MICROBIOLOGIA VETERINARIA II

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

PRACTICA Nro. 2
PREPARACION DE SOLUCIONES
ESTANDAR

PREPARACIN DE SOLUCIONES
STANDAR
Soluciones que con mayor frecuencia son
utilizadas en las experiencias
inmunoserolgicas.
En la preparacin de estos fluidos que son
usados para la suspensin de microorganismos,
clulas sanguneas, o cultivo de clulas, y en las
reacciones in vitro

IMPORTANTE
El agua

con la que se preparan estas soluciones

deber ser destilada o desmineralizada.
Estas soluciones debern tener una presin osmtica
semejante al punto isotnico de la clula que sera
suspendida. Ej : los glbulos rojos en medio no
isotnicos se lisan.
Debern contener un amortiguador para dar a las
clulas un pH. ptimo.
La presencia de iones son necesarios para el
mantenimiento ptimo de clulas particularmente de
mamferos.

1. SOLUCIN SALINA
Solucin importante por contar con los iones
Na y Cl (en un 0.85%).
Tiene una presin osmtica equivalente a la
del suero de mamferos y puede ser utilizado
para las suspensiones de clulas de la
sangre, y la mayora de los microorganismos;
sin embargo no contienen, amortiguadores.

Procedimiento:
Para 1 litro de solucin salina al 0.85 %.
Pesar 8.5 gr. de NaCI. (Cloruro de sodio anhidro).
Medir 800 ml. de agua destilada en una probeta y
trasvasar el agua a un beacker.
En agitacin constante agregar el cloruro de sodio
lentamente al beacker.
Disuelva la sal, trasvasar el contenido del beacker a
una fila de 5000 ml, envasar con el resto de agua
destilada para mezclar y trasvasar a un frasco vaco.
Rotular: Solucin salina al 0.85 % , fecha y mes.

2. SOLUCIN SALINA FENOLADA.

Esta solucin se emplear en las soluciones
de antgenos bacteriales como inactivante y
en pruebas de aglutinacin.
Procedimiento.
Se prepara al 5 %; agregando 5 ml. de fenol a
95 ml. de solucin salina. Se emplear la
solucin salina anteriormente preparada.
Rotular.

3. SOLUCIONES AMORTIGUADORAS
Son aquellas soluciones cuya
concentracin de hidrogeniones vara muy
poco al aadirles cidos o bases fuertes.
El objeto de su empleo, tanto en tcnicas
de laboratorio como en la finalidad
funcional del plasma, es precisamente
impedir o amortiguar las variaciones de pH

 La aplicacin ms importante de esta teora es,

para los fisilogos, el estudio de la regulacin del
equilibrio cido-base.
La concentracin de hidrogeniones del agua
pura experimenta una elevacin inmediata
cuando se aade una mnima cantidad de un
cido cualquiera. No ocurre as en la sangre,
que admite cantidades del mismo cido,
notablemente mayores, sin que la concentracin
de hidrogeniones aumente de una manera
apreciable.

3.1. BUFFER SALINA FOSFATO ( PBS).

Soluciones amortiguadoras o bffers que son los que resisten la
adicin de cidos y lcalis sin cambiar su pH.
Procedimiento: Pesar:
NaH2PO4. H2O : 1.37 g.
Na2HPO4. 7H2O : 2.68 g.
ClNa
: 8.76 g.
Agua desionizada : 1.00 Lt.
Disponer en la fila 800 ml. De agua destilada y la barra
magntica.
En agitacin constante sobre el agitador magntico disuelva
cada una de las sales.
Una vez disueltos, extraer la barra magntica y envasar con el
agua destilada hasta 1 litro.
Tomar una muestra en un beacker y medir el pH. El pH Se
ajusta a 7.4 con solucin de hidrxido de sodio o cido
clorhdrico.
Rotular: PBS, pH. 7.4 a 0.15 M.

3.2. BUFFER BARBITAL SDICO (veronal)

Esta solucin es especial en trabajos de inmunoelectroforesis y
con el pH. 8.6, 0.01 M. se guardar en refrigeracin hasta el
momento de uso.
Procedimiento:
Pesar:
Acido dietilbarbitrico. 1.28 g.
Barbital sdico
10.60 g.
Agua
1.000 mL.
Disolver en una fila en agitacin constante el barbital sdico con
parte del agua (800 ml.).
En un beaker disolver calentando ligeramente el cido
dietilbarbitrico, dejar enfriar.
Mezclar ambas soluciones, envasar a 1.000 ml. Con agua
destilada.
Rotular.