CULTIVOS CLONOGÉNICOS

¿QUÉ SON LOS CULTIVOS CLONOGÉNICOS?

Técnica utilizada para evaluar la capacidad de proliferación in vitro de las células progenitoras
hematopoyéticas recolectadas en sangre periférica, médula ósea y sangre de cordón umbilical.

Sirven para evaluar la calidad de un producto celular, proporcionar información funcional de progenitores
diferenciados (formando unidades) y como control de calidad pre-trasplante.

FUNDAMENTO

Tipos de células madre.

- Totipotenciales: Genera un organismo completo (óvulo fecundado).

- Pluripotenciales: Genera cualquier tejido del cuerpo, es decir, aún no se sabe qué formará. (Ej. Célula
madre de médula ósea).
- Multipotenciales: Genera linajes específicos. (Ej. Célula Madre Hematopoyética).

Los trasplantes de células madre pueden salvar la vida de los pacientes a quienes ya no les quedan otras
opciones de tratamiento. Los pacientes con cáncer reciben altas dosis de quimioterapia y de radiación que
matan células cancerosas y al igual células rojas sanguíneas. Para reconstituir las reservas de células madre, a
los pacientes se les trasplanta una infusión de células madre que todavía no han madurado. Con el tiempo
estas células madre se desarrollan como nuevas células sanguíneas.

Médula ósea. Cordón umbilical.

En la médula ósea se da el La sangre que queda en el cordón umbilical y en la

proceso de la hematopoyesis placenta después
por lo que ahí hay células de que un bebé
madre hematopoyéticas. nace y se corta el
cordón contiene
células madre.

TÉCNICA.

1. Selección de las unidades.

- Disposición alogénica.
- Que tuvieran la proteína CD34+ a cierto volumen para que confirme que hay suficientes células
madre.
- Se tomaron en cuenta unidades de reciente ingreso.

2. Cálcular volumen de siembra.

Calcular volumen de muestra que se sembrará y el volumen del agar que se utilizará.

3. Obtención de la alícuota. (La alícuota es una parte que se toma de un volumen o masa iniciales, para
ser usada en una prueba de laboratorio, cuyas propiedades físicas y químicas, así como su
composición, representan las de la sustancia original).

4. Siembra de las unidades.

 Atemperamos el colorante, el agar y el tubo de control en una gradilla. Preparar medio + cloruro de
benzalconio + muestra para cortar una orilla de donde sacaremos el volumen total.

Mezclamos 50uL Azul de Tripan y el volumen calculado de muestra, ponemos mezcla en Cámara de
Neubauer, se cuentan 100 células (y clasificamos si están vivas o muertas) en el microscopio (40x); 100-
70% c. vivas sembrar vol. X1; 70-35% sembrar vol. al doble; -35% sembrar vol. al cuádruple.

Sembramos las cajas Petri de 33mm según el porcentaje de células vivas; las ponemos dentro de cajas
Petri de 150mm con agua.

5. Incubar las cajas.

Incubar en incubadora de CO2 de 10 a 14 días. Pasados los 14 días corroborar ausencia de

contaminación del medio o cualquier daño en el cultivo.

6. Realizar lectura de los cultivos.