INFORME N°04

ACTIVIDAD ENZIMATICA

I. OBJETIVOS
 Efectuar pruebas para determinar la acción de una enzima y estudiar la influencia de la
temperatura sobre su actividad.
II. FUNDAMENTO TEORICO

Las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran la velocidad de las reacciones
metabólicas que ocurre tanto a nivel celular como fuera de ellas, sin sufrir ellas cambios
en su estructura y/o función. La acción de las enzimas, por sus características
fisicoquímicas, puede afectarse por las condiciones presentes en el lugar de acción de
estas. Entre los principales factores que pueden modificar la acción enzimática tenemos
la temperatura, inductores e inhibidores, pH.

Las enzimas son muy específicas para los reactantes o sustratos sobre las cuales actúan,
el grado de especificidad del sustrato varia. Una enzima puede reaccionar con un grupo
de sustancias de estructuras estrechamente relacionados, mientras que otras solo puede
actuar sobre un compuesto molecular único.

Para el proceso de digestión, las biomoléculas ingeridas en la dieta deben ser

degradadas a sus componentes más sencillos para ser absorbidas a nivel del tubo
digestivo y así llegar al lugar correspondiente a nivel celular donde participan en
diversos procesos metabólicos indispensables para el mantenimiento de una adecuada
homeostasis. Entre las principales enzimas que participan en la digestión podemos citar:
la amilasa salival y pancreática para la digestión de carbohidratos; la lipasa y
fosfolipasa para la digestión de lípidos, pepsina y quimiotripsina para las proteínas.
III. MATERIALES, REACTIVOS Y/O EQUIPOS
3.1. Materiales y/o Equipos
 Cocina eléctrica  Pinzas
 Equipo de baño maría  Gotero
 Termómetro  Probeta
 Varilla de vidrio  Vaso de precipitado
 Tubos de ensayo 100,150,200 ml
 Portaobjetos  Luna de reloj
3.2. Reactivos
 agua destilada  solución de yodo
 solución de almidón al 1%  reactivo de Benedict
 suspensión de almidón al 1%
3.3. Reactivo Biológicos
 reactivo de Benedict
 solución de almidón al 1%
 suspensión de almidón al 1%
IV. PARTE EXPERIMENTAL

Digestión del almidón mediante la amilasa de la saliva

a) Primero, en un vaso de precipitados de 10 ml vertimos 25 ml de la solución de

almidón al 1 %, en otro vaso de precipitados de 100 ml vertimos 25 ml de suspensión
de almidón al 1%

b) Obtuvimos dos muestras de saliva, de 1 ml cada uno y lo vertimos en dos tubos de

ensayo pequeños por separado.

c) Llevamos los dos vasos de precipitados y los dos tubos de ensayo en un baño María
manteniendo su temperatura de 38 °C, luego de transcurridos 3 o 5 minutos, vertimos
el contenido de cada tubo en cada vaso de precipitados.

d) En intervalos de 1 minuto, sacamos separadamente de cada vaso una gota de la

solución y la mezclamos con una gota de solución de yodo, sobre un portaobjetos.

e) Indicamos el tiempo requerido para alcanzar el punto acromático.

f) Una vez que obtuvimos el punto acromático efectuamos la prueba de Benedict con el
contenido de cada vaso. Anotamos nuestras observaciones
Influencia de la temperatura sobre la amilasa de la saliva

a) Marque 3 tubos de ensayo como A, B Y C y coloque en cada uno de ellos 5 ml de

solución de almidón al 1 %

b) Preparamos 1 baño de hielo. 1 baños a 38°C y otro a 70 °C

c) Colocamos el tubo A en el baño de hielo, el B en el baño con agua a 38 °C y el C en

el baño de 70°C

d) En otros 3 tubos de ensayo, colocamos respectivamente 2ml de una solución de

saliva, preparada disolviendo 0,5ml de saliva en 25ml de agua destilada. Colocamos
cada uno de estos tubos con saliva en cada uno de los baños hasta alcanzar la
temperatura de equilibrio.

e) Cuando lleguen a la temperatura de equilibrio, vertimos la saliva en las soluciones

respectivas de almidón, las mezclamos bien y sacamos 2 gotas de cada mezcla para
efectuar rápidamente la solución con yodo sobre un portaobjetos.

f) Efectuamos esta prueba cada 2 minutos y después de 10 min, cada 5 minutos hasta
obtener el unto acromático.
V. RESULTADOS

Tabla 1: Color producido por la solución de yodo después de añadir saliva al

almidón

Tiempo transcurrido Solución de almidón Suspensión de almidón

(minutos)
1 Café oscuro Amarillo con brumos cafés
en el medio
2 Amarillo con brumos Amarillo con escasos
cafés en el medio brumos cafés
3 amarillo con brumos cafés Amarillo Amarillo con
en el medio escasos brumos cafés
4 amarillo con brumos cafés Amarillo
en el medio
5 amarillo con brumos cafés
en el medio No hubo cambio de color
6 amarillo con brumos cafés se manteniendo en el color
en el medio amarillo
7 amarillo con brumos cafés
en el medio
8 amarillo con brumos cafés
en el medio
9 Amarillo con pocos
brumos cafés
10 Amarillo

Tabla 2: Influencia de la temperatura sobre la amilasa de la saliva

Tiempo 0°C 38 °C 70 °C
transcurrido
(minutos)
0 Amarillo con puntos Café Café con amarillo en
suspendidos de color los costados de la
morado muestra
2 Amarillo con puntos Café claro Café con amarillo
suspendidos de color
morado
4 Amarillo claro con Café con amarillo
No hubo cambio se brumos en el medio
6 mantuvo igual Amarillo claro con Café claro
brumos en el medio
8 Amarillo más claro Se mantuvo con el
10 Se mantiene en mismo color
15 amarillo más claro
20
 En la prueba de Benedict sin enzima

Tubo Solución Tubo Suspensión

A Al someter al calor se B La diferencia entre el tubo A
observó un color celeste de es poco se observó que quiso
tono claro en esta prueba se formar brumos es decir que
disolvió completo quiere disolver

En la prueba de Benedict con enzima

Tubo Solución Tubo Suspensión

A Bajo la tonalidad contiene B De igual manera bajo la
amilasa se debe producir la tonalidad del color la
desnaturalización pasado los suspensión con acción de calor
38 °C, está coagulando por lo va a pasar a solución
que es una reacción positiva
ya que nos indica que hay
presencia de azucares

La función de la amilasa consiste en degradar el almidón para formar azúcares

simples, la amilasa salival o ptialina se encuentra en las saliva, cuando entra en contacto
con el almidón que es un polisacárido lo desdobla en unidades de monosacáridos
llamados glucosa ;en ese caso la amilasa actúa sobre el polisacárido que es el almidón
hidrolizando el enlace O-glicosídico, por lo que el almidón se termina por transformarse
en unidades de glucosa.

VI. CUESTIONARIO
1) ¿Qué reacción cataliza la amilasa de la saliva?

La enzima -amilasa, presente en la saliva, inicia la degradación del almidón.

Hidroliza al azar los enlaces  (14) que unen residuos de glucosa en el almidón, a
excepción de los enlaces cercanos a los extremos y a los puntos de ramificación de
las cadenas. Por la acción de esta enzima activada por iones cloruro, en la boca la
longitud de la cadena del almidón se reduce de varios miles a unas ocho unidades de
glucosa. La alta concentración de protones del estómago inactiva la -amilasa salival
  amilasa
almidón    maltosa  maltotrios a  dextrinas

2) Con base en la tabla 1, explique ¿en qué forma el almidón es más fácil de
digerir?

El almidón es más fácil de digerir cuando se encuentra disuelto y no esta tan

concentrado en la solución, así mismo su digestión es más fácil si se encuentra a una
temperatura cercana a los 38°C.
 3) De acuerdo con sus resultados de la tabla 2, deduzca cual es la temperatura
optima de acción de la amilasa de la saliva

La temperatura optima de acción de la amilasa es de 38°C, así también se deduce

esta temperatura ya que la temperatura promedio de la saliva en la boca es de 38°C.

4) De acuerdo con sus resultados de la prueba de Benedict indique de que

naturaleza es el producto de la reacción catalizada por la amilasa

Según nuestros resultados al agregar la saliva más la solución del almidón al 1% y

el reactivo de Benedict es positiva por lo que indica que hay presencia de azucares.

5) Diseñe un experimento en el cual podría estudiar la influencia de la

concentración del sustrato sobre la velocidad de la reacción catalizada por la
amilasa.

VII. CONCLUSIONES
 Las diluciones óptimas para salivas de diferentes personas son distintas porque las
características y concentraciones de los compuestos varían de una persona a otra.
Esto mismo ocurre con el pH salival y el tiempo de referencia.
 El rango de 2 a 10 minutos para el efecto acromático elegido se debe a que los
tiempos sean manejables en el trabajo práctico. Si se buscase un tiempo de
referencia muy pequeño, los cambios no hubiesen sido apreciados.
 La amilasa es la responsable de comenzar la degradación del almidón en la boca, su
temperatura óptima es de 38°C, es decir; por encima y por debajo de esta
temperatura, la enzima disminuye e incluso pierde sus propiedades digestivas. Así
mismo, si el almidón está muy concentrado la amilasa no lo puede degradar tan
fácilmente.
 las enzimas catalizadoras en ese caso la amilasa actúa sobre el polisacárido
el almidón, hidrolizando el enlace O-glicosídico, por lo que el almidón se termina
por transformar en unidades de glucosa.
VIII. BIBLIOGRAFIA
http://javierviaderocumplido.blogspot.pe/2013/11/normal-0-21-false-false-false-
es-mx-x.html
Guia de practica de laboratorio – ingeniería Bioquimica - Dr.Raul Paredes Medina