PRACTICA N.

º 1
SOLUCIONES, pH y AMORTIGUADORES RELACIÓN DE
EXPERIMENTOS

1. Preparación de una solución cloruro de sodio y dextrosa.

2. Acción tampón (Buffer) de las proteínas del suero sanguíneo.
3. Determinación de la acidez gástrica.

INTRODUCCIÓN
Una solución corresponde a la mezcla de dos o más sustancias, con las características
de mostrarse homogénea a los procedimientos físicos. El componente que se
encuentra en mayor proporción se denomina solvente, en tanto que el otro u otros
componentes se denomina soluto(s). El agua por sus notables cualidades de solvente y
por ser el componente químico más importante del organismo, cumple un rol destacado
en mantener solubles a los diversos constituyentes químicos de la célula.

En atención al tamaño de las moléculas de soluto, las soluciones se agrupan en

soluciones coloidales y soluciones verdaderas. Las soluciones coloidales tienen
partículas de soluto (micelas) de un tamaño comprendido entre 1 nm y 1000 nm; es el
caso de las soluciones de proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos. Las soluciones
verdaderas tienen un tamaño menor a 1nm. Las biomoléculas y iones de bajo peso
molecular dan soluciones de esta clase.

La concentración de las soluciones corresponde a la cantidad de soluto por unidad de

volumen dé la solución y en Bioquímica existen 3 sistemas importantes para expresar
la concentración de las soluciones. El sistema molar, él sistema normal y el sistema
porcentual. Solución Molar (M) es aquella que contiene un mol de la sustancia por
litro de solución. Solución normal es aquella que contiene el equivalente gramo de la
sustancia por litro de solución. Solución porcentual es aquella que contiene un
determinado número de gramos de la sustancia en 100 g se consideran soluciones
porcentuales aquellas que contienen cierto número de gramos, miligramos o
microgramos de soluto en 100 ml de la solución y se puede escribir (P/V) para indicar
que en este caso la relación es de peso-volumen.

Por otro lado, cuando hablamos de soluciones biológicas, la concentración de

hidrogeniones [H+] en la célula tiene un poderoso efecto sobre las reacciones
químicas que allí ocurren, desde el momento en que todos estos procesos son
catalizados por enzimas y éstas a su vez requieren pH óptimos para trabajar
eficientemente. En vista que la concentración de hidrogeniones expresada en
normalidad, en la mayoría de soluciones, incluyendo líquidos biológicos, es muy
pequeña, hace un buen tiempo se acuñó el término de pH (potencial de hidrogeniones)
para representarlas con cifras más manejables. El pH es pues un término que expresa la

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concentración de iones hidrógeno como el logaritmo negativo (de base 10) de dicha
concentración en normalidad o lo que es lo mismo el logaritmo del inverso de
concentración de hidrogeniones [H+].
pH = - log [H+]

De acuerdo con este concepto, si el pH es 7 el medio es neutro, si el pH es menor de 7

la solución es ácida, y básica si el pH es mayor a 7.

La escala de pH, nos indica el grado de acidez o de basicidad de una solución y varía
entre 0 y 14, valores que en concentración de Hidrogeniones en Normalidad
corresponden desde 1N hasta 10-14 N.

El pH de una solución puede ser estimado en la práctica mediante el uso de métodos

colorimétricos o potenciométricos. El procedimiento tan conocido para determinar el
pH de una solución mediante el papel indicador de pH, es un método colorimétrico.

Finalmente, los amortiguadores o tampones son soluciones que se oponen a

variaciones bruscas en el pH y por lo general están constituidos de ácidos débiles con
sus bases conjugadas. Cuando hay exceso de OH - interviene el componente ácido del
tampón; en cambio cuando hay exceso de H +, interviene el componente base
conjugada del mismo. En uno u otro caso, se habrán enmascarado los iones OH – y H
+ y por lo tanto el pH del medio no se modificará.

Hay dos factores a considerar en la efectividad de un tampón: la concentración de los

componentes del mismo y la relación existente entre ambos. Sin embargo, hay que
tener presente que la mayor acción amortiguadora de pH está en el pK o en las
proximidades de este valor.

EXPERIMENTO 1
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
Objetivos
1. Familiarizar al alumno con los cálculos necesarios para la reparación de una
solución.
2. Preparar la solución utilizando adecuadamente el material de laboratorio.

PREPARACIÓN DE UNA SOLUCIÓN DE CLORURO DE SODIO 0.5 M (400ml)

Procedimiento
1. Estimada la cantidad de cloruro de sodio necesario para preparar 400 ml de
solución 0.5 M, se pesa con mucha exactitud dicha cantidad.
2. Se coloca la sustancia pesada en un beaker de 100 ml y se añade
aproximadamente 50 ml de agua destilada.

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 3. Se agita con una bagueta de vidrio hasta que se disuelva completamente el
cloruro de sodio.
4. Se transfiere el contenido a un frasco volumétrico (fiola) de 500 ml y se
completa hasta la marca con agua destilada. Se tapa el frasco y se mezcla.
5. Se trasfiere el contenido a un frasco y se le rotula adecuadamente.

Resultados
1. Anote en el espacio la cantidad de cloruro de sodio que calculó: 11.68gr

PREPARACIÓN DE UNA SOLUCIÓN DE DEXTROSA AL 12% (250ml)

TENIENDO COMO BASES DEXTROSA AL 5% Y DEXTROSA AL 33,3%.
Procedimiento
1. Estimar los volúmenes necesarios de dextrosa al 5% y al 33,3% necesarios
para preparar 250 ml de solución al 12% de dextrosa.
2. Se mide los volúmenes determinados en probetas.
3. Se colocan en una fiola de 250 ml.
4. Se agita hasta que se homogenicen.
5. Se transfiere el contenido a un frasco volumétrico (fiola) de 500 ml y se
completa hasta la marca con agua destilada. Se tapa el frasco y se mezcla.
6. Se trasfiere el contenido a un frasco y se le rotula adecuadamente.

Resultados
1. Anote en el espacio el volumen de dextrosa al 5% que calculó:
2. Anote en el espacio el volumen de dextrosa al 33.3% que calculó:

EXPERIMENTO 2
ACCION TAMPON (BUFFER) DE LAS PROTEINAS DEL SUERO
SANGUINEO
Objetivos
1. Demostrar la acción amortiguadora de pH de las proteínas del suero sanguíneo

Método
1. Volumétrico o titrimétrico.

Se estima los miliequivalentes de HCl y de NaOH gastados para hacer variar el pH del
suero sanguíneo, hacia el lado ácido y hacia el lado alcalino, respectivamente, y
comparar estos resultados con los obtenidos al utilizar suero desproteinizado en
lugar de suero sanguíneo.

Procedimiento:
1. Medir en un Erlenmeyer, 2 ml de suero sanguíneo diluido al medio (1.0 ml de
suero más 1.0 ml de agua destilada) y titular con NaOH 0.01 N hasta un pH

3
 aproximado de 8.5, usando como indicador la fenolftaleína. Anotar el volumen
gastado de la soda.
2. A la misma solución añadir dos gotas de anaranjado de metilo y titular con HCl
0.1 N hasta pH 3.4, anotar el volumen de ácido gastado. Para reconocer el
color que toma este indicador a pH 3.4, preparar un tampón de dicho pH y
añadirle dos gotas de anaranjado de metilo.
3. Repetir los pasos 1 y 2, utilizando en este caso suero desproteinizado (o agua
destilada). Para obtener el suero desproteinizado, mida cierto volumen de suero
en un tubo de ensayo, y caliente en baño María hirviente por dos minutos;
después de filtrar o centrifugar, usar el filtrado o el sobrenadante, según el caso.

Resultados.
1. Con los datos obtenidos en este experimento complete la siguiente tabla:

SUERO AGUA DESTILADA

SANGUÍNEO
Gasto de NaOH 0.01
N en ml
Gasto de HCl 0.1 N
en ml

2. Estimar los micromoles o miliequivalentes de ácido y base necesario para

hacer cambiar en una unidad el pH del suero y del agua destilada.

SUERO AGUA DESTILADA

SANGUÍNEO
Gasto de NaOH 0.01
N en miliequivalentes
Gasto de HCl 0.1 N
en miliequivalentes

EXPERIMENTO 3
ACIDEZ GASTRICA
Normalmente, el jugo gástrico contiene mucina, pepsina, pequeñas cantidades de otras
enzimas, ácidos orgánicos, sales, pequeñas cantidades de proteínas, fosfatos y una
cantidad importante de ácido clorhídrico. Este HCl es secretado por las células
parietales del estómago a una concentración promedio de aproximadamente 160
mEq/L (pH 0.87); esta secreción está influenciada por diversos factores y es
estimulada por las comidas, el alcohol, la histamina, etc.

La regurgitación del líquido intestinal, los alimentos y otros componentes del jugo
gástrico, hacen que la acidez señalada disminuya, por lo que se señala que la acidez
promedio de un sujeto en ayunas es de aproximadamente 2.5 de pH.

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Desde el punto de vista médico, la determinación de la acidez gástrica es de particular
importancia y contribuye al diagnóstico de una serie de enfermedades, como la úlcera
péptica, cáncer gástrico, gastritis crónica, atrofia gástrica, etc.

Hace más de un siglo se estableció el denominado grado de acidez o Unidades de

Acidez, como medida de la acidez gástrica y corresponde a los mililitros de NaOH 0.1
N necesarios para neutralizar la acidez de 100 ml de jugo gástrico.

La prueba de la determinación de la acidez gástrica en un paciente consiste en dejarlo

en ayunas por toda la noche y al día siguiente introducir una sonda nasogástrica y
evacuar completamente todo el contenido gástrico (muestra basal). Después se da el
estímulo que puede consistir en la comida de prueba, como la de Ewald, que incluye
dos tostadas y una taza de té: o agentes de mayor capacidad estimuladora como el
alcohol o la histamina, esta última se administra por vía intramuscular a una
concentración de 0.01 mg / Kg de peso corporal. Luego se comienzan a tomar
muestras de jugo gástrico cada 15 minutos hasta completar las 2 horas.

En cada muestra de jugo gástrico incluyendo la basal, se determinan las unidades de

acidez total del jugo gástrico, titulando con NaOH 0.01 N y usando como indicador el
rojo de fenol.

La acidez total del jugo gástrico en ayunas en un individuo normal es de

aproximadamente 15 –50 mEq de HCl/L. Con estímulo, como la comida de prueba, se
alcanzan normalmente valores como de 20 a 90 mEq de HCl/L. Cuando el estímulo es
la histamina que es uno de los más potentes, el máximo estímulo está entre 30 a 60
mEq/L, en condiciones normales. Menos importancia se concede en la actualidad a la
determinación de la acidez libre y acidez combinada del jugo gástrico. Se atribuía que
la primera correspondía a la acidez del HCl libre, en tanto que la segunda era debida a
HCl combinado a fosfatos ácidos y a ácidos orgánicos. La acidez libre se obtenía
titulando el jugo gástrico con NaOH hasta un pH de 3.5, en tanto que la acidez
combinada correspondía a la titulada en el jugo gástrico, desde un pH de 3.5 hasta
aproximadamente 8.3. Para esto era necesario el uso de dos indicadores, el dimetil-
aminoazobenzeno y la fenolftaleína.

Objetivo
1. Determinar los grados de acidez (Unidades de Acidez) de una muestra de
jugo gástrico de un paciente en ayunas.
Método.
1. Titular una muestra de jugo gástrico utilizando NaOH 0.01 N y rojo de fenol
como indicador.
Procedimiento.
1. Medir 1 ml. de jugo gástrico filtrado con gasa, en un Erlenmeyer de 50 ml.
Añadir 10 ml. de agua destilada.

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 2. Añadir 2 gotas de rojo de fenol y mezclar.
3. Titular con NAOH 0.01 N Hasta obtener el color de la solución patrón.
4. Preparar el patrón midiendo en un Erlenmeyer 1 ml. tampón fosfato pH 7.0;
Añadir 10 ml de agua destilada y 2 gotas de rojo de fenol y mezclar.

Resultados.
1. Las Unidades de Acidez del jugo gástrico analizados son:
2. La acidez del jugo gástrico, expresado como mEq de HCl/L de jugo gástrico es:

INTERROGANTES
1. ¿Qué es una solución saturada?
Son aquellas en las que no se puede seguir admitiendo más soluto porque el
solvente ya no lo puede disolver.

2. Siendo actualmente recomendable el sustituir las concentraciones de las biomoléculas

de los líquidos biológicos del organismo expresadas en forma porcentual, por las
concentraciones expresadas en el sistema molar, haga las conversiones
correspondientes para los compuestos químicos que se señalan e indique si los
valores están altos (A), normales (N) o disminuidos (D), respectivamente.

Compuesto PM Concentració Concentración Valores

n (%) (mmol/L)
Glucosa 180 75 mg %
(sangre)
Urea (Sangre) 60 25.5 mg %
Colesterol 387 180 mg %
(suero)
Lactato 140 5 mg %
(suero)
Creatinina 113 0.8 mg%
(suero)
Calcio 40 8.5 mg%
(suero)
Hierro 56 75 µg/dL
(suero)
Fósforo 31 4.5 mg/dL
(suero)

Para resolver puede consultar el siguiente enlace:

http://www.scielo.sa.cr/scielo.php?pid=S0253-
29482002000100008&script=sci_arttext

3. Cómo se prepara:

6
 a) 225 ml de NaCl al 10%
10gr – 100ml
Xgr – 225ml
22.5

b) 500 ml de NaHCO3 8.4%

8.4gr – 100ml
Xgr – 500ml
42
c) 100 ml de glucosa 0.5N
0.5 x 180 = 90gr
90gr – 1000ml
Xgr – 100ml
9
4. ¿Cuál presenta la osmolaridad más alta NaCl 0.1M o Na2SO4 0.08 M.? Realice los
cálculos

5. A un enfermo hay que inyectarle 15 g de KCl y 126 g de glucosa (C 6H12O6)

¿Cuánta agua habrá que añadirles para que resulte un suero 0.4 osmolar?
15gr/74.5gr = 0.2mol
126gr/180gr = 0.7mol

6. Buscar las composiciones de las siguientes soluciones: Hartman o Ringer y

Darrow.

7. Calcular la osmolaridad a partir de:

a) Dextrosa al 10% en solución salina (NaCl) al 0.45%
10gr/100ml = 0.56M x 1 = 0.56Osml
0.45gr/100ml = 0.77M x 2 = 0.15Osml

b) Dextrosa al 5% en solución salina (NaCl) al 0.2%

5gr/100ml = 0.27M x 1 = 0.27Osml
0.2gr/100ml = 0.034M x 2 = 0.068 Osml

8. ¿Qué se entiende por acidez real y por acidez titulable?

9. ¿Qué es la anaclorhidria o anacidez gástrica?

La anaclorhidria gástrica (anacidez – aclorhidria) es un estado clínico en el que la
producción del ácido clorhídrico, componente del acido gástrico, es nula. Esta
condición afecta el proceso digestivo y provoca daños en el sistema gastrointestinal.
Puede aumentar los riesgos de desarrollar anemia ocasionado por la mala absorción
del hierro además de vitaminas y minerales como el calcio, el ácido fólico,
vitaminas C y D. Es producida por el Hipotiroidismo, exceso de medicamentos,

7
 cirugía de perdida de peso, infección por Helicobacter pylori y tratamientos
autoinmunes.

10. Con los datos que se señalan, construya en papel milimetrado la curva de
acidez gástrica total. A través de una sonda nasogástrica, se obtuvo una muestra
de jugo gástrico en ayunas de un paciente. Luego se administró la comida de
Ewald como estimulante y se procedió a retirar nuevas muestras de jugo gástrico
a los 15’, 30’ y 60’. En la titulación de estas muestras se gastaron 15 ml. (basal),
20 ml., 29 ml. y 33 ml. de NaOH 0.01 N respectivamente.

11. ¿Por qué es importante que se mantenga constante, dentro de ciertos límites, el pH
en el organismo?
Las células de nuestro cuerpo necesitan un pH ligeramente alcalino (7 -7.4) para
realizar sus funciones adecuadamente, es importante mantenerlo en estos
parámetros ya que, al desequilibrarse aumentando (alcalosis) o disminuyendo
(acidosis) por el estrés, la falta de ejercicio y los malos hábitos alimentarios
producirá varias enfermedades. Este se puede mantener mediante una dieta
equilibrada y realizando actividades físicas.

12. ¿Cuáles son las fuentes de iones H+ en el organismo?

13. ¿Cuáles son los sistemas reguladores ácido/básicos que facilitan la eliminación
del H+ producido en el organismo con el fin de mantener constante el pH
sanguíneo?
El sistema de regulación respiratorio y el renal

14. ¿Qué sistemas amortiguadores participan directamente en la regulación del pH

sanguíneo?

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15. ¿Cuáles son los sistemas extra sanguíneos que tienden a mantener el pH
extracelular?
Tampón acido carbónico/bicarbonato

16. Pocos días antes de ser dado de alta nuestro paciente, se le practicó una serie
de determinaciones en el laboratorio, habiéndose obtenido los siguientes
resultados.

Compuesto Químico Valores Normales

Colesterol sérico total 215 mg%
Alanina sérica 0.8 mmol/L
Cobre sérico 182 µg/dL
Hemoglobina 1.6 mmol/L
sanguínea
Ácido úrico sérico 650 µmol/L
Tiroxina sérica 48 ng%
Zinc sérico 35 µmol/L

17. Complete la siguiente Tabla anotando los V.N para los parámetros analizados

Compuesto Químico Valores Normales

Colesterol sérico mmol/L
Alanina sérica Mg%
Cobre sérico µmol/L
Hb g%
Ácido úrico mg%
Tiroxina sérica nmol/L
Zinc sérico µg%

18. Exprese los resultados del paciente en las unidades en que se expresaron sus
V.N. en la tabla anterior y junto a cada resultado escriba en un paréntesis la letra
A, N o D, según encuentre que los resultados están aumentados, normales o
disminuidos; respectivamente.