UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA) LABORATORIO DE

BIOQUÍMICA
Facultad de Química e Ingeniería Química
---------------
EAP de Ingeniería Química
SEXTO
CICLO

LABORATORIO 2
GRUPO: 5
DOCENTE: Orihuela
INTEGRANTES:
Allende Mantilla, Gabriela del Carmen
Balbin Canevello, Daniela Andrea
Conque Araujo, Juan Guido
Herrera Suarez, Piero Matías
Moya Vasquez, Nicole Armandina
Orellana Cuenca, Sebastian Alonso
Sevilla Huarancca, Diana Brigithe
Tello Espinoza, Karla Valeria Lima - 05 de octubre 2022
Zambrano Nuñez, Christian Guillermo
 ÍNDICE
1. Resumen
2. Introducción
3. Principios Teóricos
4. Materiales y reactivos
5. Detalles experimentales
6. Análisis y discusión de resultados
7. Conclusiones
8. Recomendaciones
9. Bibliografía
 Laboratorio N°2

TÉCNICA
CROMATOGRÁFICA
 RESUMEN
OBJETIVO: estudiar la separación de componentes de mezclas complejas a través de la
cromatografía.

Se prepararon tres soluciones: la primera al 1% de Triptófano, una solución eluyente 7:3 y otra
reveladora. Se hizo uso de una placa cromatográfica de sílica-gel, previamente medida y marcada, en
la que se añadieron tres toques sucesivos de la solución con el aminoácido con la ayuda de una pipeta
Pasteur; posteriormente, esta se colocó en la solución eluyente. Se dejó secar la placa y se le aplicó la
solución reveladora para introducirla en la estufa a 90°C. Finalmente, se realizaron las mediciones de
la distancia recorrida por el eluyente y la distancia recorrida por el aminoácido, con estos datos se
calculó el Rf (factor de retardo) dando un valor de 0.5686 (%E=18.7%).

Palabras clave: aminoácido, cromatografía, Triptófano, eluyente, reveladora, factor de retardo.

 Mikhail
INTRODUCCIÓN
Tswett OBJETIVO

Tiene como objetivo el análisis de
Padre de la cromatografía.
una mezcla de componentes y es
Primero en utilizar el término. utilizada para separar los
Estableció las ventajas de la componentes y/o analitos
presentes en mezclas complejas
cromatografía.

F. estacionaria
FASES
La cromatografía F. móvil
es una técnica
cromatográfica
que utiliza una cromatografía de

placa inmersa papel, de capa fina,

TÉCNICAS
de líquidos, de gases

verticalmente en
CROMATOGRÁFICAS y de fluidos

una fase móvil. eluyente

supercríticos.
 PRINCIPIOS TEÓRICOS
Cromatografía en Aminoácido:
Factor de retardo
capa fina Triptófano
Es un aminoácido esencial, Puede definirse como una
Es una técnica de necesario para el mantenimiento relación de distancias:
separación que utiliza una y la producción de las proteínas,
placa inmersa verticalmente músculos, enzimas y
en una fase móvil (eluyente) neurotransmisores del cuerpo

Factor de retención
 MATERIALES Y REACTIVOS

n-propanol
Triptófano

Probeta Frasco gotero

Placa de sílica gel

Luna de reloj
 MATERIALES Y REACTIVOS

Vaso de Pipeta Agua Hidróxido Ninhidrina

precipitado pasteur destilada amónico
DETALLES EXPERIMENTALES
DETALLES EXPERIMENTALES
DETALLES EXPERIMENTALES
DETALLES EXPERIMENTALES
 ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE
RESULTADOS
En la preparación de la solución del α-aminoácido (triptófano)
se obtuvo una solución homogénea sin turbidez.

El efecto de la ninhidrina en la placa se debe a la reaccion de

esta con el aminoácido, formando un tono azul-violaceo,
debido al compuesto de Ruhemann.
 CÁLCULOS
Factor de retención
Obtenemos un factor de retención de:
De los datos empíricos:

M= 5.1cm

M: la distancia recorrida por el d= 2.9cm

aminoácido desde su punto inicial

d: la distancia recorrida del eluyente

Teniendo en cuenta la figura 5, tomamos un valor verdadero de 0.7, entonces el error porcentual es de
 TABLA DE RESULTADOS
Tabla 2. Resultados de la cromatografía

Fuente. Elaboración propia.

 CONCLUSIONES
La coloraciòn púrpura azulada en la placa se
debe a la reacción presente del aminoácido
con la ninhidrina.
Se determinó el valor del RF de la ninhidrina.
el cual es 0,5686. El valor del RF no debe ser
mayor a 1.
A mayor distancia recorrida por el compuesto,
tendrá mayor afinidad por la fase móvil;
mientras que a menos distancia recorrida por
el compuesto, tendrá mayor afinidad por la
fase estacionaria.
 RECOMENDACIONES
Se debe evitar tocar la parte silica gel de la
placa, puesto que se contaminaria con
aminoácidos que estén presentes en nuestras
manos
Debido a que el eluyente es tóxico, es
importante trabajar en la campana extractora.
Se deben aplicar una mínima cantidad de
gotas, puesto que esto podría retardar el
ascenso de los aminoácidos en la placa.
 CUESTIONARIO
1. Indique el procedimiento para obtener las soluciones patrón
de alfa aminoácidos empleados en esta técnica.

PROCEDIMIENTO DEL PATRÓN ALFA AMINOÁCIDO -TRIPTOFANO 1%

Primero, se pesó 1 g del aminoácido triptófano en una balanza
analítica
Luego se midió 10 mL de n-propanol en una probeta y se enrazó
con agua destilada
hasta los 100 mL.
Finalmente, se trasvasó en un frasco ámbar la solución junto con
el aminoácido
y mezclándolo homogéneamente por inversión.
 CUESTIONARIO
2. Explique la acciónseparadora de los componentes del ELUYENTE que se
emplea. En este caso: (Etanol/ hidróxidode amonio ) proporción (7: 3)
La mezcla que se va a separar junto con la fase móvil asciende a lo largo de la fase
estacionaria por capilaridad. En este avance, la fase móvil arrastrará consigo un
porcentaje de moléculas del componente a separar. La distancia recorrida por el
componente de la muestra dependerá de la cantidad de eluyente que se haga pasar,
esta separación será posible si se utiliza un volumen de eluyente adecuado.

3. Que podría decir de la resolución de la técnica. ¿Considera que dicha resolución puede
aumentarse?
La técnica de cromatografía en capa fina se puede utilizar como soporte de cualquier sustancia que
pueda dividirse en partículas finas y distribuirse uniformemente en forma de láminas. Esto incluye
sustancias inorgánicas, tales como el silicato de magnesio, gel de sílice, óxido de aluminio, etc) y
orgánicas, como por ejemplo la celulosa, el polietileno, donde se utiliza mayormente para la separación
de aminoácidos y posteriormente ser identificados mediante la reacción con ninhidrina
 BIBLIOGRAFÍA
Medina, P., & Lozano, J. (2016). Separación de aminoácidos contenidos en una muestra de
yogurt por cromatografía en capa fina. Recuperado de: https://bit.ly/3V7x0Hx

Sanchez S, Flores L, Gurrola C, Heredia P. Manual de practicas de laboratorio de

Bioquimica. 3.ª ed. México: McGRAW-HILL; 2014.

Rodwell V, Bender D, Botham K, Kennelly P, Weil A. Harper Bioquímica ilustrada. 30.ª ed.
México: Pearson

Berg J, Tymoczko J, Stryer L. Bioquímica . 6.ª ed. Barcelona: Reverte; 2008

GRACIAS
G r a c i a s