INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA

DE BIOTECNOLOGÍA

Fisicoquímica de Alimentos

Cinética enzimática

Profesor: Morin Sanchez Luis Martin

Morlan Serrano Marianela

Grupo: 3LM2

Fecha de entrega: 01 de diciembre de 201

INTRODUCCION
El termino enzima significa ‘’levadura’’, se le adjudico este nombre porque muchos de los
conocimientos con los que se cuentan actualmente sobre las enzimas se han obtenido del
estudio de las levaduras.
Las enzimas están definidas como biomoléculas de naturaleza proteica especializadas en
la catálisis de las reacciones químicas que tienen lugar en la célula. Son eficaces como
catalizadores ya que son capaces de aumentar la velocidad de las reacciones químicas.
Las enzimas hacen que las reacciones químicas se produzcan a una gran velocidad, a
temperatura relativamente baja y con un rendimiento próximo al 100% además se
recuperan íntegros después de las reacciones.
Son altamente especificas ya que cada uno de ellos favorece la transformación de un solo
tipo de sustancia y no de otras que pueden estar presentes en el medio de reacción.

 Estructura de las enzimas

Las enzimas presentan todos los rasgos estructurales y propiedades químicas de las
proteínas, algunos están constituidos por una o más cadenas poli peptídicas, es decir, son
proteínas puras mientras que otros enzimas son proteínas conjugadas, esto significa, que
además de las cadenas polipeptídicas poseen estructuras no proteicas necesarias para
su actividad. Estas estructuras no proteicas reciben el nombre de cofactores
Centro activo.
A través del centro activo las enzimas interactúan con las moléculas de ligando, también
conocida como sustrato, mediante un acoplamiento espacial ya que las superficies
moleculares de ambos tienen formas complementarias y a su vez tiene grupos químicos
complementarios que establecen los diferentes tipos de interacciones entre ellas.
El centro activo es una cavidad existente en la superficie de la enzima que en el interior
contiene un forro de aminoácidos.

 Clasificación de las enzimas

1) Oxidorreductasas: Son todas aquellas enzimas que catalizan reacciones de oxido-

reducción, entre estas enzimas se encuentran:
 Las deshidrogenasas: quitan hidrógenos al sustrato y por lo tanto lo oxidan.
 Las hidrogenasas: añaden hidrógenos al sustrato y por lo tanto lo reducen.
2) Transferasas: Catalizan reacciones de transferencia de grupos funcionales de un
sustrato otro.
3) Hidrolasas: catalizan reacciones de hidrolisis, se encargan de romper en los enlaces
por adición de agua a estos.
4) Liasas: son enzimas que catalizan reacciones de adición a dobles enlaces o bien
forman dobles enlaces. Suelen originar la perdida de grupos funcionales.
5) Isomerasas: catalizan reacciones de isomerizaciones, es decir, reacciones cuyo
resultado es una ordenación intramolecular.
6) Ligasas o sintetasas: catalizan la formación de enlaces entre 2 moléculas de sustrato,
por lo tanto, catalizan reacciones de síntesis. Utilizan la energía procedente de la
ruptura de un enlace pirofosfato en la molécula de ATP.

Modelos de cinética enzimática

Modelo cinético de Michaelis-Menten

Los estudios del efecto de la concentración inicial del sustrato sobre la actividad
enzimática comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. En 1913 Leonor Michaelis y
Maud Menten propusieron un modelo para explicar la mayoría de las reacciones
catalizadas por enzimas. En este modelo se establece que la enzima se combina
reversiblemente con su substrato para formar el complejo enzima-sustrato (ES) que
posteriormente se rompe para formar el producto, regenerando la
enzima.

Figura1. Maud Menten Figura2. Leonor Michaelis

Michaelis determinó la denominada constante de Michaelis (Km) que establece la afinidad

entre una enzima y su sustrato. Predijo y explicó la velocidad de reacción, es decir la
cantidad de sustrato que reacciona con la enzima por unidad de tiempo, así como los
factores que estimulan o inhiben dicha velocidad de reacción. (José Manuel López, 2015).
La ecuación de Michaelis-Menten es capaz de describir el cambio sufrido por la velocidad
de una reacción catalizada por una enzima al variar la concentración del sustrato. (José
Manuel López, 2015).
Deducción de la ecuación de velocidad

K1 En donde
E + ES
E + P S: Substrato ES: complejo enzima substrato

E: Enzima k1,k-1 y k2: constantes de velocidad de reaccion

K-1 K2
Definiendo la ecuación de velocidad total.

ES }
d [P]
v 0 =( ) =k 2¿
dt 0

Como se está planteando una situación de equilibrio las velocidades hacia ambas
direcciones se igualan.

k −1 [ E ] [S ]
K1[E][S] = k-1[ES] Ks= =
k 1 ❑ [ ES]

A cualquier tiempo en una reacción catalizada enzimáticamente la enzima existe en dos

formas: E y ES y su concentración total se expresa:

[E ]0=[ E ] +[ES] [E] = [ES] - [E ]0

[ E ] [S ] ( [ ES ] −[ E ] 0 ) [ S ]
Ks= =
[ES ] ❑ [ES ]

Despejando [ES].

[E ]0 [S ]
[ES ]=
Ks+[S] ❑

Sustituyendo [ES] en la expresión de velocidad

d [P] k 2[ E] 0 [S]
v 0 =( )=
dt 0 Ks+[S ] ❑
 k 2 [E]0 [S ]
v0 =
Ks+[ S] ❑

Esta ecuación se puede aplicar en dos casos:

1) Cuando [S] es baja
[S] << KS

K2
v0 = [E ] [S ] v 0 α [S ]
ks 0

2) Cuando [S] es alta

[S] >> KS v 0 =k 2 [ E ] 0=Vmax

Vmax se observa cuando prácticamente toda la enzima se encuentra saturada con su

sustrato (formando complejo ES) y un incremento en [S] no tiene efecto en la
velocidad de reacción.

En la grafica 1 se puede observar como la velocidad V que indica el número de moléculas

del sustrato que se convierten en producto por segundo, responde a la variación de
sustrato. Con concentraciones crecientes de sustrato [S], la enzima va acercándose
asintóticamente a su velocidad máxima Vmax, pero nunca la alcanza. Por esta razón, no
hay un valor de [S] determinado para la Vmax

Grafica 1. Representacion grafica de la ecuacion de velocidad de Michaelis-Menten

Limitaciones de la ecuación de Michaelis-Menten

 Concentraciones relativas de E y S: la concentración de substrato S, es mucho
mayor que la de E, de tal manera que la cantidad de substrato unido a la enzima en
cualquier momento es muy pequeña.
 Se asume el estado estacionario: ES no cambia con el tiempo, esto quiere decir que
la velocidad de formación de ES es igual a aquella para su desintegración. En general,
un intermediario en una serie de reacciones está en estado estacionario cuando su
velocidad de síntesis es igual a su velocidad de degradación.
 Velocidad inicial: para el análisis de reacciones enzimáticas, sólo se utiliza la velocidad
inicial de la reacción, que es la velocidad ejercida por la enzima, inmediatamente
después de que se ha puesto en contacto con el substrato y hasta antes de que se
haya consumido el 10 % de la concentración inicial del mismo. La razón de lo anterior
es que, en ese momento, la concentración del producto de la reacción que se ha
acumulado, en muy pequeña y, por tanto, la reacción en el sentido inverso, es decir, la
transformación del producto en el substrato original puede ser ignorada.

Cinética de Briggs-Haldane
Basándose en el esquema de reacción de Michaelis y Menten, en 1925 Briggs y Haldane
propusieron que, durante las reacciones enzimáticas, la [ES] se mantiene constante hasta
que una cantidad significativa de sustrato ha sido consumida.

Grafica 2. Representacion grafica de lo establecido por Briggs y Haldane

Linealización de Lineweaver-Burk.
El diagrama de Lineweaver-Burk se emplea como herramienta gráfica para calcular los
parámetros cinéticos de una enzima. Su utilidad se basa en que es el recíproco de la
cinética de Michaelis-Menten.
 Figura3. Expresion de Lineweaver-Bunk. La

representación gráfica de Lineweaver-Burk permite identificar la constante de Michaelis-

Menten (Km) y Vmax (velocidad máxima); el punto de corte con el eje de ordenadas es el
−1
equivalente a la inversa de Vmax, y el de abscisas representa el valor de Km

Grafica 3. Representacion grafica de lineweaver-Burk

Inhibición enzimática
La actividad de una enzima puede ser disminuida o eliminada por la acción de ciertas
sustancias a las cuales se las conoce con el nombre de inhibidores enzimáticos.
La inhibición de una enzima que forma parte de una cadena de reacciones metabólicas
puede inhibir por completo a dicho proceso metabólico.
Los inhibidores se clasifican de la siguiente manera:

Irreversibles
Inhibidores Competitivos
Reversibles
No competitivos

Figura 4. Clasificacion de inhibidores

Inhibidores irreversibles: La enzima no es capaz de recobrar su actividad por remoción del
inhibidor libre debido a que el inhibidor irreversible, actúa modificando o destruyendo
algunos de los grupos esenciales del centro activo
Inhibidores reversibles: La enzima recobra su actividad por remoción del inhibidor libre. Lo
cual demuestra que hay equilibrio entre el inhibidor libre y la enzima.
 Inhibición competitiva: El inhibidor se combina reversiblemente con la enzima en el
sitio en donde se debería unir el sustrato, impidiendo la formación del complejo
activo enzima sustrato. De ahí el nombre de competitiva porque efectivamente
tanto el inhibidor como el sustrato compiten por el mismo sitio y tratan de
desplazarse mutuamente de la enzima. Este tipo de inhibición se caracteriza en
que puede disminuirse considerablemente aumentando la concentración de
sustrato.

Figura 5. Inhibicion competitiva

 Inhibición no competitiva: El inhibidor se une con la enzima en otro sitio, por esa
razón la unión del sustrato con la enzima no es afectada por la presencia del
inhibidor y se puede formar el complejo enzima sustrato-inhibidor. Pero este
complejo es catalíticamente inactivo y no puede escindirse en productos de la
reacción y complejo enzima-inhibidor.
Este tipo de inhibición se caracteriza porque no puede ser revertido por un
aumento de la concentración de sustrato. El sustrato no puede desplazar al
 inhibidor unido a la enzima.

Figura 6. Inhibicion no competitiva

 Inhibición acompetitiva: el inhibidor no se une en el mismo sitio que el sustrato,
pero su unión al enzima aumenta la afinidad del sustrato por el enzima, dificultado
su disociación e impidiendo la formación de los productos. El inhibidor se combina
con el complejo en enzima –sustrato para formar un complejo inactivo enzima-
sustrato-inhibidor. Donde ES: complejo enzima-sustrato

I: Inhibor
ES + I ESI
Entonces la constante del inhibidor seria: ESI: complejo enzima-sustrato-inhibidor
( ES)( I )
K 1=
(ESI )
El grado de inhibición puede aumentar cuando la concentración de sustrato se ve
aumentada. La inhibición acompetitiva es poco frecuente en las reacciones de un
solo sustrato, pero es corriente en las reacciones de dos sustratos.
PROBLEMARIO
1. Considera una enzima industrial importante, la cual cataliza la conversión de un
sustrato para formar un producto con un valor agregado mayor. La enzima sigue
el siguiente mecanismo:

Un análisis inicial de las tasas de reacción para la reacción en solución, con E0 =

0.10 µM y varias concentraciones de sustrato S0, produce los siguientes
parámetros de la ecuación de Michaelis-Menten: Vmax = 0.60 µM/s; KM = 80 µM.
Un tipo de experimento diferente indica que la constante de la tasa de asociación,
k1, es k1 = 2.0 x 106 M-1s-1 (2.0 µM-1s-1). Estima el valor de k2 y k-1.
 SOLUCION

Se sabe que: Vmax=k2[E0]

Vmax 0.6 µM / s −1
K2= [E 0 ] = 0.1 µM = 6 s

De la definición de la constante de Michaelis-Menten

K-1=KmK1-k2=(80 µM ¿ (2 µM −1/s )= 154 s

−1

2. Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reacción

catalizada por una enzima son:

a) Determina la velocidad máxima

b) Cual es la concentración de enzima libre para una [S] de 5x10-4M
c) Cual es el km de la enzima

SOLUCION

a) La velocidad máxima de esta reacción es de 0.25μmol/min. Ya que por encima de

[S] de 5x10-4 no aumenta.
b) Cero, todos los enzimas están ocupados a esa [S] se la la Vmax
c) Usando la ecuación de Michaelis:

Vmax {S
V =¿ ¿
km+[ S]

Se despeja km y se utiliza la velocidad de 0.20 y [S] de 5x10-5 y la velocidad máxima calculada en el

inciso a lo que nos arroja un resultado de km=1.25z-5 moles/L

3. En un cultivo de bacterias, la velocidad de reacción de una enzima E fue de 20μg/min para

una concentración de sustrato de 3 m ꓟ. Si la concentración de sustrato es igual o superior
a 7 m ꓟ, la velocidad no supera los 40μg/min. Al añadir un inhibidor competitivo, la
 velocidad de reacción fue de 20μg/min para una concentración de sustrato de 8 m ꓟ.
Calcúlese la Km, la Vmax y la ki para la enzima, sabiéndose que la concentración de
inhibidor es de 6 m ꓟ.

SOLUCION

Si para una [S] mayor o igual a 7 milimoles la velocidad es 40 μg/min la velocidad máxima es
40 μg/min

Usando la ecuación de Michaelis

Vmax {S
V =¿ ¿
km+[ S]

40∗3
20=
km+3

Km= 3m ꓟ
Como es un inhibidor competitivo Vmax=Vmax’=40μg/min y ½ de Vmax’= 20μg/min
40∗8
20=
km+8 = 8

Km’= (1+[I]/Ki)/Km
Ki=3.6

4. -En una enzima la constante de afinidad vale 4,5 *10 -5 M y la velocidad inicial en
un punto es 10 mmol/L min cuando la concentración del sustrato es de 2,8*10-4
M

a) Calcule la velocidad máxima b) Calcule la concentración de sustrato cuando la

velocidad inicial esta en una relación de 1/5 con la velocidad máxima de reacción.
c) Si, se aumenta la concentración inicial de sustrato en un 20% (2,8 *10-4), calcule la
velocidad de la reacción, conservando los parámetros de afinidad y actividad?
SOLUCION
A) 10*(4,5*10e-5+2,8e-4)/ 2,8e-4 = Vmax == 11,6
B) Vmax* 1/5 = Vmax S/ Km +S > Km +S= 5S > Km = 4S ; S= Km/4
C) 2,8e-4* 1,2 = S2 > 3,36e-4 ; v = 11,6* 3,36e-4/( 4,5e-5 * 3,36*10e-4)==== 10 ,22
mmol/Lmin
5. La Km de una enzima es de 3,5 x 10 5 M, se hace reaccionar el sistema enzimático con
una concentración de sustrato de 3,5 x10 5 M obteniéndose una velocidad inicial de 20.0
micromoles/litro minuto.
A) Calcule el valor de la Vmáx si se utiliza el doble de la concentración de enzima.
RESPUESTA 80 umol/Lmin , Km es igual a S y la enzima se duplica
A) Con qué concentración de sustrato se obtiene la Vmáx calculada en la pregunta
anterior RESPUESTA Misma concentración de sustrato

BIBLIOGRAFIA
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https://enfermerosuls2010.files.wordpress.com/2010/11/guia_cinetica_y_resolucion
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 MOLINA, Javier. Enzimas [em linea]
http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema14.pdf
[Consulta; 20 de noviembre 2017]

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 RIVERA, Enrique. Cinetica enzimática [en línea] Mexico 2011
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 LOPEZ, Jose Manuel. Los cuatro mosqueteros de la cinetica enzimática. Revista
Eubacteria, Universidad de Murcia. [Consulta; 25 de noviembre 2017]
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