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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE YUCATN FACULTAD DE QUMICA ANLISIS DE DROGAS Y MEDICAMENTOS

Prctica 6 Identificacin y cuantificacin de Naproxeno por cromatografa de lquidos

Equipo 4: Manzanilla Rivas Ral Mijangos Ramos Ivn Felipe Rangel Mndez Jorge Aarn Snchez Yama Jorge

Fecha de entrega:

16-Abril-2010 6to. Semestre Saln 7

INTRODUCCIN El naproxeno es antiinflamatorio no esteroidal derivado del cido fenilpropinico que presenta actividad analgsica as como antipirtica. Tiene apariencia de polvo blanco cristalino, carece de olor caracterstico y es prcticamente insoluble en agua. Es ampliamente empleado en la farmacologa y administrado generalmente por va oral. Por esta va es absorbido a nivel de las membranas del tracto gastrointestinal para pasar a la circulacin sangunea y posteriormente se dirige al sitio blanco para ejercer su accin farmacolgica 1. Su uso se asocia a una menor incidencia de alteraciones gastrointestinales que la del AAS por lo que se le da un uso muy amplio en el rea de la farmacologa. Como es el caso de cualquier medicamento de uso generalizado la industria farmacutica requiere de herramientas y mtodos para el monitoreo de la cantidad de principio activo en este tipo de formas farmacuticas y encuentra en la Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (CLAR) una poderosa herramienta. La CLAR es una tcnica de separacin constituida por una fase estacionaria slida y una fase mvil lquida. Las separaciones se logran por particin, 2

adsorcin o procesos de intercambio inico, segn el tipo de fase estacionaria empleada. Los compuestos a analizar se disuelven en un lquido orgnico y la mayora de las separaciones tienen lugar a temperatura ambiente. Por lo tanto, la mayora de las drogas, sean compuestos no voltiles o trmicamente inestables, pueden analizarse mediante esta tcnica sin riesgo de descomposicin. El tiempo de elusin de un compuesto puede ser descrito por su factor de capacidad, ya que depende de la naturaleza qumica del compuesto analizado, la composicin y la velocidad de flujo de la fase mvil y la composicin y el rea superficial de la fase estacionaria. La longitud de la columna es un parmetro determinante de la resolucin. Slo los compuestos que tienen diferentes factores de capacidad pueden ser separados por CLAR 2. Se estima que entre el 80 y el 90 % de las separaciones analticas son realizadas en la modalidad de fase inversa. Prcticamente todas las separaciones en fase inversa son llevadas a cabo con fases estacionarias con superficies hidrofbicas qumicamente modificadas. Pequeas variaciones en la superficie qumica y geomtrica puede conducir a notables diferencias en la interaccin con la superficie, y como resultado de esto, diferencias en la selectividad cromatogrfica. La fase mvil por mucho es la mayor herramienta para el control de la retencin del analito en el anlisis mediante CLAR en fase inversa. Variaciones en la composicin del disolvente, tipo de modificador orgnico, pH, y concentracin del buffer proveen al cromatgrafo de un valioso conjunto de variables para el desarrollo con xito de un mtodo de separacin 3. El detector de absorbancia de UV/Vis monitorea la absorcin de luz ultravioleta o visible en el efluente de CLAR. Son los detectores ms comunes ya que la mayora de los analitos de inters para el rea farmacutica presentan absorbancia UV. El detector de arreglo de fotodiodos, proporciona espectros UV mientras que funciona como un detector de absorbancia multifrecuencia UV/Vis. Facilita la identificacin de los picos y es por esto el detector preferido en la elaboracin de mtodos analticos. La validacin del mtodo analtico es parte integral del sistema de control de calidad, puesto que confiere fiabilidad a los

resultados analticos obtenidos en un anlisis, a fin de asegurar que un medicamento cumpla los parmetros de calidad establecidos. La validacin del Factor COLUMNA Descripcin Octadecil silano unido qumicamente a poros de gel slice o micropartculas de cermica (water CL-18) DIMENSIONES 4.6 mm x 15 cm PRESIN MXIMA 248 bar FASE MVIL Acetonitrilo-agua (50:50) FLUJO 1.0 mL/min DETECTOR UV-VIS 254 nm mtodo es un proceso dinmico y no debe ser considerado una situacin de una sola ocasin. El diseo y validacin del mtodo debe ser tal forma que asegure robustez a lo largo de la vida del mtodo. La precisin de los datos es afectada por las variaciones en el proceso de preparacin, la preparacin de la muestra y el rendimiento del instrumento. Cuando los mtodos validados son confiables se generan datos que resultan dignos de confianza.4
Se recomienda separar con doble espacio los prrafos de la introduccin

OBJETIVO El alumno aprender a usar el cromatgrafo de lquidos para cuantificar una muestra problema de Naproxeno, empleando el mtodo de calibracin absoluta. METODOLOGA Condiciones de cromatgrafo: Preparacin de la fase mvil. Se prepararon 30 mL de una mezcla de metanol (grado HPLC) y agua en proporcin 50:50.

Preparacin de la mezcla de disolvente. Se prepararon 20 mL de una mezcla de metanol (grado HPLC) y agua en proporcin 90:10. Preparacin de la solucin de referencia. Se prepar una solucin de la sustancia de referencia en mezcla de disolvente con una concentracin de 2.5 mg/mL de naproxeno; para lo cual, se pes 25 mg de naproxeno y se mezcl con la solucin de mezcla de disolvente en un matraz volumtrico de 10 mL y se llev hasta lnea de aforo. Posteriormente se prepararon 10 mL de una dilucin de 25 g/mL de de naproxeno en fase mvil; para lo cual, se utiliz 0.1 mL de alcuota de la solucin anterior, se adicion en un matraz volumtrico y se llev al aforo de 10 mL con fase mvil. Preparacin de la solucin de la muestra. Se pesaron 5 tabletas de medicamento naproxeno marca GI. Se trituraron las tabletas en un mortero hasta polvo fino y se trasfiri en un vaso de precipitados 31.7 mg (cantidad equivalente a 25 mg de naproxeno); se aadi 1 mL de agua destilada y se agit vigorosamente hasta completa dispersin. Despus se filtr la mezcla directamente a un matraz volumtrico de 10 mL; se llev a lnea de aforo con metanol (grado HPLC), se mezcl y transfiri una alcuota de 0.1 mL en un matraz volumtrico de 10 mL. Posteriormente se afor con fase mvil y se mezcl perfectamente. Cuantificacin de la muestra problema. La cuantificacin del naproxeno se llev a cabo mediante Cromatografa de Lquidos de Alta Eficiencia (CLAE o HPLC por sus siglas en ingls). Se utiliz el equipo Agilent Technologies 1200 series, se ajustaron los parmetros y se inyect volmenes iguales de 20 L de la preparacin de referencia y de la muestra problema. Se registraron los cromatogramas y se midieron los tiempos de retencin de los picos principales. Se hall el rea bajo los picos e inform la cantidad de C14H14O3 que haba en la muestra tomada.

DIAGRAMA DE FLUJO

Figura 1. Preparacin de la fase mvil y la mezcla de disolvente.

Figura 2. Metodologa empleada en la determinacin de naproxeno por CLAE.

RESULTADOS Se pesaron las cinco pastillas de naproxeno requeridas para la determinacin. Los pesos se aprecian en la tabla 1.

Tabla 1. Peso de las pastillas de naproxeno. Nmero de astilla 1. 2. 3. 4. 5. Total Peso (mg) 319.3 316.0 316.3 319.3 317.2 1588.1

El marbete de las pastillas indicaba que contenan 250 mg de naproxeno, por tanto, la cantidad pesada de las cinco pastillas trituradas equivalente a 25 mg de naproxeno fue de 31.76 mg. Se procedi con la determinacin empleando el cromatgrafo de lquidos. Los cromatogramas obtenidos para la solucin de referencia y para la muestra problema se aprecian en las figuras 3 y 4 respectivamente.

Figura 3. Cromatograma de la solucin de referencia.

Figura 4. Cromatograma de la muestra problema.

La informacin ms relevante de cada cromatograma se resume en la tabla 2. Cabe sealar, que el pico de importancia en cada caso es el que aparece a

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2.29 minutos correspondiente al naproxeno y por tanto se proporciona la informacin slo de este pico.

Tabla 2. Parmetros obtenidos de los cromatogramas de la solucin de referencia y de la muestra problema. Parmetros Tiempo Ancho del tiempo rea Altura rea (%) Solucin de referencia 2.293 minutos 0.0815 minutos 492.74280 mAU*s 90.55084 mAU 93.3743 Muestra problema 2.293 0.0858 498.33398 mAU*s 88.36023 mAU 95.0201

Por ltimo se calcul la cantidad de naproxeno en mg presentes en los 31.76 mg pesados originalmente para la determinacin de la siguiente manera: 1. Se emple la frmula: DC (Rmp / Rref) D = Factor de dilucin de la muestra problema. C = Cantidad de naproxeno en referencia Rmp / Rref = reas de los picos obtenidos

2. Sustituyendo la frmula: (100) (0.025 mg/mL) (498.33/492.74) = 2.52 mg/mL (2.52 mg/mL) (10 mL) = 25.28 mg de naproxeno 11

3. Las cinco pastillas debieron tener 1250 mg de naproxeno tericamente ya que cada una contena 250 mg de naproxeno. Sin embargo experimentalmente se obtuvo que: 31.76 mg ------------------------------------ 25.28 mg de naproxeno 1588.1 mg ----------------------------------X = 1264.07 mg de naproxeno. DISCUSIONES Con base en los resultados obtenidos en el anlisis de naproxeno para su identificacin y cuantificacin por CLAE se tiene que: El porcentaje de principio activo presente en las cinco pastillas utilizadas en este anlisis est dentro del margen indicado por la FEUM, ya que esta establece un rango de 90-110 % de principio activo y la muestra analizada present un porcentaje de 101.12 %. Este valor es muy importante ya que garantiza que el frmaco desarrolle de manera satisfactoria su actividad farmacolgica en el organismo. Con respecto a la identificacin de naproxeno: Se puede observar que, debido al tempo de retencin y al carcter polar del naproxeno, este tuvo una elucin relativamente rpida. Esto era de esperarse ya que en este anlisis por CLAE de fase inversa los analitos mas polares eluyen de manera ms rpida. Se puede apreciar una gran similitud entre los cromatogramas, ya que los picos pertenecientes al naproxeno presentan tiempos de retencin idnticos, 2.293 para la referencia y la muestra; en cuanto al rea, los valores son similares 12 X

492.74 y 498.33 mAU*s para la referencia y muestra respectivamente. Es en estos datos donde se puede observar una variacin poco significativa la cual ocasion el aumento en el porcentaje de principio activo, que sin embargo est dentro del rango permitido por la FEUM. Los primeros dos picos que se aprecian en cada uno de los cromatogramas pueden deberse a impurezas presentes en los disolventes y que no son retenidas por la columna. Absorbieron luz Uv a la misma longitud de onda del naproxeno y se puede decir que son especies con una considerable polaridad debido a que sus tiempos de retencin son muy bajos y por lo tanto eluyeron con bastante rapidez.

CONCLUSIONES Se cumpli con el objetivo de la prctica de aprender a cuantificar por CLAE una muestra problema empleando el mtodo de calibracin absoluta. De acuerdo a la cuantificacin de las tabletas de naproxeno de 250 mg realizada por CLAE se obtuvo un porcentaje de principio activo de 101.12 % el cual est dentro del rango establecido por la FEUM. El mtodo utilizado posee una gran eficacia en la separacin de los compuestos que conforman una muestra problema en un tiempo bastante corto y con resultados satisfactorios.

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Es de gran importancia que los disolventes utilizados sean de grado HPLC para evitar cualquier dato errneo en el anlisis producido por alguna impureza contenida en el disolvente.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 1. P.A. Insel, Analgsicos-Antipirticos y Antiinflamatorios, y Frmacos Antigotosos, En: Goodman & Gilman. Las bases Farmacolgicas de la Teraputica,8a edicin, Editado por, J.G. Hardman, L.E. Limbird, P.B. Molinoff, R.W. Ruddon y A.G. Gilman, McGraw-Hill Interamericana Editores, S.A., Mxico, 1996, pp. 661-686. 2. Meyer, V; Practical High Performance Liquid Cromatography; 4a edicin, John Wiley & Sons. Inc; St. Gallen,Switzerland; 2004; pp.261-265 3. Dong,M; Modern HPLC for Practicing Scientists; 4 edicin; John Wiley & Sons, Inc; Hoboken, New Jersey ;2006; pp.136-143 , 195-201.

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