MÉTODO COLORIMÉTRICO PARA LA DETERMINACION DE AMONIACO (NH4

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El reactivo de Nessler produce una coloración gradual de amarillo a pardo, a medida que aumenta la concentración de amoníaco. El color amarillo es indicador de bajas concentraciones de amoníaco (de 0,4 a 5mg/L). Se mide (con una sensibilidad aceptable) en la zona de longitudes de onda que va a de 400 a 425nm, cuando se dispone de un recorrido de luz (cubeta) de 1cm. El color pardo rojizo es típico de concentraciones de amoníaco próximas a 10mg/L. Una sensibilidad aceptable se consigue en la zona de 450 a 500nm. En condiciones óptimas, la nesslerización directa puede detectar concentraciones de hasta 20mg/L. Sin embargo, la reproducibilidad por debajo de 100mg/L puede presentar problemas. Reactivos (preparación): Nota previa: Úsese agua SIN amoníaco para preparar los reactivos. a) Solución de sulfato de zinc: Se disuelven 100g de sulfato de zinc heptahidratado y se diluye hasta 1 L de disolución con agua. b) Reactivo EDTA: Se disuelven 50 g de sal disódica de EDTA (Na2EDTA) en 60mL de agua junto con 10 g de NaOH. Se puede aplicar un calor suave para favorecer que se complete la disolución. Se deja enfriar a temperatura ambiente y se diluye a 100 mL. c) Solución de la Sal de Rochelle: Se disuelven 50g de tartrato sódico de potasio tetrahidratado (KNaC4H4O6·4H2O) en 100 mL de agua. Se ha de eliminar el amoníaco normalmente presente en la sal. Esto se consigue con la ebullición de 30mL de solución y su posterior dilución a 100mL (después de enfriarse). d) Reactivo Nessler: Se disuelven 100g de HgI2 y 70 g de KI en una pequeña cantidad de agua. Esta mezcla se añade posteriormente, con cuidado y agitación, a una solución fría de 160 g de NaOH en 500mL de agua. Se diluye todo a 1 L. Se conserva en frascos de vidrio de borosilicato, con tapón de goma y protegido de la luz. En estas condiciones, se puede almacenar intacto durante 1 año en condiciones normales de laboratorio. Éste reactivo es tóxico y hay que evitar su ingestión. e) Solución madre de amonio: Se disuelven 3.819 g de NH4Cl anhidro (secado previamente a 100ºC) en agua y se diluye a 1 L. f) Solución patrón de amonio: Se diluyen 10mL de solución madre de amonio en 1L de agua (1mL=10,00mg N=12,2mg NH3). g) Solución de cloroplatinato de potasio (solución de color): Se disuelven 2,0 g de K2[PtCl6] en 300 a 400mL de agua. Se añaden 100mL de HCl concentrado y se diluye a 1 L. Procedimiento:    Tratamiento de las muestras no destiladas: En caso de ser necesario, se elimina el cloro residual de la muestra por adición de un agente decolorante. Se añade 1 mL de solución de sulfato de zinc a 100 mL de muestra y se mezcla completamente. Se añaden 0,4 a 0,5 mL de solución de hidróxido de sodio 6 N para obtener un pH de 10,5. Se mezcla suavemente y se deja reposar la muestra durante unos minutos. Se formará un precipitado floculante y denso dejando un sobrenadante claro e incoloro. Filtrar o centrifugar para clarificar.

Cálculo: Donde: A = mg NH3-N en 51 mL de volumen final B = Volumen final de destilado obtenido en mL e incluyendo el absorbente ácido.Se pasa agua a través del papel de filtro y se analiza el filtrado por nesslerización para asegurarse que no contiene amoníaco contaminante. C= Volumen de destilado tomado para nesslerizar en mL. Las condiciones de procedimiento (temperatura. Se mezcla bien y a continuación se añaden 2 mL de reactivo de Nessler si se ha usado EDTA o 1 mL del mismo reactivo si se ha usado sal de Rochelle. PRECAUCIÓN: Las muestras con más de 10 mg de NH3-N/L pueden perder amoníaco durante el tratamiento de las muestras no destiladas debido al pH que es elevado. Se ha de dejar que pasen al menos 10 minutos para que el reactivo de Nessler desarrolle el color. Para muestras destiladas. No se usa en la nesslerización directa. la muestra y los patrones. de igual manera que se hace para las muestras (éstas se preparan llevando 300 mL de destilado más 50 mL de ácido bórico a 500 mL de volumen final).  DETERMINACIÓN FOTOMETRICA: Se mide la absorbancia o transmitancia con un espectrofotómetro. se añade una gota de EDTA o de 1 a 2 gotas de sal de Rochelle. 2) Muestras destiladas: El ácido bórico ha de neutralizarse previamente. Al filtrar la muestra se desechan los primeros 25 mL de filtrado. . Desarrollo del color: 1) Muestras no destiladas: Se miden 50 mL de muestra o una porción diluida a 50 mL con agua destilada. 3) Los tubos de Nessler han de taparse con tapones de goma previamente lavados con agua destilada. Nota: La relación B/C sólo es aplicable en las muestras destiladas. Si la muestra contiene concentraciones interferentes de calcio. Se mezclan por inversión un mínimo de seis veces. Esto se consigue o bien por adición de un exceso de reactivo de Nessler (que hace subir el pH hasta los valores adecuados) o bien con NaOH (con posterior adición de 1 mL de reactivo de Nessler). Se diluyen todos a 500 mL.) han de ser iguales tanto para el blanco. hay que destilar también el blanco y los patrones. Estas muestras se diluyen hasta el rango sensible. magnesio o otros iones que produzcan turbidez o formen un precipitado con el reactivo de Nessler. Se toma una alícuota de 50 mL para la nesslerización. tiempo de reacción del reactivo de Nessler etc. La curva de calibrado se prepara con las mismas condiciones de procedimiento que se han usado para las muestras.

en el espectrofotómetro. mezclar bien y esperar 10 min. Añadir 2 ml de hidróxido amónico.1. 6.4 y 5 ml de la dción madre de nitrito sódico. Rellenar con agua destilada hasta los 50 ml. homogeneizar y esperar 5 min Calibrar el cero de transmitancia con el obturador del espectro fotómetro y el 100% de transmitancia con el “blanco” (dción sin ión nitrito). homogeneizar y esperar 5 min 5. El resultado de esta reacción es un compuesto de color amarillo-rojizo. mezclar bien y esperar 10 min.3. Leer la transmitancia (%) de las 5 disoluciones patrón restantes. Llevar la dción al espectrofotómetro y leer la transmitancia (%). Cuando la luz atraviesa una disolución coloreada existe una parte de la intensidad incidente que queda absorbida.DETERMINACIÓN DE NITRITOS EN AGUA POR ESPECTROFOTOMETRÍA El análisis se basa en la reacción de los nitritos con el ácido sufanílico en medio clorhídrico. 4. 2. Añadir 2 ml del reactivo de Zambelli. Tomar 25 ml de la muestra a analizar (agua del grifo) y se introducen en un matraz aforado de 50 ml. 1. Añadir 2 ml de hidróxido amónico. Transmitancia de la dción: T = It / Io Absorbancia de la dción: A = log (1/T) Ley de Lambert-Beer: A = k·C·l ponsable del color k=cte l = espesor de la dción C=concentración de la sustancia res- Procedimiento Experimental. utilizando una cubeta de 1cm de paso de luz y una longitud de onda d ml muestra 2 3 23 11 0’23 0’11 0’64 0’96 T% T A=log (1/T) 0 100 1 0 1 51 0’51 0’29 4 6 0’06 1’22 5 3 0’03 1’52 Ahora: 1. . Añadir 2ml del reactivo de Zambelli. La intensidad de la coloración es proporcional a la cantidad de nitritos existente. 2.2. y midiendo la intensidad de la coloración por espectrofotometría visible determinaremos la concentración de nitritos existente en la muestra de agua problema (del grifo). 4. 5. Introducir en 6 matraces aforados de 50 ml. Rellenar con agua destilada hasta los 50 ml. 3. 0. 3.

1. RECTA DE CALIBRADO 1.22 0.en la muestra.2 1.4 0. Multiplicamos los 0.023 mg/L En 2 ml Tenemos 0.6 0.4 1.115 Concentración m g/l MATERIAL 8 matraces aforados de 50 ml 2 pipetas de 2ml Espectrofotómetro 1 pipeta aforada de 25 ml Cuentagotas REACTIVOS Reactivo de Zambelli Solución madre de nitritos Hidróxido amónico 25% .023 0.046 mg/L En 3 ml Tenemos 0.2 0 0 0 0.8 0.138 mg/l.069 mg/l por dos dándonos una concentración en la muestra de 0.0230 g de NO2 En 1 ml Tenemos 0. Mirando en la recta de calibrado vemos que corresponde a una concentración de 0.069 mg/L En 4 ml Tenemos 0.6 1.069 mg/l 3.115 mg/L Tomamos el valor obtenido de la Absorbancia de la muestra y se mira a ver a que concentración corresponde de la recta de calibrado y el valor obtenido. en mg/l.29 0.52 Absorbancia 1 0.092 mg/L En 5 ml Tenemos 0.96 2.ml muetra T (%) T A=log (1/T) 0 100 1 0 25 11 0’11 0’96 Interpretación de los resultados Calcular la concentración de ión nitrito de las disoluciones patrón.069 0. Si en 1 litro tenemos 0. lo multiplicamos por dos dándonos la concentración de NO2.046 0.092 0.96 1.64 0. 1. El resultado obtenido en la muestra es de A= 0.

Medir 50 ml de muestra en un matraz erlenmeyer de 100 ml. deberá prepararse cada vez que se vaya a utilizar. Amoniaco concentrado.5 2 3 1 2 4 2. Añadir 5 gramos de ácido sulfanilico y 7. de cloroformo y manteniéndola en refrigerador. El color obtenido es estable durante 24 horas.23 mg de No2.230 3 2 0. y someterlo al mismo tratamiento que los patrones. mezclar y esperar 5 minutos. Matraz Amoniaco mg NO2/l 1 2 0. Cuando todo esté disuelto completar hasta un litro con agua desionizada.150 5 2 2. Diluir 260 ml. Tratamiento de la muestra. Disponer de tantos matraces erlenmeyer de 100 ml como numero de patrones vayamos a preparar. En caso contrario.Reactivos Reactivo Zambelli.1 2 2 0. Disolver 0.925 Solución patrón de nitrito.046 2 2 0.300 Leer la absorbancia a 425 nm frente a un blanco de agua destilada tratado de la misma forma que la muestra. Dejar enfriar y agregar 135 gramos de amonio cloruro. .345 gramos de nitrito de sodio en agua desionizada hasta un litro. un mililitro equivale a 0. Esta solución se conserva hasta un mes añadiendo 1 ml. calentando suavemente hasta disolucion.5 gramos de fenol. La lectura se hace a 425 nm frente a un blanco de agua destilada. densidad 0. de amoniaco concentrado. de acido clorhidrico con 500 ml de agua desionizada. añadir 2 ml.460 4 2 1. Curva patrón. Matraz Patrón (ml) Zambelli (ml) 1 0.5 2 5 5 2 Tras la adicion del reactivo de Zambelli mezclar bien y esperar 10 minutos. Transcurrido ese tiempo.