RESUMEN:

La hierba Radix Polygoni Multiflori Se

ha utilizado como tónico y hierba
antienvejecimiento en la medicina
tradicional china.

En estudios clínicos, el extracto de Radix Polygoni Multiflori

puede mejorar la hipercolesterolemia, la diabetes y otras
enfermedades comúnmente asociadas con el metabolismo de
los glucolípidos, sin embargo, los mecanismos moleculares de
estas acciones son desconocidos.
UCSM
OBJETIVO DE ESTUDIO:
Se diseñamos una estrategia de detección de drogas
basada en RMN para descubrir sustancias activas a partir
de medicamentos a base de hierbas, utilizando Radix
Polygoni Multiflori como ejemplo para abordar un tema tan
desafiante, mientras tanto, para explorar el objetivo
molecular de Radix Polygoni Multiflori's beneficio del
metabolismo de glucolípidos.

UCSM
 INTRODUCCIÓN

Los medicamentos de la medicina tradicional a base de hierbas son

una forma efectiva, y debido a que los productos naturales de las
hierbas medicinales han sido preseleccionados evolutivamente para
modular las vías bioquímicas, tienen intrínsecamente una mayor
similitud con los medicamentos, lo que resulta en una mayor
oportunidad de interacción con la proteína objetivo.

UCSM
LA ESPECTROSCOPÍA de resonancia magnética nuclear (RMN)
se valora rutinariamente por su capacidad de arrojar luz sobre la
estructura molecular, además, la RMN es una herramienta
prometedora en la detección de fármacos, que puede detectar y
cuantificar las interacciones moleculares y, al mismo tiempo,
proporcionar información estructural detallada con resolución a
nivel atómico. En cuanto a una herramienta de detección, la RMN
puede detectar interacción débil con precisión, por lo que puede
ampliar el conjunto de herramientas del químico farmacéutico a un
rango de afinidad más amplio.

UCSM
 FRACCIÓN 1
Extraer cromatografía de
FRACCIÓN 2

columna
MAYOR SEPARACIÓN
SUBFRACCIÓN 1
SUBFRACCIÓN 2

ESPECTROS DE H RMN

RESONANCIAS
RESUELTAS EN LA
REGIÓN
≥ 5,0 ppm

Y + PROTEÍNA OBJETIVO

LIGANDO DETECTÓ
EXPERIMENTOS DE RMN

PERTURBACIÓN DE CAMBIO DE LÍNEA DE

RMN O PERTURBACIÓN DE CAMBIO QUÍMICO
TENER
GOLPES, Y
/N
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Figura 1. El protocolo descrito para nuestra detección de drogas basada en RMN a partir de medicamentos a base de hierbas .
En el método, los extractos de hierbas medicinales se sometieron en
primer lugar a una separación moderada para generar bibliotecas de
productos naturales de sub-fracciones pre-purificadas, que tienen
características de el espectro de RMN 1H se resolvió en el cambio
químico ≥5,0 ppm, luego se agregó proteína diana relacionada con la
enfermedad a cada sub-fracción, y se realizaron experimentos de
detección de interacción de RMN observados por ligando. Una vez que
se descubrió una posible sub-fracción, se realizó la identificación y
optimización del golpe utilizando la información estructural
proporcionada por la detección de interacción de RMN observada por
ligando. La utilidad de la estrategia se demuestra con el ácido graso
humano (ojo)
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 2. MATERIAL Y MÉTODO
2.1 REACTIVOS Y MATERIALES:

Base Polygoni Multiflori la hierba se recolectó de la prefectura de Enshi, provincia

de Hubei, China, proteína de unión a ácido graso humano recombinante-4 (FABP
4).

se adquirió de Cayman Chemical, dimetil sulfóxido de deuterio (DMSO-d 6, 99,9%

D), acetonitrilo de deuterio (CD 3 CN- D 3) y deuteróxido (D 2 O) se compraron en
Cambridge Isotope Laboratories, los solventes utilizados para la cromatografía en
columna fueron todos de grado analítico.

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Figura 2. Espectros de RMN 1H de estas sub-fracciones obtenidas de Radix Polygoni Multiflori. UCSM
 2.2 PREPARACIÓN DE UNA BIBLIOTECA DE PRODUCTOS
NATURALES PRE-FRACCIONADOS:
Se molieron 2 kg de material vegetal secado al aire en polvo homogéneo, el polvo se extrajo luego con agua
destilada. El extracto fue primero precipitado con etanol al 70% para eliminar los polisacáridos y proteínas,
luego se repartió usando n-BuOH y H2O.

El extracto bruto de n-BuOH (30 g) se sometió a separación

repetida. con gel de sílice C.C. y ODS, el proceso de separación
fue monitoreado por TLC y 1H NMR, hasta que la sub-fracción
resultante tenga su resonancias de protones resueltas en cambio
químico ≥5.0 ppm.

Se obtuvieron cuatro sub-fracciones, denominadas B1, B2, B4-1 y

B4-3. El extracto crudo de H2O (10 g) se sometió a separación
repetida con resinas adsorbentes macroporosas AB-8 y gel ODS
C.C., el proceso de separación se controló por TLC y 1H NMR,
hasta el resultado la sub-fracción tiene sus resonancias de
protones resueltas en el cambio químico ≥5.0 ppm. Se obtuvieron
tres sub-fracciones, denominadas W1, W2 y W3. UCSM
3.3 PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN PARA LA DETECCIÓN DE
DROGAS BASADAS EN RMN

 Cada fracción se eliminó de los disolventes residuales por vacío, el sólido se

disolvió luego en DMSO como solución saturada marcada como solución madre A.
 La solución de proteína objetivo se preparó inmediatamente antes de la detección
del fármaco basada en RMN, y se disolvieron 100 μg de proteína objetivo en 5 mL
D2O marcado como solución madre B.
 Para cada sub-fracción, se prepararon muestras libres de proteínas objetivo y
muestras que contienen proteínas objetivo, la muestra libre de proteínas objetivo se
preparó con 25 μL de solución A añadida a 475 μL D2O, se preparó una muestra
que contenía proteína diana con 25 μL de solución A añadida a 475 μL de solución
B.

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