SSCP

David Santiago Martnez Sarmiento

Jos Adrin Bustos Chacn
MICROBIOLOGA

Q u es SSCP?

Es una tcnica de rastreo de mutaciones

usada en el diagnstico molecular basada
en la migracin electrofortica del ADN.

Basada en el distinto comportamiento

electrofortico que presentan las
molculas mono catenarias de ADN
segn su secuencia en un gel de
poliacrilamida no desnaturalizante. Al ser
una tcnica de rastreo o barrido es til
para determinar de forma rpida la
presencia de mutacin, pero no aporta
informacin acerca de la mutacin
concreta que presenta el ADN.

Cm o Funciona?

Es un proceso
donde los
productos de
PCR son
desnaturalizados
en cadena
simples de ADN,
luego re
naturalizados
para favorecer
los
apareamientos
intracatenarios y
finalmente
analizados en un
gel de
Poliacrilamida.

Procedim iento

Se realiza la desnaturalizacin de la molcula de ADN mediante calor.

Un par especfico de cebadores de PCR ( directo e inverso ) se utiliza

para amplificar los fragmentos de ADN deseados de los individuos.

ADN de una sola hebra es producido por PCR asimtrica : el cebador en

un lado del fragmento es en gran medida en exceso sobre el otro
cebador . despus de la baja concentracin de la oferta de imprimacin
se agota , continu PCR produce slo el objetivo de una sola hebra .

Las movilidades de los fragmentos de cadena sencilla se comparan por

electroforesis en un gel de poliacrilamida neutra.

Las bandas se detectaron mediante marcaje radioactivo o (ms a

menudo) tincin de plata , y el patrn se interpreta ( Melcher , 2000 ) .

Resultados experim entales

Un cambio en la secuencia provoca cambios
conformacionales cuando el ADN se
desnaturaliza (se separan las dos cadenas)
y se deja que cada cadena se repliegue por
separado. Estos cambios conformacionales
se detectan porque alteran la migracin
electrofortica en geles de poliacrilamida
no-desnaturalizantes.

Si no hay mutaciones, se detectarn

nicamente las bandas
correspondientes al homodplex
(resultado de la reasociacin parcial
de las dos cadenas complementarias
durante la electroforesis) y las
bandas correspondientes a cada una
de las cadenas sencillas que se han
replegado adoptando una
conformacin determinada. En
cambio,la presencia de una
mutacin dar lugar a nuevas
bandas debidas al patrn de
plegamiento de las cadenas sencillas
mutantes, que ser diferente al de
las cadenas nativas.

Ventajas y desventajas deluso de SSCP

Ventajas
Puede detectar
mutaciones en una
regin de ADN especifica
por la eleccin de
cebadores de PCR que
abarcan la regin.

Puede observar y probar

un gran nmero de
muestras porque la
tcnica es simple y
rpida.

El barrido SSCP slo le dice que

Desventajas
existe una mutacin . Debe llevar
a cabo la secuenciacin del ADN
posterior para determinar la
naturaleza de la mutacin que
provoc un cambio de movilidad
electrofortica en una muestra
dada .

Por otra parte , no todas las

mutaciones puntuales en una
secuencia dada causar un
cambio detectable en la movilidad
electrofortica . Sin embargo ,
mediante la optimizacin de las
reacciones de PCR y condiciones
antes de intentar ejecutar una
gran escala de barrido puede

Condiciones de funcionam iento

Temperatura ( ~
temperatura
ambiente , ~ 4 C )
Adems de los
aditivos por ejemplo,
glicerol ( 5-10%) ;
sacarosa ( 10 %)
Primers.

Bibliografi
a:
Bibliografa

Melcher, Ulrich. SSCPs. http://opbs.okstate.edu/~

melcher/MG/MGW1/MG11129.html.

PCRLinks. http://
www.espanol.pcrlinks.com/variantes/pcr_sscp.htm

Univesidad de Navara, http://

www.unav.es/ocw/genetica/tema10-2.html