CALIBRACIÓN CON ESTÁNDAR INTERNO

Dra. Cecilia Mejía Dominguez

 AGENDA

1. Exposición sobre el tema

2. Resolución de Ejercicios sobre calibración con
estándares internos.
3. Preguntas
4. Resumen
5. Práctica:
6. Evaluación
7. Tarea
 CAPACIDAD DE LA UNIDAD 2
SESIÓN 06
Ante la importancia de validar un método
TEMA: instrumental, realiza la calibración de los
Calibración de los métodos métodos analíticos, en base a la metodología
instrumentales con establecida por la AOAC y la norma ISO 17025.
estándar interno:
INDICADOR DE LOGRO
Elabora la curva de calibración de los
métodos instrumentales mediante un
estándar interno.
 CALIBRACIÓN CON ESTÁNDAR INTERNO

La calibración con estándar ó patrón

Entre estas se tiene:
interno se utiliza para compensar errores
• La variación de la velocidad de
aleatorios y sistemáticos como
nebulización, del tamaño de
interferencias no espectrales de
gota, fluctuaciones de las
componentes de la matriz, fluctuaciones
presiones gaseosas, de la
debidas del método y errores
viscosidad y tensión superficial.
instrumentales

Se selecciona como estándar interno, Se aplica este método en

una sustancia diferente del analito
que presente propiedades similares a
las del analito, tal que ambos sean
afectados similarmente durante el
análisis.
técnicas instrumentales que
permitan la determinación
multielemental.
Un estándar interno es
una sustancia que se
añade a todas las
muestras en una
cantidad constante.
La calibración supone
representar la razón
entre la señal del
analito y la del
estándar interno como
una función de la
concentración del
analito. Figura : Esquema del procedimiento de calibración con patrón interno
APLICACIÓN DEL MÉTODO:

• Realizar medidas simultaneas de la respuesta del instrumento al analito y al estándar

interno.
• El estándar interno se añade en una cantidad conocida y constante a la muestra, y a los
estándares del analito.
• En la gráfica de calibrado se representa la relación Señal analito/Señal de estándar interno
en función de la concentración del analito en los estándares. De esta manera la respuesta
del instrumento o la señal analítica es independiente, de la fluctuación debida al método de
análisis.

VENTAJAS:
Al compensar el efecto de los
errores no controlados, se obtienen
resultados muy exactos y precisos
DESVENTAJAS;
se trata de un procedimiento más laborioso que
cualquier otro método de calibración
convencional. Además de la dificultad de
encontrar una sustancia adecuada para que sea
utilizada como patrón interno.
 Cuantificación de compuestos por cromatografía: Método del Patrón Interno

Cuando se quiere cuantificar un compuesto presente en una muestra por el método

del patrón interno, los pasos a seguir son los siguientes:

1. Preparar una serie de disoluciones de concentraciones crecientes, del patrón

correspondiente al compuesto a cuantificar. El intervalo de concentraciones ha de
ser similar a la concentración del analito en la muestra problema.
2. Añadir a cada uno de los patrones y a la muestra una misma cantidad o
concentración de patrón interno. El patrón interno ha de ser un compuesto de
naturaleza similar al analito a determinar, pero que no esté presente en la muestra.
Por ejemplo, en un análisis de azúcares en fresas un patrón interno podría ser
lactosa, ya que se trata de un azúcar, pero no está presente en las fresas.
3. Inyectar el mismo volumen en el cromatógrafo de cada una de las disoluciones
patrón que contienen el patrón interno, así como del extracto de la muestra que
también contiene el patrón interno. De esta forma tendremos los distintos
cromatogramas de los patrones (un cromatograma para cada disolución patrón) y el
cromatograma de la muestra.
 EJEMPLO 1:
Se analizan trazas de benceno en una muestra de agua usando análisis de
espacio de cabeza. Las muestras y los estándares se adicionan con una
cantidad fija de tolueno, como estándar interno. Se obtienen los datos
siguientes:

Benceno Tolueno (ppm) Señal Benceno Señal Tolueno

(ppm) Patrón interno (Área) (Área)
10.0 1 252 376
15.0 1 373 370
25.0 1 636 371
Muestra 1 533 368

¿Cuál es la concentración de benceno en la muestra)

SOLUCIÓN

Benceno Tolueno Señal Señal Relación de la Relación de

(ppm) (ppm) Benceno Tolueno concentración la señal (S”)
Patrón (Área) (Área) (C”) B/T
interno B/T
10.0 1 252 376 10 0.670
15.0 1 373 370 15 1.008
25.0 1 636 371 25 1.714
Muestra 1 533 368 X/1 1.448

Preparación Lectura equipo Calculada

GRAFICAR LA C” Y S”
EJEMPLO 2 2.
Se desea determinar la concentration de glucosa en g% en una muestra de mermelada,
aplicando una metodología de calibración con estándar interno.
Se prepara una solución patron de glucosa (250 mg de glucose en 200 ml) y a partir de
esta solución se prepara los estándares midiendo 2, 4,6, 8 10 y 12 ml en un volumen de 50
ml. Asimismo se prepara un patrón interno de lactosa (100 mg de lactosa en 250 ml) del
cual se añade 5 ml a cada solución estándar de glucosa. La muestra se preparó de la
siguiente forma: 500 mg y se lleva a volume de 100 ml previa adición del patron interno ( 5
ml).
Datos:
Glucosa: Pureza 99%
Humedad 2% ---98% patron anhidro
Lactosa: Pureza 97%
Humedad : 5 % ……. Patron refe 95% anhidra
Muestra Problema: 500 mg de mermelada
Señal de la Glucosa: 0,1723
Señal de Lactosa : 0.1234
Determine:
a) La concentración de la solución patron de glucosa en mg/ml
b) La concentración del patron interno en mg/ml y la concentración que se añade a cada estándar de glucosa
.c) La concentracion de glucosa en la muestra expresado en g%

Glucosa (mg/ml) Lactosa (mg/ml)

Std mg/ml Señal mg/ml Señal
1 0.1014 0.2539
2 0.2045 0.2342
3 0.2985 0.2611
4 0.4186 0.2234
5 0.5024 0.2488
6 0.5933 0.2707
SOLUCIÓN
MP X 0.1723 0.1234
 Ejemplo 2: Lactosa.
5 ml
2 ml Pureza: 97%
Estandar glucosa: % H: 5% --- 95%
Pureza 99% 50 ml
% Humedad 2%
PATRON
5 ml INTERNO
4 ml

50 ml
100 mg
250 mg
6 ml 5 ml

50 ml

8 ml 5 ml

50 ml

250 ml
10 ml 5 ml
200 ml Soluciòn Madre:
50 ml cc 0,37 mg/ml
Soluciòn madre:
Cc = 1,213 mg/ml 100 mg x 97 x 95 = 92.15 mg = 0,37 mg/ml
5 ml 100 100 250 ml
12 ml
50 ml
 GLUCOSA
Hallar concentración de cada estándar:
Std 1 1,213 mg x 2 ml = 0,0485 mg/ml
ml 50 ml

LACTOSA
Std 2 1,213 mg x 4 ml = 0,0970 mg/ml
ml 50 ml

1,213 mg x 6 ml = 0,1455 mg/ml 0,37 mg x 5 ml = 0,037 mg/ml

Std 3
ml 50 ml ml 50 ml

Std 4 1,213 mg x 8 ml = 0,1941 mg/ml

ml 50 ml

Std 5 1,213 mg x 10 ml = 0,2426 mg/ml

ml 50 ml

Std 6 1,213 mg x 12 ml = 0,2911 mg/ml

ml 50 ml
 Std Glucosa Lactosa C” Señal “
G/L G/L
C (mg/ml) Señal C (mg/ml) Señal
5 ml St lactosa
1 0,049 0,1014 0,037 0,2539 1,324 0,3994
2 0,097 0,2045 0,037 0,2342 2,622 0,8732
3 0,146 0,2985 0,037 0,2611 3,946 1,1432
4 0,194 0,4186 0,037 0,2234 5,243 1,8738
5 0,243 0,5024 0,037 0,2488 6,568 2,0193
6 0,291 0,5933 0,037 0,2707 7,865 2,1917
500 mg

100 ml Esto reemplazar

Señal= 0.1723 = 1.3963 en la ecuación de la
0,1234 grafica
Señal:
Glucosa: 0,1723
Lactosa: 0,1234 C = 4,53 = C glucosa = cc glucosa
Cc lactosa 0,018
Cc lactosa = 0,37 mg/ml x 5 ml = 0,018 mg/ml
100 ml
Cc glucosa = 0,084 mg/ml
Ahora en % = 0,084 mg/ml x 100 ml x 100
Muestra (mg)
Ver Excel Clase 6… % glucosa = 1,7
EJERCICIOS PARA ELABORAR CURVA DE CALIBRACION CON PATRÓN
INTERNO
 REFERENCIAS

Douglas A. Skoog, Stanley R. Crouch, F. J Holler (2008). Principios de Análisis

Instrumental. 6° Edición. Editor Cengage Learning
https://www.academia.edu/37326567/Principios_de_an%C3%A1lisis_instrumental_
6ta_Edici%C3%B3n_Douglas_A._Skoog_LIBROSVIRTUAL
Fundación Cetabol
. Servicio de Laboratorio: https://www.cetabol.bo/sitio/index.php/laboratorio/nut
ricion-animal/analisis-de-sales-minerales
Espejo, M. (2016). Importancia de la calibración en los Laboratorios de Química
Analítica. Facultad de Farmacia - Universidad de Sevilla
https://idus.us.es/bitstream/handle/11441/54518/IMPORTANCIA%20DE%20LA.pdf
?sequence=1&isAllowed=y
Zumbado, F. H (2004): Análisis Químico de los Alimentos – Métodos Clásicos.
https://juliocruz82.files.wordpress.com/2011/08/analisis-quimico-de-los-alimentos-
mc3a9todos-clc3a1sicos.pdf