CURSO: BIOLOGÍA (BIO-103)

GUÍA DE PRÁCTICAS

TEMA :Actividad Enzimática

I. Objetivos:

 Identificar la presencia de una enzima que se encuentra en la saliva humana y que participa en el
proceso digestivo.
 Determinar la actividad de dicha enzima.
 Reconocer los factores que afectan la actividad enzimática.

II. Aspectos teóricos

Las enzimas son un tipo de proteína encargada de catalizar 1una serie de reacciones bioquímicas
que tiene lugar sobre un sustrato 2 y que ocurren por lo general dentro de la célula. La enzima unida a
otros compuestos forma un complejo que produce una reacción específica y a mayor velocidad.

Enzima (E) -----Complejo Sustrato Enzima (SE)--------- productos (P)+ Enzima €

Características de las enzimas:

 Disminuyen la energía de activación y hacen que las reacciones sean más rápidas.
 Cada enzima se une con un sustrato particular, es decir son específicas.
 Tienen gran actividad, pues una pequeña cantidad puede transformar una masa mucho mayor a
ella.
 Son solubles en agua, alcohol y glicerina.
 Presentan un peso molecular alto.
 Al igual que el resto de proteínas pierden su conformación por encima de cierta temperatura,
generalmente por encima de los 50° C
 A menudo los grupos funcionales de las enzimas son complementados con cofactores iones
inorgánicos o moléculas orgánicas denominadas coenzimas.

1
Catalizar: proceso químico que reduce la velocidad de una reacción mediante la participación de un Catalizador
(sustancia que regula la velocidad de una reacción sin utilizarse en la misma).
2
Sustrato: compuesto sobre el que actúa la enzima.
  La actividad enzimática se da en las mismas condiciones de pH y temperatura de la célula.
 Ciertas sustancias pueden disminuir la velocidad de la reacción.
 La velocidad de las reacciones químicas dependen de la concentración de la enzima.
Existen diversos tipos de enzimas. En esta ocasión nos referiremos a las enzimas digestivas; las
cuales se pueden catalogar dentro de cuatro grandes grupos dependiendo de la función que cumplan en el
proceso digestivo.

1) Lipasas: Las lipasas son enzimas específicas originadas en el páncreas que poseen la función de disociar
los enlaces covalentes entre lípidos complejos llevándolos al estado de gliceroles y ácidos grasos asimilables
por el organismo.

2) Peptidasas o proteasas: Este grupo enzimático, que se origina en el estómago o en el páncreas, posee la
capacidad de actuar sobre los enlaces peptídicos de las macromoléculas proteicas reduciéndolas a
monómeros orgánicos denominados aminoácidos.

3) Amilasas o ptialinas: Las denominadas amilasas son aquellas enzimas con función de romper los enlaces
glucosídicos entre monosacáridos dejándolos de forma individual para ser asimilados. Hay tres tipos de
amilasas dependiendo de su lugar de origen, estas son la amilasa salival, amilasa pancreática y amilasa
intestinal (del duodeno).

4) Nucleasas: Rompen los enlaces hidrolíticos del tipo fosfodiéster presentes en los ácidos nucleicos entre
la pentosa de un nucleótido y el grupo fosfato del otro. Actúan tanto en ADN intra y extracelular, así como
ARN. Comúnmente se les conoce como ADNasas y ARNasas.

La α amilasa salival, es la enzima responsable de degradar el glucógeno y el almidón, presentes en

los alimentos que ingresan en la boca. El almidón es un polisacárido formado por largas cadenas de
Glucosa, hexosas unidas por enlaces (1-4). Esta enzima requiere la presencia de cloro para romper los
enlaces α(1−4) y α (1-6) que unen las moléculas de glucosa que forman estos azúcares.

Enlace α (1−6)

Enlace α (1−4)

Fig. 1 Porción de la molécula de almidón

Factores que determinan la Actividad Enzimática

* El pH: A pHs extremos se altera irreversiblemente la estructura de la enzima desnaturalizándola. El

pH también puede modificar la naturaleza del sustrato, por ello para que se de una actividad
máxima el pH debe estar en relación al pH del sustrato.
* concentración de coenzima o cofactor: La velocidad de la reacción aumenta rápidamente al
principio debido al incremento de la concentración de la coenzima hasta llegar a un máximo a
partir del cual la velocidad va en decremento.
* Temperatura: La velocidad de la reacción aumenta con la temperatura; pero existe un valor crítico
sobre el cual la actividad decae y se detiene debido a que, como se mencionó, las enzimas son
proteínas y estas se desnaturalizan a ciertas temperaturas.
* Tiempo: Existen dos tipos de respuestas. En un caso la cantidad de sustrato transformado se
mantiene constante. En otros casos la cantidad de sustrato transformado está en relación a la
cantidad de sustrato presente; al disminuir el sustrato produce que la cantidad transformada
disminuya progresivamente.

III. Procedimiento:

Materiales

• Solución de almidón al 1%
• carbonato de sodio 0.1 N
• ácido Clorhídrico
• Alfaamilasa (solución de saliva al 5%)
• Buffer fosfato ph 6.6
• agua destilada
• indicador de pH
• tubos
• hielo
• Lugol
• incubadora 37° C y 100°C

Metodología

Nota: Debe mezclar bien los reactivos antes de agregar la alfa amilasa.

Agregar las sustancias según se muestran en las tablas:

1. Actividad de la enzima

Contenido Tubo 1 Tubo2

. Almidón al 1% 0.5 ml 0.5 ml
. Buffer fosfato 0.1 M pH 6.6 0.5 ml 0.5 ml
. Solución de amilasaal 5% 0.5 ml ____
. agua destilada -------- 0.5 ml

. Incubar por 5 min a 37° C

. Agregar unas gotas de lugol y observar coloración
. Interpretar.

2. Efecto del pH en la actividad de la enzima

Contenido Tubo 1 Tubo2 Tubo3

. Almidón al 1% 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
. Buffer fosfato 0.1 M pH 6.6 0.5 ml --- --
. Carbonato de sódio 0.1 N pH 10 ---- 0.5 ml
. Ácido clorhídrico 0.1N pH 2 0.5 ml
. Solución de amilasa al 5% 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml

- Incubar por 5 min a 37° C

- Agregar unas gotas de lugol y observar coloración
- Interpretar.

3. Efecto de la temperatura en la actividad de la enzima.

Contenido Tubo 1 Tubo2 Tubo3

. Solución amilasa al 5% 3 ml 3 ml 3ml
. Incubar por 5 min 0° C 37° C 100°C

- Retirar los tubos y dejar a temperatura ambiente por 5 min

* Preparar otra batería de tubos

Contenido Tubo 1 Tubo2 Tubo3 Tubo 4

. Almidón al 1% 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
. Buffer fosfato 0.1 M pH 6.6 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
. Solución de amilasa al 5 a 0 °C 0.5 ml 0.5 ml ----- ----
. Solución de amilasa al 5% a 37 °C -------- ----- 0.5 m ------
. Solución de amilasa al 5% a 100 °C -------- ------ ------- 0.5 ml

- Incubar por 5 min a 37° C

 - Agregar lugol y observar coloración
- Interpretar.

IV. Cuestionario

1) ¿Nombre otras 5 enzimas y su actividad?

2) ¿En qué casos, el reactivo de lugol, mostrará reacción positiva, para almidón, en los experimentos
planteados, por qué?

3) ¿Cómo afecta la temperatura y el pH en la actividad de las enzimas? ¿Todas actúan a la misma

temperatura y pH?

V. Bibliografía

2007 Peretó, J. Sendra, R. Pamblanco y M. Baño, C. Fundamentos de Bioquímica. Univeritat de Valencia 376
pp

2007 Quesada, S. Manual de experimentos para bioquímica. EUNED San José Costa rica 148pp

1977 McGilvery, R Conceptos Bioquímicos editorial Reverté 597 pp

1988 Guías de prácticas de biología UNMS.