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DETERMINACIN DE AMINOCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE.

MTODO DE SANGER.
Gonzlez B. Jos E., Netzahuatl L. Abraham Z. 2FM1 Seccin 1

OBJETIVO DISCUSIN

Identificar el aminocido alfa-amino terminal de las Las protenas pueden ser marcadas mediante
cadenas de la molcula de hemoglobina mediante diferentes mtodos, el que fue empleado en esta
el mtodo de Sanger prctica fue el mtodo de Sanger. Para este
INTRODUCCIN mtodo se utiliz como marcador (identificador) del
residuo N-terminal de las cadenas de hemoglobina
Las protenas son sustancias orgnicas el compuesto 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (DNFB)
nitrogenadas complejas que se hallan en las en pH bsico para desprotonar la protena y se
clulas animales y vegetales. Son polmeros forme el derivado dinitrofenilado, despus se
lineales en los que las unidades monomricas son
cambia el pH a acido para que el DNFB no
los aminocidos, que se pliegan en una notable
diversidad de formas tridimensionales, que les reaccione con otros residuos de aminocidos.
proporcionan una correspondiente variedad de
Posteriormente se hicieron extracciones con ter
funciones.
(un solvente no polar) para eliminar el DNFB que
Para la identificacin y la cuantificacin de las no reaccion, conservando la fase acuosa. Se
protenas existen mtodos variados, pero la gran disminuy el pH de la solucin y se hidroliz en
mayora de estos mtodos tienen como principio condiciones extremas (pH acido, presin de 15
alguna reaccin qumica caracterstica de los
lb/inch2 y 125C). Despus de la hidrlisis se
grupos R de los diferentes aminocidos existentes.
extrajo con eter el aminocido (debido a que es no
Las protenas reflejan las propiedades qumicas de polar) marcado y se realizo una cromatografa en
todos aquellos residuos de aminocidos que papel
contienen en su estructura, esto hace que la
mayora de las reacciones coloridas de Como se muestra en la tabla de resultados el Rf
identificacin dependen de la existencia de un del derivado dinitrofenilado ms cercano al Rf de la
aminocido especfico en ellas. muestra problema es la valina, dato que concuerda
RESULTADOS con el residuo amino-terminal de la secuencia de
aminocidos de la hemoglobina ya registrada en la
Se anexa esquema del cromatograma a escala 1:2 literatura, porque este aminocido es especifico en
este sitio de la protena.
Condiciones del cromatograma.
CONCLUSIN
Solvente: cido ctrico citrato de sodio. Tiempo
que se dej el cromatograma en la cmara de En la identificacin de los aminocidos presentes
cromatografa: 10 horas (5 para saturacin del en una determinada protena se llevan a cabo
papel, 5 para desarrollo del cromatograma) mtodos de anlisis especficos para cada
sustancia, y mediante reacciones coloridas y otra
Muestra Rf
clase de pruebas, por ejemplo la cromatografa en
Alanina (Ala) 0.55
papel, determina el tipo de aminocido presente en
Fenilalanina (Phe) 0.56 esa protena propiamente identificada gracias a los
Valina (Val) 0.68 grupos R inherentes de cada aminocido.
DNFB 0.48
Muestra problema 0.66 BIBLIOGRAFA
Tabla 1. Valores de Rf obtenidos
- Nelson, M., & Cox, D. (2009). Lehninger
principios de bioqumica. Barcelona: Ediciones
Omega

1
http://www.rcsb.org/pdb/explore/remediatedSequen
ce.do?structureId=1GZX secuencia de la
hemoglobina humana