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Universidad Del Tolima - Facultad De Ing.

Agroindustrial

INFORME - TALLER #2 BIOQUIMICA


‘’CINETICA ENZIMATICA’’

Edwin Andrés Trujillo Castillo


Didier Aleixo Medina Ramírez

INTRODUCCIÓN

Las enzimas son proteínas (RNA) que catalizan reacciones químicas en las células. Cada enzima es
altamente específica para la reacción que cataliza. Esta especificidad está determinada por el centro
activo de la enzima (en donde se hallan los grupos químicos responsables de la catálisis). (Universidad
Pablo D Olavide Sevilla, 2019). La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones
químicas, que son catalizadas por las enzimas. Estos estudios proporcionan información directa
acerca del mecanismo de la reacción catalítica y de la especifidad del enzima. (Rodarte, Beatriz
(2013). Manual de prácticas de biología molecular de la célula I. Facultad de Ciencias, UNAM.) Los
reactivos de las reacciones catalizadas por encimas se denominan sustratos. Las enzimas son
catalizadores específicos: cada enzima cataliza un solo tipo de reacción, y casi siempre actúa sobre
un único sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos.

OBJETIVOS pasos también presentan una etapa limitante


con la que se puede lograr determinar la
Los objetivos del presente informe y por velocidad final de toda la reacción, esta puede
consiguiente de la actividad desarrolla es ser una reacción química o un cambio de la
determinar el coeficiente de especificidad de enzima o del sustrato.
algunas enzimas. Aprender a evaluar valores
del coeficiente de especificidad de una enzima LA CINETICA ENZIMATICA
y como afecta este valor a la interacción que
existe entre enzima – sustrato. Comprender las La cinética enzimática estudia la velocidad de
propiedades de la cinética enzimática y las reacciones catalizadas por enzimas. Estos
comprender valores de especificidad de una estudios proporcionan información directa
enzima para con un sustrato acerca del mecanismo de la reacción catalítica
y de la especifidad de la enzima. La velocidad
MARCO TEORICO de una reacción puede medirse con relativa
facilidad. ya que en muchos casos no es
ENZIMAS necesario purificar o aislar el enzima.

Las enzimas son macromoléculas capaces de El estudio de esta velocidad y de la dinámica


manipular otras moléculas, llamadas sustratos. de la enzima, nos permite conocer a fondo el
Un sustrato es el que puede ser capaz de unirse mecanismo de acción de dicha enzima, el rol
al centro catalítico de las enzimas y que esta lo que cumple en el metabolismo, ya la
reconozca y llegar a transformarse en una serie regulación de su actividad por inhibidores
de pasos determinado mecanismo enzimático. naturales, fármacos, venenos u otros tipos de
Algunos tipos de enzimas tienen la posibilidad sustancias.
de unir varios sustratos distintos y/o liberar
diversos productos. En distintos casos ocurre La medida se realiza siempre en las
la unión simultanea de dos sustratos como es condiciones óptimas, de pH, temperatura,
el caso del DNA-polimerasa, el cual es capaz presencia de cofactores, etc., y se utilizan
de introducir nucleótido a una hebra de ADN. concentraciones saturantes de sustrato
Aunque estos deben de llevar una serie de (universidad del pais vasco, 2019).
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primeras, aunque sus mecanismos de reacción


y sus cinéticas pueden ser estudiados y
clasificados por los mismos métodos.

MECANISMOS DE ACCIÓN DE LAS


ENZIMAS

La velocidad de reacción se debe a las enzimas


favorables, la energía de activación es una
Las enzimas son proteínas que son capaces de barrera por encima de las cual una molécula de
manipular a otras macromoléculas, llamados un producto debe para que lleve a cabo una
sustratos. Un sustrato es capaz de unirse al reacción, se le puede definir como la energía
sitio activado de una enzima, es decir, se une a necesaria para llevar un mol de reactantes
una determinada zona de la enzima, diseñada hasta un estado de transición ( es un estado que
especialmente para unirse a un sustrato. Una posee mayor cantidad de energía libre,
vez que esta unión se ha dado, se produce, la cualquier cambio energético favorece a la
catálisis, es decir, la obtención de productos a generación de productos) no todas las enzimas
partir del sustrato, gracias a la acción aceleran la velocidad y no todas lo hacen con
enzimática (Gonzales, 2010). la misma magnitud, cada enzima al interactuar
con su sustrato genera un resultado transitorio
 La catálisis enzimática es esencial para llamado: complejo enzima- sustrato.
sistemas vivos.
 Nos permite distinguir las enzimas CINETICA DE MICHAELIS MENTEN
 Distinguir entre isoenzimas
 Nos permite reconocer las diferencias En 1903 se propuso la idea de que las enzimas
entre las actividades de un tejido u otro. cambian con su sustrato para formar un
 Permite conocer la afinidad con los complejo, esta idea fue desarrollada por
sustratos Michaelis y Maunt Menten y se convirtió en la
 La unidad internacional es: μmol S /min. teoría general de las enzimas. Las reacciones
enzimáticas se caracterizan porque, aunque se
MECANISMOS ENZIMATICOS aumente la concentración de sustrato la
velocidad no aumenta linealmente, aparece un
Los mecanismos enzimáticos pueden ser efecto de saturación. La saturación se debe a
divididos en mecanismo de único sustrato o que todos los centros activos están ocupados.
mecanismo de múltiples sustratos. Los La velocidad depende de la cantidad de enzima
estudios cinéticos llevados a cabo en enzimas con sustrato suficiente. Consideraremos sólo
que solo unen un sustrato, como la la velocidad inicial de las reacciones para cada
triosafosfato isomerasa, pretenden medir la concentración de sustrato cuando se construya
afinidad con la que se une el sustrato y la una gráfica, evitando el error introducido por
velocidad con la que lo transforma en el deterioro del enzima. Como en el primer
producto. momento no hay producto no consideraremos
la reacción contraria.
No obstante, no todas las catálisis son llevadas
a cabo por enzimas proteicas. Existen DIAGRAMA DE HANES
moléculas catalíticas basadas en el ARN,
como las ribozimas y los ribosomas, En bioquímica, el diagrama Hanes–Woolf se
esenciales para el splicing alternativo y la emplea como herramienta gráfica para
traducción del ARNm, respectivamente. La calcular los parámetros cinéticos de una
principal diferencia entre las ribozimas y los enzima. En él se representa la relación
ribosomas radica en el limitado número de concentración de sustrato/velocidad de
reacciones que pueden llevar a cabo las reacción frente a la concentración de sustrato
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[S]. Es una de las formas de linealizar la RESULTADOS


ecuación de Michaelis-Menten.
Ejercicio 1
𝑆 [𝑆] 𝐾𝑚
= + Enzima A
𝜐 𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑉𝑚𝑎𝑥 [S] Velocidad
(mM) (μM/min) 1/S 1/Velocidad
donde
V: velocidad de reacción, 0,0002 0,3373 5000 2,964719834
Km: constante de Michaelis-Menten, 0,0002 0,3364 5000 2,972651605
Vmax: velocidad máxima 0,0005 0,6945 2000 1,439884809
[S]: concentración de sustrato. 0,0005 0,6957 2000 1,437401179
0,001 1,0764 1000 0,929022668
La ecuación se puede obtener a partir de la
de Michaelis siguiendo los siguientes pasos: 0,001 1,1407 1000 0,876654686
0,005 1,9636 200 0,50926869
𝑉𝑚𝑎𝑥 [𝑆] 0,005 1,706 200 0,586166471
𝜐=
𝐾𝑚 + [𝑆] 0,01 2,0641 100 0,484472652
0,01 2,0751 100 0,481904487
Invirtiendo y multiplicando por [S]:

𝑆 [𝑆](𝐾𝑚 + [𝑆]) 𝐾𝑀 + [𝑆]


= = 1/Velocidad
𝜐 𝑉𝑚𝑎𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚𝑎𝑥 4

3 y = 0.0005x + 0.4261
Reordenando: R² = 0.9991
2

𝑆 1 𝐾𝑚 1
= [𝑆] +
𝜐 𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑉𝑚𝑎𝑥
0
0 1000 2000 3000 4000 5000 6000
La representación gráfica de Hanes permite
identificar el Km Vmax; el punto de corte con el
eje de coordenadas es el equivalente a coeficiente de
Km/Vmax, y el de abscisas es el valor de −Km. Vmax Km especificidad
2,34686693 0,00117343 2000

Enzima B
[S] velocidad
(mM) (μM/min) 1/S 1/Velocidad
0,005 0,3962 200 2,523977789
0,005 0,3857 200 2,592688618
0,01 0,6163 100 1,622586403
0,01 0,6413 100 1,559332606
0,05 1,56069 20 0,640742236
0,05 1,5689 20 0,637389254
0,1 1,9862 10 0,50347397
0,1 1,7909 10 0,558378469
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0,25 2,2011 4 0,454318295 𝐾𝑚 = 590,6 ∗ 𝑉𝑚𝑎𝑥


0,25 2,2047 4 0,45357645 𝐾𝑚 = 590,6 ∗ 2,7144 = 1603,12 𝜇𝑀
Sabemos que 𝑉𝑚𝑎𝑥 = 𝐾𝑐𝑎𝑡 [𝐸]𝑡 , por lo tanto
1/Velocidad 𝑉𝑚𝑎𝑥
𝐾𝑐𝑎𝑡 =
3 [𝐸]𝑡
y = 0.0108x + 0.4322
2 R² = 0.9967 2,7144 𝜇𝑀 𝑆 −1
𝐾𝑐𝑎𝑡 = = 904,8 𝑆 −1
1 0,003 𝜇𝑀

0
0 50 100 150 200 250
DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES
coeficiente de En el ejercicio 1 se dan los valores de
Vmax Km especificidad concentración de sustrato y velocidad de dos
2,31374364 0,02498843 92,59259259 enzimas, los valores obtenidos muestran que la
enzima “A” es más específica por el sustrato,
debido a que su coeficiente de especificidad (A
Ejercicio 2 = 2000 min-1) es más alto que el coeficiente de
especificidad de “B” (92,59259259 min-1).

El valor de Km es menor en la enzima “A”


(0,00117343) mientras que en la enzima “B”
(0,02498843) su valor es más alto, esto
sugiere que la enzima “A” tiene una mayor
afinidad con el sustrato para formar el
complejo enzimático, debido a que necesita
menor cantidad de sustrato para lograr
alcanzar un medio de la Vmax.

Con respecto al valor de Vmax de cada enzima,


Se observa que se utilizó la ecuación de se puede notar que la enzima A es mas
Hanes-Woolf eficiente que la enzima “B”, comparando sus
[𝑆] 1 𝑘𝑀 valores (A=2,34686693) y (B=2,31374364)
= [𝑆] + existe una diferencia de 0,03312329 en
𝑉 𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑉𝑚𝑎𝑥
velocidad máxima de reacción en la formación
del complejo enzima sustrato.
Los datos del problema son:

m = 0,3684 s Μm-1 Bibliografía


b = 590.6 s Gonzales, M. (21 de 10 de 2010). La Guia.
Obtenido de La Guia:
1 https://quimica.laguia2000.com/conc
𝑉𝑚𝑎𝑥 = = 2,7144 𝜇𝑀 𝑆 −1
0,3684 eptos-basicos/cinetica-enzimatica
universidad del pais vasco. (23 de 09 de
2019). universidad del pais vasco.
Universidad Del Tolima - Facultad De Ing. Agroindustrial

Obtenido de universidad del pais


vasco:
http://www.ehu.eus/biomoleculas/enz
imas/enz3.htm
Universidad Pablo D Olavide Sevilla. (24 de
09 de 2019). Universidad Pablo D
Olavide Sevilla. Obtenido de
Universidad Pablo D Olavide Sevilla:
https://www.upo.es/depa/webdex/qui
mfis/miembros/Web_Sofia/GRUPOS
/Tema%207.pdf