Enzimologia

Tema -3
Deducción de la Ecuación de
Michaelis y Menten

✔ Hipótesis de rápido equilibrio

✔ Hipótesis de estado
estacionario

◈ Prof. Cecilia Nieto Aravena

Hipótesis del rápido
equilibrio
 Hipótesis del rápido equilibrio

Supuesto N.º 1
Existencia de un Sistema Unireactante

Ks Kp

K1 K2
E + S E-S E + P

K -1
K-2
 Hipótesis del rápido equilibrio

Supuesto N.º 2

▪ La Enzima y el Sustrato reaccionan muy rápidamente , de

forma tal que llegan a un rápido equilibrio .
▪ El paso limitante : la disociación del complejo [E-S]
▪ Por tanto en todo momento la velocidad de reacción es
proporcional a [E-S]

V = Kp . [E-S]
 Hipótesis del rápido equilibrio

Supuesto N.º 3 Condiciones catalíticas de reacción

[S] >>>>> [E]

Por tanto la formación del complejo enzima –sustrato ,

no altera significativamente la [S]
 Hipótesis del rápido equilibrio

Supuesto N.º 4 Distribución de [E]

En condiciones catalíticas de reacción la [E] si es afectada por la

formación del complejo enzima –sustrato.
Por tanto:
En todo momento la concentración total de la enzima se encuentra
distribuida en:
✔ una cantidad de enzima libre
✔ Una cantidad que forma parte del complejo[E-S]

[Et] = [E] + [E-S]

 Cambio de las
concentraciones
de Sustrato y
producto en el
transcurso de
la reacción
enzimática
 Hipótesis del rápido equilibrio

Supuesto N.º 5 Expresión de la Velocidad Máxima

Si
V = Kp . [E-S] Supuesto 2

entonces
Kp . [Et] = Vm Supuesto 5
 Hipótesis del rápido equilibrio

Correlacionando los supuestos V = Kp . [E-S]

N° 2 y N° 4 se tiene :
[Et] [E] + [E-S]

Expresión que puede operativizase haciendo uso de

equivalencias del [E-S] y de artificios matemáticos
hasta llegar a la expresión de la Ecuación de M-M

V = Vm . [ S ]
Ks + [ S ]
 Equivalencias para el E-S

Ks Kp
E + S E-S E + P

V1 =Ks [E]. [S]

Partiendo de la expresión de la V1, puede hallarse

una igualdad para reemplazar en la igualdad
 Equivalencias para el E-S
Ks Kp
E + S E-S E + P

Partiendo de la definición de Ks, puede hallarse una igualdad

para reemplazar en la igualdad

[E] [S] = [E-S]

[E] [S] = KS
KS
[E-S]

Expresión útil para

reemplazar el [E-S]
en la ecuación 1
V = Kp . [E-S]
[Et] [E] + [E-S]

V = Kp . [E] . [S]
Ks
[Et] [E] + [E] .[S]
Ks

V = Kp . [S]
[Et] 1 + [S]
Ks
Multiplicando numerador y denominador por Ks :

V = (Kp . [S] /Ks) Ks

[Et] (1 + [S] ) Ks
Ks

V = Kp . [S]
[Et] Ks + [S]
 Despejando Velocidad de reacción :
V = Kp . [Et] . [S]
Vm
Ks + [S]

Reemplazando:
V = Vm . [ S ]
Ks + [ S ]

Ecuación de M-M con

Hipótesis del rápido
equilibrio
Hipótesis del estado
estacionario
 Hipótesis del estado estacionario

Supuesto N.º 1
Existencia de un Sistema
Unireactante

Ks Kp

K1 K2
E + S E-S E + P

K -1
K-2
 Supuesto N.º 2 Estado estacionario

▪ Esta hipótesis sustentada por Briggs y Haldane declara si bien enzima y

sustrato reaccionan rápidamente

▪ Que si bien es cierto que la etapa limitante es la disociación del [E-S],

esta disociación va en dos sentidos , lo que no ha sido considerado.

▪ Por lo tanto no puede sustentarse un rápido equilibrio sino más bien un

estado estacionario , debido a que durante el transcurso de la reacción
enzimática , la concentración del [E-S] se mantiene estable y de
magnitud baja, hasta que termina de liberarse el producto
 Cambio de las
concentraciones
de Sustrato y
producto en el
transcurso de la
reacción
enzimática

En el estado estacionario :
Vel. formación Vel. de disociación
Supuesto N° 2 V = Kp . [E-S]

Supuesto N.º 3 Condiciones catalíticas de reacción

[S] >>>>> [E]

Supuesto N.º 4 Distribución de la [Et]

[Et] = [E] + [E-S]

 Expresión de la Vm
Supuesto N° 5
Kp . [Et] = Vm

Supuesto N.º 6 Disociación del [E-S]

Ks Kp
E + S E-S E + P

Vel. formación Vel. de disociación

 E + S Ks E-S KEp + P

Vel. formación Vel. de disociación

V f = k1 [E] . [S] V d = (k-1 [E-S]) + (k.2 [E-S])

Juntando elementos comunes a ambos lados de la

ecuación
[E] [S] = k-1 + k.2
[E- S] k1 Km
 [E] [S] = Km
[E- S]

[E] [S] = [E-S]

Km

Expresión útil para reemplazar

el [E-S] en la ecuación y
hacer uso de los mismos
artificios aplicados
V = Kp . [E-S]
[Et] [E] + [E-S]

V = Vm . [ S ]
Km + [ S ]
Ecuación de M-M
con Hipótesis del
estado estacionario
 Tema 3- Pregunta aplicativa 1

1. En qué radica específicamente la diferencia entre la

hipótesis de rápido equilibrio y del steady state

2. Cuál es la diferencia entre Ks y Kp

3. Porqué se asume que Kp es equivalente a K2

4. Qué unidades tiene una constante de proporcionalidad

de primer orden ?
 Tema 3- Pregunta aplicativa
2
Revise la lectura encargada y Elabore una biografía
resumida de cada uno de los cuatro mosqueteros

LECTURA ENCARGADA

Lectura :
hhttps://www.um.es/eubacteria/Los_cuatro_m
osqueteros_de_la_cinetica_enzimatica_Eubac
teria34.pdf
FIN DEL TEMA 3