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GASTROENTERITIS AGUDAS VIRALES

RVT 2023

ROTAVIRUS
 Sedenomina “rotavirus” a un grupo de
virus ARN, que producen infecciones
intestinales provocando como patología
más relevante, diarrea aguda.

 Fue descubierto por Bishop y col. En 1973

al examinar biopsias de duodeno de niños
con gastroenteritis mediante el
microscopio electrónico.
 La infección por rotavirus es responsable de alrededor de
600.000 muertes anuales y aproximadamente 40% de las
hospitalizaciones por diarrea en menores de 5 años de
edad en todo el mundo, lo que la convierte en la causa
más importante de diarrea en este grupo de población.

 En países en desarrollo, la tasa de infección más alta

ocurre entre los 3 y 11 meses de vida y en los países
desarrollados durante el segundo año de vida.
°Los rotavirus derivan su nombre del latín rota:
rueda.
°Tienen una apariencia característica parecido a una
rueda, cuando es visualizado mediante microscopio
electrónico.
°Son virus icosaédricos, no envueltos
°En su cápside se observan 3 capas (externa, media
e Interna).
°Pueden llegar a medir 76,5 nm de diámetro.
 Pertenece a la familia Reoviridae.
 Virus Ácido Ribonucleico (ARN) de doble cadena, en 11
segmentos.
 El género incluye 7 grupos principales de rotavirus
identificados: A, B, C, D, E, F, G (VP6)
 Solo los grupos A, B y C infectan los seres humanos,
siendo el grupo A el más importante.
 El grupo A es el más común y el más esparcido, causando
el 90% de las infecciones.
GRUPOS SEROLOGICOS DE
ROTAVIRUS (A-G)
GRUPO A SON LA CAUSA MAS
COMUN DE DIARREA EN NIÑOS
MENORES DE 2 AÑOS

GRUPO B VINCULADO A BROTES DE

A ,B, C INFECTAN DIARREA EN CHINA
AL HOMBRE
GRUPO C RELACIONADOS CON
BROTES DE DIARREA EN ADULTOS
EN ASIA. EUROPA Y AMERICA
LATINA.
El virión está formado por seis
proteínas estructurales (VP):

VP1,
VP2,
VP3,
VP4,
VP5 y
VP6.
Proteínas estructurales
 Proteínas de la Nucleocapside: VP1-VP2-VP3.
Replicación ARN viral.
 Proteína capa intermedia: VP6 Contiene
determinantes antigénicos.
 Proteína capa externa: VP4 - VP7. Infectividad
viral.
 VP1: situada en el núcleo del virus y es una RNA polimerasa.
En una célula infectada produce los transcritos de ARNm para
sintetizar las proteínas víricas y duplica el genoma para
producir nuevas partículas víricas.

 VP2: forma parte de la capa más interna del virión y va unida

al genoma de ARN activando su replicación.

 VP3: forma parte de la capa interna del virión y es un enzima

transferasa. Esta estabiliza el extremo 5' del mensajero e
impide que sea atacado por nucleasas, enzimas que degradan
ácidos nucleicos.
 VP4: situada en la parte externa del virión y forma
una protuberancia, que es capaz de unirse a los
receptores celulares de la célula para entrar en su
interior. La estructura de VP4 determina la virulencia
del virus.

 VP6: proteína principal de la cápside. Es altamente

antigénica y puede usarse para determinar la especie
del rotavirus. Se usa en los ensayos clínicos para
determinar la existencia de infección por rotavirus A.

 VP7: glicoproteína que forma parte de la capa externa

del virión. Aparte de sus funciones estructurales,
determina el tipo G de la cadena, y junto con VP4,
está implicada en la respuesta inmunitaria al virus.
PROTEINAS NO
ESTRUCTURALES
 ESTAS PROTEINAS QUE VAN DE NSP1 A NSP6
 NO FORMAN PARTE DEL VIRION,
 SE SINTETIZAN EN LA CELULA DURANTE EL
CICLO REPLICATIVO DEL VIRUS
TIENEN FUNCIONES COMO:
1. CONTROL DE LA SINTESIS DE PROTEINAS
CELULARES Y VIRALES,
2. CON LA REPLICACION DEL GENOMA,
3. CON EL EMPAQUETAMIENTO DE LOS GENES
VIRALES
4. CON LA MADURACION DE LA PARTICULA VIRAL
EN EL INTERIOR DE LA CELULA.
Hay seis más no estructurales (NSP),
producidas únicamente en las células
infectadas:
 NSP1 es transcrita por el gen 5 y es una proteína no estructural de unión a
ARN.

 NSP2 es una proteína de unión a ARN, que se acumula en inclusiones

citoplasmáticas (viroplasma) y es necesaria en la replicación del genoma.

 NSP3 está unida a ARNm en las células infectadas y es la responsable de la

finalización de la síntesis proteica celular.

 NSP4 es una enterotoxina viral que induce diarrea y fue la primera

enterotoxina viral que se descubrió.

 NSP5 está codificada por el segmento 11 del genoma vírico del rotavirus A, y
en las células infectadas se acumula en el viroplasma.

 NSP6 es una proteína de unión a ácido nucleico es codificada por el gen 11, en
un marco abierto de lectura desfasado.
 Genes y proteínas del rotavirus

Segmento Tamaño Peso

del ARN (pares de Proteína molecular Localización Función
(gen) bases) kDa

Vértices del ARN polimerasa ARN-

1 3302 VP1 125
núcleo dependiente

Forma la capa
Estimula la RNA replicasa
2 2690 VP2 102 interna del
viral
núcleo

Vértices del Enzima guanilil

3 2591 VP3 88
núcleo transferasa de ARNm

Protuberancias
4 2362 VP4 87 Atraque celular, virulencia
superficiales

No es esencial en el
5 1611 NSP1 59 No estructural
crecimiento del virus

Estructural y antígeno
6 1356 VP6 45 Cápside interna específico de cada
especie

Aumenta la actividad del

ARNm viral y finaliza la
7 1104 NSP3 37 No estructural
síntesis de proteínas
celulares.

NTPasa involucrada en el
8 1059 NSP2 35 No estructural
empaquetamiento de ARN

1 Estructural y
VP7
9 1062 2 38 y 34 Superficie neutralizadora de
VP7
antígenos.

10 751 NSP4 20 No estructural Enterotoxina

11 667 NSP5 NSP6 22 No estructural Moduladora de la unión del ARNsc y ARNdc

CICLO DE MULTIPLICACIO DEL
ROTAVIRUS
 Se une a un receptor de membrana y luego penetra al
interior de la célula y pierden la capa externa. (VP4)
 Entonces se activa la trascripción. (VP1-VP2)
 ARNs recién sintetizados cumplen dos funciones:
(VP3)
A) ARNs mensajeros para traducción de proteínas
viral.
B) Templados para la síntesis de los ARNs
complementario para replicación del genoma.
 Adquieren la capa externa al gemar a través de la
membrana del reticulo endoplasmico.
 Finalmente los viriónes maduros son liberados de la
célula por lisis de la misma.
CICLO DE REPLICACIÓN DEL
ROTAVIRUS
Patogénesis viral
VIA DE ENTRADA: ORAL

VIA DE TRANSMISION: FECAL-ORAL

POSIBLEMEMTE VIA
RESPIRATORIA

ORGANO BLANCO: INTESTINO DELGADO

(MICROVELLOSIDADES)

SALIDA: POR MEDIO DE LAS HECES

REPLICACION: CITOPLASMA ENTEROCITO

MADURO
IMPORTANCIA DE LA PROTEINA VP6
Forma parte de las proteínas estructurales
 La VP6 es la proteína principal de la cápside. Es altamente
antigénica y puede usarse para determinar la especie del
rotavirus. Se usa en los ensayos clínicos para determinar la
existencia de infección por rotavirus A.
 La principal ruta de transmisión de los rotavirus es la vía
fecal-oral, con periodo de incubación de 3 a 5 días.
 Aunque también se ha especulado que el contacto persona a
persona, el contacto con secreciones respiratorias, y/o el
contacto con superficies contaminadas pudieran ser fuentes
de transmisión.
 La propagación es a través de gotitas de saliva y de las
secreciones del tracto respiratorio.
 El virus es altamente infectante y muy estable en el medio
ambiente.
 Puede sobrevivir por horas en las manos y por días en
superficies sólidas.
 Los rotavirus exhiben patogenicidad principalmente en animales
jovenes de muy diferentes especies.

 El virus es muy lábil a pH inferior a 2, puede soportar un pH

estomacal superior a 3 con facilidad.
 La replicación de este virus tiene lugar en las células
epiteliales ubicadas en el extremo superior de las
microvellosidades del intestino delgado, y la infeccion es
confinada a este tipo de celulas.
 De esta forma, la infección en forma selectiva en los
enterocitos maduros del intestino delgado.
Bass y col. han demostrado que lo que hace una célula susceptible
o no a la infección por rotavirus es la capacidad de que el virus
pueda penetrar en forma directa la membrane plasmatica celular.
 Trabajos que se realizarón a pacientes con
gastroenteritis por rotavirus demostraron que los
cambios en la mucosa podian variar desde lesiones
leves hasta graves.

EN LOS CASOS LEVES

Las lesiones se presentan formando parches en el
epitelio, e incluyen acortamiento de las vellosidades y
leve infiltracion de la lamina propia con celulas
mononucleares.

EN LOS CASOS GRAVES

Hasta un total achatamiento de las vellosidades,
marcado infiltrado inflamatorio, hipertrofia de las
criptas y daño severo del epitelio con transformacion
cuboidal de las celulas en los casos graves
°El daño de la mucosas es rapidamente reparado alrededor de la tercera
semana despues del episodio diarreico.
°Las células infectadas son reemplazadas por células secretorios de la
cripta, por lo que disminuye el transporte de glucosa acoplando el sodio.
°La mayoría de los niños con gastroenteritis aguda por rotavirus, padecen
malabsorción de la lactosa e intolerancia.
°La tolerancia normal reaparece a los 10 14 días de iniciados los
síntomas.
°Esta serie de hechos asociados a la gastroenteritis aguda por rotavirus,
provocan la pérdida de electrólitos y fluidos, pudiendo llevar a la
deshidratación severa y aún a la muerte.
 P. PERIODO SINTOMATICO P. CONVALESCENCIA
INCUBACION
AS 1 2 3 4 5 6 7 8 9

CONTACTO CON
RECEPTORES E
INGRESO DEL VIRUS
AL ENTEROCITO
SE NORMALIZA LA HISTOLOGIA

LISIS DE LOS ENTEROCITOS

REPLICACION VIRAL
E INICIO DE CAMBIOS
LIMITACION DE LA INF
HISTOLOGICOS

EXTENCION DE LA INF.
Y CAMBIO
HISTOLOGICOS EVIDENTES
SIGNOS Y SINTOMAS
 DIARREA NO SANGUINOLENTA
DE 2 A 8 DIAS DE DURACIÓN
MAS COMÚN  VÓMITO, ANOREXIA Y FIEBRE
 DESHIDRATACIÓN ISOTONICA
 ERITEMA FARINGEO

 DESHIDRATACIÓN HIPER O
HIPONATRÉMICA
MENOS COMÚN  INTOLERANCIA TRANSITORIA A
LA LACATOSA
 RINITIS
 SIBILANCIAS
 OTITIS MEDIA SEROSA
 Deshidratación,que puede ocurrir rápidamente,
especialmente en los lactantes.

Los síntomas de la deshidratación pueden incluir:

 somnolencia o letargo
 irritabilidad
 sed
 piel pálida o moteada
 menor elasticidad en la piel
 ojos profundamente hundidos
 lafontanela del bebé (o punto blando) puede estar
hundida
 lágrimas escasas o ausentes
 disminución de la cantidad de orina o de pañales
mojados
 boca seca
 Las personas infectadas con rotavirus excretan
grandes cantidades de partículas virales antes
de iniciar los síntomas de la enfermedad.
 La diseminación persona a persona, a través de
manos contaminadas, parece ser responsable
por diseminar el virus en ambientes cerrados,
como hogares y hospitales.
 Las heces suelen contener 100 billones de
partículas virales por mililitro, siendo que la
dosis infecciosa es de 10 mil a 10 millones de
partículas virales.
 DIAGNOSTICO VIRAL CLINICO
 SE
BASA PRINCIPALMENTE EN EL CUADRO
CLÍNICO
CONSIDERANDO:
 ANTECEDENTES PERSONALES
 FAMILIARES
 SITUACION EPIDEMIOLOGICA
DIAGNOSTICO DE

LABORATORIO
ROTAVIRUS
 Diagnóstico diferencial
Los síntomas pueden ser semejantes a otros agentes infecciosos que causan diarrea
acuosa en infantes, como:
 Adenovirus entérico, Astrovirus, Calicivirus

 Shigella,
 Salmonella, Vibrión cólera
 Escherichia Coli enterotoxigénica
 Campylobacter Jejuni, Staphylococcus aureus
 Hongos.

Los parásitos mas frecuentes que causan diarrea son

 Giardia Lamblia,
 Entamoeba histolytica y
 Cryptosporidium.
DIAGNOSTICO DIFERENCIAL
Vómitos frecuentes, diarrea voluminosas acuosas, sin
VIRAL mucus ni sangre.
Prueba azul de metileno (PAM) usualmente < 10 leucocitos
por campo a predominio de mononucleares.

Pocos vómitos, deposiciones usualmente no voluminosas

BACTERIANA con mucus y/o sangre.
PAM > 10 leucocitos a predominio de PMN.

Deposiciones voluminosas, espumosas, Distensión y dolor

GIARDIASIS abdominal, nauseas y vómitos; tendencia a la cronicidad.

Deposiciones pequeñas con mucus y/o

AMIBIASIS sangre; pujo y tenesmo
 TOMA DE MUESTRA

Recolectar de 5 a 10 ml. de heces fecales (5 días iniciados los síntomas)

Colocarla en un frasco limpio de tapa rosca

Identificar con el nombre del caso y fecha de la toma de muestra.

 ROTAVIRUS
Las partículas de rotavirus pueden estar
presentes en la heces de los sujetos
infectados en altas concentraciones por
gramo de heces. Este gran número de
partículas permiten su detección por varias
técnicas inmunológicas.

Para el diagnóstico de la infección por

rotavirus se utilizan diferentes técnicas,
tales como microscopía electrónica,
electroforesis, inmunocromatografía
rápida, ELISA, aglutinación indirecta e
inoculación en cultivos celulares.
 CULTIVO
 Es sumamente laborioso, debido a la
adaptación de la cepa in vitro.

 Método de amplificación.

 Solo es posible con tripsina como pretratamiento. Actúa disgregando la

doble cápside viral exponiendo los sitios receptores del virus.

 El efecto citopático se inicia con la presencia de focos de

redondeamiento celular que se agregan linealmente hasta cubrir
totalmente la monocapa celular.

 Un rasgo muy característico de los cultivos celulares infectados con

rotavirus es el denominado efecto de bandera o flameo que se evidencia
al ocurrir un desprendimiento celular parcial.
 Una de las líneas celulares más utilizada para la replicación de
rotavirus es la línea MA-104 derivada de riñón fetal de mono
Rhesus
MICROSCOPIA ELECTRÓNICA (ME)
 Método es sumamente sencillo y específico.
 Es poco sensible.
 Requiere mucho tiempo de observación (al
menos 10min/muestra)
 La detección es directamente en muestras de
materia fecal, preparadas por tinción negativa con
ácido fosfotúngstico o acetato de uranilo.
 Demuestra fácil e
inequívocamente la
presencia de partículas
virales con una morfología
típica, requiriendo
solamente la presencia, de
unas cuantas partículas
virales.
 En la inmunomicroscopía
electrónica es necesario
mezclar las heces con un
suero anti rotavirus.
ENZIMOINMUNOENSAYO
(ELISA) Y AGLUTINACIÓN DE
LÁTEX
 Se basan en una reacción antígeno-anticuerpo y
detectan al principal componente antigénico
común de los rotavirus del grupo A, ubicado en la
proteína VP6 de la cápside interna.
 Son métodos sumamente rápidos, sensibles y
sencillos por lo que resultan ideales para el
diagnóstico clínico.
 ELISA
La ELISA estaba basado en la técnica del doble
sándwich, con un anticuerpo de captura pegado a
un soporte sólido, la muestra consistente en una
suspensión de heces al 10% en buffer Tris, un
segundo anticuerpo o anticuerpo detector, un
tercer anti-anticuerpo o anticuerpo indicador
conjugado con una enzima (fosfatasa alcalina o
peroxidasa), y finalmente el sustrato que dará una
reacción de color en las muestras positivas.
ELISA

 ELISA Detección de
antígeno viral en
heces para
Rotavirus. Pozos
color amarillo
positivos a rotavirus.
Pozos incoloros
negativos a rotavirus
AGLUTINACION CON LATEX
 La técnica de ACLX demostró ser sumamente útil, y está basada en la
sensibilización de partículas de látex con anticuerpo anti-rotavirus. Este
reactivo en contacto con una muestra positiva produce una aglutinación
característica en sólo un par de minutos.
 ELECTROFORESIS EN GEL
DE POLIACRILAMIDA

La electroforesis del ARN rotaviral pone de

manifiesto el comportamiento del genoma viral
que tiene un modelo de migración característico
en un gel de poliacrilamida, visualizándose 11
bandas (electroferotipo) las que se presentan en
cuatro grupos.
LA ROTAFORESIS ES UN METODO DE DIAGNOSTICO PARA
ROTAVIRUS BASADO EN LA IDENTIFICACION DIRECTA DEL
GENOMA A PARTIR DE LAS HECES
 TECNICA

A) EXTRACCION DE RNA A PARTIR DE

HECES

B) PREPARACION DEL GEL DE

POLIACRILAMIDA

C) TINCION DEL GEL

D) INTERPRETACION DE LOS
RESULTADOS
Ha permitido la
tipificación viral y la
realización de
estudios
epidemiológicos al
conocer los
electroferotipos
dominantes y sus
mutantes posteriores
 Gel de
poliacrilamida al 5%
teñido con Nitrato
de plata. Carriles 1-5
Electroferotipos
“largos”. Carriles 6-
10 Electroferotipos
“cortos”  específicos
del genoma viral de
Rotavirus
TECNICAS PARA EL DIAGNOSTICO DE LABORATORIO

Técnica Ventajas Desventajas

Cultivo celular Permite evaluar infectividad y Escasa disponibilidad,
realizar estudios de neutralización. Laborioso.

Microscopia Permite la caracterización Escasa disponibilidad,

Electronica morfologica de los virus. Laborioso, costoso.

Electroforesis Bajo costo, sencillo de realizar y adenovirus entérico

aplicable solo a rotavirus

Inmunoanalisis, Resultados en minutos, Sencibilidad, especificidad

ELISA y técnicas costo intermedio. intermedia
De aglutinación

Inmunofluorescencia Ninguna en particular Alto costo, laborioso,

el resultado tarda dias.

Reacción en cadena Alta sencibilidad escasa disponibilidad, alto

De la polimerasa costo, laborioso: el
resultado
tarda varios dias.
 TRATAMIENTO

 Por ser una infección viral, no existe un tto. especifico.

 Solo se tratan los síntomas.
 Se debe realizar un aislamiento durante la enfermedad.

 Podemos decir que el tratamiento consiste en:

 La restitución de líquidos.

 El restablecimiento del equilibrio

electrolítico por vía intravenosa u oral.

 La administración del fármaco nitazoxanida

durante un periodo de tres días reduce la duración
de la enfermedad en niños hospitalizados.
 Rehidratación oral con agua, fórmula, leche materna y/o
líquidos especiales que contengan electrólitos (líquidos con
contenido de azúcares y sales), como Pedialyte®

 Alimentar al niño con alimentos sólidos, si los tolera.

 Aproximadamente uno de cada 40 niños desarrolla una deshidratación lo
suficientemente severa como para requerir hospitalización. En estos niños, el
tratamiento puede incluir:

 Administración de líquidos por vía endovenosa (IV)

 Alimentación por sonda nasogástrica (NG) - sonda pequeña que se coloca en el

estómago del niño a través de la nariz, para poder administrarle fórmula o líquidos.
 PREVENCIÓN

 Están relacionadas con la higiene ambiental, tratamiento de aguas servidas.

 Mantener una higiene adecuada y lavarse bien las manos.
 Limpiar las superficies duras, los juguetes y las perillas de las puertas.
 Mejorar los hábitos higiénico-dietéticos de la población.
 Manejar y desechar correctamente los pañales sucios.

 Además de estas medidas, se encuentra la alimentación con seno materno, que

de manera pasiva transfiere anticuerpos en contra de la infección.
Vacunas: rotarix (GlaxoSmithKline), rota
teq (Merck), rotashiel (Wyeth)
Vacunas
CONCLUSIONES
 En la actualidad el Rotavirus es una de las causas principales
de gastroenteritis en la población infantil.

 Sin ser comprobado aún se presume que otra vía de

transmisión es la vía respiratoria.

 Existe la hipótesis de que la proteína no estructural NSP4

actúa como una enterotoxina.

 Se considera a la rotaforesis como una de las técnicas de

diagnóstico más Sensible y económica, sin embargo, el
diagnostico se realiza de acuerdo a las posibilidades del
laboratorio