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PRÁCTICA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

INTRODUCCIÓN
Las enzimas son proteínas que actúan como catalizadores en las células y
hacen posible las reacciones, al disminuir la energía de activación que se
necesita.
Las miles de reacciones que constituyen el metabolismo de los seres vivos
están bajo el control de miles de enzimas. Diferentes enzimas controlan
diferentes reacciones. La sustancia sobre la cual actúa una enzima se conoce
como sustrato, el cual se convierte en uno o más productos al ocurrir la reacción.
El sitio activo es la región específica en la enzima donde se unen con un o más
sustratos específicos.
Las enzimas no se consumen en las reacciones y se pueden volver a utilizar.
Los factores que afectan la estructura de las proteínas también afectan la
función o actividad de las enzimas. Estos factores pueden ser: temperatura, pH
y concentración de sustrato. Las altas temperaturas y un pH demasiado alto o
demasiado bajo rompen ciertos enlaces en las moléculas proteicas,
provocando un cambio en la forma de la molécula, proceso que se denomina
desnaturalización.
La actividad enzimática también puede afectarse por la concentración de
sustrato a medida que ésta aumenta. La actividad enzimática aumenta hasta
cierto punto, más allá de la cual, la actividad deja de aumentar y se mantiene
constante.
La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de tejidos animales
y vegetales. La función de esta enzima es catalizar la descomposición del
peróxido de hidrógeno (H2O2), compuesto toxico producido durante el
metabolismo celular, en agua y oxígeno:
2 H2O2 ------------------►2 H2O + O2. Catalasa

La existencia de catalasa en tejido animales se aprovecha para utilizar el agua

oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como
muchas de las bacterias patógenas son anaerobias, mueren con el
desprendimiento de O2 que se produce cuando la catalasa de los tejidos actúa
sobre el agua oxigenada.
OBJETIVOS
♦ Comprobar la presencia y actividad de enzimas en un tejido animal y
vegetal.

♦ Evaluar el efecto de la temperatura y pH sobre la actividad de las

enzimas.
♦ Valorar la importancia de las enzimas en la homeostasis celular.

MATERIALES (por grupo)

q 50 gr de hígado picado en presenciales usaremos tubos de
cuadritos* ensayo

q 50 gr de hígado molido* q Ácido acético (vinagre Blanco)*

q 1 papa en cuadritos y triturada* q Baño María (olla donde meter

los frascos) *
q Fécula de maíz
q 1 hoja de bisturí o un cuchillo
q Lugol o yodo / Isodine* con filo*

q Hojas de papel toalla de cocina*

q 1 jeringa de 10mL, o algún
medidor de que permita medir q 1 frasco de agua oxigenada 2%
(H2O2) (tarro azul)
esta cantidad
(*) Material que el estudiante debe
q Recipientes vacíos de vidrio tener en casa
transparente. Para prácticas

1. ACTIVIDAD DE LA CATALASA
PROCEDIMIENTO
1. Rotular los 5 frascos con hígado en cuadritos, hígado molido, papa en cuadritos,
papa triturada y otro con agua.
2. Colocar 1mL de agua destilada en el frasco rotulado con AGUA.
3. Picar la papa y el hígado en cuadritos, y triturar papa e hígado en el
mortero.
4.Colocar una porción de cada muestra en los tubos, según su rotulo.
5. Debes colocar una cantidad de hígado o papa que no exceda la mitad de la
capacidad del frasco, y no debes presionarlo, esto lo debes tener en cuenta en todos
los casos. Además, debe ser aproximadamente la misma cantidad.
6. Añadir 1 ml de agua oxigenada en cada uno de los frascos.
Observar el burbujeo* y comparar la intensidad del burbujeo en los frascos que
contienen la muestra en trozos y triturada.

Resultados & Análisis

1. Con base en el experimento anterior, compara la intensidad del burbujeo en
los tubos completando la tabla de índice de reacción, usando los números del
cero al 4 para describir la intensidad de la reacción
Tabla de índice de reacción de la actividad de la catalasa

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5

Control Papa en Papa Hígado en Hígado
(Agua) cuadritos triturada cuadraditos triturado
Índice de
1 ml
reacción

ÍNDICE DE REACCIÓN: El desprendimiento de burbujas se registrará de la siguiente

manera: 0 = No hay reacción, 1 = Reacción muy lenta y con pocas burbujas
2 = Reacción lenta y con burbujas, 3 = Reacción rápida con bastantes burbujas
4 = Reacción muy rápida con muchas burbujas

2.¿Qué muestras presentaron un mayor burbujeo? ¿Por qué?

3. El hígado y la Papa son ricos en catalasa. ¿En cuál de los dos es más
abundante su actividad?

Fuente (http://biologiaterceroiem.blogspot.com/2011/11/trabajo-practico-n-9.htmL)

2. REUTILIZANDO LA ENZIMA
1. Con una pipeta saque 1 mL del sobrenadante de los frascos donde se observó la
presencia de catalasa del experimento anterior (hígado macerado) y colóquelo en un
frasco limpio, rotúlalo como R o Reutilizando
2. Añade un 1 mL de agua oxigenada.
3. Observa y anota los resultados.
Resultados & Análisis
1. Comparando con la enzima en su reacción inicial en el hígado triturado.
¿Cuál es el índice de reacción de la enzima REUTILIZADA? Usa la tabla de
abajo para comparar
2. ¿Por qué crees que se produce este resultado?
Tabla de índice de reacción reutilizando la enzima
Enzima Hígado
reutilizada triturado

Índice de reacción

ÍNDICE DE REACCIÓN: El desprendimiento de burbujas se registrará de la

siguiente manera: 0 = No hay reacción, 1 = Reacción muy lenta y con pocas burbujas
2 = Reacción lenta y con burbujas, 3 = Reacción rápida con bastantes burbujas
4 = Reacción muy rápida con muchas burbujas

EFECTO DEL pH Y LA TEMPERATURA SOBRE LA CATALASA

3. EFECTO DEL pH SOBRE LA CATALASA
1. Rotular los tubos como NaOH 1% (Hidróxido de Sodio) y HCL (Ácido
clorhídrico)
2. Colocar en cada tubo hígado en cuadritos.
3 Añade 1 mL de vinagre blanco en el frasco rotulado como VB.
4. Añade 1 ml de NaOH 1% (Hidróxido de Sodio) y HCL (Ácido clorhídrico) a
cada tubo según corresponda.
5. Mover suavemente cada uno de los frascos.i
6. Ahora añade en cada uno de los frascos 1 ml de agua oxigenada.
7. Observar el resultado y anota el índice de reacción.

Resultados & Análisis

1. Comparado con la enzima en su reacción inicial en el hígado triturado. ¿Cuál

es el índice de reacción de las enzimas en presencia de HCl y NaOH? Usa la
tabla de abajo para comparar.
2. ¿Por qué crees que se produce este resultado?
 Tabla de índice de reacción pH y catalasa

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Hígado (reacción
Hígado Hígado inicial)
HCL 1N 1 mL NO
NaOH 1N 1mL NO
solución
H2O2 1 mL 1 mL 1 mL
Índice de
reacción
ÍNDICE DE REACCIÓN: El desprendimiento de burbujas se registrará de la siguiente
manera: 0 = No hay reacción, 1 = Reacción muy lenta y con pocas burbujas
2 = Reacción lenta y con burbujas, 3 = Reacción rápida con bastantes burbujas
4 = Reacción muy rápida con muchas burbujas

4. EFECTO DEL CALOR SOBRE LA CATALASA

1. Colocar en un tubo rotulado como Desnaturalización o D, hígado en cuadritos.
2. Añadir agua al frasco y llevar a Baño María, 90ºC por 10 minutos.
3. Observar y anotar los cambios.
3. Retirar el agua del frasco.
4. Añadir a la muestra 1 ml de agua oxigenada.
5. Observar el resultado y anota el índice de reacción.

Resultados & Análisis

1. Comparado con la enzima en su reacción inicial en el hígado triturado.

¿Cuál es el índice de reacción de la enzima en presencia de calor? Usa la tabla
de abajo para comparar.
2. ¿Por qué crees que se produce este resultado?

Tabla de índice de reacción calor y catalasa

Tubo 1 Tubo 5
Hígado triturado Hígado triturado
Baño María Reacción inicial
Índice de reacción
ÍNDICE DE REACCIÓN: El desprendimiento de burbujas se registrará de la siguiente
manera: 0 = No hay reacción, 1 = Reacción muy lenta y con pocas burbujas
2 = Reacción lenta y con burbujas, 3 = Reacción rápida con bastantes burbujas
4 = Reacción muy rápida con muchas burbujas
5. ACTIVIDAD DE LA AMILASA
1.Coloque en un frasco de 2mL de solución de almidón al 1%, rotúlalo como almidón.
2. En otro frasco de ensayo coloque 2mL de la solución de almidón al 1% (solución de
almidón más agua), adicione aproximadamente 2mL de saliva, agite y deje reposar
durante 25 minutos aproximadamente.
3. Agregue 4 gotas de lugol a cada uno de los frascos, observe y registre el resultado.

Fuente (http://www.educa.madrid.org/web/ies.mateoaleman.alcala/PRACTICAS_EB_alumnos.pdf)

Resultados & Análisis

1. ¿Por qué hacer una prueba de lugar para verificar la actividad de la Amilasa?
2. ¿Cuándo una prueba de lugol es positiva?

6. EFECTO DE LA AMILASA SOBRE EL ALMIDÓN.

1. Preparemos una solución de almidón usando 1 tapa de gaseosa de fécula de maíz
(maicena) y 50 ml de agua. Mezcla con una cuchara.
6. EFECTO DE LA AMILASA SOBRE EL ALMIDÓN
1. Coloca aproximadamente 1 ml de saliva en un frasco y añade la misma cantidad de la
solución de almidón que preparaste, agítalo.
3. Coloca 1 ml de fécula de maíz (sola) en otro recipiente.
4. Pasados 25 minutos debes agregar 4 gotas de Isodine Solución a cada frasco.
5. Agítalo, y observa y toma fotos de tus resultados.

Resultados & Análisis

1. ¿Qué cambios importantes notas en el frasco (tubo) con almidón con saliva al
realizar la prueba del yodo? ¿Por qué crees que se produce esa diferencia?
2. ¿Cuál es la principal diferencia entre esta prueba realizada en el laboratorio?
3. ¿Cuál es la temperatura y pH óptimo de la amilasa?
7. EFECTO DEL CALOR Y EL pH SOBRE LA CATALASA
1. Rotula 3 frascos como Vinagre (ácido acético), calor e hígado.
2. Coloca la misma cantidad de hígado en cuadritos en los 3 frascos.
3. Añade 1ml de vinagre (en el frasco rotulado como vinagre) que previamente tenia el
hígado.
4. Añade 1 ml de agua oxigenada. Anota y toma fotos de los resultados.
5. Añade agua al frasco rotulado como calor, que previamente tenia el hígado y llévalo
a una olla con agua hirviendo (utiliza agarraderas para no quemarte) déjalo por 10
minutos.
6. Extrae el frasco de la olla, retira el agua con mucho cuidado pues estará caliente y
añade 1 ml de agua oxigenada. Anota y toma fotos de los resultados
7. Añade 1 ml de agua oxigenada en el frasco que contiene el hígado en cuadritos solo.
Anota y toma fotos de los resultados

Resultados & Análisis

1. ¿Cómo crees que afecte el ácido acético la estructura de la catalasa y luego su
función?
2. Comparando los resultados obtenidos en el laboratorio con HCL y NaOH y los
obtenidos con ácido acético. ¿Cuál de los tres tratamientos crees que afecta en
mayor medida la actividad de la enzima?
4. ¿Cuál es la temperatura óptima de la catalasa?
5. ¿Cómo crees que una temperatura de 100º afecta la estructura de la catalasa y
luego su función?
6. ¿Qué gas se libera por acción de la catalasa?

CUESTIONARIO

1. Explique ¿Qué factores influyen sobre la catálisis enzimática y cómo lo hacen?

2. ¿Qué son enzimas alostéricas y cuál es su papel en la homeostasis celular?

3. ¿Cuál es la diferencia en la intensidad de burbujeo entre los trozos de

muestra cortada en cuadritos y la muestra triturada? ¿Por qué?

4. ¿Qué ocurre cuando se añade peróxido de hidrógeno el sobrenadante en la

reutilización de la enzima? ¿Por qué?

5. De acuerdo con los experimentos realizados ¿en qué condiciones la actividad

de la catalasa es óptima?

6. Investiga sobre la acatalasemia ¿Qué tipo de deficiencia es? ¿En qué

poblaciones se presenta? Explique las causas y consecuencias