantalla se visualiza e introduce el nmero de operador, repetir la operacin; el nmero de paciente y repetir la operacin. Si es desea introducir otros parmetros como T, FiO 2 y tipo de muestra presionar PAGE. 5. El equipo har los clculos en 120 segundos. 6. Transcribir los datos con los parmetros corregidos de acuerdo a los cambios que se insertaron. 7. Finalmente se saca el cartucho y se desecha. El equipo guarda las ltimas 10 muestras y se apaga automticamente.
316
Cada cartucho de i-STAT contiene un electrodo de referencia (siempre que en la configuracin del cartucho se incluyan sensores potenciomtricos), sensores para la medicin de analitos especficos y una solucin de calibrado acuosa tamponada de concentraciones conocidas. En los cartuchos que disponen de un sensor para la medicin de PCO2, la solucin de calibrado contiene 30 mm Hg de PCO2.
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS En refrigeracin de 2-8 C no congele. Los cartuchos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja.
MUESTRAS Sangre arterial.
317
BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
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GASOMETRIA VENOSA
INTRODUCCION El O2 y anhdrido carbnico de la sangre estn disueltos en parte y por ende ejercen presin. La medicin de las presiones parciales que ejercen estos gases se denomina medicin de los gases sanguneos. La determinacin de pH de la sangre se hace siempre cuando se miden PCO2 y PO2. El contenido de CO2 de sangre venosa es aproximadamente 2Mm/l ms alto y el contenido de O2 alrededor de 2mm/l menos que la sangre arterial. Esta diferencia entre sangre arterial y venosa vara con la actividad metablica del rgano o del tejido del cual se obtiene la sangre venosa. La sangre arterial es de composicin ms uniforme, sin embargo la diferencia entre pH de arterial y venosa es de 0.01 a 0.03 pH. El hecho importante es que la diferencia de pH entre sangre arterial y venosa en la mayora de los pacientes no excede 0.01 unidad de pH. pH: Es el log negativo de la concentracin de iones hidrgeno. HCO3-: forma la segunda fraccin en cantidad de aniones en plasma. Acido carbnico: esta fraccin incluye el cido carbnico y el CO 2 fsicamente disuelto. PCO2: Es la suma de las presiones parciales de los gases por separado. La parte con la cual contribuye a la presin el gas CO 2 se llama presin parcial de CO2 (PCO2). CO2 Total: consiste de una fraccin ionizada que contiene HCO 3- y una fraccin no ionizada que contiene H2CO3 y CO2 fsicamente disuelto.
INTERPRETACION CLNICA El conocimiento de CO2 junto con pH, PCO2 es muy til en la evaluacin del balance cido-base. La determinacin de slo el contenido de CO 2 tiene valor limitado, puede observarse alto CO2 en acidosis respiratoria al igual que en alcalosis metablica, disminucin de CO 2 en alcalosis respiratoria o acidosis metablica. Los valores de CO2 son ms altos en sangre venosa.
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FUNDAMENTO DE LA TCNICA (i-STAT)
El PCO2 se mide por potenciometra directa. En el clculo de resultados con respecto al PCO2, la concentracin se relaciona con el potencial a travs de la ecuacin de Nernst. Los resultados se miden a 37C cuando se utilizan cartuchos que exigen control trmico, y se corrigen a 37 C cuando se utilizan cartuchos que no exigen control trmico. Las caractersticas de funcionamiento de los sensores son equivalentes en todas las configuraciones de cartucho.
Cuando un cartucho incluye sensores tanto para pH como para PCO2, se puede calcular el bicarbonato (HCO3), el dixido de carbono total (TCO2) y el exceso de base (BE).
Log HCO3 = pH + log PCO2 7.608 TCO2 = HCO3 + 0.03 PCO2 BEelec = HCO3 24.8 + 16.2 (pH 7.4)
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DESARROLLO DE LA TECNICA (i-STAT)
1. Se extrae la muestra de sangre venosa con la ayuda de una jeringa que contiene heparina de sodio, aproximadamente 2-3 ml y se mezcla. 2. Atemperar el cartucho. 3. Se desechan las primeras gotas de muestra y se llena el cartucho en la zona indicada, cerrar e introducirlo al equipo que posteriormente se activa automticamente. 4. En pantalla se visualiza e introduce el nmero de operador, repetir la operacin; el nmero de paciente y repetir la operacin. Si es desea introducir otros parmetros como T, FiO 2 y tipo de muestra presionar PAGE. 5. El equipo har los clculos en 120 segundos. 6. Transcribir los datos con los parmetros corregidos de acuerdo a los cambios que se insertaron. 7. Finalmente se saca el cartucho y se desecha. El equipo guarda las ltimas 10 muestras y se apaga automticamente.
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COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Cada cartucho de i-STAT contiene un electrodo de referencia (siempre que en la configuracin del cartucho se incluyan sensores potenciomtricos), sensores para la medicin de analitos especficos y una solucin de calibrado acuosa tamponada de concentraciones conocidas. En los cartuchos que disponen de un sensor para la medicin de PCO 2, la solucin de calibrado contiene 30 mm Hg de PCO2.
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS En refrigeracin de 2-8 C no congele. . Los cartuchos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja.
MUESTRAS Sangre venosa.
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BIBLIOGRAFIA
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
2.
3.
4.
323
GLUCOSA BASAL
INTRODUCCION La glucosa se forma a partir de la digestin de carbohidratos y la conversin heptica de glucgeno en glucosa. Las hormonas que regulan de manera directa la glucemia son el glucagon y la insulina. El glucagon acelera la degradacin heptica del glucgeno con la consecuente elevacin de glucosa sangunea. La insulina aumenta la permeabilidad de la membrana celular a la glucosa, transporta glucosa dentro de las clulas (para su metabolismo), estimula la formacin de glucogeno y reduce la glucemia. Para que la glucosa se introduzca en las clulas se necesita insulina y receptores insulnicos. La insulina se adhiere a estos receptores en la superficie de las clulas blanco, como en la grasa y el msculo. Ello abre los canales para que la glucosa penetre en las clulas y posteriormente se convierta en energa. Al haber metabolismo celular de la glucosa se reduce la glucemia. La determinacin de glucosa en suero se solicita con el fin de diagnosticar y efectuar el seguimiento de las anormalidades en el metabolismo de los hidratos de carbono. En orina se examina rutinariamente la presencia de glucosa, siendo una prueba que forma parte siempre del anlisis elemental de orina. Los mtodos enzimticos para su determinacin proporcionan una especificidad mxima en cuanto a las estimaciones de glucosa. Se mide por la reaccin de glucosa oxidasa, en la que se produce cido glucnico y perxido de hidrgeno (H2 O2). El peroxido de hidrogeno reacciona a continuacin con un aceptor de oxigeno del tipo de la ortodianisidina, la fenilamn-fenazona (reactivo de Trinder) u otros aceptores cromognicos, en una reaccin catalizada por la peroxidasa para dar color.
Glucosa H2 O
(1) -D-Glucosa + O2
oxidasa (2)
gluconolactona
O2
peroxidasa
cido glucnico + H 2 O2
H2 O 2 +
Ortodianisidina(o) fenilamn-fenazona
color cromgeno H 2 O
INTERPRETACIN CLINICA Los resultados de la glucosa plasmtica pueden clasificarse como hiperglucmicos o hipoglucmicos la diabetes mellitus es una enfermedad crnica caracterizada por concentraciones plasmticas de glucosa anormalmente elevadas, glucosuria y engrosamiento de las membranas bsales de los capilares. El diagnostico se realiza midiendo la glucosa con el paciente en ayunas.
324
La glucosa presente en la muestra origina, segn las reacciones descritas
acopladas
a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por
espectrofotometra.
Glucosa oxidasa
Glucosa + O2 + H2 O
Peroxidasa
glucnico + H2 O2 Quinoaimina + 4H2 O2
2H2 O2 + 4-Aminoantipirina + fenol
325
DESARROLLO DE LA TECNICA (BioSystems)
1.
Atemperar el reactivo a temperatura ambiente.
2.
Pipetear en tubos de ensayo
Patrn (P) Muestra Reactivo(A)
Blanco _____ ______ 500 L
Patrn 5 L ______ 500 L
Muestra ______ 5 L 500 L
3.
Agitar bien
e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura
ambiente o durante 5 minutos a 37 C. 4. Leer la absorbancia (A) del patrn
Clculos
La concentracin de glucosa en la muestra se calcula a partir de la siguiente formula
A muestra X A patrn C Patrn = C Muestra
326
A: Fosfatos 100 mmol/L, glucosa oxidasa >10 U/mL , peroxidasa >1 U/mL, 4-aminoantipirina 0.4 mmol/L, pH 7.5 S: Patrn de glucosa /urea/creatinina. Glucosa 100 mg/dL(5.55 mmol/L, urea 50 mg/dL, creatinina 2 mg/dL. Patrn primario acuoso.
Conservar a 2-8 C El reactivo y el patrn son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserve bien cerrados y se evite la contaminacin durante su uso.
MUESTRAS Suero o plasma. El suero debe de separarse de los elementos celulares lo antes posible para evitar la gluclisis. La glucosa en suero o plasma es estable 5 das a 2-8 C. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren.
327
BIBLIOGRAFIA 1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
2.
3.
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GLUCOSA BASAL Y POST-PRANDIAL

INTRODUCCION La glucosa se forma a partir de la digestin de carbohidratos y la conversin heptica de glucgeno en glucosa. Las hormonas que regulan de manera directa la glucemia son el glucagon y la insulina. El glucagon acelera la degradacin heptica del glucgeno con la consecuente elevacin de glucosa sangunea. La insulina aumenta la permeabilidad transporta glucosa de la membrana celular a la glucosa, dentro de las clulas (para su metabolismo), estimula la
formacin de glicgeno y reduce la glucemia. Para que la glucosa se introduzca en las clulas se necesita insulina y receptores insulnicos. La muestra para una prueba posprandial se debe tomar despus de comer. La concentracin de glucosa en la sangre rara vez se eleva en el individuo sano 2 horas despus de haber ingerido alimentos, pero en el diabtico este incremento es considerable.
INTERPRETACION CLINICA Para establecer el diagnstico de diabetes sacarina, se recomienda realizar una glucemia de ayuno y otra pospandrial. Elevacin: 140 200 mg/dl indica tolerancia alterada a la glucosa, >200 mg/dl diagnstica de diabetes sacarina, cirrosis heptica avanzada, Sndrome de Cushing, acromegalia, hipertiroidismo, feocromocitoma, neuropata crnica. Reduccin: Insuficiencia adenohipofisaria, adenoma de clulas de los islotes, hipopituitarismo, enfermedad de Addison.
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Toma de muestra 2 horas despus de haber ingerido una dieta rica en carbohidratos.
PARA REALIZAR LAS DETERMINACIONES DE GLUCOSA BASAL Y POSPANDRIAL VER REFERENCIA EN TCNICA DE GLUCOSA
BIBLIOGRAFIA
330
1.
2.
3.
4.
GLUCOSA EN ORINA
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INTRODUCCION La glucosa es una de las sustancias con umbral renal. Existe glucosa en el filtrado glomerular pero es reabsorbida en el tbulo proximal. Sin embargo, si la cantidad de glucosa sangunea excede a la capacidad de reabsorcin de los tmulos, se derramara en la orina. La glucosuria no es necesariamente anormal. Aparece en la orina despus de haber ingerido una comida abundante o con tensin emocional. Para algunas personas la reabsorcin tubular es lenta produce glucosuria en presencia de glucosa normal. Una prueba de glucosa en orina combinada con una glucemia nos proporciona incluso mas informacin.
INTERPRETACION CLINICA La glucosa aumenta en diabetes sacarina, problemas hipofisiarios, alteraciones del sistema nervioso central (dao cerebral), patologa de los tmulos renales acompaada de umbral urinario bajo, sndrome de Fanconi, neuropata inflamatoria.
332
PARA DETERMINACION DE GLUCOSA EN ORINA VER METODOLOGIA EN EL EXAMEN GLUCOSA GENERAL DE ORINA EN LA TIRA SE DETERMNA
333
BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
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GRUPO SANGUINEO Y RH INTRODUCCION

La sangre del humano se clasifica de acuerdo con la presencia o ausencia de antgenos especficos de grupo (ABO). Estos antgenos se localizan en la superficie de los eritrocitos y pueden inducir la produccin de anticuerpos en el organismo. Las actividades antignicas estn determinadas por algunos azucares que tienen un acoplamiento especial denominados A y B. La N-acetilgalactosamina es actividad de la molcula de A, mientras que la galactosa es la que determina la actividad de B. La actividad antignica de la molcula central (sin galactosa ni N-acetilgalactosamina) se denomina H. Esta sustancia H, y la actividad de los genes H, es indispensable para el funcionamiento de los antgenos ABO.
Grupo Sanguneo A B AB O
Antgeno ABO A B AB Ninguno
Anticuerpos B A Ninguno AyB
La sangre del humano se clasifica en Rh positiva y Rh negativa. Esto se debe a la presencia o ausencia del antgeno Rh (actualmente llamado Rh o [D]) en la membrana de los eritrocitos que es, despus del antgeno A y B, el antigeno mas importante en las trasfusiones. Los individuos con Rh negativo desarrollan anticuerpos contra los antgenos Rh positivos cuando tienen contacto con sangre Rh positiva. El factor Rho (D) es el ms antignico; los dems causan isoinmunizacion con una frecuencia mucho menor. INTERPRETACION CLNICA: La importancia de los grupos sanguneos es que cuando se realice alguna transfusin esta no realice hemlisis en la persona que requiera la transfusin. La importancia del Rh estriba en su potencial para conferir inmunidad al recibir una transfusin o durante el embarazo.
335
La prueba utilizada con estos reactivos de grupos sanguneos se basan en el principio de hemoaglutinacin directa. La incubacin de las clulas rojas antgeno anticuerpo, especifica si de los prueba con DBL NOVACLONE Anti-A IgM + IgG, Anti-B IgM+IgG, Anti-D IgM+IgG mezcla monoclonal resultara durante antgenos estn presentes en las clulas rojas. La deteccin visible de esta
reaccin se pone de manifiesto mediante aglutinacin de las clulas seguidas de centrifugacin. La ausencia de aglutinacin indica un resultando en el caso de antigeno D indica la ausencia del antgeno en la clulas sanguneas, en el caso de las otros antgenos.
336
DESARROLLO DE LA TCNICA 1. Prepare suspensin de 2-4 % de los eritrocitos de prueba en solucin salina isotnica. Se recomienda el uso rutinario de suspensiones de eritrocitos lavados anormales. 2. Dispense una gota (aprox. 40-50 L) de DBL NOVACLONE Anti-D IgM + IgG. Mezcla monoclonal dentro adecuadamente. 3. Utilizando una pipeta automtica, adicione una gota de la suspensin de 2-4% de eritrocitos a los tubos de prueba. 4. 5. 6. Mezcle el contenido de cada tubo completamente. Centrifugar por: 15 segundos Suavemente resuspenda el botn de eritrocitos y examine del tubo de prueba etiquetado para reducir el riesgo de encontrar reacciones
macroscpicamente la aglutinacin. 7. Registre sus resultados. Una aglutinacin indica que el eritrocito posee antgenos contra ese anticuerpo y por lo tanto corresponde a ese grupo sanguneo.
337
CASO Rh NEGATIVO Una vez que se realizo el grupo sanguneo del paciente, y sale el factor Rh negativo hay que confirmar si es Rh Du negativo o Rh negativo Du negativo:
1. Se realiza la determinacin de anticuerpos calientes ya que estos son de tipo IgG y atraviesan placenta, los anticuerpos fros son de tipo IgM. Se verifican ambos. 2. Del tubo donde se realizo la determinacin del antigeno D, se le realizan 3 lavados con solucin salina isotnica. 3. Concluidos los lavados se separan en dos tubos uno para la realizacin de los anticuerpos fros y otro para los anticuerpos calientes. 4. Se adiciona 2 gotas de reactivo de Coombs( antigama globulinahumana)en ambos tubos y se mezcla bien . 5. El de anticuerpos fros se centrifuga durante 15 seg. Y despus se revisa como se indica:
Se verifica que se forme el tapn, si no es as no tiene anticuerpos de tipo IgM.
338
6. El tubo de los anticuerpos calientes se incuba a 37C, trascurrido ese tiempo se centrifuga por 15 segundos, y se realiza la lectura del tubo.
Los resultados se interpretan de la siguiente manera: Si se presento aglutinacin se reporta como : Rh NEGATIVO DU POSITIVO
Si no aglutino se reporta como: Rh NEGATIVO DU NEGATIVO
339
DBL NOVACLONE Anti-D IgM + IgG, mezcla monoclonal se prepara a partir de Anti-D IgM monoclonal humano, y Anti-D IgG monoclonal humano(lnea celular ).
CONSERVACION DELOS REACTIVOS
Almacene de 274-283 K(1-10 C) cuando no se utilice suficiente cantidad para evitar la formacin de residuos de azidas.
MUESTRAS Las muestras de sangre se pueden recolectar con o sin anticoagulante .
340
BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
341
HEMOGLOBINA GLUCOSILADA
INTRODUCCION La glucohemoglobina es un tipo normal de hemoglobina. La hemoglobina A1 es glucosilada hasta el momento en que forma hemoglobina A 1a, A1b glbulos rojos a lo largo de 120 das. La glucohemoglobina y A1c, mediante un proceso lento que no es enzimtico y que se realiza dentro de los es glucosa sangunea adherida a la hemoglobina. Los eritrocitos combinan al circular parte de glucosa con su propia hemoglobina y forma as la glucohemoglobina. La cantidad de hemoglobina disponible durante la vida del eritrocito, que es de 120 das. En presencia de hiperglucemia, se produce elevacin de la glucohemoglobina, generalmente a expensas de Hb A 1c . cuando la concentracin de glucosa aumenta por una deficiencia de insulina, la glucosilacin es irreversible. INTERPRETACION CLINICA La hemoglobina glucosilada refleja la glucemia promedio durante los dos o tres meses anteriores a la prueba. Esta prueba proporciona informacin para valorar el tratamiento de la diabetes, es til para determinar el tratamiento de la diabetes juvenil, con cetoacidosis aguda y ayuda a vigilar el control de la glucemia en la diabetes mas leve. Los resultados inferiores son poco frecuentes y pueden indicar que la muestra contiene una alta concentracin de hemoglobina fetal o que el paciente tiene una anemia hemoltica o policitemia (patologas que dan lugar a una significativa disminucin de la vida media de los hemates).
342
Para la medida especfica de HbA1c se utiliza la inhibicin
de la
aglutinacin de partculas de ltex. Un aglutinador (polmero sinttico que contiene mltiples copias de la porcin inmunoreactiva de la HbA1c) produce aglutinacin de partculas de ltex recubiertas con un anticuerpo monoclonal de ratn especfico para HbA1c. esta reaccin de aglutinacin produce un incremento de la dispersin de luz, que se mide como un incremento de la absorbancia a 531 nm. En las muestras de sangre total, la HbA1c compite por el nmero limitado de centros de unin en las partculas de ltex, produciendo una inhibicin de la dispersin de la luz. La disminucin de la dispersin se mide como una disminucin de la absorbancia a 531 nm. Luego se cuantifica la concentracin de la HbA1c, utilizando una curva de calibracin de absorbancia frente a concentracin de HbA1c.
343
(DCA2000) 1. Abrir el envase tirando de la pestaa hacia abajo (con un movimiento en cremallera mientras se sostiene el borde estriado. 2. Desechar el cartucho reactivo si aparece daado, falta o esta floja la lengeta, falta el desecante o hay partculas de desecante sueltas en el envase de aluminio. 3. Una vez sacado de la nevera, espere a que el reactivo alcance la temperatura ambiente. Si no ha abierto el envase debe esperar 10 minutos; pero si ya lo ha abierto, debe esperar 5 minutos. 4. Una vez abierto el envase de aluminio, el cartucho reactivo debe ser utilizado dentro de un perodo de 1 hora. 5. Llenar el capilar con la muestra y una vez lleno el anlisis debe comenzar dentro de un perodo de 5 minutos. 6. Los resultados mostrados en la pantalla no requieren clculos ulteriores. La concentracin de HbA1c puede oscilar entre 2.5% y 14%; el anlisis es lineal dentro de estos lmites. Signo (<) indica una concentracin inferior el lmite inferior del test (bajo rango). El resultado se informa como HbA1c inferior a 2.5%. Signo( > ) indica una concentracin superior al lmite superior del test (sobre rango). El resultado se informa como HbA1c superior a 14.0%
344
Ltex-anticuerpo: Anticuerpo monoclonal de ratn, especfico para HbA1c, absorbido en partculas de ltex. 2.5% p/v de ltex anticuerpo en glicocola 10mM; 16% p/v de componentes no reactivos. Aglutinador: 0.005% p/v de un polimero de poliaspartato unido de forma covalente al hapteno de HbA1c en tampn citrato sdico 20 mM, que contiene 0.1% p/v de albmina srica bovina y 1% p/v de componentes no reactivos. Solucin Tampn: 8.1% p/v de Tiocianato de litio, 0.01% de digitonina en 200mm de glicina en tampn. Oxidante: ferrocianuro potsico al 1.5% p/v en agua, con 21% p/v de4 componentes no reactivos.
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Guardar los cartuchos refrigerados a 2-8 C. los portacapilares pueden guardarse refrigerados o a la temperatura ambiente.
MUESTRAS El capilar de vidrio proporcionado tiene capacidad para 1l de sangre total. La muestra puede ser obtenida por puncin digital o por venoclisis. Como anticoagulantes adecuados, se pueden emplear EDTA, heparina, citrato y fluoruro/oxalato.
345
2.
3.
4.
MAGNESIO SERICO /URINARIO

346
INTRODUCCION El magnesio esta concentrado en el organismo en los huesos, cartlagos y dentro de las clulas mismas y su funcin es permitir al organismo utilizar el trifosfato de adenosina (ATP) como fuente de energtica. Por lo tanto, es necesario para la accin de numerosos sistemas enzimticos, como el metabolismo de los carbohidratos, sntesis de protenas, la sntesis de cidos nucleicos y la contraccin del tejido muscular. Junto con los iones de sodio, potasio y calcio , el magnesio tambin regula la irritabilidad neuromuscular y el mecanismo de coagulacin.El magnesio plasmtico se encuentra en tres formas: No difusible, ligado a protenas, especialmente a la albmina, Inico difusible, Unido a citrato, fosfato o bicarbonato formando complejos. El rin es el rgano fundamental para el control del nivel srico. Un 80% no esta ligado a protenas y se absorbe a nivel de leon, entre el 205 y un 60%, ejercindose filtracin glomerular. El magnesio y el, calcio estn ntimamente ligados en sus funciones orgnicas y la deficiencia de ellos tiene un efecto profundo sobre el metabolismo del otro. La excrecin de magnesio controla el equilibrio del magnesio srico. La excrecin urinaria de magnesio depende de la dieta. Esta prueba sirve para estudiar el metabolismo del magnesio, investigar el estado de los electrolitos y adems forma parte de la batera de estudios necesaria en casos de nefrolitiasis. INTERPRETACION CLNICA La excrecin urinaria de magnesio aumenta en: La elevacin del alcohol sanguneo, sndrome de Barter. La excrecin urinaria de magnesio disminuye en: Mala absorcin, Alcoholismo crnico, tratamiento parenteral prolongado, deficiencia de magnesio, neuropata crnica. La hipomagnesemia implica manifestaciones similares ala hipocalcemia y se presenta cuando la cifra es inferior a 1 meq/L con hiperexcitabilidad neuromuscular del sistema nervioso central. Los movimientos predominan en los miembros superiores con temblores que pueden llegar hasta la tetania, pueden existir crisis convulsivas generalizadas o locales, hiperperrelexia osteotendinosa, insomnio, alucinaciones y sintomatologa delirante. el dficit de magnesio generalmente trae consigo hipocalcemia e hipopotasemia. La hipermagnesemia implica una depresin del sistema nervioso central y de la excitabilidad neuromuscular. La hipotensin y trastornos digestivos y vmitos, aparecen cuando las concentraciones mas elevadas de 5 a 7 meq/L. A concentraciones mas elevadas de 5 a 7 meq/L hay obnubilacin y trastornos de la conciencia, llegando al coma cuando los niveles alcanzan de 12 a 15 meq/L se asocia con arreflexia osteotendinosa, debilidad muscular y posteriormente parlisis trastornos cardiacos. niveles elevados de magnesio son propios de insuficiencia renal aguda o crnica, coma diabtico, hiperparatiroidismo, administracin de anticidos con contenido de magnesio, enfermedad de Addison.
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El magnesio forma un complejo de color prpura al reaccionar con la calmagita en medio alcalino. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de magnesio en la muestra ensayada. La cuantificaron en orina eliminada en 24 horas se expresa en mg/24 horas mide la cantidad de la fraccin de magnesio filtrada por el glomrulo y no reabsorbida por el tbulo renal.
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DESARROLLO DE LA TECNICA (SPINREACT) ORINA: Ajustar a pH 1 con HCI. Si la muestra es turbia, calentarla a 60C 10 min. Para disolver los precipitados. Diluir la muestra 1/10 con agua destilada.
1. Pipetear en una cubeta: Blanco 250 250 ----Patrn 250 250 5 --Muestra 250 250 --5
R1 ( L) R2 ( L) Patrn ( L) Muestra ( L)
2. Mezclar e incubar 5 min a temperatura ambiente o 3 minutos a 37C.
3. Leer la absorbancia (A) a 520nm del calibrador y la muestra, frente al blanco de reactivo. El color es estable como mnimo 30 minutos.
CALCULOS: (A)Muestra x 2 (Conc. Patrn) = mg/dl de magnesio en la muestra (A) Patrn
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COMPOSICION DE LOS REACTIVOS R1 Tampn: Amino-metil-propanol 1mmol/L, EGTA 0.21mmol/L R2 Cromgeno: Calmagita 0.30 mmol/L MAGNESIUM CAL: Patrn primario acuoso de Magnesio 2mg/dl
CONSERVACION DELOS REACTIVOS Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin.
MUESTRAS Suero o plasma heparinizado; libre de hemlisis, separado lo antes posible de los hemates. Orina de 24 horas.
350
2.
3.
4.
351
NITROGENO UREICO
INTRODUCCIN La urea representa el producto final en el metabolismo proteico sintetizado por el hgado, presente en el torrente circulatorio y elimina por el rin. Toda perturbacin renal en la capacidad de eliminar desechos orgnicos, se refleja en un aumento de la urea, se expresa por medio de su nitrgeno ureico, con el que indirectamente correlaciona y expresa el nivel de urea sangunea. Sin embargo, todo nitrgeno ureico corresponde a lesin renal. Hay extrarrenales como deshidratacin, que transitoriamente elevan sus valores. INTERPRETACIN CLINICA La deshidratacin suministra cifras elevadas transitoriamente. Su aumento es signo elemental de insuficiencia renal orgnica, pero hay que tener en cuenta que no todo el aumento significa neuropata ,pues tambin se eleva por causas extrarrenales. Niveles altos se encuentran en uremia aguda, glomerulonefritis aguda, anuria traumtica, choque hemoltico post-trasfusional, nefrosis, esclerosis renal, hidronefrosis, tuberculosis renal, pielonefritis y rin poliquistico. Cuando el aumento obedece a causa extrarrenal, es fenmeno agudo o subagudo, pero reversible a veces en pocas horas, como sucede en la deshidratacin aguda, donde por la maana se puede encontrar un nivel superior a los 40 mg/dL y en la tarde estar dentro de la normalidad. Igual ocurre en los vmitos intensos, diarreas, sudoracin profusa, quemaduras extensas, en infecciones que cursen con proteolisis tisular aumentada, en el coma diabtico, en el post-operatorio inmediato, donde interviene factores de hipotensin.
352
La urea en la muestra origina, segn las reacciones descritas a continuacin, un indofenol coloreado que se cuantifica espectrofotomtricamente.
Ureasa Urea + H2 O 2NH4 + + CO2 Nitroprusiato NH4 + + Salicilato + NaCIO Indofenol
(Bio System)
353
1. 2.
Atemperar los reactivos a temperatura ambiente. Pipetear en tubos de ensayo: BLANCO ______ _______ 0.5 ml PATRN 5 L ______ 0.5 mL MUESTRA _______ 5 L 0.5 mL
Patrn de urea(S) Muestra Reactivo A 3. 4.
Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente(16-25 C) o durante 5 minutos a 37 C. Pipetear: 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL
Reactivo B 5. 6.
Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25 C) o durante 5 minutos a 37 C. Leer la absorbancia (A) del patrn y de la muestra a 600nm frente al blanco. El color es estable durante al menos 2 horas.
CALCULOS La concentracin de la urea en la muestra se calcula a partir de la siguiente formula general. A Muestra X C Patrn X Factor de dilucin muestra= C muestra A Patrn Valores de referencia 15-39 mg/dL Urea = 2.5-6.5 mmol/L
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS A1. Reactivo: salicilato sdico 62 mmol/L, nitroprusiato sdico 3.4 mmol/L, tampn 20 mmol/L pH 6.9. 354
A2. Reactivo. Ureasa >500 U/mL B. Reactivo: hipoclorito sdico 7 mmol/ L, hidrxido sdico 150 mmol/L. S. patrn de glucosa/urea/ creatinina.
CONSERVACION DELOS REACTIVOS Conservar de 2-8 C. Los reactivos y el patrn son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserve contaminacin durante su uso. bien cerrado y se evite la
MUESTRAS Suero u orina recogidos mediante procedimientos estndar. Diluir la orina 1/50 con agua destilada antes del ensayo. La urea en suero o plasma es estable 7 das a 2-8C. Se recomienda la heparina como anticoagulante. La urea en la orina e estable 3 das a temperatura ambiente si no se produce crecimiento bacteriano.
BIBLIOGRAFIA
355
1.
2.
AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
3.
ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
4.
FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
OSMOLARIDAD SERICA INTRODUCCION
356
La osmolaridad mide la concentracin de partculas deshidratacin y disminuye con la hiperhidratacin.
en una solucin,
independiente de su tamao o carga elctrica. Se encuentra aumentada en la El aumento estimula la secrecin de la hormona antidiurtica ADH y una osmolalidad baja suprime la liberacin de la ADH, con disminucin de la reabsorcin de agua y emisin de grandes cantidades de orina diluida. Es de gran utilidad para evaluar los desequilibrios de lquidos y electrolitos, como tambin la presencia de cidos grasos, azcares o etanol. Ofrece mucha utilidad en la evaluacin de convulsiones, enfermedad heptica, estado de hidratacin, equilibrio cido bsico y para valorar la funcin de la ADH. Desempea un papel importante en toxicologa y estudio de pacientes comatoso. Niveles elevados de osmolalidad reflejan hipernatremia, deshidratacin, hiperglicemia, terapia con manitol, hiperazohemia, ingestin de glicol, etanol o metanol. Es de gran utilidad para evaluar el grado de intoxicacin y coma. Elevada osmolalidad con sodio normal, es compatible con hiperglicemia, hiperazohemia a alcoholismo. Niveles bajos pueden ser secundarios a una inapropiada secrecin de hormona antidiurtica (ADH) con carcinoma pulmonar. INTERPRETACION CLNICA Niveles elevados de osmolaridad reflejan hipernatremia, deshidratacin, hiperglicemia, terapia con manitol, hiperazohemia, ingestin de glicol, etanol o metanol. Es de gran ayuda para evaluar el grado de intoxicacin y coma. Elevada osmolalidad con sodio normal, es compatible con hiperglicemia, hiperazohemia o alcoholismo. Niveles bajos pulmonar. pueden ser secundarios a una superhidratacin, hiponatremia , sndrome de una inapropiada secrecin de hormona antidiurtica con carcinoma
CALCULO:
357
LA DETERMINACION DE OSMOLARIDAD SERICA SE REALIZA MEDIANTE LA APLICACIN DE LA SIGUIENTE FORMULA:
GLUCOSA mg/dl 2 (Na+ mmol/L) + 18 +
NITROG. UREIC. Mg/dl = mOsm/L 2.8
OSMOLARIDAD EN ORINA / 24 HORAS TOMAR DATOS DE EDAD, PESO Y ESTATURA
PARA LAS DETERMINACIONES DE LOS METABOLITOS VER REFERENCIA EN PAGINAS:
TECNICA DE GLUCOSA TECNICA DE NITROGENO UREICO TECNICA DE SODIO
BIBLIOGRAFIA
358
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1996.
2.
3.
4.
PERFIL CARDIACO (TGO, CPK, CPK-MB, DHL)
359
INTRODUCCION Infarto cardiaco es una necrosis isqumica arteria coronaria. Cuando se produce una isquemia miocrdica, se alteran los mecanismos oxidativos necesaria normales de la clula, y tras un intento de conseguir la energa utilizando la gluclisis anaerbica, terminara por producirse una ubicadas protenas de una zona o territorio
determinado del miocardio, consecutiva a la obliteracin de una rama de una
alteracin de la membrana celular y posteriormente la muerte de la clula. En el citoplasma de la clula, se encuentran enzimticas como la aspartato aminotransferasa (TGO), la creatincinasa (CK), y la deshidrogenasa lctica (LDH), que han presentado durante mucho tiempo la piedra angular en el diagnstico de la necrosis miocrdica. A medida que progresa la necrosis celular, salen macromolculas estructurales y citoplasmticas hacia la microcirculacin y a los linfticos. Estas con mayor especificidad y por tanto tiles para el diagnostico y cuantificacin de la necrosis del tejido miocrdico. Entre las enzimas estn: la creatincinasa y su isoenzima (CK-MB), asparto aminotransferasa (TGO) y deshidrogenasa lctica.(LDH). Tambin se liberan protenas estructurales como las troponinas y la mioglobina. El infarto agudo al miocardio se diagnostica en base a tres criterios: clnico, electrocardiogrfico y enzimtico. Para establecer el diagnostico presentarse por lo menos dos de estos criterios. deben
360
FUNDAMENTO Y DESARROLLO DE LA TCNICA
VER LA METODOLOGIA DE TGO
VER LA METODOLOGIA DE CPK
VER LA METODOLOGIA DE CPK-MB
VER LA METODOLOGIA DE DHL
361
BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO HEPATICO (BIL, TGO, TGP, FALC.)
362
INTRODUCCION
El hgado humano est constituido por una masa nica, dividida en dos lbulos, derecho e izquierdo, delimitados por la dicotoma en el hilio heptico de las estructuras vasculares aferentes (vena porta y arteria heptica). El hgado se halla implicado en la mayora de los procesos metablicos del organismo, como es en el procesos de coagulacin, almacn de glucogeno y su posterior utilizacin lo que justifica que las denominadas pruebas de funcin heptica. Por otra parte, muchas de las determinaciones biolgicas (transaminasas, fosfatasa alcalina, gammaglutamiltranspeptidasa) no pueden considerarse realmente como pruebas funcionales, ya que su alteracin slo indica la existencia de una lesin hepatobiliar. En cambio, otras pruebas, como la bilirrubina, la excrecin de colorantes, galactosa y cidos biliares, analizan el estado de una o varias funciones casi exclusivas del parnquima heptico y, por lo tanto, merecen el calificativo de funcionales. Su utilizacin pretende: a) establecer si existe o no alteracin en el hgado; b) definir la naturaleza y, en ocasiones, la etiologa de la enfermedad heptica, y c) establecer su gravedad y pronstico. El hgado contiene un gran nmero de enzimas, pero las que tienen mayor inters clnico son las transaminasas, la fosfatasa alcalina y la gama glutamiltranspeptidasa.
363
VER LA METODOLOGIA DE BILIRRUBINAS
VER LA METODOLOGIA DE LAS ENZIMAS TGO
VER LA METODOLOGIA DE LAS ENZIMAS TGP
VER LA METODOLOGIA DE LAS ENZIMAS FOSFATAS ALCALINA
BIBLIOGRAFIA
364
1.
2.
3.
ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
4.
PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO HEPATICO (ANTERIORES + TP, PROT. TOT/ALB, DHL)

INTRODUCCION 365
El laboratorio clnico dispone de un gran nmero de pruebas tendientes a detectar alteraciones en el funcionamiento heptico y que adems ayudan en la localizacin del dao, sin embargo, son pocas las pruebas que los autores consideran de real utilidad. Para complementar la informacin que se obtiene con el anterior perfil, este es el complemento de las pruebas de funcionamiento heptico en cuyos casos se desea saber como se encuentran los niveles de las protenas totales/albmina en un caso de cirrosis, hepatitis virales y necrosis. BD = AUM: Coledocolitiasis, Cncer de cabeza de pncreas, Hepatitis. BI = AUM: anemia hemoltica, trauma heptico, infarto pulmonar hemorrgico, Sx.Crigler-Najiar, Enf. Gilbert. BT = Resultado de la ruptura de la hemoglobina de los eritrocitos, producida por el sistema reticuloendotelial y eliminada por el hgado. AUM: Hepatopatas obstructivas, hemlisis, hepatitis, cirrosis, colestasis secundaria a frmacos, metstasis hepticas. TGO = Enzima que se encuentra en tejidos con actividad metablica elevada (corazn, hgado, msculo esqueltico, cerebro) y es liberada a la circulacin a consecuencia de lisis celular. AUM: IAM, hepatopatas, pancreatitis aguda, trauma muscular, anemia hemoltica aguda, uso de salicilatos, quemaduras graves.DISM: Beri beri, cetoacidosis diabtica. TGP = Enzima que se encuentra principalmente en el hgado y en concentraciones bajas en corazn, msculo y rin. AUM: Enf. hepatocelulares, cirrosis, metstasis hepticas, hepatopata obstructiva o txica, congestin heptica. FA = Enzima principalmente originada en hgado, hueso y placenta. AUM: Enf. Heptica: Ictericia obstructiva, absceso o Cncer heptico, cirrosis biliar. Enf. Osea: Enf. Paget, metstasis seas, sarcoma osteognico, osteomalacia, raquitismo. Tambin en hiperparatiroidismo, mononucleosis infecciosa y leucemia. DISM: Hipofosfatemia, desnutricin, hipotiroidismo, anemia perniciosa, escorbuto. Sx. leche-lcali, insuficiencia placentaria. PROTEINAS TOTALES = Es la suma de las concentraciones de albmina y globulina plasmticas. ALBUMINA = Protena que se forma en el hgado y ayuda a conservar la distribucin normal de agua en el organismo (presin osmtica). Contribuye al transporte de compuestos en la sangre: iones, pigmentos, hormonas, enzimas y algunos frmacos.
366
VER LA METODOLOGIA DE BILIRRUBINAS
VER LA METODOLOGIA DE TGO
VER LA METODOLOGIA DE TGP
VER LA METODOLOGIA DE FOSFATAS ALCALINA VER LA METODOLOGIA DE TP VER LA METODOLOGIA DE PROT. TOT/ALB
VER LA METODOLOGIA DE DHL
BIBLIOGRAFIA
367
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
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PERFIL REUMATICO (AEL, ACUR, FR, PCR, VSG)
368
INTRODUCCION
Este grupo de pruebas es el ms empleado para el diagnstico de fiebre reumtica. Sin embargo se encuentran un sin fin de enfermedades de tipo inflamatorio en las que se monitorea a los pacientes con artritis, gota, etc. La fiebre reumtica es un padecimiento inflamatorio de curso agudo o subagudo que involucra las articulaciones, el corazn, sistema nervioso central y el tejido celular subcutneo. Las manifestaciones clnicas aparecen 1-3 semanas despus de una faringitis por estreptococos beta-hemolticos. La artritis es la inflamacin de las articulaciones que se manifiesta con dolor, enrojecimiento, tumefaccin e impotencia funcional en las articulaciones afectadas que pueden ser rodillas, tobillos, codos y muecas. Gota es un trastorno del metabolismo de las purinas o de la excrecin renal del cido rico caracterizado por hiperuricemia, precipitacin de urato monosdico en forma de depsito (tofos) en el cuerpo, muestra una especial predileccin por las articulaciones y el cartlago periarticular. padecimientos como fiebre reumtica,
369
VER LA METODOLOGIA DE ESTREPTOLISINAS
VER LA METODOLOGIA DEL AC. URICO
VER LA METODOLOGIA DE FACTOR REUMATOIDE
VER LA METODOLOGIA DE PROTEINA C REACTIVA
VER LA METODOLOGIA GLOBULAR
DE
VELOCIDAD
DE
SEDIMENTACION
BIBLIOGRAFIA
370
1.
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3.
4.
PERFIL TIROIDEO COMPLETO
INTRODUCCION
371
El estudio de laboratorio de la funcin tiroidea es muy til para distinguir a los pacientes con eutiroidismo (funcionamiento normal de la glndula tiroides) de los que padecen reducida). La glndula tiroides capta yodo a partir de la sangre circulante, lo combina con el aminocido tirosina y lo convierte en las hormonas tiroideas tiroxina (T 4) y del peso de las triyodotironina (T3). Aproximadamente dos terceras partes con hipertiroidismo (funcin acelerada) o hIpotiroidismo (funcin
hormonas tiroideas son yodo. La glndula tiroides almacena T 3 y T4 hasta que son liberadas en el torrente sanguneo bajo la influencia de la tirotropina (hormona estimulante de la tiroides; TSH) proveniente de la hipfisis. La porcin libre de las hormonas tiroideas la que determina el estado de la tiroides. INTERPRETACION CLNICA El mayor determinante de la actividad tiroidea est representado por la forma libre de estas hormonas, pues cuando sus niveles sricos disminuyen, los centros hipotalmicos hipofisiarios se activan para restablecer un balance glandular adecuado y cuando los niveles de T3 y T4 se elevan se inhiben la secrecin de hormonas. La fracciones libres T4, FT4,se elevan en Tirotoxicosis, hipertiroidismo y disminuyen en el hipotiroidismo primario, secundario. FT3 y T3 se elevan en el hipertiroidismo y disminuyen en el hipotiroidismo primario, secundario. TSH se eleva en hipotiroidismo primario, un tumor y disminuye por hipertiroidismo o hipotiroidismo primario y secundario.
FUNDAMENTO
372
VER LA METODOLOGIA DE TSH
VER LA METODOLOGIA DE T4T
VER LA METODOLOGIA DE FT4
VER LA METODOLOGIA DE T3T
VER LA METODOLOGIA DE FT3
BIBLIOGRAFIA
373
1.
2.
3.
4.
PERFIL VIRAL 1 (HIV, HEP B Y HEP C) INTRODUCCION
374
Es una determinacin que tiene un principal inters en las personas que buscan las investigacin de padecimientos de ndole viral ya que en algunos oficios de trabajo se tiene contacto con cualquier tipo de secrecin de personas que estn infectadas, y para un control de las personas cercanas , u en el ambiente se determinen si presentan la enfermedad. El virus de la Hepatitis C (HCV) es un virus ARN que utiliza la va parental como principal forma de transmisin, siendo responsable del 80-90% de las hepatitis postransfusionales. La Hepatitis B es causada por un hepadnavirus (DNA). HBsAg es una protena de estructura compleja que se sintetiza en exceso en el citoplasma del hepatocito. Es detectable en sangre circulante como parte integrante del virin y en otras dos formas diferentes, de distinta morfologa y tamao pero con actividad de HBsAg H.I.V. = Prueba para deteccin de Ac al Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) por medio de la tcnica de ELISA. En caso de ser positiva, deber realizarse la prueba confirmatoria (Wester-Blot). FALSA-NEGATIVA: Si el paciente se encuentra en perodo de ventana (perodo entre el inicio de la infeccin activa y el desarrollo de anticuerpos que puede durar hasta 6 meses). FALSO-POSITIVA: Se puede presentar un resultado positivo en pacientes absolutamente normales debido a factores desconocidos.
375
VER LA METODOLOGIA DE ANTICUERPOS VS HIV TIPO 1Y 2
VER LA METODOLOGIA DE ANTIGENO DE SUP. DE HEP.B
VER LA METODOLOGIA DE ANTICUERPOS DE VIRUS DE HEP. C
376
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
2.
3.
4.
377
PRENUPCIALES (GPO. Y RH, VIH, VDRL)
Son
una serie de anlisis clnicos que determina la condicin clnica de los que tiene inters en
contrayentes Este estudio es de rutina para todas aquellas personas sanguneo muestra informacin contraer matrimonio en el mbito civil, mediante la determinacin de su grupo que es vital para ciertos casos de incompatibilidad de grupo entre madre e hijo, la cual se previene con la vacuna antirogan, adems confirma que no presenten enfermedades de trasmisin sexual. GRUPO SANGUINEO: La sangre del humano se clasifica de acuerdo con la presencia o ausencia de antgenos especficos de grupo (ABO). Estos antgenos se localizan en la superficie de los eritrocitos y pueden inducir la produccin de anticuerpos en el organismo. H.I.V. = Prueba para deteccin de Ac al Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) por medio de la tcnica de ELISA. En caso de ser positiva, deber realizarse la prueba confirmatoria (Wester-Blot). VDRL: El agente etiolgico de la sfilis es Treponema pallidum, es un organismo delgado en forme de espiral, que mide 6 a 15 de longitud pero slo 0.2 de grosor. La sfilis se adquiere en general por va venrea. Despus de un perodo de incubacin variable de 10 das a varios meses aparece la lesin primaria o chancro.
378
VER LA METODOLOGIA DE GRUPO SANGUINEO Y RH
VER LA METODOLOGIA DE ANTICUERPOS VS HIV TIPO 1 Y 2
VER LA METODOLOGIA DE V. D. R. L.
379
BIBLIOGRAFIA
2.
3.
4.
POTASIO SERICO
INTRODUCCION
380
El potasio es el principal electrolito (catin) del lquido intracelular y el amortiguador ms importante dentro de la clula misma. Cerca de 90% del potasio se encuentra concentrado dentro de esta ltima y muy poco se localiza en el hueso y la sangre. Las clulas lesionadas liberan potasio hacia la sangre. El organismo cuenta con una excrecin muy eficiente. Normalmente de 80 a 90% del potasio de las clulas es excretado en la orina por el glomrulo renal, el resto se elimina en el sudor y la materia fecal. An cuando no entre potasio al organismo, se siguen excretando de 40 a 50 meq diarios en la orina. Los riones lo conservan, y cuando no se ingiere una cantidad suficiente de este electrlito, sobreviene una deficiencia grave. El potasio tiene una funcin muy importante en la conduccin nerviosa, en la funcin muscular, en el equilibrio cido-bsico y en la presin osmtica. Junto con el calcio y el magnesio, el primero controla la velocidad y la fuerza de la contraccin cardiaca y por lo tanto, el gasto cardiaco. En el electrocardiograma se puede detectar una deficiencia de potasio debido a que aparece una onda U. Los iones de sodio y potasio son especialmente importantes en la regulacin renal del equilibrio cido-base porque stos sustituyen a los iones hidrgeno en el tbulo renal. El potasio es ms importante que el sodio ya que el bicarbonato de potasio es el principal amortiguador inorgnico intracelular. Cuando hay deficiencia de potasio se produce una disminucin relativa de bicarbonato de potasio intracelular y el pH es tambin relativamente cido. El centro respiratorio responde a la acidosis intracelular y disminuye la PCO2, a travs de la hiperventilacin. La concentracin de potasio tambin depende de las hormonas suprarrenales. La deficiencia de este electrolito trae consigo una reduccin considerable de la sntesis proteca. INTERPRETACION CLNICA La determinacin de potasio se utiliza para evaluar el balance electroltico; los niveles de potasio deben ser seguidos especialmente en pacientes mayores, en aquellos con alimentacin intravenosa, con tratamiento diurtico, con fallo renal agudo, con hemodilisis y con nefritis intersticial. Hipopotasemia (hipocalemia) El potasio reducido se debe a la entrada de K + a las clulas, a la perdida de K+ del aparato biliar, a la excrecin renal de K+ y a la reduccin en el consumo de K+ y sucede en : diarrea, vmitos, inanicin, mala absorcin, diaforesis profusa, heridas con drenaje, fibrosis qustica, quemaduras extensas, aldosteronismo primario, hiperglucemia osmtica, alcalosis respiratoria, acidosis tubular. Hiperpotasemia (hipercalemia) El potasio se eleva cuando sale de las clulas hacia el lquido extracelular, en la excrecin renal inadecuada y en la ingestin excesiva de potasio como: insuficiencia renal, deshidratacin, obstruccin, traumatismo, lesin celular como quemaduras, accidentes, ciruga, quimioterapia, CID (las clulas liberan potasio hacia la sangre), acidosis metablica, enfermedad de Addison, Seudohipoaldosteronismo, diabetes no controlada FUNDAMENTO DE LA TECNICA 381
El analizador I-Lyte mide el potasio en fluidos biolgicos, utilizando tecnologa de electrodos selectivos de iones. El electrodo de potasio emplea un tubo plstico, incorporando a la valinomicina como su elemento selectivo. El potencial de cada electrodo es medido con relacin a un voltaje fijo y constante establecido por el electrodo de referencia de cloruro de plata y plata. Un electrodo selectivo de iones desarrolla un voltaje que vara con la concentracin del in al cual responde. La relacin entre el voltaje desarrollado y la concentracin del in detectado es logartmico, como es expresado por la ecuacin Nernst: E = E + (RT / nF) Log ( C) Donde: E= E= El potencial del electrodo en la solucin de la muestra El potencial desarrollado bajo condiciones normales
RT/ nF= Una temperatura dependiente constante que condiciona la/las inclinacin (es). n= Log= = C= 1 para potasio Funcin de logaritmo base diez Coeficiente de actividad del in medido en la solucin Concentracin del in medido en la solucin
Se utiliza un mtodo comparativo de medida. Primero, el analizador mide el potencial desarrollado cuando la muestra es bombeada a travs de los electrodos. Despus, Estndar A es bombeado a travs de los electrodos. La diferencia entre los dos potenciales se relaciona logartmicamente con la concentracin de iones de cloro en la muestra, dividida por sus respectivas concentraciones en la solucin Estndar. Ya que se conoce la diferencia de los potenciales y la concentracin de iones de cloro en la solucin Estndar, el analizador puede calcular la concentracin de los iones en la solucin de muestra.
382
(ILyte)
7. 8.
Calibrar el aparato; oprimir YES para CALIBRAR AHORA? Tras una calibracin exitosa el analizador ILyte presentar en la pantalla ANALIZAR SANGRE?
9.
Cuando aparece ANALIZAR SANGRE? Oprima YES. La sonda de muestra baja y aparece SONDA EN SANGRE? En la pantalla.
10.
Coloque el envase de muestras sobre la SONDA DE MUESTRAS asegurese que el hueco de la sonda esta bajo la superficie de la muestra durante toda la operacin de muestras.
11.
Oprima
YES. La muestra es aspirada dentro del analizador ILyte.
Sostenga el envase de la muestra en su sitio hasta que el analizador levante automticamente la SONDA DE MUESTRA. Si se aspira aire, aparecer AIRE EN MUESTRA en la pantalla. Repita el anlisis de muestra. Una vez que la muestra quede ubicada automticamente dentro de los electrodos, comienza el anlisis y la pantalla mostrar ANALIZANDO. 12. Cuando se completa el anlisis, los resultados aparecen en la pantalla y son impresos automticamente.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Solucin patrn A 400 ml 383
[Na+ 140mmol/L, K+ 4.0 mmol/L, Cl- 125.0 mmol/L] Solucin patrn B 130 ml [Na+ 35.0 mmol/L, K+ 1.6 mmol/L, Cl- 41.0 mmol/L] Buffer/ Tampn Conservante Agente humectante Solucin de lavado 50 ml Bifluoruro de Amonio [ 0.1 mol/L] Contenedor de desechos Solucin de lavado
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Los reactivos deben mantenerse de 18 a 25C.
384
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
2.
3.
4.
385
PROTEINA C REACTIVA
INTRODUCCION Durante cualquier proceso inflamatorio aparece en la sangre una protena
anormal especfica llamada protena C reactiva (CPR). Esta protena no existe en el suero del individuo sano. La CRP se forma rpidamente en la sangre y los lquidos del organismo como respuesta a los estmulos nocivos. Se cree que se sintetiza principalmente en el hgado y es mas abundante en el liquido peritoneal, pleural, pericardio y sinovial. La CRP constituye el reactivo de la fase aguda ms clsico y dramtico. Su concentracin alcanza cifras hasta 1000 veces mayores para disminuir en forma repentina cuando desaparece el proceso inflamatorio. INTERPRETACION CLNICA La CRP carece de especificad en la valoracin de las enfermedad inflamatorias y determinacin de la gravedad de las situaciones acompaadas necrosis titulares como infarto, del miocardio, cncer o artritis reumatoide. Durante las primeras 18-24 horas de inicia la lesin hstica se detecta CRP en suero. Esta protena se cuantifica tambin para seguir el progreso del tratamiento de la fiebre reumtica, interpretar la velocidad de sedimentacin
globular y vigilar la cicatrizacin de las heridas, en especial cuando se trata de lesiones internas, quemaduras, trasplantes de rganos.
386
La PCR-Ltex es una tcnica de aglutinacin en porta para la deteccin cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las partculas de ltex recubiertas con anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por molculas de PCR presentes en la muestra del paciente.
387
DESARROLLO DE LA TECNICA (SPINREACT) Mtodo cualitativo 1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas. 2. Depositar 50 L de muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles Positivo y Negativo, sobre crculos distintos, sobre crculos distintos de un porta. 3. Homogeneizar suavemente el reactivo de PCR-Ltex antes de usar. Depositar una gota (L) junto a cada una de las gotas anteriores. 4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del crculo. Emplear palillos distintos par4a cada muestra. 5. Situar el porta sobre un agitador rotatorio agitar durante 1 a 1:25 minutos. El exceso de tiempo puede originar la aparicin de falsos positivos. 6. Una concentracin muy elevada de PCR en la muestra del paciente puede dar lugar a un resultado falsamente negativo debido al efecto prozona. Se recomienda reensayar la muestra utilizando un volumen de 25 L.
Mtodo Semicuantitativo 1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solucin salina 9 g/dl. 2. Proceder para cada dilucin, como en la prueba cualitativa. CLCULOS: La concentracin aproximada de PCR aplicando la siguiente frmula:
en la muestra del paciente se obtiene
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6 X Titulo de PCR = mg/L
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Ltex : Suspensin de partculas de ltex cubiertas de IgG de cabra anti-PCR humana, pH 8.2. Azida sdica 0.95 g/L. Control +: Tapn rojo Control - : Tapn azul Suero humano con una concentracin de PCR >20 mg/L. Azida sdica 0.95 g/L. Suero animal. Azida sdica 0.95 g/L.
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Todos los componentes del kit estn listos para el uso, y son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C y se evita la contaminacin durante su uso. No congelar: la congelacin de los reactivos altera irreversiblemente la funcionalidad de stos.
MUESTRAS Suero fresco. Estable 8 das a 2-8C o 3 meses a -20 C. Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la prueba.
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BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
390
PROTEINA DE BENCE JONES

INTRODUCCIN Es una protena que se encuentra en orina de muchos pacientes con proliferacin maligna de inmunecitos. Consta de cadenas ligeras libres o fragmentos de cadenas L, que han sido sintetizadas en exceso en relacin a las cadenas H. Su presencia implica un grado de desdiferenciacin de los inmunocitos. A causa de su baja masa molecular es filtrada por glomrulo y solo se acumula en sangre si existe una insuficiencia glomerular. La PBJ puede daar a las clulas tubulares y formar parte de grandes cilindros. La PBJ puede tambin pasar a los espacios msticos y asociarse con la formacin de sustancia amiloide.
Esta
prueba
es
til
en
el
diagnstico
de
mieloma
mltiple,
linfoma,
macroglobulinemia, leucemia, sarcoma osteogeno, amiloidosis y otros canceres. La protena de Bence Jones es detectable mediante una prueba de turbidimetria, como cido sulfosalicilico, o bien mediante la prueba de precipitacin con calor. La protena de Bence Jones se precipita al calentar entre 45 y 60 C y se
disuelven nuevamente si se calienta hasta el punto de ebullicin. Siendo una prueba de deteccin, en s misma, no es diagnostica. La mejor manera de
391
confirmarla es la electroforesis de protenas urinarias y la inmunoelectroforesis de la orina.
Se aprovecha
su propiedad de precipitar por calentamiento con posterior
redisolucin a mayor temperatura., a un pH cercano a 4.9 precipita a temperatura inferior a los 60 C, se redisuelve al seguir el calentamiento y reaparece al dejar enfriar nuevamente la orina.
392
DESARROLLO DE LA TCNICA (Precipitacin por calentamiento)
1. Centrifugar la orina
2. En un tubo de ensayo colocar 4 ml de orina centrifugada, agregar 1 ml de cido actico, introducir el tubo en Bao Mara a 56 C, por 15 minutos.
3. La aparicin de un precipitado revela la presencia de Protena de Bence Jones.
4. En caso positivo, calentar el tubo en agua hirviendo por 3 minutos ms, con lo cual la turbidez desaparece por redisolucin de esta protena.
5. Dejar enfriar el tubo, con lo cual se apreciar nuevamente turbidez y precipitacin a los 45 60 C, que desaparece por debajo de los 40 C.
393
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Acido actico glacial Agua destilada
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Mantenerse a temperatura ambiente, libres de contaminacin , cuando se mantienen los frascos bien cerrados y protegidos .
MUESTRA Orina lmpida por centrifugacin
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BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
395
PROTEINAS TOTALES EN SANGRE/ ORINA

INTRODUCCION La amplia difusin de la electroforesis proteica ha hecho el conocimiento de las mismas y ha descartado la importancia de su estudio fraccionado. La cifra normal de la s protenas totales del suero est comprendida entre 6 y 8 g/mL, encontrndose un promedio de 1 g, menos en pacientes que guardan cama por ms de dos semanas. Las protenas totales estn integradas por la fraccin de albmina y la fraccin globulina. La primera, regula la presin osmtica coloidal de la sangre, aporta la nutricin celular, interviene en el equilibrio cido base, trasporta los lpidos originando los compuestos que se denominan de trasporte a multitud de elementos. La fraccin globulina se sintetiza principalmente en las clulas plasmticas y tiene como misin principal fabricar anticuerpos de donde se originan el nombre de inmunoglobulinas. Una relacin A/G puede obtenerse porque existe hiperglobulinemia o hipoalbuminemia o ambas, por lo que se refiere a analizar aisladamente la lipoprotenas y sirven de medio
elevacin o depresin de los diferentes valores proteicos. INTERPRETACION CLINICA Se utilizan para evaluar el estado nutricional y el estudio del edema. Las causas de protenas elevadas son: hiperinmunoglobulinemia, gammapatas mono o policlonales, en casos de enfermedad heptica incluyendo hepatitis crnica, y cirrosis; neoplasias sobre todo mieloma. Protenas totales disminuidas: asociado con perdida de protenas como gastroenteropatas, quemaduras, sndrome nefrtico; disminucin en su sntesis como deficiencia proteica severa, enfermedad heptica crnica, malnutricin, agammaglobulinemia y en otras causas como embarazo, alcoholismo crnico, colitis ulcerosa hipertiroidismo.
396
En medio alcalino, las protenas dan un intenso color violeta azulado en presencia de sales de cobre; contiene yoduro como antioxidante.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de protena total en la muestra ensayada.
397
1.
Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.
2.
Pipetear en una cubeta:
R ( L) Patrn (L ) Muestra (L)
Blanco 500 ---
Patrn 500 12.5 --
Muestra 500 -12.5
3.
Mezclar e incubar 5 minutos a 37C o 10 minutos a T ambiente.
4.
Leer la absorbancia (A) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo (540nm). El color es estable como mnimo 30 minutos.
CLCULOS (A) muestra x 7 (Conc. Patrn) = g/dL de protenas totales (A) Patrn
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R Biuret : Potasio sodio tartrato Yoduro sdico Yoduro de potasio Sulfato de cobre (II)
15 mmol/L
100 mmol/L 5 mmol/L 5 mmol/L
T PROTEIN CAL: Patrn primario de Albmina Bovina 7g/dL
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 28C, protegidos y se evita su contaminacin.
MUESTRAS Suero o plasma heparinizado.
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BIBLIOGRAFIA
2.
3.
ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
4.
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PROTEINAS TOTALES/ ALBUMINA

INTRODUCCION Una de las funciones del hgado es la de sintetizar diversas molculas vitales para el organismo como lo son las protenas. La mayora de las protenas sricas son producidas por la clula heptica, por lo que las alteraciones hepticas pueden verse reflejadas en las concentraciones de las protenas circulantes. Aunque las pruebas de capacidad de sntesis no son sensibles a daos hepticos mnimos, su uso principal es la cuantificacin de la severidad de la disfuncin heptica. Generalmente se recurre a la cuantificacin de las protenas totales y en la mayora de los casos se puede evaluar la fraccin albmina. Para una mayor ayuda diagnstica se recurre a la separacin electrofortica que permite resolver a las protenas en 5 fracciones denominadas : albmina, -1, -2, y -globulinas. En el caso de las lesiones hepticas por hepatitis viral, se detecta una disminucin de la fraccin albmina y un aumento concomitante de la globulinas y . En el caso de una ictericia obstructiva, en general se presenta un aumento de las globulinas y con un nivel normal de -globulinas, la fraccin albmina se encuentra dentro de los lmites de referencia. Cuando la ictericia obstructiva persiste cirrosis. La presencia de una hipergamaglogulinemia esta a favor de una hepatitis, mientras que una gamaglobulinemia normal es evidencia de una ictericia obstructiva. Es importante conocer el nivel de albmina por su correlacin con la severidad del deterioro de la funcin heptica. La informacin dada por el modelo proteico es de poco valor prctico para el diagnstico diferencial entre una hepatitis viral y una ictericia obstructiva. durante algn tiempo, puede aparecer dao heptico y una posible
401
En la relacin protenas totales/albmina se debe determinar la concentracin de globulinas que resulta : protenas totales menos albmina; adems de la relacin albmina/globulinas al dividir albmina entre globulinas.
PARA LAS DETERMINACIONES ANTERIORES REVISAR LAS TCNICAS :
VER REFERENCIA ALBMINA VER REFERENCIA PROTENAS TOTALES
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BIBLIOGRAFIA
2.
3.
4.
403
PRUEBA DE EMBARAZO
INTRODUCCIN Las hormonas glucoprotecas, HCG, hormona luteinizante, hormona estimulante del folculo y TSH estn formadas por dos subunidades distintas, la subunidad alfa es similar en todas las hormonas glucoprotecas, mientras que la subunidad beta es nica en cada hormona. La mayor sensibilidad de HCG beta permite saber si hay embarazo de seis a diez das despus de la implantacin. Durante el embarazo normal, se puede detectar HCG hasta 4 a 6 semanas despus del parto. La subunidad beta puede ser positiva hasta 3 4 semanas despus del parto. El intervalo para que desaparezca la HGC despus de un embarazo molar, ya sea por histerectoma o mediante succin y legrado es de 73 a 76 das, con lmites de 11 a 219 das. Adems existe una gran variedad de neoplasias diferenciadas y mal diferenciadas que producen gonadotropina corinica ectopica. El anlisis para HGC total puede detectar tumores ectpicos. En estas neoplasias, la HGC suele ser el producto de clulas del sincitiotrofoblasto.
INTERPRETACION CLINICA La aplicacin clnica de la determinacin es la confirmacin del embarazo
mediante una prueba cualitativa.
404
Es un ensayo colorimtrico de fase solida. Se basa en un ensayo Inmunomtrico de sndwich que utiliza la combinacin nica de anticuerpos monoclonales y policlonales para la identificar selectivamente hGC con alto grado de sensitividad La hGC es una hormona glicoproteca secretada por el desarrollo de la placenta poco despus de la fertilizacin. La frmula contiene anticuerpo monoclonal antihGC de ratn con oro coloidal. La membrana de nitrocelulosa es impregnada con IgG chivo-antiratn en la zona de control y anticuerpo chivo anti-hGC en la zona de test. Durante la prueba, la muestra de orina o suero es absorbida por el cojn en al zona donde se coloca la muestra en la prueba por fenmeno de accin capilar y la hGC en al muestra de orina se combina con el oro coloidal,
moviendose cromatogrficamente a lo largo de la membrana. El anticuerpo chivo anti-hGC preimpregnado en al zona de test atrapa el complejo resultante. La aparicin de una lnea prpura en al zona de test resultante de la reaccin muestra. La ausencia de esta lnea, indica un resultado negativo. Para efecto del control de calidad, siempre deber aparecer una lnea de color en la zona de control.
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DESARROLLO DE LA TCNICA (Grupo MexLab) Todas las muestras y cassette debern estar a temperatura ambiente al momento de correr la prueba (20 C 30 C). Antes de abrir el sobre llvelo a temperatura ambiente para evitar la condensacin de humedad sobre la membrana. Para cada muestra o control deber emplearse una tira individual. 1. Saque el cassette de sus sobre metalizado y rotule con el nombre del paciente. 2. Coloque el cassette en una superficie plana. Con la pipeta plstica que se incluye en el equipo, tome un poco de muestra de orina de suero y coloque de 3 a 4 gotas en el orificio circular S donde se debe colocar la muestra. 3. Por fenmeno de absorcin, la muestra colocada empezar a migrar a lo largo de la tira que se encuentra en el interior del cassette. 4. Espere para llevar a cabo la interpretacin de resultados. Resultado Positivo: Adicionalmente a la lnea rosada rojiza de la zona de control, aparecer otra lnea en al zona de test. El tiempo ptimo para observacin es de 2.5 a 3 minutos. Sin embargo, un resultado positivo puede surgir a partir de 15 segundos de transcurrida la prueba. Resultado Negativo: Solamente una lnea rosada-rojiza aparecer en la zona de control y nada en la zona de test. Una observacin de hasta 7 minutos es necesaria para excluir la posibilidad de positividad. Resultado Invalido: Despus de 7 minutos no aparecen lneas en al zona de test ni en al zona de control nicamente una linea en la zona de test. Esta prueba deber excluirse. Lo anterior puede deberse a que se llevaron a cabo pasos de manera inapropiada en el procedimiento de la prueba simplemente
406
al deterioro de los reactivos. En dicho caso la prueba deber ser evaluada con otro nuevo cassette. COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Prueba de cassette. Contiene dispositivo de plstico con una membrana de nitrocelulosa impregnada con anticuerpo chivo anti-hGC y un cojn de absorcin con anticuerpo monoclonal chivo anti-hGC conjugado y 0.05% azida de sodio como preservativo.
CONSERVACION DELOS REACTIVOS La prueba de cassette puede ser almacenada tanto a temperatura ambiente como en refrigeracin (2 - 30 C) en sobre sellado con desecante Es estable hasta la fecha de caducidad. Para una ptima conservacin, se debe mantener el producto en un lugar fresco y seco. Se recomienda refrigerarlo si la temperatura ambiente supera los 30C . No congelar.
MUESTRAS Muestra de orina, deber ser recolectada en frasco de orinas, de preferencia la primera orina de la maana, pueden ser refrigeradas (2-8 C) y almacenadas hasta por 72 horas antes de ser evaluadas. Aquella muestras que hayan sido sujetas a procesos repetidos de congelacin no debern ser utilizadas. Muestra de suero.
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BIBLIOGRAFIA
2.
3.
4.
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QUMICA SANGUNEA COMPLETA
La qumica clnica utiliza procesos
qumicos para medir los niveles de los
componentes qumicos en la sangre. Las muestras ms comnmente utilizadas en la qumica clnica son la sangre y la orina. Existen muchos exmenes diferentes para analizar casi todos los tipos de componentes qumicos presentes en la sangre o en la orina. Los componentes pueden incluir la glucosa en la sangre, los electrolitos, las enzimas, las hormonas, los lpidos (grasas), las protenas y otras sustancias metablicas. La glucosa en la sangre o azcar de la sangre, estos niveles indican cmo el cuerpo controla la glucosa. Medir los niveles de glucosa en ayunas puede ayudar a diagnosticar la diabetes o la hipoglucemia. La urea nos ayuda a la determinacin de que si el paciente sufre una enfermedad renal o solo la persona esta deshidratado o sufre insuficiencia renal, se sabe que la relacin entre la creatinina y la urea ayudan a evaluar el funcionamiento renal. El cido rico es uno de los metabolitos que se eleva en ciertas enfermedades como la gota, o por el consumo indiscriminado de carnes rojas. El colesterol y los triglicridos son en la actualidad uno de los metabolitos mas importantes de controlar ya que en la actualidad han crecido las enfermedades de colesterol y triglicridos altos, en algunos casos predecesores de infartos al miocardio o de alteraciones graves en el organismo de cada individuo.
409
VER LA METODOLOGIA EN VER LA METODOLOGIA EN VER LA METODOLOGIA EN VER LA METODOLOGIA EN VER LA METODOLOGIA EN
GLUCOSA UREA NITROGENO DE UREA CREATININA CIDO RICO
VER LA METODOLOGIA EN
COLESTEROL
TRIGLICRIDOS
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BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
411
QUMICA SANGUNEA PARCIAL INTRODUCCIN

Las alteraciones de algunos metabolitos en determinados padecimientos nos sirve de gran ayuda mediante la determinacin de parmetros tan sencillos para el laboratorio como lo son la determinacin de glucosa, urea y creatinina nos orienta sobre una informacin de cmo se encuentra el paciente. Ya que en este estudio se le determina en primera instancia la glucosa, nos ayuda a la identificacin de pacientes de chequeo medico, otros de seguimiento de tratamiento, y en general del funcionamiento de los riones por la urea y la creatinina que se renal. Cada metabolito se debe de tratar con el debida importancia, para saber de los padecimientos que arrojan las elevaciones o disminucin de estos metabolitos es necesario hacer la debida revisin de cada metabolito en el manual. La glucosa en la sangre o azcar de la sangre, estos niveles indican cmo el cuerpo controla la glucosa. Medir los niveles de glucosa en ayunas puede ayudar a diagnosticar la diabetes o la hipoglucemia. La urea nos ayuda a la determinacin de que si el paciente sufre una enfermedad renal o solo la persona esta deshidratado o sufre insuficiencia renal, se sabe que la relacin entre la creatinina y la urea ayudan a evaluar el funcionamiento renal. muestran alteraciones en padecimientos como insuficiencia
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GLUCOSA
UREA
NITROGENO DE UREA
CREATININA
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BIBLIOGRAFIA
5.
6.
7.
8.
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REACCIONES FEBRILES
INTRODUCCION La fiebre tifoidea es una enfermedad infecciosa de origen entrico caracterizada, fundamentalmente, por manifestaciones esplenomegalia y leucopenia, con intensa desviacin a la izquierda. Puede cursar con complicaciones graves, como enterorragia y perforacin. Slo afecta a la especie humana y no a otros animales, por lo que ofrece buenas posibilidades de erradicacin. El agente etiolgico es casi siempre S. typhi. En ocasiones, sin embargo, depende de serotipos distintos, como S. paratyphi A S. schottmuelleri (antes denominada paratyphi B), S. hirschfeldii (antes paratyphi C) e incluso, rara vez, de otros. En este ltimo caso, es decir, cuando no est producida por S. typhi, se habla de fiebre paratifoidea, cuya clnica slo se diferencia de la de la fiebre tifoidea en que suele ser ms leve. S. typhi posee un antgeno flagelar (H), otro lipopolisacrido (O), que forma parte de la pared bacteriana, y, por ltimo, el antgeno de virulencia (Vi), que es un polisacrido capsular. El contagio directo a partir de los enfermos es posible si no se toman las debidas medidas higinicas, dado que excretan con las heces millones de salmonelas. Sin embargo, la mxima importancia epidemiolgica corresponde a los portadores sanos, ya sean transitorios (en la convalecencia de la enfermedad) o permanentes, que diseminan los bacilos. Estos ltimos suelen ser pacientes con afectacin de las vas biliares (donde los bacilos se albergan), por lo que a menudo se trata de mujeres mayores de40 aos, dado que las afecciones de la vescula son ms frecuentes en el sexo femenino y a dicha edad. En ocasiones los portadores pueden alojar los bacilos en el colon. La transmisin de la enfermedad depende del nmero de bacilos ingeridos.
INTERPRETACION CLINICA Algunos sueros normales pueden dar un titulo 1:20, 1:40, 1:80 pero es debido a vacunaciones o alguna infeccin anterior. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a vacunaciones para ciertas enfermedades.
415
La prueba se basa en una reaccin inmunolgica entre los anticuerpos sricos y el antgeno correspondiente produciendo una reaccin de aglutinacin
macroscpica.
Lleve los reactivos a temperatura ambiente antes de realizar la prueba. 416
Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antgeno que se este usando. NOTA: el reactivo as como los sueros, deben alcanzar la temperatura de laboratorio para comenzar la prueba.
1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a

probar: 0.08 ml, 0.04 ml, 0.02, 0.01 ml y 0.005 ml ( el suero debe estar totalmente claro) 2. Agitar el antgeno a utilizar para tener una suspensin uniforme. 3. Aadir 30 L de la suspensin de antgeno a cada una de las diferentes
cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automticas (el gotero incluido proporciona una gota de 30-40 L). 4. Mezclar el antgeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero. 5. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecnico. Durante 3 minutos. 6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinacin macroscpica. 7. Se recomienda incluir controles positivo y negativo.
INTERPRETACIN DE RESULTADOS.
El grado de aglutinacin se registra como sigue:
417
4+ 3+ 2+ 1+ -
Aglutinacin de l 100 % de los organismos Aglutinacin de 75 % de los organismos Aglutinacin del 50 % de los organismos Aglutinacin del 25 % de los organismos Aglutinacin del 0 % de los organismos.
El titulo del suero ser la inversa de la dilucin ms alta donde se observa una aglutinacin del 50 % Las diluciones del suero en la prueba en placa son aproximadamente equivalentes a las diluciones continuacin. Volumen del suero 0.08 mL 0.04 ml. 0.02 ml 0.01ml 0.005 Titulo 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 para prueba en tubo como se muestra a
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Tifico O Salmonella Typhi antigeno somtico pH 6.51.0. Frasco de 5 ml. Tifico H Salmonella Typhi antigeno flagelar. pH: 6.51.0. Frasco de 5 ml. Paratifico A pH: 6.51.0. Frasco de 5 ml. Paratifico B pH: 6.51.0. Frasco de 5 ml. Brucella abortus, pH: 6.51.0. Frasco de 5 ml.
418
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Conserve en refrigeracin
MUESTRAS Obtenga sangre venosa y separe el suero evitando la hemlisis.
BIBLIOGRAFIA
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 419
2.
3.
4.
RETICULOCITOS
INTRODUCCION Los reticulocitos son eritrocitos jvenes recin nacidos que ocupan una posicin intermedia entre los eritrocitos maduros enucleados y los precursores eritroides nucleados que se encuentran en la mdula sea. Son considerados como el mejor ndice para evaluar como esta la produccin de glbulos rojos en la mdula sea. La cifra normal esta comprendida entre 40,000 y 100,000 por mm3, con un promedio en los extendidos perifricos de 0.5 al 1.5%. Cuando los reticulocitos estn muy aumentados , estos tienen un tamao ms grande que el de un glbulo rojo y en los recuentos electrnicos puede dar un falso aumento del volumen corpuscular medio. INTERPRETACION CLINICA
420
La cuenta de reticulocitos se utiliza para distinguir las anemias producidas por insuficiencia de la medula sea de las que son causadas por hemorragias o hemlisis (destruccin de eritrocitos); para vigilar lo efectivo del tratamiento de la anemia perniciosa o la recuperacin de la funcin de la mdula sea en la anemia aplastica, y para la determinar los efectos de las sustancias radiactivas en los individuos expuestos a este factor. La cuenta se encuentra aumentada indica que existe mayor produccin de glbulos rojos conforme la medula sea sustituye a las clulas que se pierden o se destruyen en forma precoz. Si se identifica reticulocitosis puede haber alguna enfermedad ocultan como hemorragia crnica o hemlisis (anemia de clulas falciformes y talasemia) Es baja cuando la medula sea no produce suficientes eritrocitos como en deficiencia de hierro, anemia aplastica, anemia perniciosa no tratada, infeccin crnica.
Los reticulocitos son eritrocitos no nucleados inmaduros que contienen cido ribonucleico (RNA) y que continan sintetizando la hemoglobina despus de la prdida del ncleo. Cuando la sangre se incuba brevemente en una solucin de azul de cresil brillante recin elaborados, el RNA se precipita como un complejo colorante-ribonucleoprotena, que microscpicamente aparece como una malla (retculo) azul oscura que permiten identificar y contar los reticulocitos.
421
1. Tome un tubo limpio y deposite una gota de muestra de sangre con

EDTA y despus agregue tres gotas de azul de cresil brillante.
2. Djelos por espacio de 10 minutos a que reaccione la sangre con el

colorante.
3. Una vez concluido el tiempo realizar un frotis y observar al

microscopio.
4. Con un contador se realiza la cuenta de 1000 celulas entre ellas se

cuenta el nmero de reticulocitos junto con los eritrocitos.
422
5. Se saca la cuenta del total de reticulocitos encontrados con la

siguiente frmula.
(# DE RETICULOCITOS) x (100 %) RETICULOCITOS = _________________________________ 1000 CELULAS CONTADAS
VALORES DE REFERENCIA: 0.5 1.5
RETICULOCITOS
COMPOSICIN DE LOS REACTIVOS Azul de cresil brillante 1%, solucin colorante de NaCl 0.85 %
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Conserve se protegido de la luz y en lugar fresco
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MUESTRAS Sangre completa con EDTA.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
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3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
ROTAVIRUS
INTRODUCCIN La gastroenteritis es la causante aproximadamente del 12 % de los ingresos hospitalarios pedriticos y ocupa un segundo lugar, despus del resfriado comn como causa de enfermedad en la primera y segunda infancia. En 1973, BISHOP describi como agente patgeno en diarreas infantiles y de adultos a un virus cpsulado de doble contorno, 70 nm de dimetro similar al de una rueda (rota en latn), de donde deriva su nombre actual, habindose
conocido inicialmente como duovirus, u orbivirus. Hay dos tipos principales: el HRVI y HRVII que se detectan por medio de
pruebas de RIA o de Elisa. Estudios epidemiolgicos han demostrado que le rotavirus se encuentra entre el 60 y el 80 % de la diarreas virales, siendo menos frecuentes los reovirus y los parvovirus.
425
El virus infecta a las clulas epiteliales del intestino, despus de un periodo de incubacin de 1-2 das se presentan los sntomas vmito, diarrea, fiebre, dolor abdominal y sntomas respiratorios.
INTERPRETACION CLINICA El rotavirus es la mayor causa de gastroenteritis en nios menores de 2 aos. Ocurre en todas partes del mundo. Causa gastroenteritis epidemicas en nios y en ancianos. Se infectan 130 millones de nios al ao causando 1 milln de muertes.
El reactivo antgeno es una suspensin de partculas de ltex de poliestireno de tamao uniforme sensibilizadas con inmunoglobulinas especficas contra
antgenos de grupo obtenidos de la cepa SA-11 de rotavirus de simio. Las partculas de ltez ponente manifiesto la reaccin antgeno-anticuerpo. Si debido a la presencia de antgeno de rotavirus en la suspensin clarificada de heces tiene lugar dicha reaccin, la suspensin de latx pierde sus aspecto
uniforme hacindose evidente una clara aglutinacin. Ello se debe a que los 426
antgenos vricos del grupo rotavirus presentes en las heces reaccionan con las inmunoglobulinas especficas unidas a las partculas de ltex, iniciando la formacin de una malla entre las mismas. Se incluye un reactivo control sensibilizado con globulinas de conejo no inmune para detectar las reacciones no especficas.
DESARROLLO DE LA TCNICA (RotaTEST)
1.
Depositar hasta la marca 1 ml de muestra en un tubo ependor que contiene buffer.
2.
Centrifugar por 2 minutos.
3.
Colocar 4 gotas de sobrenadante en el cartucho.
4.
Dejar 15 minutos e interpretar.
Reacciones positivas: 1 + una lnea tenue 2 + una lnea bien definida 3 + una lnea mas marcada que el control
427
Reacciones negativas: Ausencia de la lnea en la zona T.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Cartuchos: contiene un anticuerpo monoclonal anti-Rotavirus, conjugado coloreado y un anticuerpo policlonal unido sobre la membrana. El anticuerpo monoclonal es especfico de la protenas de la capside del Rotavirus. Buffer: 0.1% sodio azida.
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS El kit de prueba es estable almacenado a temperatura ambiente (15-30C), hasta la fecha de caducidad indicada en la caja.
MUESTRAS Muestra fecal
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La muestra debe ser obtenida tan pronto como empiecen los sntomas, durante la fase aguda de gastroenteritis, porque una gran cantidad de partculas virales son excretadas durante este periodo.
BIBLIOGRAFIA
1) BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2) AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3) ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4) FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
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SANGRE OCULTA EN HECES

INTRODUCCION La deteccin de las fuentes de hemorragia es a menudo un problema que desafa al diagnstico. Hemorragias recientes y bastante serias pueden ser reconocidas de ordinario visualmente por examen de una muestra de heces. Sin embargo la presencia de pequeas cantidades de sangre o de sangre alterada, no puede descubrirse as y por ello esta sangre ha recibido el nombre de oculta. Las muestras de heces contendrn siempre pequeas cantidades de sangre o de productos de descomposicin de hemoglobina. Hasta 1 2 ml de sangre pueden entrar normalmente en la materia fecal que se forma en el canal intestinal. Buena porcin de ella se degrada y est presente en las heces como hematina, porfirinas y otros productos. Todas las reacciones para descubrir sangre oculta han de poder permitir la distincin entre estos niveles normales de sangre y niveles elevados que sugieren de manera clara hemorragia clnicamente importante como la que ocurre a causa de lceras y tumores malignos.
INTERPRETACION CLINICA La deteccin de sangre oculta en heces es muy til para inferir patologa gastrointestinal. Esta prueba demuestra la presencia de sangre en la parte superior del aparato gastrointestinal, por ejemplo una lcera gstrica. Tambin
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ayuda a detectar carcinoma de colon, colitis ulcerativa, adenoma, hernia diafragmtica, carcinoma gstrico, diverticulitis, hemorroides. Cualquier traza de color azul dentro del rea de aplicacin de la muestra es un resultado positivo para sangre oculta, siempre y cuando el monitoreo reaccione adecuadamente. Recuerde siempre revelar la prueba, interpretar y registrar los resultados antes del revelado del monitoreo de la placa. La interpretacin de la muestra no debe ser hecha por una persona daltnica.
FUNDAMENTO DE LA TECNICA El Hema-Screen esta compuesto de un papel impregnado de guanaco encerrado en una tarjeta, con lo que se permite la aplicacin de la muestra en un lado y el desarrollo Guanaco. Este se basa en la oxidacin de los compuestos fenlicos presentes en el guanaco (Ej. cidos guaiacnicos) con la produccin de compuestos quinonas de color azul. Cuando la muestra de materia fecal que contiene sangre oculta se aplica en el papel de prueba, se lleva a cabo un contacto entre la hemoglobina y el guanaco. Una reaccin pseudoperoxidasa ocurrir una vez que se adicione la solucin reveladora, formndose un cromgeno azul proporcional a la concentracin de hemoglobina. La reaccin de color ocurrir despus de 30 segundos: e interpretacin al reverso. El proceso involucra la colocacin 2 muestras colectadas a partir de 3 evacuaciones sucesivas, dentro del papel de
Hemoglobina + revelador Hb + 2 H2 O2
2 H2 O2 + O2
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Oxidacin del guanaco O2 + Guanaco

(incoloro)
Guanaco oxidado (AZUL)
DESARROLLO DE LA TCNICA (HEMA-SCREEN) 1. Colocar la informacin requerida en la parte frontal de la tapa de la placa Hema-Screen. 2. Habr la tapa frontal. 3. Utilizando un extremo del aplicador, colecte una pequea cantidad de muestra. Aplique una capa muy delgada en la ventana 1. 4. Utilice el otro extremo del aplicador para obtener una segunda muestra a partir de una porcin diferente de la muestra de heces. Aplicar una capa muy delgada en la ventana 2.(repetir los pasos anteriores
utilizando una placa adicional, a partir de movimientos intestinales subsecuentes) 5. Permitir que las muestras se sequen al aire, despus cierre la cubierta. 6. Habr la ventana perforada en la parte trasera de la placa. 7. Aplicar dos gotas de revelador Hema-Screen en la parte trasera de las ventanas 1y 2. 8. Lea despus de 30 segundos y durante 2 minutos.
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9. Registre los resultados, cualquier traza de color azul, dentro o fuera del margen de la muestra, indica un resultado positivo para sangre oculta.
COMPOSICIN DE LOS REACTIVOS 1. Placas de Hema-ScreenTM con un lado para monitoreo,. Reactivos las placas de Hema-Screen estn hechas con un papel de calidad controlada impregnada la cul tornar a azul si el producto esta funcionando adecuadamente. El monitoreo negativo consiste de un papel impregnado de guanaco. CONSERVACION DELOS REACTIVOS Este producto debe de ser almacenado a temperatura ambiente 288-303 K (15-30 C) y es estable hasta la fecha de caducidad indicada en cada placa. Las placas deben de ser protegidas del calor, humedad luz fluorescente, radiacin U.V, excesivo flujo de aire o qumicos voltiles ( Ej. Yodo o blanqueadores). No refrigere o congele. MUESTRA Muestras de materia fecal.
BIBLIOGRAFIA
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1) BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 2) AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3) ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. 4) FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
SEDIMENTACION GLOBULAR
INTRODUCCION Se produce sedimentacin cuando los eritrocitos se aglomeran en forma de columnas (formacin en pilas de monedas). Estos cambios se deben a alteraciones en las protenas plasmticas. La ESR no se debe utilizar en pacientes asintomticos para buscar enfermedades. Los niveles elevados de fibringeno y en menor medida, de alfa2, beta y gammaglobulinas favorecen una VSG acelerada. Estas molculas asimtricas de protena tienen un efecto mayor que otras protenas respecto a la disminucin de la carga negativa de los eritrocitos (potencial Z) que tiende a mantenerlos apartados. La disminucin de este potencial promueve la formacin de apilamientos que sedimentan ms rpidamente que las clulas aisladas. La anemia es responsable de una mayor VSG, ya que la variacin de la relacin eritrocito-plasma favorece la formacin de apilamientos independientemente de las variaciones en la concentracin de protenas plasmticas. La velocidad de sedimentacin es directamente proporcional al peso del agregado celular e inversamente proporcional al rea superficial. Los microcitos se sedimentan con mayor lentitud que los macrocitos que tienen un rea superficial disminuida en relacin con el volumen. Las pilas de
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monedas tienen un rea superficial disminuida en relacin con el volumen y aceleran la VSG. INTERPRETACION CLNICA Los valores normales de VSG varan con el sexo y en cierto grado con la edad. Las situaciones fisiolgicas que se acompaan con aumento de VSG son embarazo, ciclo menstrual y crecimiento, entre la patolgicas ciertas enfermedades como infecciones agudas y crnicas, neoplasias , gammapatas monoclonales, procesos inflamatorios agudos y crnicos, anemias intensas, insuficiencia renal, infarto al miocardio , presencia de crioaglutininas. Tambin existen enfermedades que cursan con disminucin de la VSG como policitemia vera, alteraciones congnitas eritrocitarias, hipo fibrinogenia, insuficiencia cardiaca congestiva y otros casos de etiologa desconocida.
La velocidad de sedimentacin globular es aquella en la que los eritrocitos se sedimentan en la sangre anticoagulada en una hora. Se basa en el hecho de que los procesos inflamatorios y necrticos alteran las protenas sanguneas, con lo que los eritrocitos se aglomeran, se tornan ms pesados y es ms probable que caigan rpidamente si se colocan en un tubo vertical.
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1) En tubo graduado se coloca muestra de sangre con ayuda de una pipeta pasteur hasta la marca de cero, se llenara con cuidado de no dejar
burbujas (presencia de aire en la muestra).
2) Se deja reposando una hora, se verifica la sedimentacin de la muestra. Se observa los milmetros a donde llego el paquete de sedimentados. eritrocitos
3) Si la velocidad esta elevada, debemos realizar la correccin, debido a que en algunos casos como en anemias carenciales severas la relacin
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albmina/ globulina aumenta, se puede observar el efecto rouleaux y este es el que se tiene que corregir, junto con otros padecimientos.
4)
La correccin se basa en la medicin de
su hematocrito y su VSG
mediante la tabla de microhematocrito, se reporta VSG corregida.
MUESTRAS Sangre con EDTA
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994, 2. AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
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SODIO SERICO
INTRODUCCION El sodio es un catin ms abundante (90% del lquido electroltico) y la base principal de la sangre. Sus principales funciones en el organismo son mantener la presin osmtica desde el punto de vista qumico, conservar el equilibrio cidobase y trasmitir los impulsos nerviosos. El organismo tiene una gran tendencia a mantener u cierto contenido total de sodio y los cambios que se producen son muy ligeros, incluso en estados patolgicos. Los mecanismos para mantener un nivel constante de ste en el plasma y el liquido extracelular incluyen al flujo renal, la actividad enzimtica esteroides, cuyo de la anhidrasa carbnica , la accin de otros nivel plasmtico es controlado por la hipfisis anterior , la
secrecin de renina y la secrecin de hormona antidiurtica y la vasopresina.
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INTERPRETACION CLINICA Hiponatremia: disminuciones significativas en el contenido en sodio del suero se observan como consecuencia de: retencin hdrica (insuficiencia renal grave, edemas, secrecin inadecuada de HAD, ingesta exagerada de agua), perdidas anormales de agua y sodio insuficientemente compensadas (vmitos, aspiracin del contenido intestinal, diarrea, insuficiencia suprarrenal, sudoraciones profusas), alteraciones que conducen al paso del sodio al espacio intracelular (enfermedades crnicas invalidantes, prdidas de potasio). Hipernatremias: dficit de agua (deshidratacin, parlisis, prdida de conciencia), retencin excesiva de agua (sobredosificacin de esteroides, hiperaldosteronismo, soluciones salinas hipertnicas), alteracin en la secrecin y/o respuesta renal a la ADH FUNDAMENTO DE LA TECNICA El analizador ILyte mide el sodio en fluidos biolgicos, utilizando tecnologa de electrodos selectivos de iones. El electrodo de sodio de flujo continuo contiene un tubo vidrio, especialmente formulado a ser sensitivo a los iones de sodio. El potencial de cada electrodo es medido con relacin a un voltaje fijo y constante establecido por el electrodo de referencia de cloruro de plata y plata. Un electrodo selectivo de iones desarrolla un voltaje que vara con la concentracin del in al cual responde. La relacin entre el voltaje desarrollado y la concentracin del in detectado es logartmico, como es expresado por la ecuacin Nernst: E = E + (RT / nF) Log ( C) Donde: E= E= El potencial del electrodo en la solucin de la muestra El potencial desarrollado bajo condiciones normales
RT/ nF= Una temperatura dependiente constante que condiciona la/las inclinacin (es). n= 1 para sodio
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Log= = C=
Funcin de logaritmo base diez Coeficiente de actividad del in medido en la solucin Concentracin del in medido en la solucin
Se utiliza un mtodo comparativo de medida. Primero, el analizador mide el potencial desarrollado cuando lmuestra es bombeada a travs de los electrodos. Despus, Estndar A es bombeado a travs de los electrodos. La diferencia entre los dos potenciales se relaciona logartmicamente con la concentracin de iones de cloro en la muestra, dividida por sus respectivas concentraciones en la solucin Estndar. Ya que se conoce la diferencia de los potenciales y la concentracin de iones de cloro en la solucin Estndar, el analizador puede calcular la concentracin de los iones en la solucin de muestra.
DESARROLLO DE LA TECNICA (ILyte) 13. 14. Calibrar el aparato; oprimir YES para CALIBRAR AHORA? Tras una calibracin exitosa el analizador ILyte presentar en la pantalla ANALIZAR SANGRE? 15. Cuando aparece ANALIZAR SANGRE? Oprima YES. La sonda de muestra baja y aparece SONDA EN SANGRE? En la pantalla. 16. Coloque el envase de muestras sobre la SONDA DE MUESTRAS asegrese que el hueco de la sonda esta bajo la superficie de la muestra durante toda la operacin de muestras. 17. Oprima YES. La muestra es aspirada dentro del analizador ILyte.
Sostenga el envase de la muestra en su sitio hasta que el analizador levante automticamente la SONDA DE MUESTRA. Si se aspira aire,
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aparecer AIRE EN MUESTRA en la pantalla. Repita el anlisis de muestra. Una vez que la muestra quede ubicada automticamente dentro de los electrodos, comienza el anlisis y la pantalla mostrar ANALIZANDO. 18. Cuando se completa el anlisis, los resultados aparecen en la pantalla y son impresos automticamente.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Solucin patrn A 400 ml [Na+ 140mmol/L, K+ 4.0 mmol/L, Cl- 125.0 mmol/L] Solucin patrn B 130 ml [Na+ 35.0 mmol/L, K+ 1.6 mmol/L, Cl- 41.0 mmol/L] Buffer/ Tampn Conservante Agente humectante Solucin de lavado 50 ml Bifluoruro de Amonio [ 0.1 mol/L] Contenedor de desechos Solucin de lavado
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Los reactivos deben mantenerse de 18 a 25C.
BIBLIOGRAFIA
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
2.
3.
4.
442
T 3 LIBRE
INTRODUCCIN Es uno de los estudios que se utiliza para valorar la funcin tiroidea y cuantificar la fraccin de la T3 circulante que existe en estado libre en la sangre, no unida a protenas. Evala directamente el nivel de T3 libre en la sangre y permite una correccin para la mayora de las interferencias provocadas por las anormalidades de las protenas fijadoras. Puede ser de utilidad para excluir la toxicosis por T3 en algunos pacientes que ingieren anticonceptivos orales y en los que el valor aislado de T3 en suero aumenta en ausencia de una elevacin correspondiente de la T4, hipotiroidismo e hipertiroidismo; para determinar el estado de la tiroides y para valorar el tratamiento sustitutivo tiroideo.
INTERPRETACION CLNICA
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Se emplea como prueba de captacin de triyodotironina para diagnosticar el funcionamiento tiroideo en unin de la T4 y del ndice de tiroxina. Su significado clnico: 1. Se eleva en : a) Hipertiroidismo. b) Toxicosis por T3. c) Sndrome de resistencia perifrica. 2. La FT3 disminuye en el hipotiroidismo ( primario y secundario) y durante el tercer trimestre del embarazo.
FUNDAMENTO DE LA TCNICA El principio de la determinacin asocia el mtodo competicin a una deteccin final en fluorescencia. El cono de uso nico sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo. Los otros reactivos de la reaccin inmunolgica estn listos para su uso y previamente repartidos en el cartucho. Todas las etapas de la prueba son efectuadas instrumento. Estn constituidas por una expulsin del medio de reactivo. Durante la etapa final de revelado, el substrato(4-Metil-umbeliferil fosfato) es del conjugado cataliza la automticamente por el de aspiracin/ inmunoenzimatico por
sucesin de ciclos
aspirado y luego expulsado del cono, la enzima
reaccin de hidrlisis de este sustrato en un producto (4-Metil-umbeliferona) cuya fluorescencia emitida se mide a 450 nm. El valor de la seal de fluorescencia es 444
inversamente proporcional a la concentracin de triyodotironina libre presente en la muestra. Al final de la prueba, los resultados son calculados automticamente por el instrumento en relacin con una curva de calibracin memorizada, y luego se imprimen.
DESARROLLO DE LA TCNICA (Biomerieux) 10. Sacar nicamente los reactivos necesarios, dejarlos 30 minutos a temperatura ambiente antes de usarlos. 11. Utilizar un cartucho FT3 y un cono FT3 para cada muestra, control o calibrador a ensayar. Comprobar que se cierra la bolsa de conos despus de cada uso. 12. Teclear o seleccionar FT3 en el instrumento para introducir el cdigo de la prueba. El calibrador se identificar obligatoriamente como S1 y debe analizarse en triple. Si debe probarse el control, ser identificado como C1. 13. De ser necesario, clarificar las muestras mediante centrifugado. 14. Homogeneizar el calibrador, el control y las muestras con un agitador tipo vortex. 15. Distribuir 100 L de calibrador , de muestra o de control en el pocillo de muestra.
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16. Colocar en el instrumento los conos y los cartuchos. Comprobar la correcta concordancia de cdigos (colores y letras) entre el cono y el cartucho. 17. Iniciar el anlisis. Todas las etapas son controladas automticamente por el aparato. Los resultados se obtienen en 40 minutos aproximadamente. 18. Al final del anlisis, retirar los conos y los cartuchos del instrumento. 19. Eliminar los conos y los cartuchos usados en un recipiente apropiado.

60 cartuchos FT3 60 conos FT3 Control FT3 X 2 ml(lquido) Calibrador FT3 1 X 2 ml( lquido) STR SPR 1 C1 Listos para su uso. Listos para su uso. Conos sensibilizados con triyodotironina. Listos para su uso Suero humano + L-triyodotironina + azida sdica 1 g/l. El intervalo de confianza en pool/L est indicado en la tarjeta MLE con la indicacin: control C1 Dose Value Range Listos para su uso Suero humano + L-triyodotironina + azida sdica 1 g/l. La concentracin en pool/l est indicada en la tarjeta MLE con la indicacin : Calibrator (S1) Dose Value. El intervalo de confianza en valor de fluorescencia relativa est indicada en la tarjeta MLE con la indicacin : Calibrator (S1) RFV Range Ficha de especificaciones que contiene los datos de fbrica necesarios para la calibracin de la prueba.
S1
1 Tarjeta MLE 1 Ficha
CONSERVACION DELOS REACTIVOS Conservar el equipo VIDAS FT3 a 2-8 C . No congelar los reactivos. Dejar a 2-8 C los reactivos no utilizados. Al abrir el equipo, comprobar la integridad de las bolsas de conos y que cierran correctamente. En caso contrario, no utilizar los conos.
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Despus de cada uso, cerrar bien la bolsa con su deshidratante para conservar, la estabilidad de los conos y llevar de nuevo todo el equipo a 2-8 C.
Todos los componentes son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del equipo cuando son conservados en las condiciones exigidas.
MUESTRAS Suero o plasma con heparina de litio o EDTA
BIBLIOGRAFIA
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
2.
3.
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4.
T 3 TOTAL
INTRODUCCIN Hormona tiroidea con los tomos de yodo en posiciones 3,5 del anillo interno no fenlico y en la posicin 3 del anillo externo fenlico. Los valores sricos de T3 son mucho menores que las concentraciones sricas de la tiroxina. Puesto que la T3 no esta tan fuertemente ligada a la globulina fijadora de tiroxina (TBG), a la prealbmina , a la prealbmina fijadora de tiroxina y la albmina, la proporcin de T3 que existe en estado libre es superior a la T4. La fraccin determinante de la T3 es la fraccin libre. La T3 ms importante desde el punto de vista metablico se origina a partir de la secrecin tiroidea directa (20%) y de la conversin perifrica de T4 a T3 mediante una monodesiodacin (80%). Tanto T3 como T4 ejercen sus efectos biolgicos mediante fijacin a nivel de receptores celulares especficos y, ulteriormente, son degradadas mediante procesos sucesivos de desiodacin. T3 es ms activa desde el punto de vista metablico que T4, pero su efecto es menos duradero.
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INTERPRETACIN CLINICA Constituye la prueba de eleccin en el diagnstico de tirotoxicosis por T3. No es lo mismo que la prueba de captacin de T3, que mide la TBC no saturada en el suero. Tambin puede ser til en el diagnstico de hipertiroidismo. La tirotoxicosis por T3 es una variante de hipertiroidismo en la que el paciente padece con elevacin de T3 y T4 normal, tambin es til en el diagnstico de Tiroiditis aguda. Su valor es muy limitado en el diagnstico de hipotiroidismo, porque algunos pacientes hipotiroideos tienen niveles normales, en inanicin y enfermedades agudas se encuentra disminuida.
FUNDAMENTO DE LA TCNICA El principio del anlisis asocia el mtodo inmunoenzimatico por competicin una deteccin final de fluorescencia (ELFA). El cono de uso nico sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo. Los otros reactivos de la reaccin inmunolgica estn listos para su uso y previamente repartidos en el cartucho. El instrumento realiza automticamente todas las etapas de las pruebas que consiste en una sucesin de ciclos de aspiracin/ rechazo del medio reactivo. Se toma la muestra y se trasfiere a la cubeta que contiene el antgeno T3, marcado con fosfatasa alcalina (conjugado). Se produce una competicin entre el antigeno presente en la muestra y el a
antigeno marcado, de cara al posicionamiento del anticuerpo especfico anti-T3
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(cordero) fijado sobre el cono. Las etapas de lavado eliminan los componentes no fijados. Durante la etapa final de revelado, el substrato (4-Metil-umbeliferil-fosfato) se aspira y luego se rechaza sobre el cono; la enzima del conjugado cataliza la de la seal de del antgeno reaccin de hidrlisis de este sustrato en un producto ( 4-Metil-umberiferona) cuya fluorescencia emitida se mide a 450 nm. El valor fluorescencia resultados es inversamente proporcional a la concentracin automticamente en relacin
especifico presente en la muestra. Al final de la prueba, el instrumento calcula los con una curva de calibracin memorizada y despus se imprime.
DESARROLLO DE LA TCNICA (Biomerieux) 1. Sacar nicamente los reactivos necesarios, dejarlos 30 minutos a temperatura ambiente antes de usarlos. 2. Utilizar un de cada uso. 3. Teclear o seleccionar T3 en el instrumento para introducir el cdigo de la prueba. El calibrador se identificar obligatoriamente como S1 y debe analizarse en triple. Si debe probarse el control, ser identificado como C1. 4. De ser necesario, clarificar las muestras mediante centrifugado. cartucho T3 y un cono T3 para cada muestra, control o
calibrador a ensayar. Comprobar que se cierra la bolsa de conos despus
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5. Homogeneizar el calibrador , el control y las muestras con un agitador tipo vortex. 6. Distribuir 100 L de calibrador , de muestra o de control en el pocillo de muestra. 7. Colocar en el instrumento los conos y los cartuchos. Comprobar la correcta concordancia de cdigos (colores y letras) entre el cono y el cartucho. 8. Iniciar el anlisis. Todas las etapas son controladas automticamente por el aparato. Los resultados se obtienen en 40 minutos aproximadamente. 9. Al final del anlisis, retirar los conos y los cartuchos del instrumento. 10. Eliminar los conos y los cartuchos usados en un recipiente apropiado. COMPOSICION DE LOS REACTIVOS
60 cartuchos T3 60 conos T3 Control T3 X 2 ml(lquido) 1 STR SPR C1 Listos para su empleo. Listos para su empleo. Conos sensibilizados con anticuerpos monoclonales de cordero anti-T3. Listos para su empleo. Suero humano + L-triiodotironina + azida sdica 1 g/l. El intervalo de confianza en pool/L est indicado en la tarjeta MLE con la indicacin: control C1 Dose Value Range Listos para su uso Suero humano + L-triiodotironina + azida sdica 1 g/l. La concentracin en pool/l est indicada en la tarjeta MLE con la indicacion : Calibrator (S1) Dose Value. El intervalo de confianza en valor de fluorescencia relativa est indicada en la tarjeta MLE con la indicacin : Calibrator (S1) RFV Range Ficha de especificaciones que contiene los datos de fbrica necesarios para la calibracin de la prueba.
Calibrador FT3 1 X 2 ml( lquido)
S1
1 Tarjeta MLE 1 Ficha
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CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Conservar el equipo VIDAS T3 a 2-8 C . No congelar los reactivos. Dejar a 2-8 C los reactivos no utilizados. Al abrir el equipo, comprobar la integridad de las bolsas de conos y que cierran correctamente. En caso contrario, no utilizar los conos. Despus de cada uso, cerrar bien la bolsa con su deshidratante para conservar, la estabilidad de los conos y llevar de nuevo todo el equipo a 2-8 C. Todos los componentes son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del equipo cuando son conservados en las condiciones exigidas.
MUESTRAS Suero o plasma humano (heparina de litio) no utilizar tubos con EDTA.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
2.
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4.
T 4 TOTAL
INTRODUCCIN La tiroxina es una hormona tiroidea con 4 tomos de Yodo, por lo que se
denomina T4. La combinacin de captacin srica de T4 y T3 como valoracin de la globulina fijadora de tiroxina (TBG) ayuda a determinar si el valor anormal de T4 se debe a alteraciones en la globulina fijadora de tiroxina srica o a cambios de los niveles de las hormonas tiroidea. Las desviaciones de ambas pruebas en la misma direccin suele indicar que el nivel anormal de T4 se debe a
anormalidades en la hormona tiroidea. Las desviaciones de ambas pruebas en
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direcciones opuestas proporcionan evidencia de que el nivel anormal de T4 puede estar relacionado con las alteraciones de globulina fijadora de tiroxina.
La cuantificacin
de tiroxina, una de las pruebas de funcionamiento tiroides,
constituye la medicin directa de la concentracin de T4 en el suero sanguneo. El nivel total de T4 constituye un buen ndice de la funcin tiroides cuando la TBG es normal: la elevacin de globulina fijadora de tiroxina (TBG) que normalmente se observa en el embarazo y con la terapia estrognica aumentar el nivel total de T4; la reduccin de TBG en los individuos que reciben esteroides anablicos, en los problemas hepticos crnicos y en las nefrosis reducir el valor total de T4. la prueba de T4 tambin se puede utilizar como gua para establecer la dosis de mantenimiento del medicamento tiroideo en el tratamiento del hipotiroidismo.
FUNDAMENTO DE LA TCNICA El principio del anlisis asocia el mtodo inmunoenzimatico por competicin una deteccin final de fluorescencia (ELFA). El cono de uso nico sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo. Los otros reactivos de la reaccin inmunolgica estn listos para su uso y previamente repartidos en el cartucho. a
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El instrumento realiza automticamente todas las etapas de las pruebas que consiste en una sucesin de ciclos de aspiracin/ rechazo del medio reactivo. Se toma la muestra y se trasfiere a la cubeta que contiene el antgeno T4, marcado con fosfatasa alcalina (conjugado). Se produce una competicin entre el antigeno presente en la muestra y el
antigeno marcado, de cara al posicionamiento del anticuerpo especfico anti-T4 (cordero) fijado sobre el cono. Las etapas de lavado eliminan los componentes no fijados. Durante la etapa final de revelado, el substrato (4-Metil-umbeliferil-fosfato) se aspira y luego se rechaza sobre el cono; la enzima del conjugado cataliza la de la seal de del antgeno reaccin de hidrlisis de este sustrato en un producto ( 4-Metil-umberiferona) cuya fluorescencia emitida se mide a 450 nm. El valor fluorescencia resultados es inversamente proporcional a la concentracin automticamente en relacin
especfico presente en la muestra. Al final de la prueba, el instrumento calcula los con una curva de calibracin memorizada y despus se imprime.
DESARROLLO DE LA TCNICA (Biomerieux) 1. Sacar nicamente los reactivos necesarios, dejarlos 30 minutos a temperatura ambiente antes de usarlos. 2. Utilizar un de cada uso. 3. Teclear o seleccionar T4 en el instrumento para introducir el cdigo de la prueba. El calibrador se identificar obligatoriamente como S1 y debe cartucho T4 y un cono T4 para cada muestra, control o calibrador a ensayar. Comprobar que se cierra la bolsa de conos despus
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analizarse en triple. Si debe probarse el control, ser identificado como C1. 4. Homogeneizar el calibrador , el control y las muestras con un agitador tipo vortex.. 5. Distribuir 200 L de calibrador, de muestra o de control en el pocillo de muestra. 6. Colocar en el instrumento los conos y los cartuchos. Comprobar la correcta concordancia de cdigos (colores y letras) entre el cono y el cartucho. 7. Iniciar el anlisis. Todas las etapas son controladas automticamente por el aparato. Los resultados se obtienen en 40 minutos aproximadamente. 8. Al final del anlisis, retirar los conos y los cartuchos del instrumento. 9. Eliminar los conos y los cartuchos usados en un recipiente apropiado.

60 cartuchos T4 60 conos T4 Control T4 1 X 2 ml(lquido) STR SPR C1 Listos para su empleo. Listos para su empleo. Conos sensibilizados con anticuerpos monoclonales de ratn anti-T4. Listos para su empleo. Suero humano + L-triroxina + azida sdica 1 g/l. El intervalo de confianza en pool/L est indicado en la tarjeta MLE con la indicacin: control C1 Dose Value Range Listos para su uso Suero humano + L-triroxina + azida sdica 1 g/l. La concentracin en pool/l est indicada en la tarjeta MLE
Calibrador T4 1 X 2 ml( lquido)
S1
456
con la indicacion : Calibrator (S1) Dose Value. El intervalo de confianza en valor de fluorescencia relativa est indicada en la tarjeta MLE con la indicacin : Calibrator (S1) RFV Range 1 Tarjeta MLE 1 Ficha tcnica Ficha de especificaciones que contiene los datos de fbrica necesarios para la calibracin de la prueba.
CONSERVACION DELOS REACTIVOS Conservar el equipo VIDAS T3 a 2-8 C. No congelar los reactivos. Dejar a 2-8 C los reactivos no utilizados. Al abrir el equipo, comprobar la integridad de las bolsas de conos y que cierran correctamente. En caso contrario, no utilizar los conos. Despus de cada uso, cerrar bien la bolsa con su deshidratante para conservar, la estabilidad de los conos y llevar de nuevo todo el equipo a 2-8 C. Todos los componentes son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del equipo cuando son conservados en las condiciones exigidas.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
2.
457
3.
4.
T4 LIBRE
INTRODUCCIN La tiroxina libre constituye una fraccin muy pequea de la tiroxina total. La T4 est disponible para los tejidos y constituye la forma metablicamente activa de esta hormona. Est fraccin (cerca del 5 % de la tiroxina circulante) se encuentra libre y no se adhiere a ninguna protena. Ayuda a determinar el estado de la tiroides, descarta hipo e hipertiroidismo y ayuda a valorar la terapia sustitutiva tiroidea. La FT4 tiene valor diagnstico en las
458
situaciones en que las hormonas totales no se correlacionan
con el estado
tirometablico y no se sospecha de ninguna anormalidad en los niveles en los niveles de las protenas fijadoras. Es muy til en anormalidades en los niveles de captacin, proporciona un cuadro ms preciso del estado de la tiroides en las personas con cifras anormales de globulinas fijadoras de tiroxina en el embarazo y los que estn recibiendo estrgenos, andrgenos, fenitona y salicilatos. INTERPRETACIN CLINICA 1. La FT4 se eleva en la enfermedad de Graves y en la tiroxicosis causada por la produccin excesiva de T4. 2. La FT4 disminuye en: a. Hipotiroidismo primario. b. Hipotiroidismo secundario( Hipofisiario) c. Hipotiroidismo terciario ( Hipotalmico). d. Tirotoxicosis causado por produccin excesiva de T3.
FUNDAMENTO DE LA PRUEBA El principio del anlisis asocia el mtodo inmunoenzimatico por competicin una deteccin final de fluorescencia (ELFA). El cono de uso nico sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo. Los otros reactivos de la reaccin inmunolgica estn listos para su uso y previamente repartidos en el cartucho. a
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El instrumento realiza automticamente todas las etapas de las pruebas que consiste en una sucesin de ciclos de aspiracin/ rechazo del medio reactivo. Se toma la muestra y se trasfiere a la cubeta que contiene el antgeno T4, marcado con fosfatasa alcalina (conjugado). Se produce una competicin entre el antigeno presente en la muestra y el
antigeno marcado, de cara al posicionamiento del anticuerpo especfico anti-T4 (cordero) fijado sobre el cono. Las etapas de lavado eliminan los componentes no fijados. Durante la etapa final de revelado, el substrato (4-Metil-umbeliferil-fosfato) se aspira y luego se rechaza sobre el cono; la enzima del conjugado cataliza la reaccin de hidrlisis de este sustrato en un producto (4-Metil-umberiferona) cuya fluorescencia emitida se mide a 450 nm. El valor de la seal de fluorescencia es inversamente proporcional a la concentracin del antgeno especific presente en la muestra. Al final de la prueba, el instrumento calcula los resultados automticamente en relacin con una curva de calibracin memorizada y despus se imprime.
DESARROLLO DE LA TCNICA (Biomerieux) 1. Sacar nicamente los reactivos necesarios, dejarlos 30 minutos a temperatura ambiente antes de usarlos. 2. Utilizar un cartucho FT4 y un cono FT4 para cada muestra, control o calibrador a ensayar. Comprobar que se cierra la bolsa de conos despus de cada uso.
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3. Teclear o seleccionar FT4 en el instrumento para introducir el cdigo de la prueba. El calibrador se identificar obligatoriamente como S1 y debe analizarse en triple. Si debe probarse el control, ser identificado como C1. 4. Homogeneizar el calibrador , el control y las muestras con un agitador tipo vortex.. 5. Distribuir 200 L de calibrador, de muestra o de control en el pocillo de muestra. 6. Colocar en el instrumento los conos y los cartuchos. Comprobar la correcta concordancia de cdigos (colores y letras) entre el cono y el cartucho. 7. Iniciar el anlisis. Todas las etapas son controladas automticamente por el aparato. Los resultados se obtienen en 40 minutos aproximadamente. 8. Al final del anlisis, retirar los conos y los cartuchos del instrumento. 9. Eliminar los conos y los cartuchos usados en un recipiente apropiado.

60 cartuchos FT4 60 conos FT4 Control FT4 1 X 2 ml(lquido) STR SPR C1 Listos para su empleo. Listos para su empleo. Conos sensibilizados con anticuerpos monoclonales de ratn anti-T4. Listos para su empleo. Suero humano + L-triroxina + azida sdica 1 g/l. El intervalo de confianza en pool/L est indicado en la tarjeta MLE con la indicacin: control C1 Dose Value Range Listos para su uso
Calibrador FT4
S1
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1 X 2 ml( lquido)
Suero humano + L-triroxina + azida sdica 1 g/l. La concentracin en pool/l est indicada en la tarjeta MLE con la indicacion : Calibrator (S1) Dose Value. El intervalo de confianza en valor de fluorescencia relativa est indicada en la tarjeta MLE con la indicacin : Calibrator (S1) RFV Range Ficha de especificaciones que contiene los datos de fbrica necesarios para la calibracin de la prueba.
1 Tarjeta MLE 1 Ficha tcnica
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Conservar el equipo VIDAS T3 a 2-8 C. No congelar los reactivos. Dejar a 2-8 C los reactivos no utilizados. Al abrir el equipo, comprobar la integridad de las bolsas de conos y que cierran correctamente. En caso contrario, no utilizar los conos. Despus de cada uso, cerrar bien la bolsa con su deshidratante para conservar, la estabilidad de los conos y llevar de nuevo todo el equipo a 2-8 C. Todos los componentes son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del equipo cuando son conservados en las condiciones exigidas.
BIBLIOGRAFIA
1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 462
2.
FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
3.
4.
TIEMPO DE COAGULACIN
INTRODUCCIN El tiempo de coagulacin de sangre total es una de las pruebas llamadas globales y abarca la activacin intrnseca de la protrombina y el fibringeno Presenta 3 fases globales bien definidas. En cada una interviene varios factores cuya presencia, deficiencia o ausencia, establecen una coagulacin normal o retardada. En la primera fase se produce la tromboplastina. Se inicia por la lesin epitelial, cuando se pierde la continuidad de la pared interna del vaso, lo cual permite que la sangre se extravase. 463
En la segunda se forma la trombina y en una tercera se origina la fibrina, encargada de englobar a los elementos sanguneos, aprisionarlos y de nuevas cantidades de sangre hacia el exterior. Para llegar a esta ultima fase, se han descrito 13 factores, elementos que reaccionan independientemente pero se despiertan en forma rpida a otros que tienen propiedades latentes y como verdaderos catalizadores desarrollan una reaccin en cadena, unos por accin de otros hasta obtenerse la coagulacn normal. Este tiempo de coagulacin in vitro reflejar mejor la eficacia del sistema in vivo, cuanto menos se modifique esta sangre (contacto con el vidrio, burbujas de aire, detergentes, etc.). INTERPRETACION CLINICA El tiempo de coagulacin esta prolongado en defectos del sistema intrnseco de la coagulacin, pero la sensibilidad de la prueba limita su utilidad para la deteccin de estos efectos. La carbenicilina, dicumarol, heparina, mitracina, ticarcilina y warfarina elevan el tiempo de coagulacin. La puncin venosa traumtica puede causar contaminacin con los lquidos coagulacin. La prueba de Lee-White es considerablemente menos sensible que otros mtodos para determinar la coagulacin. Se recomienda sustituirla por el tiempo de tromboplastina activado(TTPA). de los tejidos, lo que reduce el tiempo de
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El tradicional mtodo de Lee-White
es un procedimiento
que informa
globalmente las 3 etapas de coagulacin variables. Consiste en extraer sangre sin mayor contaminacin con tromboplastina tisular, depositar en un tubo de vidrio e inclinarlo peridicamente hasta que se produzca la coagulacin, el tiempo que tarda este proceso esta en relacin con el sistema de procoagulantes e
inhibidores fisiolgicos o adquiridos, que influyen en la formacin de dicho cogulo.
1. Se realiza la toma de muestra de sangre completa aproximadamente 4 ml y se coloca en una gradilla junto a un cronometro para tomar el tiempo de coagulacin.
465
2. Se deja correr el tiempo, y se verifica la coagulacin, mediante la inclinacin del tubo levemente, se tiene que observar la formacin del coagulo.
3. Se revisa el tubo hasta la observacin del coagulo.
4.
Se detiene el tiempo en el momento que se observe el coagulo bien formado.
El valor normal es de 5-11 min.
MUESTRAS a. Sangre completa
BIBLIOGRAFIA
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1.
BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
2.
3.
4.
TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)

INTRODUCCION 467
La protrombina es una protena producida por el hgado que acta en la coagulacin sangunea. La produccin de esta protena dependen de la ingestin suficiente de vitamina K y de su absorcin. Durante el proceso de la coagulacin, la protrombina se convierte en trombina. En los pacientes con problemas hepticos, el contenido sanguneo de protrombina disminuye, las clulas pierden su capacidad para sintetizar algunos factores de la coagulacin como I, II, V, VII, IX y X, incluyendo deficits moderados de los factores XI y XIII. La deficiencia de los factores mencionados provoca una prolongacin de TP
INTERPRETACION El tiempo de protrombina es una de las cuatro pruebas ms importantes para el diagnstico de trastornos de la coagulacin. Mide directamente un defecto de potencial en la segunda fase del mecanismo de la coagulacin y analiza la capacidad de cinco factores de la coagulacin extrinseco (protrombina, fibringeno y factores V , VII y X). esto se conoce como el tiempo de protrombina y suele ordenarse durante el tratamiento con anticoagulantes ( warfarina, coumadin).
468
El proceso de coagulacin se desencadena mediante la incubacin del plasma con cantidades ptimas de tromboplastina y calcio; se mide el tiempo transcurrido hasta la formacin del cogulo de fibrina.
DESARROLLO DE LA TCNICA (Dade Behring Marburg GMBH)
1. Se realiza en el aparato llamado Coatron, en el cual se colocan 3 cubetas dobles (ya que el aparato determina el TP mediante la determinacin de la media)en los respectivos pticos a usar .
469
2. Se depositan 25 L de muestra, 2 pozos, en uno se coloca 105 L reactivo de protrombina y se procede a que se incuben a 37C en el mismo aparato por duracin de un minuto.
3. Trascurrido ese tiempo se procede a realizar la determinacin. En el aparato, se pone en la funcin de TP y se colocaran 50 L de reactivo en cada pozo colocado en los pticos de lectura mediante, una pipeta automtica y conectada al aparato que automticamente registrara cuando se adicione el reactivo a cada pozo. 4. El mismo aparato nos da una determinacin doble del TP y realiza una media y un INR que la misma maquina registrar.
a. Reactivo Thromborel S: Tromboplastina obtenida de placenta humana, liofilizada, cloruro de calcio, estabilizadores.
b. Agente de conservacin:
Gentamicin (0.1 g/l)
470
5-cloro-2-metil-4isotiasol-3-on y 2-metil-4-isotiasol-3-on (max 20 mg/l)
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Almacenado sin abrir entre 2-8 C, puede utilizarse hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Estabilidad entre 2-8C 5 das.
MUESTRAS Plasma citratado.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS POR EL LABORATORIO, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ,
2.
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C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. 3. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
4.
TIEMPO DE SANGRADO
INTRODUCCION El tiempo de sangrado mide la fase primaria de la hemostasia: la interaccin de las plaquetas con la pared del vaso sanguneo y la formacin del tapn hemosttico. El tiempo de sangrado constituye la mejor prueba para detectar alteraciones de la funcin plaquetaria y es uno de los principales estudios en los trastornos de la coagulacin. Se hace una pequea herida en la falange del dedo de la mano y se anota el tiempo de sangrado y la velocidad con la que se forma el cogulo
472
plaquetario. La duracin del sangrado de un capilar depende de la calidad cantidad de plaquetas y de la vasoconstriccin.
INTERPRETACIN CLNICA. El tiempo de sangrado es muy til para detectar anormalidad vascular y ms o menos til para detectar anormalidades plaquetarias. Se utiliza principalmente para el diagnostico de enfermedad de Von Willebrand, defecto hereditario de la molcula del factor VIII y un tipo de seudohemofilia. Se sabe que la aspirina causa hemorragia anormal en algunas personas sanas, pero no se ha comprobado que el tiempo se sangrado sea til siempre para identificar a estas personas. A pesar de que se ha visto que en la trombocitopenia el tiempo de sangrado suele ser prolongado, esta prueba constituye un mtodo indirecto para identificar esta enfermedad.
FUNDAMENTO DE LA TCNICA Se basa en el mtodo de Ivy, Esta prueba valora la capacidad hemosttica global in vivo y consiste en medir el tiempo transcurrido desde la realizacin de una pequea incisin cutnea hasta 473
que cesa la hemorragia. La prueba mide el tiempo necesario para obtener un tapn hemosttico eficaz y, por ende, representa una valoracin global y simultnea de la funcin plaquetaria (nmero, adhesin, agregacin y
degranulacin plaquetaria) y de la funcin vascular. Respecto al factor vascular, la prueba depende de la integridad de la pared vascular y de su capacidad constrictora.
DESARROLLO DE LA TCNICA (Mtodo de Ivy)
1. En un dedo del paciente, se realiza una puncin con la lanceta estril. 2. Tener a la mano papel doblado y un cronometro. 3. Realizar la asepsia en la zona del dedo al realizar la puncin con torundas impregnadas de alcohol.
474
4. Presionar
el dedo, la sangre emitida se colocara en el papel, esto se
realiza con el propsito de observar como disminuye el sangrado debido a la formacin del tapn primario, se pone en marcha el cronometro. 5. Presionar el dedo hasta que en el papel no se observe ni una gota insignificante de sangre y se detiene el cronometro. 6. Anotar el tiempo que tardo, se le realiza limpieza de la zona del dedo.
MUESTRAS Sangre completa extraida mediante el procedimiento se da a continuacin.
BIBLIOGRAFIA
475
1.
2.
AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996. FISCHBACH, T. FRANCES, MANUAL DE PRUEBAS DIAGNSTICAS, QUINTA EDICION, MC GRAW HILL INTERAMERICANA, 1997
3.
4.
TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL (TTP)

INTRODUCCION Mide la actividad de la coagulacin en la va intrnseca. Se denomina tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPa) a la variante de la TTP que se caracteriza por una mayor sensibilidad y mejor estandarizacin, cuya dosificacin requiere
476
aparato electrnico especial, que informa el momento exacto en que se produce la coagulacin entre el reactivo y el plasma, con dato en fracciones por segundo. Es un procedimiento que permite valorar la normalidad o anormalidad de los factores I( fibringeno ), II (protrombina), V, VIII, IX, X y XII. Es la prueba de eleccin terapia con anticoagulantes. cuando se administra anticoagulantes a base de heparina, reemplazando con altos beneficios al tiempo de coagulacin en la
INTERPRETACION CLINICA La determinacin del tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA) es un test de chequeo global, el cual se utiliza primordialmente para la evaluacin del sistema endgeno de la coagulacin, pero que igualmente indica una deficiencia funcional grave de los factores II, V, X o del fibringeno. La determinacin del TTPA es adems un test reconocido para el control de la teraputica con heparina, en donde la prolongacin del tiempo de coagulacin es proporcional al nivel de heparina. En pacientes bajo una teraputica con anticoagulantes orales se espera una prolongacin del TTPA, ya que los factores II, VII, IX y X, estn disminuidos. Sustancias inhibidoras no especficas similares al anticoagulante ldico pueden ocasionar una prolongacin del TTPA.
477
La incubacin del plasma con una cantidad ptima de fosfolpidos y un activador de superficie conduce a la activacin de los factores del sistema endgeno de la coagulacin. Al aadir los iones de calcio se desencadena el proceso de coagulacin. Se mide el tiempo gastado hasta la formacin del coagulo.
DESARROLLO DE LA TCNICA (Dade Behring Marburg GMBH)
1. Se realiza en el aparato llamado Coatron , en el cual se colocan 3 cubetas en los respectivos pticos a usar. 2. Se colocan 25 L de muestra y 25 L del reactivo de TTPA en 2 pozos, en otro se coloca 2 gotas de cloruro de calcio y se procede a que se incuben a 37c en el mismo aparato por duracin de 2 minutos .
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3. Trascurrido ese tiempo se procede a realizar la determinacin en el aparto, se pone en la funcin de TTP (02) y se colocaran 25 L de reactivo en cada pozo colocados en los opticos de lectura mediante una pipeta automatica y conectada al aparato que automticamente registrara cuando se adicine el reactivo a cada poso. 4. El mismo aparato nos da una determinacin doble del TTP y realiza una media.
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Actin Reactivo de cefaloplastina activada: Cefalina (extracto obtenido de cerebro de conejo deshidratado en 1.0 X 10-4 M de cido elgico, con tampn, estabilizadores y agentes de conservacin. Cloruro de Calcio
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Almacenado sin abrir entre 2-8 C, puede utilizarse hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
MUESTRAS Plasma citratado.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
2.
480
3.
4.
TRANSAMINASAS OXALACETICA (TGO)

Estas enzimas catalizan la transferencia de un grupo amino (NH 2) de un cido alfaaminado a un cido alfa-cetnico, formndose un nuevo cido aminado y un nuevo cetocido. TRANSAMINASA GLUTAMICO-OXALACTICA (TGO) Reaccin que cataliza COOH | CH2 | CH2 | CHNH2 | COOH
Acido glutamico
CH3 | CO | COOH
Acido oxalacetico
COOH | CH2 | CH2 | CO COOH

Acido alfacetoglutarico
CH3 | CHNH2 | COOH

Acido asprtico
481
Los orgenes titulares son (en orden de concentracin descendente): corazn, hgado, msculo estriado, rin y pncreas. INTERPRETACION Es una enzima que se encuentra tanto en el citoplasma del hepatocito como en las mitocrondias por lo que es bilocular. Los glbulos rojos contienen unas 10 veces ms TGO que el suero. Agentes como el etanol que inducen la necriosis de las mitocrondias celulares, liberan la TGO lo mismo que la hepatitis viral. Es de mucha utilidad para medir la actividad hepatica y cronicidad de hepatitis viral.en el infarto del miocardio aun en los inparentes clnicamente se elevan entre las 6 y 12 horas post-infarto, alcanzan su mxima intensidad entre las 20-40 horas y retorna a la normalidad a los 4 o 5 das. Tambin esta elevada en la mononucleosis, obstruccin hepato biliar, cirrosis, metstasis heptica, pancreatitis aguda, anemia hemoltica e infeccin renal. La TGO es muy empleada para valorar el estado de inflamacin y nedcrosis del hgado. En la hepatitis viral, inicialmente esta ms elevada que la TGP por encima de 1.000 UI/L que la sigue en el ascenso, pero en forma muy discreta. Cuando la hepatitis es muy intensa y existe marcada necrosis, baja la TGO y persiste mas elevada la TGP.
Este reactivo permite la determinacin cintica de la actividad aspartato aminotransferasa asociada a una reaccin indicadora la cual produce NAD
reducido, en tampn Tris-HCl 80 mM pH 7.80, sin fosfato de piridoxal, en suero y plasma humanos segn las reacciones siguientes.
482
L-aspartato + cetoglutarato
GOT
Oxalacetato + L-glutamato
Oxalacetato + NADH + H+
MDH
L-malato
+ NAD+
Se mide la velocidad a la que es consumido el NADH a 340 nm. Esta actividad es proporcional a la actividad cataltica de la GOT.
DESARROLLO DE LA TCNICA Reconstituir un vial de Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato R1b con el volumen adecuado de Tampn/Sustrato R1a 2 ml. Es estable durante 14 das concervado entre +2 y +8 C 24 horas entre +15 y +25 C.
1. Introducir un tubo o una cubeta de lectura termostatizada a 37C:
Reactivo reconstituido y termostatizado a 37C
500L
483
Muestra
50 l
3. 4. 5. 6.
Mezclar. Esperar 1 minuto a 37C. Medir la disminucin media de DO por min (n) durante 1 a 3 minutos. CLCULOS: U/I = (n) x 1746.
Valore de referencia Hombre hasta 37 U/I Mujer hasta 31 U/I
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS A. Reactivo 1: mmol/L, NaN3 1g/l B. Reactivo 2: NADH 0.23 mmol/l, cetoglutarato 1200U/L, MDH 500U/L. 484 13.2 mmol/l, LDH tampn Tris pH 7.8 88 mmol/L, L-aspartato 220
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Conservar a 2-8C.
Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminacin durante su uso.
MUESTRAS Suero recogido mediante procedimientos estndar.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
2.
3.
485
4.
TRANSAMINASA PIRUVICA (TGP)

Se identifica en todo proceso inflamatorio necrtico del hgado y es muy empleada como screen en dadores de sangre, para descartar hepatitis viral activa. Es una enzima citoplasmtica del hepatocito, que se libera fcilmente cuando existe alteracin celular. Es muy til para seguir la evolucin de las hepatitis virales, por su aumento al iniciarse y regresin paulatina en la mejora. Origenes titulares son estos , el orden descendiente de concentraciones : hgado, rin corazn, msculo estriado y pncreas. COOH | CH2 | CH2 | CHNH2 | COOH COOH | CH3 | CO | COOH COOH | CH2 | CH2 | CO | COOH COOH | CH 2 | CHNH2 | COOH
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Acido glutamico
Acido piruvico
Acido alfacetoglutrico
Alanina
INTERPRETACIN Su aumento es muy manifiesto en la ictericia de origen viral y se eleva muy poco en la de origen obstructivo. Se eleva ligeramente en el infarto del miocardio e intensamente si predomina la estasis heptica por insuficiencia cardaca. La cifra normal en unidades internacionales se considera en el adulto hasta -40 UI/L siendo las cifras ms elevada en el recien nacido por mayor permeabilidad del hepatocito que llega hasta 65 UI/L. Valores bajos corresponden a baja nutricin con piridoxina ( Vitamina B 6 ) deficiente. Tambin en la mujer que toma anticonceptivos y en pacientes a quienes se les practica hemodialisi. En hepatitis viral las cifras pueden llegar a ms de 1.000 unidades/mL. La TGP es ms especfica para las enfermedades del hgado que la TGO.
Este reactivo permite la determinacin cintica de la actividad alanino aminotransferasa asociada a una reaccin indicadora la cual produce NAD reducido, en tampn Tris-HCl 100mM pH 7.50, sin fosfato de piridoxal, en suero y plasma humanos, segn las reacciones siguientes.
L-alanina
cetoglutarato
GTP
Piruvato
LDH
+ +
L-glutamato NAD+
Piruvato + NADH + H+
L-lactato
487
Se mide la velocidad a la que es consumido el NADH a 340 nm. Esta actividad es proporcional a la actividad cataltica de la GPT.
DESARROLLO DE LA TCNICA Reconstituir un vial de Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato R1b con el volumen adecuado de Tampn/Sustrato R1a 2 ml. Es estable durante 14 das concervado entre +2 y +8 C 24 horas entre +15 y +25 C. 1. Introducir un tubo o una cubeta de lectura termostatizada a 37C:
Reactivo reconstituido y termostatizado a 37C Muestra
500L
50
488
2. 3. 4. 5.
Mezclar. Esperar 1 minuto a 37C. Medir la disminucin media de DO por min (n) durante 1 a 3 minutos. CLCULOS: U/I = (n) x 1746.
Valore de referencia Hombre hasta 40 U/I Mujer hasta 31 U/I
A. Reactivo 1:
tampn Tris pH 7.5
101 mmol/L, L-alanina 550 16.5 mmol/l,
mmol/L, NaN3 1g/l B. Reactivo 2: NADH 0.24 mmol/l, cetoglutarato LDH 1200U/L
Conservar a 2-8C. Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminacin durante su uso.
MUESTRAS
489
Suero recogido mediante procedimientos estndar.
BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
490
ESTUDIO COMPARATIVO DE LA ACTIVIDAD DE TGO Y TGP Estado clnico Hepatitis viral Txica Necrosis Mononucleosis Infarto cardaco Carcinoma heptico Pancreatitis aguda Inflamacin y necrosis. Monitoreo drogas txicas TGO TGP
Aumenta 100 veces Aumenta 50 veces Aumenta 20 veces Aumenta 9-10 veces Aumenta 6-8 veces Aumenta 5-10 veces Aumenta 2-5 veces Aumenta 2-5 veces
Aumenta 30-50 veces Aumenta 10-20 veces Aumenta 20 veces No aumenta, o muy poco Util evol. Hepatitis Inicia alta, baja en mejoria Eleva ms que la TGO Eleva en Hepatitis C ( 90 % por trasfusiones) Eleva discretamente
491
TRIGLICRIDOS
INTRODUCCIN Ms de 90% de los triglicridos proviene de la dieta y constituyen cerca de 95% de la grasa almacenada en los tejidos. Debido a que son insolubles en agua, constituyen el principal ster de glicerol, cidos grasos y monoglicridos y en el hgado se vuelven en triglicridos. Esta prueba sirve para valorar la sospecha de aterosclerosis y cuantifica la capacidad del organismo para metabolizar la grasa. Cuando hay elevacin de los triglicridos combinada con elevacin del colesterol, se considera un factor de riesgo para aterosclerosis. Tanto el colesterol como los triglicridos pueden variar de manera independiente as que es importante medir ambas metabolitos.
INTERPRETACION CLINICA Los triglicridos se elevan en: a) Hiperlipoproteinemias tipo I, IIB, III, IV y . b) Hepatopatas y alcoholismo. c) Sndrome nefrtico y neuropata. d) Hipotiroidismo. e) Diabetes sacarina mal controlada. f) Pancreatitis. g) Enfermedad del almacenamiento del glucogeno(enf. De Von Gierke). h) Infarto del miocardio( la elevacin meses). puede persistir durante varios
492
i) Gota. Los triglicridos se reducen en la lipropoteinemia - congnita, desnutricin e hipertiroidismo.
FUNDAMENTO DE LA TCNICA Los triglicridos presentes en la muestra originan, segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por espedctrofotometria.
Lipasa
Triglicridos + H2O
Glicerol quinasa
Glicerol + cidos grasos Glicerol 3 - P + ADP

G-3-P-oxidasa
Glicerol + ATP Glicerol- 3- P + O2
DIhidroxiacetona-P + H2O2
Peroxidasa
2 H2O2 + 4- Aminoantipirina + 4-Clorofenol
Quinoneimina + HCl+ 4 H 2O
493
1. Preparacin del reactivo: Adicionar 5 L de activador por cada 500 L de solucin buffer.
2. Mezclar muy bien e incubar 15 minutos a temperatura ambiente antes de utilizarlo. 3. Adicionar 5 L de muestra a 37 C por 5 min. 4. Leer la absorbancia (A) del patrn y de la muestra a 500 nm frente al blanco.
Clculos La concentracin de triglicridos en la muestra se calcula a partir de la sig. Formula:
A muestra
494
X C patrn = A patrn
C muestra
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Reactivo de triglicridos enzimtico lquido ATP Sal de magnesio 4-aminoantipirina cido m-hidroxibenzoico Glicerolfosfato oxidasa Azida de sodio Lipasa Glicerol-cinasa Peroxidasa Buffer pH 2.0 mM 5.0 mM 0.7 mM 5.0 mM > 7000 U/L 0.1 % > 200,000 U/L 50 mM > 2000 U/L 50 mM 7.3 +/- 0.1
Reactivo triglicridos activador Concentrado enzimtico, activadores y estabilizadores.
CONSERVACION DELOS REACTIVOS Conservar de 2-8 C.
495
MUESTRAS Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estndar. Los anticoagulantes como heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren.
BIBLIOGRAFIA
2.
3.
496
4.
HORMONA ESTIMULANTE DE LA TIROIDES (T. S. H.)

INTRODUCCIN La tiroides es una glndula endocrina nica debido a que tiene un almacn muy grande de hormonas y su recambio normal es lento. La tiroides es estimulada por la TSH, que se produce en la hipfisis anterior provocando liberacin y distribucin de hormonas toroideas almacenadas. La tirotropina estimula la secrecin de T4 (tiroxina) y T3. La secrecin de TSH es regulada desde el punto de vista fisiologico por T3 y T4 (inhibicin por retroalimentacin) y es estimulada por la TRH (hormona liberadora de tirotropina) proviene del hipotalamo. La prueba de TSH constituye el estudio ms sensible del hipotiroidismo primario. Cuando existen datos de hipotiroidismo sin elevacin de TSH, puede existir hipopituitarismo.
INTERPRETACION 497
Esta cuantificacin se utiliza en el diagnstico de hipotiroidismo primario cuando puede haber insuficiencia tiroidea por algn problema ntriseco y se utiliza para distinguir el hipotiroidismo primario del secundario al determinar el nivel de TSH : la TSH se eleva en el hipotiroidismo primario y circulatorio real
disminuye en el hipertiroidismo. Esta constituye la prueba nica ms sensible del hipotiroidismo primario.
FUNDAMENTO
El principio del anlisis asocia el mtodo inmunoenzimatico por sandwich a una deteccin final de fluorescencia (ELFA). El cono de uso nico sirve a la vez de fase slida y de sistema de pipeteo. Los otros reactivos de la reaccin inmunolgica estn listos para su uso y previamente repartidos en el cartucho. Todas la etapas instrumento. de la prueba son constituidas por efectuadas automticamente una sucesin de por el de Estn ciclos
aspiracin/expulsin del
medio de reactivo. La muestra es tomada y luego
trasferida a las cubetas que contienen el anticuerpo anti-TSH marcado con fosfatasa alcalina (conjugado). La mezcla muestra/ conjugada es aspirada y luego expulsada varias veces por el cono .
498
Durante la etapa final de revelado, el substrato (4-Metil-umbeliferil-fosfato) se aspira y luego se rechaza sobre el cono; la enzima del conjugado cataliza la de la seal de del antgeno reaccin de hidrlisis de este sustrato en un producto ( 4-Metil-umberiferona) cuya fluorescencia emitida se mide a 450 nm. El valor fluorescencia resultados es inversamente proporcional a la concentracin automticamente en relacion
especifco presente en la muestra. Al final de la prueba, el instrumento calcula los con una curva de calibracin memorizada y despus se imprime.
DESARROLLO DE LA TCNICA (Biomerieux) 1. Sacar nicamente los reactivos necesarios, dejarlos 30 minutos a temperatura ambiente antes de usarlos. 2. Utilizar un cartucho TSH y un cono TSH para cada muestra, control o calibrador a ensayar. Comprobar que se cierra la bolsa de conos despus de cada uso. 3. Teclear o seleccionar TSH en el instrumento para introducir el cdigo de la prueba. El calibrador se identificar obligatoriamente como S1 y debe analizarse en triple. Si debe probarse el control, ser identificado como C1. 4. De ser necesario, clarificar las muestras mediante centrifugado.
499
5. Homogeneizar el calibrador , el control y las muestras con un agitador tipo vortex.. 6. Distribuir 200 L de calibrador , de muestra o de control en el pocillo de muestra. 7. Colocar en el instrumento los conos y los cartuchos. Comprobar la correcta concordancia de cdigos (colores y letras) entre el cono y el cartucho. 8. Iniciar el anlisis. Todas las etapas son controladas automticamente por el aparato. Los resultados se obtienen en 40 minutos aproximadamente. 9. Al final del anlisis, retirar los conos y los cartuchos del instrumento. 10. Eliminar los conos y los cartuchos usados en un recipiente apropiado.

60 cartuchos TSH 60 conos TSH Control TSH 1 X 3 ml(lquido) STR SPR C1 Listos para su empleo. Listos para su empleo. Conos sensibilizados con anticuerpos monoclonales de cordero anti-T3. Listos para su empleo. Suero humano + L-triiodotironina + azida sdica 1 g/l. El intervalo de confianza en pool/L est indicado en la tarjeta MLE con la indicacin: control C1 Dose Value Range Listos para su uso Suero humano + L-triiodotironina + azida sdica 1 g/l. La concentracin en pool/l est indicada en la tarjeta MLE con la indicacion : Calibrator (S1) Dose Value. El intervalo de confianza en valor de fluorescencia relativa est indicada en la tarjeta MLE con la indicacin : Calibrator (S1) RFV Range Listo para su uso . Suero de ternero+ azida sdico 0.9 g/l Ficha de especificaciones que contiene los datos de fbrica necesarios para la calibracin de la prueba.
Calibrador TSH 1 X 2 ml( lquido)
S1
Diluyente TSH 1X3 ml(lquido) 1 Tarjeta MLE 1 Ficha
R1
500
CONSERVACION DE LOS REACTIVOS Conservar el equipo VIDAS TSHa 2-8 C . No congelar los reactivos. Dejar a 2-8 C los reactivos no utilizados. Al abrir el equipo, comprobar la integridad de las bolsas de conos y que cierran correctamente. En caso contrario, no utilizar los conos. Despus de cada uso, cerrar bien la bolsa con su deshidratante para conservar, la estabilidad de los conos y llevar de nuevo todo el equipo a 2-8 C. Todos los componentes son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del equipo cuando son conservados en las condiciones exigidas.
BIBLIOGRAFIA
2.
3.
501
4.
UREA
INTRODUCCION La urea es el principal producto de excrecin del catabolismo proteco. Se forma en el rin a partir del bixido de carbono y amoniaco, mediante un proceso bioqumico que se conoce con el nombre de ciclo de la ornitina y que puede esquematizarse como sigue: Ornitina + CO2 + NH3 Citrulina + NH3 Arginina + H2O
arginasa
citrulina arginina ornitina + UREA
(La ornitina, la citrulina y la arginina son cidos aminados) Una vez elaborada la urea pasa a la sangre y es excretada por el glomrulo, siendo reabsorbida en parte por los tmulos. La urea sangunea puede aumentar por otras razones adems de excrecin renal insuficiente.
502
El trmino que se emplea para designar un aumento de la cifra sangunea de urea es azoemia; la palabra uremia designa el trastorno clnico constituido por insuficiencia renal con azoemia. La urea no es la sustancia que produce todas las manifestaciones de la uremia. A consecuencia da la gran capacidad de los riones para compensar un posible dao, puede existir una enfermedad renal bastante importante antes de que aparezca azoemia. INTERPRETACION CLINICA Prerrenal: Son los estados en los cuales se altera la circulacin por rin: choque quirrgico, enfermedad de Addison, insuficiencia cardiaca derecha, hemorragia en especial del tubo digestivo y catabolismo de sangre. Renal: enfermedad de Bright, etc. Posrenal: obstruccin de las vas urinarias, como en la hipertrofia prosttica, etc.
FUNDAMENTO DE LA TCNICA VER LA METODOLOGIA DE NITROGENO DE UREA
503
BIBLIOGRAFIA
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BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995. ANGEL M. G, ANGEL R. M. INTERPRETACIN CLINICA DEL LABORATORIO, QUINTA EDICIN EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA, 1996.
2.
3.
504
4.
V.D.R.L.
INTRODUCCION El agente etiolgico de la sfilis es Treponema pallidum, es un organismo delgado en forme de espiral, que mide 6 a 15 de longitud pero slo 0.2 de grosor. La sfilis se adquiere en general por va venrea. Despus de un perodo de incubacin variable de 10 das a varios meses aparece la lesin primaria o chancro. Esta empieza como un ndulo solitario, pequeo, que con su crecimiento y necrosis del epitelio provoca la aparicin de una lcera indolora; no hay pus a menos que la lesin se sobreinfecte por otras bacterias. Estas lesiones aparecen en los genitales externos y en la mujer pueden existir lesiones en la vagina y cerviz. Durante la fase secundaria pueden afectarse sistema nervioso central, ojos, huesos e hgado, las lesiones se resuelven espontneamente y entra en la fase latente. Una tercera parte de los individuos con sfilis latente desarrollaran la sfilis terciaria: gomas, sfilis cardiovascular o neurosfilis. Las gomas son reas localizadas de inflamacin granulomatosa que se pueden hallar en cualquier rgano o tejido del cuerpo. Las manifestaciones de la neurosfilis son muy variables y dependen de si la afeccin es meningovascular o parenquimatosa.
505
Los anticuerpos contra sfilis comienzan a aparecer en la sangre entre cuatro y seis semanas despus de la infeccin. Las pruebas no treponmicas (inespecficas) determinan la presencia de reagina, que es un anticuerpo no treponmico dirigido contra los antgenos de cardiolipina. Estas pruebas incluyen el VDRL (prueba de floculacin). En estas el resultado positivo confirma la pr5esencia de sfilis, pueden ser negativas en los casos de sfilis tarda y existen falsas positivas biolgicas. INTERPRETACION CLINICA Un resultado positivo se debe confirmar determinando anticuerpos treponmicos especficos, pudiendo ocurrir: Prueba treponmica positiva: compatible con sfilis activa, sfilis en tratamiento, sfilis tratada inadecuadamente o reinfeccin. Prueba treponmica negativa: falso biolgico positivo en pruebas reagnicas. Un resultado negativo puede significar ausencia de infeccin o realizacin de la prueba antes de la respuesta inmunolgica.
FUNDAMENTO DE LA TCNICA La prueba de RPR es una prueba de floculacin no treponmica macroscpica que es utilizada para detectar y cuantificar reaginas , un anticuerpo antilipdico encontrado en el suero o plasma de personas con sfilis y ocasionalmente en personas con infecciones agudas o crnica sen otras condiciones aparte de la sfilis.
506
El antgeno utilizado en el equipo es una modificacin del antgeno VDRL el cual contiene micropartculas del carbn para realzar la diferencia entre un resultado positivo y negativo. Si una muestra contiene reaginas, ocurre la floculacin con las partculas de
carbn contenidas en la suspensin del antgeno, la cual aparece como un acmulo negro. Las muestras no reactivas se observan con un ligero color gris.
DESARROLLO DE LA TCNICA Prueba cualitativa: 1. 2. Lleve a temperatura ambiente la suspensin del antgeno de RPR, los controles y las muestras. Tome la pipeta/agitador del extremo sellado. Al tiempo que oprime y mantiene presionado dicho extremo, coloque la pipeta dentro de la muestra. Suelte para permitir que la pipeta aspire un poco de muestra. 3. Sostenga en posicin vertical la pipeta /agitador directamente sobre un crculo de la tarjeta de prueba y coloque una gota de muestra sobre esta rea. 4. Utilizando el extremo plano de la pipeta/agitador, extienda la muestra para cubrir 5. el total de la superficie del crculo. Deseche la pipeta/agitador. Repita el mismo procedimiento para cada muestra. Agite el frasco de la suspensin del antgeno antes de utilizarlo. Sostngalo en posicin vertical y dispense varias gotas en la tapa del
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frasco para asegurarse de que el paso por la guja es correcto. No limpie la aguja. Coloque una gota de la suspensin del antgeno sobre cada muestra. No extienda. 6. 7. 8. Agite por 5 minutos a 160rpm en un rotador mecnico. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agtela breve y suavemente. Lea microscpicamente bajo una lmpara de luz intensa.
RESULTADOS CUALITATIVOS REACTIVO: Flculos grandes o pequeos en el centro o la periferia del crculo de prueba. DEBIL REACTIVO: Presencia de floculos pequeos pero definidos. NO REACTIVO: Apariencia lisa, uniforme pero sin flculos visibles. Los resultados positivos deben ser confirmados utilizando procedimientos cuantitativos.
PROCEDIMIENTO CUANTITATIVO: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Seleccione los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa. Colocar en una gradilla cuatro tubos y numerarlos. Agregar a cada uno de ellos 0.5 ml de solucin salina. Depositar 0.5 ml de suero problema en el tubo 1 y mezclar. Pasar 0.5 ml del tubo No. 1 al tubo No. 2 y mezclar. Continuar esta operacin hasta el tubo No. 4. Depositar 50 l de cada una de las diluciones sobre anillos diferentes de la placa de reaccin. Extienda sobre el total de la superficie de cada crculo donde se colocaron las diluciones. 8. Aadir una gota de la suspensin del antgeno previamente resuspendido, exactamente sobre cada una de las gotas de las
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diluciones anteriores utilizando el frasco gotero al cual se le ha insertado la aguja sin bisel. 9. 10. 11. Agite por 8 minutos a 100 rpm en un rotador mecnico. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agtela breve y suavemente. Leer el resultado macroscpicamente.
RESULTADOS CUANTITATIVOS La ltima dilucin que contenga agregados macroscpicos indica el ttulo de la muestra. Tubos No 1 2 3 4 Dilucin del suero 1:2 1:4 1:8 1:16 Resultado POSITIVO POSITIVO POSITIVO NEGATIVO
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Suspensin de Antgeno RPR. Suspensin de Cardiolipina, conteniendo micropartculas de carbn activado. Control Positivo RPR. Control lquido estabilizado, reactivo con antgeno RPR Control Negativo RPR. Control lquido estabilizado, no reactivo con antgeno RPR.
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CONSERVACION DE LOS REACTIVOS La suspensin del antgeno siempre debe refrigerarse cuando no se utilice. El antgeno es estable sin abrir y almacenado entre 2-8C, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
MUESTRAS Pueden ser sueros inactivados o activados o plasmas colectados con EDTA como anticoagulante.
BIBLIOGRAFIA
1. BERNARD HENRY, JOHN, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICOS por el laboratorio, NOVENA EDICION, EDITORIAL MASSON SALVAT MEDICINA.1994 AEFA, FERNANDEZ PARDO, E. GARCA MERMEJO, I. HERRERA TREVILLA, P. MORALES, ELIPE, V. AEBM, ALVAREZ VZQUEZ, C. ALCAIDE MARTN, M.J. DORADO DELGAD, C. GONZLEZPERAMATO, A. NOMENCLATOR DE LABORATORIO CLINICO, PRIMERA EDICIN, INTERAMERICANA-MG GRAW-HILL, 1995.
2.
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3.
4.
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ANTICUERPOS VS CISTICERCO EN LCR O SUERO

DESARROLLO DE LA TECNICA (IVD Research, Inc.) (Cisticercosis FERUM Microwell ELISA)

MUESTRAS Suero Liquido cefalorraqudeo obtenida por un medico

CIDO RICO EN SUERO

Alantoina + CO2 + 2 H 2O2 cido rico + O2 + 2 H 2O uricasa

peroxidasa 2 H 2O2 + 4 A min oantipina + DCFS Quinonai min a + 4 H 2O

DESARROLLO DE LA TECNICA ACIDO URICO (BioSystems)

1. Atemperar a temperatura ambiente. 2. Pipetear en tubos de ensayo:

Agua destilada Patrn cido rico Muestra Reactivo (A)

Blanco 12.5L 500 L

Patrn 12.5L 500 L

Muestra 12.5L 500 L

CIDO RICO EN ORINA

FUNDAMENTO DE LA TECNICA (BioSystems)

Alantoina + CO2 + 2 H 2O2 cido rico + O2 + 2 H 2O uricasa

peroxidasa 2 H 2O2 + 4 A min oantipina + DCFS Quinonai min a + 4 H 2O

INTERPRETACION CLINICA Incrementos de albmina se observan en procesos de deshidratacin (pseudohiperalbuminemia). 33

Valores de referencia: Normal: 3.5 5.0 g/100 ml Orina 24 horas.

DESARROLLO DE LA TECNICA ( SPINREACT )

1) Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.

2) Pipetear en una cubeta:

R (l) Patrn (l) Muestra (l)

Blanco 500 L ---

Patrn 500 L 2.5 --

Muestra 500 L -2.5

3) Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (15-25C).

R: Verde bromocresol pH 4.2

ALBUMIN CAL : Patrn primario acuoso de Albmina 5 g/dL

Valores de referencia: Normal: 30 300 mg/24 HRS. Orina 24 horas.

DESARROLLO DE LA TECNICA ( SPINREACT )

5) Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.

6) Pipetear en una cubeta:

R (l) Patrn (l) Muestra (l)

Blanco 500 L ---

Patrn 500 L 2.5 --

Muestra 500 L -2.5

7) Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (15-25C).

COMPOSICION DE REACTIVOS R: Verde bromocresol pH 4.2 50 mmol/L

ALBUMIN CAL : Patrn primario acuoso de Albmina 5 g/dL

MUESTRAS Orina centrifugada de 24 hrs.

AMIBA EN FRESCO Y CITOLOGIA DE MOCO FECAL

Lugol para la observacin de los quistes o trofozoitos Cubreobjetos.

bI-G2-5 + G2-5-pNP glucosa-pNP-glucsido

bl-GpNP = pNP/ maltchepkaosido bloqueado

DESARROLLO DE LA TECNICA ( RANDOX)

Tampn: Cloruro clcico Cloruro sdico

5.0 mmol/l 5.0 mmol/l

Sustrato: Glucoamilasa pN-maltoheptaosida bbq -glucosidasa

5 U/ml 0.8 mmol/l 12 U/ml

MUESTRAS Suero o plasma heparinizado.

bl-GpNP = pNP/ maltchepkaosido bloqueado

DESARROLLO DE LA TECNICA (RANDOX)

1. Diluir la orina 1:2 con solucin NaCl 0.9 % . 2. Pipetear en la cubeta

COMPOSICION DE LOS REACTIVOS

Tampn: Cloruro clcico Cloruro sdico

5.0 mmol/l 5.0 mmol/l

Sustrato: Glucoamilasa pN-maltoheptaosida bbq -glucosidasa

5 U/ml 0.8 mmol/l 12 U/ml

DESARROLLO DE LA TECNICA ( IMMUNOSTICS)

COMPOSICION DE LOS REACTIVOS

ANTICUERPOS VS HIV TIPO 1 Y 2

NOTA: Los resultados son estables durante 5-10 minutos.

CONSERVACION DE LOS REACTIVOS

ANTICUERPOS VS BRUCELA (ROSA DE BENGALA)