INSTITUTO TECNOLÓGICO Y DE ESTUDIOS SUPERIORES DE

OCCIDENTE

Análisis, modelado y simulación de un proceso cinético enzimático

Departamento de Procesos Tecnológicos e Industriales

CINÉTICA QUÍMICA Y BIOLÓGICA
Otoño 2022
Tercer examen parcial

Por:
Karen Anahi Carreon Martinez Ing. Química.727077
Emilio Ambriz Barragán. Ing. Química. 731120

04 dediciembre de 2022
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Contenido
Abstract...................................................................................................................................................3
Antecedentes..........................................................................................................................................3
Objetivos.................................................................................................................................................3
Datos experimentales.............................................................................................................................3
Mecanismo de reacción..........................................................................................................................4
Ecuación de velocidad.............................................................................................................................4
Resultados...............................................................................................................................................5
Discusión de resultados...........................................................................................................................5
Conclusión...............................................................................................................................................5
Anexos.....................................................................................................................................................6
Referencias..............................................................................................................................................7

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Abstract
The directed evolution of enzymes is a
powerful methodology that allows obtaining
proteins with improved characteristics or with
new functions never before required in nature.
Nowadays, these enzymes, some of them of
industrial use and many others still in the
exploratory phase, can catalyze with high
efficiency synthetic processes that form even
non-natural compounds, with this we intend to
report how the enzyme LactaMAX developed
by protein engineering through directed
evolution and with this determine the initial
speeds at different concentrations of lactose.
Antecedentes
La evolución dirigida de enzimas es una
poderosa metodología que permite la
obtención de proteínas con características
mejoradas o con nuevas funciones nunca antes
requeridas en la naturaleza. Esta técnica imita
en el laboratorio los principios darwinianos de
la evolución natural: la introducción de
mutaciones al azar en el ADN que codifica para
la proteína de interés y la posterior selección
de aquellas variantes de la enzima que
presentan mejoras en la propiedad deseada.
Este proceso se repite las veces necesarias
hasta lograr biocatalizadores con aplicación en
biomedicina o en la industria.
La evolución dirigida recrea en el laboratorio
los principios darwinianos de evolución
natural, permitiendo el diseño de enzimas con
propiedades de alto interés biotecnológico en
ausencia de información estructural o
mecanística previa. En la evolución dirigida la
presión selectiva es controlada por el científico
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La evolución dirigida de enzimas es una
poderosa metodología que permite la
obtención de proteínas con características
mejoradas o con nuevas funciones nunca antes
requeridas en la naturaleza. Hoy en día, es- tas
enzimas, algunas de uso industrial y muchas
otras aún en fase exploratoria, pueden
catalizar con alta eficiencia procesos sintéticos
que forman incluso compuestos no naturales,
con esto se pretende reportar como la enzima
LactaMAX desarrollada por ingeniería de
proteínas a través de evolución dirigida y con
esta determinar las velocidades iniciales a
diferentes concentraciones de lactosa.
en busca de una mejora en una propiedad
enzimática concreta al tiempo que la escala
temporal se reduce a tan sólo meses, e incluso
días, de trabajo en el laboratorio.
 Las proteínas desempeñan una gran variedad
de funciones en el organismo, las enzimas en
especial, catalizan reacciones químicas
celulares , así pues, las proteínas son quizá las
macromoléculas más versátiles, que se
responsabilizan en gran parte de las funciones
metabólicas y de la morfología de los seres
vivos.
Salvo algunas excepciones las enzimas son
proteínas; cada proteína enzimática está
diseñada para catalizar una reacción específica,
y cada una de las reacciones celulares está
catalizada por una enzima diferente, por Io que
las enzimas poseen un elevado grado de
especificidad respecto a sus substratos,
aceleran reacciones químicas específicas y
funcionan en soluciones acuosas en
condiciones muy suaves de temperaturas y pH.
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ntre las miles de sustancias presentes en cada Objetivos

célula, las enzimas constituyen la parte más
importante de las proteínas celulares.
Esencialmente, todas las reacciones
bioquímicas son catalizadas por enzimas. A las
proteínas se les denotan varios niveles
estructurales que se definirán brevemente a
continuación: Estructura primaria, se refiere al
orden de los aminoácidos en la cadena
polipeptídica, la fuerza estabilizadora de esta
estructura es el enlace covalente
(peptídico) ;en esta estructura se incluye,
además de la secuencia de aminoácidos, la
localización de los puentes disulfuro (cistina).  por el modelo y interpretar los
 Determina los parámetros cinéticos que
aparecen en los modelos propuestos en
los incisos anteriores.
 Determina el modelo cinético que rige
al sistema sin presencia de glucosa.
 Reconocer el tipo de inhibición que se
presenta.
 Determinar la constante cinética del
modelo propuesto.
 Compara gráficamente los datos
experimentales contra los propuestos
resultados.

Datos experimentales 3 17.1630 36.2330

Parte 1: A partir de una serie de experimentos 6 17.7271 41.3632
en condiciones controladas, se probó la enzima 9 22.3488 54.2756
LactaMAX desarrollada por ingeniería de 12 22.7647 56.4903
proteínas a través de evolución dirigida. Se 15 19.1164 48.0807
lograron determinar las velocidades iniciales a 18 23.1306 58.7160
diferentes concentraciones de lactosa y en 21 20.9627 53.5712
presencia de 4.0 g/L de glucosa que actúa 24 21.0944 54.1838
como inhibidor. Los datos experimentales se
27 21.1905 54.6492
encuentran en la tabla 2 como S para sustrato,
30 19.6673 50.8851
Roexp para la velocidad sin inhibición y Riexp
33 23.3477 60.5684
para la velocidad medida en condiciones de
36 21.2355 55.2122
inhibición.
39 18.9219 49.2906
42 19.5584 51.0316
Tabla 2. Datos experimentales de la cinética de
45 25.5825 66.8446
la lactasa con y sin inhibición
48 23.5558 61.6258
Riexp (g/L Roexp (g/L
S (g/L)
h) h)
0 0.0000 0.0000
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Parte 2: En experimentos separados se

caracterizó la afinidad de la enzima por su
sustrato como se muestra la tabla 3, en donde
se agrupan datos de temperatura T y constante
de Michaelis

Tabla 3. Datos experimentales de la constante

de Michaelis a distintas temperaturas
T (°C) km (g/L) T (°C) km (g/L)
0 0.0275 18 1.9813
2 0.1096 20 2.7196
4 0.3195 22 2.0524
6 0.8708 24 0.4907
8 1.4124 26 0.0473
10 1.3794 28 0.0022
12 1.4163 30 0.0001
14 0.8424 32 0.0000
16 0.8464

Mecanismo de reacción

Ecuación de velocidad

Resultados

Discusión de resultados

Conclusión

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Anexos

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Referencias

- K Chen, FH Arnold FH. (1991) Enzyme

engineering for nonaqueous solvents: Random
mutagenesis to enhance activity of subtilisin E
in polar organic media. Biotechnology, 9, 1073-
1077 (1991).
- JR Cherry, AL Fidantsef. Directed evolution of
industrial enzymes: an update. Curr. Opin.
Biotech., 14, 438-443 (2003).
-  JD Bloom, MM Meyer, P Meinhold, CR Otey,
D MacMillan, FH Arnold. Evolving strategies for
enzyme engineering. Curr. Opin. Struc. Biol.,
15, 447-452 (2005).
-  Beynon R.J.& Bond J.S. (1993) Proteolytic
enzimes.

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