Unidad VI

ENZIMAS: Clase 2
Profa Yenis Pérez Rojas
e-mail: yenisperez@usb.ve y
gladinex@gmail.com

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 ¿ Cómo trabajan las enzimas?
 Sitio activo
 Se enlazan al estado de transición mediante interacciones no
covalentes
 Afectan las velocidades de reacción, no el equilibrio

Alineación de grupos reactivos

Formación de intermediarios inestables cargados
Rearreglo de enlaces
Otras transformaciones

La energía de activación G++ señala la diferencia de energía

entre el estado de transición y el basal

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Complementariedad estructural entre enzima y
estado de transición

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 ¿ Por qué existen barreras de activación?
 Son cruciales
para la vida
 La estabilidad de
una molécula
aumenta con su
barrera
 Para que
macromoléculas
complejas no
reviertan
espontáneamente
a formas
moleculares más
simples y existan
estructuras y
procesos
metabólicos
ordenados y
complejos en las
células. 4
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7
Curva de progreso
de una reacción
catalizada por una
enzima

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Hipótesis de llave-
cerradura

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Curva de progreso de
una reacción
catalizada por una
enzima

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Derivación de Briggs y Haldane (1925)

E+S ES E+P
K 1  K cat ES   K1 Etotal  ES S 
K 1  K cat E  ES S 
 Km  total
K1 ES 
Km 
Etotal  ES S 
ES 
KmES   Etotal S   ES S 

ES   Etotal S 

Km  S  K E S  V maxS 
Vo  cat total Vo 
Km  S  Km  S 
V  K cat ES 

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 Cambio de Energía libre-estándar está
relacionado con la constante de equilibrio
Reactantes y productos se combinan hasta que se alcanza el equilibrio, punto en el cual
las velocidades de las reacciones directa e inversa son iguales.

¿Qué pasa cuando no hay equilibrio?

El sistema tiende a regresar al equilibrio, a través de un cambio de

energía libre de Gibbs ( G°)

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 >1 Derecha
P
Keq
 Equilibrio
G° = -favorable
equilibrio de reacción
1
S <1 Izquierda
No implica rapidez
G° = 0
G° = +. equilibrio de reacción
Desfavorable

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 Los cambios de Energía libre son aditivos
Hexoquinasa

Keq1= 3.9 x 10-3

Keqtotal = (Keq1)(Keq2) = 7.8 x 102
Keq2= 2 x 105
14
Hipótesis de llave-cerradura

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Dobles recíprocos: Transformación de
Michaelis-Menten

Lineweaver-Burk

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Reacciones enzimáticas con dos o más sustratos

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INHIBICIÓN REVERSIBLE
 El inhibidor se une mediante enlaces no covalentes a E
 Al unirse a E interfiere con su actividad y evita la formación de
ES y posteriormente E + P
 Permiten investigar los mecanismos enzimáticos y descifrar las
vías metabólicas
 Ayuda a estudiar la especificidad de una enzima
 Arquitectura física y química del sitio activo
 Se pueden eliminar con diálisis o filtración en gel

 Se clasifican en: Inhibidores Competitivos

Inhibidores Acompetitivos
Inhibidores No-competitivos

Ki  E I /EI 

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Inhibición Competitiva
 Es común que S e I se unan en el mismo sitio activo, pero algunos
inhibidores se unen a sitios diferentes al del S y sigue siendo
competitiva
 La capacidad para formar ES depende de la cantidad de S e I
presentes y de sus afinidades relativas
 La formación de EI se puede revertir aumentando [S]
 Mientras más potente el inhibidor se necesita más [S] para tener la
media saturación o Km = Km (aparente)
 Vmax no se afecta con la presencia de este Inhibidor
 Los Inhibidores son por lo general análogos de los sustratos

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Inhibición Competitiva

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 Inhibición Competitiva

Ks Kp v  kpES 
E  S  ES  E  P
v kpES 
+ 
Et t E  ES  EI 
I ES   S  E 
Ks
Ki  S 
EI   I  E   E
EI Ki v  Ks 

kpEt  S  I 
E E E
S   Ks Ki 
v Ks v

S 

V max 1  S   I  V max  I  
1    S 
Ks 
K s Ki  K i 

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 Inhibición Acompetitiva
 Se une reversiblemente al complejo ES y no a E,
generando ESI inactivo
 Es común en los sistemas de múltiples reactantes, en los
cuales I se enlaza solamente al complejo ES
 A cualquier [I], una concentración infinitamente alta de S
no podrá llevar la E a ES
 Vmax será menor
 Km aparente decrece, debido a la utilización de I por parte
de ES.

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Inhibición Acompetitiva

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Inhibición Acompetitiva
Ks Kp
v  kpES  E  S  ES  E  P
+
ES   S  E 
Ks
ESI   ES  I  I
Ki
Ki
v kpES 

Et E  ES   ESI  ESI
E S 
v
 Ks v

S 
kpE t  E S   S I E  V max  I  
 E   Ks  S 1  
 Ks Ki.Ks   Ki 

V maxS 
v
Km   S 
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 Inhibición No-Competitiva
 Se unen tanto a E como a ES, de modo que se pueden formar
complejos EI y ESI, ambos inactivos
 Por lo general, I no es semejante a S
 Se enlaza a la E presente en la solución, por tanto decrece la
Vmax pero no cambia Km.
 Esta inhibición no se supera al aumentar [S]
 No-competitiva pura: Cuando el I se fija a E y ES con igual
afinidad
 No-competitiva mixta: cuando las afinidades de unión del I a E y
ES son diferentes
 La inhibición puede ser revertida por diálisis exhaustiva de la
enzima inhibida, siempre y cuando el enlace entre E e I NO sea
covalente.

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Inhibición No-competitiva

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Inhibición No-competitiva
Ks Kp
E  S  ES  E  P
+ + EI   E I 
Ki
I I
Ki Ki ESI   EI S   E I S 
Ks Ks Ks.Ki
EI + S ESI
E S 
v
 Ks v

S 
kpE t  S  I  S I   V max  I    I  
1    E  Ks1    S 1  
 Ks Ki Ks.Ki   Ki   Ki 

v

S  v S 
V max Ks  S  
V max Km   S 


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Inhibición Irreversible
 Se enlazan de forma covalente y estable a la E, se combinan y destruyen
un grupo funcional esencial para la catálisis
 No es revertida por diálisis a menos que el enlace sea lábil

químicamente como un éster o un tioéster

¿Para qué se usan? Permiten identificar aa’s del sitio activo por sustitución
específica de sus cadenas laterales
Ejemplo: el grupo tiol del sitio activo de la gliceraldehido-3-fosfato
dehidrogenasa reacciona con -cloromercuribenzoato, el cual no revierte
con diálisis ni adición de S.

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Inhibidores Irreversibles

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 Inhibición Irreversible

 Drogas como inhibidores

enzimáticos: antimetabolitos
-Sulfa (sulfanilamida), agente
antibacterial, compite con el
ácido -aminobenzoico
(PABA)

 Metotrexato, bloquea la
biosíntesis de purinas y
pirimidinas, es análogo del
dihidrofolato y compite con
éste por la dihidrofolato
reductasa

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Conversión de dUMP a dTMP por timidilato sintetasa y dihidrofolato reductasa
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Síntesis de timidilato y metabolismo del folato como blancos de quimioterapia
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 Inhibidores Irreversibles
 Inactivadores o sustratos suicidas: compuestos relativamente no-
reactivos hasta que se unen al sitio activo de la Enzima:
-Lleva a cabo los primeros pasos de la reacción enzimática normal
-No es transformado en producto, sino en un compuesto reactivo que se
combina con la E de forma irreversible
-Usa el mecanismo de reacción enzimático normal para su propósito:
inactivadores basados en mecanismos, por lo que son específicos

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