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Hemocultivo - Microbiología Medica

Hemocultivo - Microbiología Medica

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UNAM, FES Zaragoza. Microbiología Médica - Hemocultivo. Equipo 1.
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Alumno

:
Pérez Pérez José Manuel

Asesor:
QFB Ma. De las Mercedes Zamudio Durán

Definiciones
Bacteremia
• Presencia de bacterias en sangre Transitoria • Manipulación de tejidos • Abscesos, forúnculos, celulitis, cepillado, estreñimiento. • Instrumentación sobre superficies mucosas • Extracción dentaria, caterización uretral Intermitente

• Abscesos intraabdominales o viscerales no drenados • Osteomielitis, artritis, meningitis, neumonía
Continua

• Endocarditis bacteriana

Sindrome de Respuesta inflamatoria sistemica (SIRS)
• Por lo menos dos manifestaciones • 1) Fibre mayor a 38°C o hipotermia menor a 36°C. 2) Frecuencia cardiaca mayr a 90 cpm; 3) Frecuencia respiratoria mayor a 20 rpm, o pCO2 menor a 32 mm de Hg. Leucocitosis mayor a 12000 o menor a 4000/mm3; o mas de 10% de formas inmaduras. Shock septico • Situación de sepsis asociada a hipotención, pese a reposición de fluidos Septicemia • Sindrome severo asociada a infección aguda y falla orgánica relacionada con mediadores del tipo citoquinas en circulación Piemia • Infección por pyogenos. S pyogenes. Toxiemia • Presencia de bacterias en sangre

PRINCIPALES AGENTES DE BACTEREMIA

Endocarditis • Afecta • Endocardio y valvulas Causantes

• Biota normal de la boca y tracto gastronistestinal • Streptococcus del grupo viridans • Staphylococcus aureus (drogadictos)
Tipos • Endocarditos aguda • Valvulas normales o lesionadas con progreso rápido y mortal (S. aureus) • Endocarditis subaguda (cronica) • Válvulas anormales, con deformacions congénitas y lesiones reumaticas o escleroticas (S. viridans) Secuelas • Insuficiencia renal • Embolias en cerebro y riñon • Insuficiencia valvular aguda

Endocarditis infecciosa

Endocarditis
Video que muestra cómo se observa una válvula normal y una con endocarditis y cuerpos vegetativos.

¿Qué es un hemocultivo?

Entorno de Infección
IMPORTANCIA y ETIOPATOGENIA • Sepsis: 20 y 80% de mortalidad en UCI

• Nosocomial>Comunitaria Naturaleza de la bacteriemia • Polimicrobiana>Monomicrobiana Enfermedades subyacentes • Neoplasias Hematológicas y no hematológicas, diabetes, insuficiencia renal en etapap de diálisis, cirrosis hepática, SIDAComplicaciones de la Sepsis • Shock Procedimientos invasivos

Tratamiento antimicrobiano
• Tratamiento excesivo o inadecuado • Fármacos inmunosupresores

Microorganismo responsable
• Enterococcus, gramnegativos y hongos Edad • Mayores de 40 años, recién nacidos Foco infecciosos • Genitourinario>respiratorio>absesos

• Catéteres, cirugías del tracto digestivo y genitourinario, endoscopia.

Clasificación de Hemocultivos
Rapides en detección, sensibilidad, mejora en las bacterteremias y terapia antimicrobiana. Botellas con diverversos medios: (aeróbicos, anaeróbicos, hongos, micobacterias con resinas). Detección de productos del metabolismo (CO2) mediante técnicas radiometricas, espectrofotometricas, fluorométricas, y/o colorimetricas. El computador relaciona los indices del crecimiento bacteriano. Micoorganismo intracelulares y cuantificación. Hongos, Micobacterias. SPS: Anticoagulante Saponina: Agente lítico de eritrocitos y leucocitos Polipropilenglicol: Antiespumante Hemocultivos cuantitativos. Diagnóstico de bacteremia relacionada a Catéter Venoso Central (CVC) Polianetol Sulfonato de Sodio (SPS) a 0.025-0.05% Para: Peptostreptococcus, Gardnerella, y algunas cepas de Neisseria spp agregar 1.2% de Gelatina Mayor riesgo de contaminación. Incubación desición del microbiologó basado en el diagnóstico clínico.

Automatizados

Semi-automatizados Lisis-Centrifugación

Manuales Monofásico Bifasico

Clasificación de los hemocultivos.
Según tipo de paciente, toma de muestra, tipo de microorganismo y metodología.

Según el tipo de Paciente

Según toma de la Muestra

Según el Tipo de Microorganismo

Según la Metodología

Pediátrico

Central

Bacterias aeróbicas

Cerrado o Abierto

Adulto

Periféricos Bacterias anaeróbicas

Manuales

Inmunocompetente Bacterias Fastidiosas Inmosuprimido

Semi-automatizados

Automatizados
Micobacterias

Hongos

CLASIFICACIÓN DE SISTEMAS DE HEMOCULTIVO

MANUEL

Clasificación de Hemocultivos FUNDAMENTO DE ALGUNOS AUTOMATIZADOS
BACTEC SERIES 9000 Fluorescencia. Reacción del CO2 con material fluorescente al fondo es proporcional a la luz absorbida. Monitoriea cada 10 minutos.

BACTEC 9000 Series Fluorescence Becton Dickinson BD

BacT/Alert Colorimetria Biomerieux

Reacción del CO2 con material colorimetrico en el fondo (gas permeable) con vire de verde a amarillo. BACTEC 13A - RADIOMETRICO Sustratos marcados con C14, la cantidad de CO2 (C14) es medida por su ionización y transformada a un numero, proporcial al crecimiento bacterinano

Bactec 13A Radiometrico Becton Dickinson BD

Arrow Process

Why use graphics from PowerPointing.com?

IMPACTO DE HEMOCULTIVOS AUTOMATIZADOS

Sensibilidad y velocidad de detección Mejora en diagnóstico y mejora en el trabamiento

Disminución de carga de trabajo y contaminación

Estadistica de positividad y contaminación, control de bacteremias intrahospitalarias

Dismunución de horas/hombre Material de resiembre Disminuye riesgo de cortopunzantes

CLINICO

MICROBIOLOGICO

EPIDEMIOLOGICO

ECONOMICO

Costo de 2-4 veces el convencional Costo equipo
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MEDIO “RUIZ CASTAÑEDA” SISTEMA BIFASICO
Se ideo para el diagnóstico de Brucelosis. Medio para el cultivo de bacterias como estafilococos, pseudomonas, E. coli, Salmonella, Neumococo, a partir de muestras sanguíneas y líquido céfalo raquídeo. Observar crecimiento en medio solido sin abrir el frasco Evita contaminación y riesgo de infección. •Fase solida: Agar Soya Tripticasa (AST) •Fase líquida: Caldo Soya Tripticasa •SPS: 0.025% •Cisteína: 0.025% •Sacarosa: 10%

MEDIO LISIS-CENTRIFUGACIÓN (ISOLATOR)

Concentración por sedimento. Diagnóstico de bacteremia relacionada a Catéter Venoso Central (CVC) Micoorganismos intracelulares y cuantificación. Hemocultivos cuantitativos. •SPS: Anticoagulante •Saponina: Agente lítico de eritrocitos y leucocitos •Polipropilenglicol: Antiespumante Micobacterias y Hongos (25 – 50%)

PROCEDIMIENTO EN LA TOMA DEL HEMOCULTIVO

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• Recolección y Transporte

•Número de Hemocultivo
•Tiempo e intervalo de toma de muestras •Volumen de sangre por frasco

•Relación Sangre-Caldo •Medios de cultivo y Anticoagulante
•Duración de la Incubación

TOMA DE MUESTRA
Intervalo de la toma de muestra
Volumen de la muestra

• 2 horas a 30 minutos antes del pico febril. (puede • Bacterias en sangre 1 a 10 UFC/mL ser precedida por escalofríos) • Adolescentes y adultos: 10 mL • Si no de puede predecir. • Recien nacidos: 1 -2 mL • Tomar de forma arbitraria 2 hemocultivos a • Lactantes (1 mes – 2 años): 2-3 mL intervalos de 30 a 90 minutos (Endocarditis) • Mayores de 2 años: 5 mL • Tomar 2 Hemocultivos al mismo tiempo de diferente sitio de punción Relación Sangre-Caldo de Cultivo Método de Obtención de Muestra

• del • Periférica (venosa o arterial) y ser la primera1:5 a 1:10 • examen, el catéter se coloniza a las 48 h de Mayor: Dilución del microorganismos instalado. • Menor: inhibición bactericida del suero Preparación de la Piel (CRITICO)
Inoculación de las Botellas • Lavado de piel (Pavidona Yodada) • Desinfección con Tintura de Yodo o Clorhexidina alcohólica y remoción con alcohol al 70% • Desinfectar el tapón de las botellas (alcohol 70%) • Sistemas manuales hay mayor contaminación • Guantes estériles

Numero de Hemocultivos
• 2 a 3 H apropiados (95% de bacteremias) • 2 H para endocarditis en 24h (98%) sin Tx antibiótica, si los primeros son negativos tomar otro set a las 24-48 h. • Antes de la siguiente administración antibiótica • 3-5% contaminación • Más de 4 hemocultivos provoca anemia al paciente Hospitalizado.

Medios de cultivo
• Medios de Cultivo • Aeróbicos y anaeróbicos facultativos • Caldos: Soya-Tripticasa, Columbia, Brucela, BHI, peptona complementada • Sistemas bifasicos: Setpi-Chek (Becton Dickinson) • Lisis centrifugación • Sistemas automatizados: Bactec 6A, 16A, 26 Plus, PEDS Plus (Becton Dickinson). BacT/Alert (Biomeriuoux)

Medios de Cultivo • Anaerobios facultativos • Líquidos: BHI anaerobios, Caldo Tioglicolato • Automatizados: Bactec 7A, 17A, litico • Hongos • Isolator y Bactec para hongos • Micobacterias. • Isolator, Bactec 13A Anticoagulante y Aditivos • Anticoagulante: Polyanetol Sulfonato de Sodio • 0.025 – 0.05% • Inhibe: • Complemento, fagocitosis, antibióticos (amino glucósidos), lisozimas • Gelatina: 1.2% por efecto inhibitorio PSS • Neisseria spp. Peptostreptococcus spp,

Gardnerella sp.
• Estabilizadores osmóticos (pared deficiente) • Sacarosa, manitol (10%) • Resinas • Inhibe antibióticos • Aditivos y otros • Piridoxal (B6) Streptococcus viridans • L-cistenia

Hemocultivo: procedimiento de toma

Hemocultivo Parte I
Video que muestra cómo se toma la muestra para un hemocultivo, cuidados y precauciones. Las botellas pertenecen al sistema BacT/ALERT (aerobio y anaerobio).

Incubación y seguimiento manual
Incubación
Aspecto macroscopico Hemólisis Microoganismo asociado Observación macroscopica Streptococus, Staphylococcus, Listeria spp. Clostridoum, Bacillus spp. Bacilo gramnegativo aerobio, Stpaphylococcus, Bacteroides spp. Bacilo gramnegativo aerobio, anaerobios Pseudomonas spp., Bacillus spp., levaduras Staphylococcus aureus Staphylococcus, Streptococcus.

Turbidez

Formación de gas

TA 25°C maximo 2 horas. Incubar a 35°C. Nunca refrigerar Manual: Observación díaria Automatizado: Por ordenador

Formación pelicula

Coágulo Colonias visibles

Hemocultivo, sistema automatizado BACTEC™

Hemocultivo parte II
Video que muestra cómo se procesa la muestra en un hemocultivos automatizado BACTEC PEDS PLUS/F después que el equipo detecta que es positivo.

INTERPRETACION
Hemocultivo positivo • Interpretación a la luz del cuadro clínico. • Hemocultivo positivo en diferente sitio de punción. • Bacterima verdadera (90%) • S. aureus, > Bateremia intrahosp. • Enterobacterias • S. pneumoniae • Micobacterias, • Hongos levaduriformes
Contaminantes • • • •

Hemocultivo CVC • Cultivo positivo en Hemocultivo y Catéter para el mismo mo. <15 UFC
Falsos posivos

• Hemocultivos positivos para el mismo microogranismo en una toma • Indadecuada desinfección de piel • Indadecuada desifección del frasco (tapón)
Hemocultivos negativos • Virus • Endocarditis no infecciosa • Microoganismos de dificil desarrollo • Cultivos al final de un proceso crónico • Endocardoitis causada por Chlamidia

Corynebacterium spp. Bacillus spp. Propionebacterum acnes. Staphylococcus coagulasa
negativa.

spp., Rickettsia spp. Coxiella buernetti, Legionella pneumophila.

SELECCION DE MEDIOS DE CULTIVO
• Recolección y Transporte

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GRAM

Cocacea grampositivo Bacilo grampositivo Cocacea gramnegativo
Bacilo gramnegativo

ASC5% AC X X X X X X

MAC

CNA X X X X

ANA X X X X

BRUC X X

X X

ASC: Agar Sangre de Carnero; AS: Agar Chocolate; CNA: Agar Columbia Cistin-ácido nalidixico BRUC: Agar Vrucela

PROCEDIMIENTO DE PRACTICA

• Desinfectar con yodo 3% una zona de aproximadamente 2 cm de diámetro sobre la piel de la vena escogida. • Eliminar con alcohol al 70% el exceso de yodo. • Realizar punción extrayendo 3mL de sangre y depositarlos inmediatamente el frasco del medio de cultivo.

• Agitar lentamente el frasco por unos segundos e incubar a 37°C por 30 min en posición horizontal , para hacer contacto con la fase solida
• Enderezar el frasco e incubar a 37°C y observar cada 24 hrs, si hay crecimiento en fase solida turbidez en la liquida por una semana. Continuar la observación semanalmente • 7. Si hay cambios en el medio, realizar frotis y teñir con la técnica de Gram y hacer resiembras para aislamientos de m.o en A.S, EMB Y Staph 110 e incubar a 37°C por 24 hrs. • Hacer pruebas especiales según la morfología colonial y microscópica. • Antibiograma una vez identificado el m.o

Referencias:
Koneman E. Diagnóstico microbiológico. 5ª edición. Editorial médica panamericana. México. 2003. García C, Pérez C. Hemocultivos. Instituto de Salud de Chile. Pontificia Universidad Católica de Chile: 2003 [LINK] Macedo M, Algorta G, Vola M, Pardo L. Bactermias y sepsis. Endocarditis. Instituto de Salud. Facultad de Medicina; Uruguay: 2006. pp 197-211 [LINK]
Sitios visitados. BIOMERIEUX. BacT/Alert [LINK] Becton Dickenson (BD) Bactec™ [LINK]

Material audio-visual Introduction to Bloodcultures. Dalhousie University Faculty of Medicine. [LINK] Lancashire Teaching Hospital. NHS. The University of Manchester [LINK01], [LINK02], [LINK03] Blood culture. BlackBearl [LINK] Use of the BacT/ALERT® 3D microbial detection system in the biopharmaceutical industry [LINK] Fail mitral valve due to inefective endocarditis [LINK] How the hearth animation video [LINK] Mitral Valve Prolapse and Mitral Regurgitation [LINK]

Diseño Designado EK790M: http://ark461.wordpress.com

ANCIENT REPOSITORY KNOWLEDGE 461 Pérez Pérez José Manuel
Diseño Designado EK790M: http://ark461.wordpress.com

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