2.4.

Métodos experimentales para el

estudio del metabolismo. 

La complejidad de muchas rutas metabólicas

dificulta su estudio.
Las condiciones de reacción que se usan con
reactivos aislados en un tubo de ensayo (in
vitro) con frecuencia son muy diferentes a las
condiciones de reacción en la célula intacta (in
vivo).
2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 

Se han desarrollado muchos métodos para

caracterizar las enzimas, compuestos intermedios, el
flujo y la regulación de las rutas metabólicas.Un
método clásico para descubrir las rutas metabólicas es
agregar un sustrato a preparaciones de tejidos, células
o fracciones celulares, para entonces seguir la
formación de compuestos intermedios y productos
finales.
 2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 

Ciertos parametros
son claves para
comprender los
mecanismos de
acción de las
enzimas
2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 

Se han aislado enzimas

individuales de casi para
todos los pasos metabólicos
conocidos. Al determinar
la.especificidad del sustrato y
las propiedades cinéticas de
una enzima purificada, es
posible sacar algunas
conclusiones acerca del
papel regulador de esta
2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 

Ecuación de Michaelis-Menten

La ecuación de Michaelis-
Menten es una expresión
derivada de las leyes de
cinética química, la cual nos
permite relacionar la
velocidad inicial de una
reacción enzimática, con la
concentración de sustrato.
2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 
2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 
El diagrama de Lineweaver-
Burk, es más práctico para
calcular los parámetros
cinéticos de una enzima. En
esta representación se grafica
el inverso de los valores de la
cinética de Michaelis-Menten,
lo que da como resultado una
linea recta con la ecuación que
aparece en el gráfico.
2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 
El diagrama de Lineweaver-Burk,
también permite visualizar el
comportamiento de una enzima en
presencia de un inhibidor. Si se trata
de un inhibidor competitivo,
observaremos que la linea intersecta
al eje Y en el mismo punto que la linea
que representa la cinética sin
inhibidor, es decír, que no se modifica
el valor de la Vmax, pero sí vemos un
cambio en la valor de Km (linea roja).
2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 
Con un  inhibidor no
competitivo, el valor de Km
no cambia pero si lo hace la
Vmax (linea roja).
2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 
El uso de isotopos radiactivos y su
identificación mediante espectroscopia de
resonancia magnética nuclear(RMN) ha
permitido rastrear ciertas reacciones
metabólicas en células.
También se puede emplear para estudiar el
metabolismo de animales completos
(incluyendo los humanos) y se usa en
análisis clínicos.
Sin embargo,en una evaluación completa
de la regulación de una ruta se requiere
analizar las concentraciones de metabolito
en la célula intacta, o en el organismo, bajo
ciertas condiciones.
 2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 

Se puede adquirir información valiosa estudiando mutaciones en

genes aislados asociadas a la producción de formas inactivas o
defectuosas de enzimas individuales.
Algunas herramientas modernas para el estudio de las rutas
metabolicas
- Metabólomica
- Proteómica
- Errores innatos del metabolismo
- Estudios mediante marcaje selectivo por inmunoflorencia
INIAP_473
 PROCESO BIOLOGICO
response to stress translational elongation response to inorganic substance
cellular homeostasis response to biotic stimulus

15%

44%
15%

15%

10%
 Hsp7
0

Protein disulfide isomerase (PDI) cataliza la conversión

de los tioles-disulfito y juega un rol importate en varios
Hsp
70

eventos fisiologidos en animales. En plantas tropicales se

ha encontrado que tiene un papel importante en
respuesta al estrés abiotico, además en arroz se ha
observado su importancia en la relación con proteínas de
almacenamiento
2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 

Un equipo de científicos de la Universidad de

Nueva York utilizó un microscopio fluorescente de
última generación para observar los núcleos de
las células humanas. Descubrieron que la
envoltura nuclear parpadea durante un período
de unos pocos segundos, y cambia durante el
ciclo celular.
 2.4.Métodos experimentales para el
estudio del metabolismo. 

Los investigadores de la Escuela de Medicina de Perelman

han descubierto nuevos detalles de las vías moleculares de
las células pulmonares que participan en la reparación y la Se observa un nuevo mecanismo de regeneración de
regeneración.. la glándula estomacal y el efecto que la infección por
Helicobacter pylori puede tener en este proceso.