CARLOS MARIO ATENCIA PINEDA

ESTUDIANTE DE INGENIERÍA QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA SEDE MEDELLÍN
1. CATÁLISIS ENZIMÁTICA
2. ESTRUCTURA DE LAS ENZIMAS
3. CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS DIGESTIVAS
4. AMILASA SALIVAL
5. ALMIDÓN
6. FUNCIÓN ENZIMÁTICA
7. VARIABLES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD CATALÍTICA DE LAS
ENZIMAS
8. PRÁCTICA DE LABORATORIO
9. ARTÍCULO CIENTÍFICO
Las enzimas son catalizadores de origen biológico
(microorganismos, células vegetales y animales) en su mayoría
son proteínas.
Las enzimas son proteínas globulares formadas por una o más cadenas
polipeptídicas (enlaces peptídicos) plegadas, creando una “hondonada”
donde encaja el sustrato y tiene lugar la reacción.
Existen ala rededor de 20 tipos de enzimas clasificadas en tres grandes
grupos:
Lipasas: son enzimas específicas originadas en el páncreas que poseen la función
de disociar los enlaces covalentes entre lípidos complejos llevándolos al estado
de gliceroles y ácidos grasos asimilables por el organismo.
Peptidasas o proteasas: este grupo enzimático, que se origina en el estómago o en
el páncreas, posee la capacidad de actuar sobre los enlaces peptídicos de las
macromoléculas proteicas reduciéndolas a monómeros orgánicos
denominados aminoácidos.
Amilasas o ptialinas: las denominadas amilasas son aquellas enzimas con función de
romper los enlaces glucosídicos entre monosacáridos dejándolos de forma individual
para ser asimilados. Hay tres tipos de amilasas dependiendo de su lugar de origen,
estas son la amilasa salival, amilasa pancreática y amilasa intestinal.
La amilasa salival es una enzima digestiva, hidrolasa que tiene como
función catalizar la función de hidrolisis de los enlaces 1-4 entre las
unidades de glucosa al digerir el glucógeno y el almidón.

PM: 50.000 g/mol

Contenido en la saliva: 0-3 mg/ml
Cofactor: 𝑪𝒂+𝟐
Estructuralmente, el almidón es un polímero de glucosas (glucano), unidas por enlaces
α-glucosídicos, y formado por dos compuestos diferentes: la amilosa (10 – 20 %) y la
amilopectina (80 – 90%).
Las enzimas por lo general tienen su actividad catalítica en su
estructura cuaternaria.
 Concentración del sustrato
 Ausencia o presencia de cofactores
 Inhibidores
 Efecto de la temperatura
 Variaciones de pH
Esta relación fue estudiada en 1913 por Michaelis y Menten, quienes midieron la velocidad
inicial (v) de una reacción sencilla de un solo sustrato, manteniendo constante la
concentración de la enzima y aumentando la concentración del sustrato.

Representación de Lineweaver-Burk
Irreversibles
• el inhibidor se une a la enzima de  No competitivos
forma covalente • El I puede unirse a la E libre o al
• provoca un cambio permanente en complejo e-s
la molécula • Interfiere la acción de ambos
• pérdida definitiva de la actividad • No se desplaza por aumento de la
enzimática [S]

Reversibles
 Competitivos
• I y S tienen estructura similar
• compiten pro el sitio activo
• se desplaza por aumento de [S]
El aumento de la temperatura en las reacciones orgánicas
(enzimáticas) provoca un incremento en la velocidad de reacción no en
forma lineal, sino exponencial, como lo indica la ecuación de Arrhenius:
𝑬𝒂
K=A𝒆 𝑹𝑻
Las enzimas poseen grupos químicos ionizables (carboxilos-COOH; amino-
NH2; tiol-SH; anillos aromáticos etc.) en las cadenas laterales de sus
aminoácidos.
 Los pka de las cadenas laterales
de los aminoácidos presentes en el
sitio activo y que realizan la
catálisis.
 Los pka de las cadenas laterales
de los aminoácidos, que en el sitio
activo ayudan a fijar el sustrato.
 Los pka de las cadenas laterales
alejadas del sitio activo, pero que
ayudan a estabilizar la
conformación global de la enzima.
 Los pka de los grupos ácidos y
básicos del sustrato
Objetivo
Evaluar la dependencia de la reacción enzimática con respecto a la acidez del
medio, la temperatura y concentración de la enzima.
Materiales y Reactivos
 Soluciones buffer 0.1 m: de citrato con pH = 3.0, citrato con pH=4.0 fosfato
con pH=5.0, fosfato con pH= 7.5, borato con pH=9.0, borato con pH=10.0 y
de carbonato con pH=11.
 Solución de almidón al 0,5 %.
 Solución de almidón extraído de arroz.
 Solución salina (solución NaCI al 0.85 %).
 Solución de lugol: 5 mmoles de 𝐼2 por litro de KI (30 g/l).
 Solución acuosa de saliva (fuente de la α-amilasa) en diferentes
proporciones.
 Guantes de látex.
 Evaluación del cambio de pH sobre la actividad catalítica
de la enzima amilasa
Preparar 8 ml de sln Realizar Adicionar 1ml a cada Calentar por 5
de saliva al 25% en pretratamiento en tubo sln de almidón y minutos a 37°c
un tubo de ensayo baño María 2ml de sln salina
Agregar tres gotas de
Tomar 2ml de saliva y Agregar 1ml de sln de Lugol y mezclar por
completar hasta 8ml saliva en los buffers de inversión
con sln salina diferentes pH Amilosa-I2

SI
Calentar a 37°c los Observar el grado de
tubos y un ultimo tubo sin Color intensidad del color
buffers por 5 minutos Azul?? azul
NO

Color Medir % de
SI
Rxn rápida Calentar?? Marrón?? intensidad

NO
SI

Amilopectina-I2 Calcular
Proceso de
%Rxn= 100-%Intensidad
Rxn lento
 Evaluación del cambio de [ ] de la enzima sobre la rxn de hidrólisis de
la amilosa
50%
25%
12.5 Preparar 7 soluciones Calentar a 37°c por 5
% acuosas de saliva a minutos y agitar por Indicador de
diferentes [ ] inversión almidón
6.2%
3.1% SI
1.6% Tomar y marcar 7 tubos Adicionar 3 gotas de
0.8% de ensayo a su criterio Lugol a cada tubo y Lugol??
mezclar
adicionar: NO
4ml buffer 7.2
Análisis
2mll sln salina al 0.85% Observar grado de visualmente
4ml Almidón al 0.5% intensidad del color azul imperceptible

Calentar a 37°c por 5

minutos en baño María Calcular
%Intensidad
Agregar 1ml de sln de %Rxn
saliva en la [ ] respectiva
 Evaluación del cambio de temperatura sobre la actividad
de la amilasa
4°c
Temp. Ambiente Preparar 4 ambientes de
37°c temperatura diferentes
94°c

Incubar 4 tubos de ensayo

con 1ml de saliva al 25% y
4ml de buffer pH 7.5
Agitar y registrar
Llevar cada tubo a la %Intensidad del color azul y
temperatura indicada %Rxn
durante 5 minutos

Sacar los tubos y dejarlos a Adicionar 3 gotas de Lugol a

temperatura ambiente (baño cada tubo
de agua)

Agregar 2ml de sln salina y Calentar a 37°c por 5

4ml de sln de almidón minutos y agitar por inversión
Biopsia: Una biopsia es un procedimiento que extrae células o tejidos de su
cuerpo. un médico llamado patólogo examina las células o tejidos bajo un
microscopio para verificar si hay daños o enfermedad. el patólogo también
puede hacer otras pruebas a estas células.
Nivel sérico: Es un término usado por los profesionales de la salud para
referirse a la cantidad de una sustancia en la sangre. la palabra es sinónimo de
suero de plasma.
Ultrasonido endoscópico: El USE es un estudio que se realiza con un
endoscopio flexible especial que tiene un transductor de ultrasonido en su
extremo. desde el punto de vista del paciente, el USE no es diferente de una
endoscopia común.
Determinar el nivel sérico de enzimas pancreáticas tales como amilasa y
lipasa posterior a la realización de una biopsia por punción y aspiración
con aguja fina guiada por ultrasonido endoscópico en lesiones de
páncreas, además de la frecuencia de pancreatitis aguda pospunción.
La punción aspirativa guiada por ultrasonido se realizó con aguja de 22 G marca
wilson cook® (cook medical incorpo-rated) y un equipo de ultrasonido lineal GF-
UCT140 marca olympus® (olympus corporation).
La BAAF guiada por USE se asoció a una baja tasa de elevación de enzimas
pancreáticas y en ningún caso se desarrolló pancreatitis pospunción. La
frecuencia de pancreatitis aguda después de la punción varía en cada centro que
realiza USE y podría estar relacionada con la experiencia del médico que lleva a
cabo el procedimiento.