TECNOLOGIA DEL ADN

1) ¿Investiga y explica cómo se extrae el ADN de las células para su análisis?

La extracción de ADN es un proceso fundamental en la genética y se utiliza para
obtener el material genético de las células para su posterior análisis, es proceso
se divide en 6 etapas las cuales son:
1° Preparación de la muestra: Se selecciona la muestra biológica que
contiene las células de interés.
2° Ruptura de las células: Se lleva a cabo la ruptura de las células para
liberar el ADN contenido en su interior.
3° Lisis celular: Se añade una solución de lisis celular que contiene enzimas
llamadas proteasas, las cuales degradan las proteínas y otros
componentes celulares que pueden interferir en la extracción y
posterior análisis del ADN.
4° Precipitación del ADN: Se añade alcohol frío para precipitar el ADN. El
alcohol provoca que el ADN se agregue y forme una estructura visible a
simple vista o mediante centrifugación.
5° Lavado del ADN: El precipitado de ADN se separa del resto de los
componentes celulares mediante centrifugación y se lava con alcohol
para eliminar impurezas como sales y proteínas.
6° Reconstitución del ADN: El precipitado de ADN se disuelve en un
tampón o solución acuosa adecuada para su almacenamiento y análisis
posterior. En esta etapa, se puede realizar una cuantificación del ADN
para determinar su concentración y pureza.

2) ¿Qué función cumplen la nucleasas y enzimas de restricción?

Las NUCLEASAS son enzimas que catalizan la ruptura de los enlaces
fosfodiéster en la cadena de ADN o ARN, lo que resulta en la degradación de
estas moléculas. Las nucleasas pueden tener diferentes especificidades y
pueden actuar en diferentes partes de la molécula de ADN o ARN. Las
nucleasas se utilizan en diversas aplicaciones, como la degradación controlada
de ADN o ARN en estudios de investigación, la eliminación de contaminantes de
ADN en muestras y la degradación de material genético en el sistema de
defensa inmunológica.
 Exonucleasas: Son nucleasas que degradan el ADN o ARN comenzando
desde los extremos de la cadena, eliminando uno o más nucleótidos a la
vez.
 Endonucleasas: Son nucleasas que cortan el ADN o ARN en el medio de
la cadena, generando fragmentos más pequeños.
Las ENZIMAS DE RESTRICCIÓN, también conocidas como endonucleasas de
restricción, son un tipo específico de nucleasas que reconocen secuencias de
ADN específicas y cortan la cadena de ADN en lugares precisos en esas
secuencias. Las enzimas de restricción son herramientas esenciales en la
 tecnología del ADN recombinante y la manipulación del ADN en el laboratorio.
Se utilizan para cortar el ADN en fragmentos específicos, permitiendo su
posterior manipulación, clonación y análisis. Además, las enzimas de restricción
se utilizan en técnicas como la electroforesis de restricción y la digestión
enzimática para el análisis y la caracterización del ADN.
 Reconocimiento de secuencias: Cada enzima de restricción reconoce
una secuencia específica de ADN, conocida como sitio de
reconocimiento. Estas secuencias suelen ser palindrómicas, lo que
significa que tienen simetría en sus bases.
 Corte del ADN: Una vez que la enzima de restricción se une a su sitio de
reconocimiento, corta la cadena de ADN en uno o ambos lugares del
sitio de reconocimiento, generando fragmentos más pequeños.

3) ¿En qué consiste una electroforesis y para qué se puede utilizar?

La electroforesis es una técnica utilizada para separar y analizar moléculas
cargadas eléctricamente, como el ADN, el ARN y las proteínas, en función de su
tamaño y carga. Consiste en aplicar una corriente eléctrica a través de un gel o
matriz porosa en el que se han cargado las muestras, lo que permite la
migración de las moléculas a través del gel. Esta técnica consiste en:
1° Preparación del gel: Se prepara un gel, con una concentración y
porosidad adecuadas según el tamaño de las moléculas que se desean
separar. El gel se coloca en una cubeta o cámara de electroforesis y se
vierte una solución de tampón en la cámara para mantener el pH y las
condiciones iónicas adecuadas.
2° Carga de las muestras: Se cargan las muestras en el gel mediante
pequeños pocillos o pozos que se forman en un extremo del gel. Las
muestras se mezclan previamente con un tampón de carga que
contiene un colorante o marcador para visualizar la migración durante
el proceso.
3° Aplicación de la corriente eléctrica: Se conectan los electrodos a una
fuente de alimentación eléctrica. El electrodo negativo se coloca en el
extremo donde se cargaron las muestras, mientras que el electrodo
positivo se coloca en el extremo opuesto del gel. Al aplicar una corriente
eléctrica, las moléculas cargadas se mueven a través del gel hacia el
electrodo opuesto.
4° Separación y migración de las moléculas: Durante la electroforesis, las
moléculas se separan y migran a diferentes velocidades a través del gel
en función de su tamaño y carga. Las moléculas más pequeñas y
cargadas se desplazan más rápidamente a través del gel, mientras que
las moléculas más grandes y menos cargadas migran más lentamente.
5° Visualización de las moléculas: Después de la electroforesis, se detiene
la corriente eléctrica y se retira el gel de la cámara. Las moléculas
separadas se pueden visualizar mediante diferentes métodos, como la
tinción con colorantes específicos para el ADN, ARN o proteínas, o
 mediante técnicas de transferencia a membranas para su posterior
detección.
La electroforesis se utiliza en una amplia gama de aplicaciones en genética,
biología molecular y bioquímica. Algunos usos comunes incluyen:
 Separación y análisis de fragmentos de ADN y ARN en técnicas como la
electroforesis en gel de agarosa o poliacrilamida.
 Análisis de mutaciones genéticas y variantes genéticas en enfermedades
genéticas.
 Estudios de expresión génica y análisis de perfiles de expresión
mediante electroforesis de ARN.
 Separación y análisis de proteínas mediante electroforesis de proteínas
en gel de poliacrilamida.
 Caracterización de proteínas, como la determinación de su tamaño,
carga y pureza.

4) ¿Que son y en que procesos se utilizan sondas génicas? ¿Cuál es su finalidad?

Las sondas génicas son secuencias de ADN o ARN complementarias a
secuencias específicas de genes o regiones genómicas de interés. Estas sondas
se utilizan en diversos procesos para detectar, localizar y cuantificar la
presencia o expresión de secuencias específicas en una muestra de ADN o ARN.
La finalidad principal de las sondas génicas es la detección y análisis de
secuencias de interés dentro del genoma. Al unirse de manera específica a la
secuencia complementaria, las sondas permiten identificar y cuantificar la
presencia o ausencia de esa secuencia en una muestra. Algunos de los procesos
en los que se utilizan sondas génicas son:
 Hibridación de sondas: Las sondas génicas se utilizan en la técnica de
hibridación de sondas, en la que se marca la sonda con un marcador
fluorescente u otro tipo de etiqueta. La sonda marcada se hibrida con el
ADN o ARN de la muestra objetivo. Si hay complementariedad entre la
sonda y la secuencia de interés, se produce una unión específica, lo que
permite detectar y visualizar la presencia de la secuencia objetivo.
 Southern blot: El Southern blot es una técnica que utiliza sondas génicas
para detectar la presencia y analizar la cantidad de secuencias
específicas de ADN en una muestra. Después de la separación de los
fragmentos de ADN mediante electroforesis en gel, se realiza la
transferencia del ADN a una membrana y se hibrida con una sonda
específica para la secuencia de interés. Esto permite identificar y
cuantificar la presencia de esa secuencia en la muestra.
 Northern blot: Similar al Southern blot, el Northern blot se utiliza para
detectar y cuantificar la presencia de secuencias específicas de ARN en
una muestra. Después de la separación de los ARN mediante
electroforesis en gel y su transferencia a una membrana, se realiza la
hibridación con una sonda de ARN complementaria a la secuencia
 objetivo. Esto permite analizar la expresión génica y la cantidad de ARN
correspondiente en la muestra.
 Fluorescencia in situ (FISH): En la técnica de FISH, se utilizan sondas
génicas marcadas con fluorocromos para la visualización de secuencias
específicas en células o tejidos. Las sondas se unen a sus secuencias
complementarias dentro de las células, lo que permite detectar y
localizar la presencia de esas secuencias en un contexto espacial.

5) Investiga sobre las técnicas Southern blot, Westhern blot y Northern blot ¿En
qué consisten? ¿Cómo se utilizan? Buscar animación que las representan para
poder usarlas en la resolución de casos
Southern blot
es una técnica utilizada para detectar y analizar secuencias específicas de ADN
en una muestra. Consiste en los siguientes pasos:
1° Digestión del ADN: Se digiere el ADN de la muestra utilizando enzimas
de restricción específicas que cortan el ADN en fragmentos más
pequeños.
2° Electroforesis en gel: Los fragmentos de ADN se separan según su
tamaño mediante electroforesis en gel de agarosa.
3° Transferencia a una membrana: Los fragmentos de ADN se transfieren
desde el gel a una membrana de nitrocelulosa o nylon mediante una
técnica llamada "transferencia de Southern blot".
4° Hibridación de la sonda: La membrana se hibrida con una sonda de ADN
complementaria a la secuencia de interés marcada con una etiqueta. La
sonda se une específicamente a la secuencia de ADN objetivo en la
membrana.
5° Detección de la sonda: La presencia de la sonda marcada se detecta
mediante auto radiografía o utilizando métodos de detección
fluorescente.
Western blot
se utiliza para detectar y analizar proteínas específicas en una muestra. Los
pasos principales son los siguientes:
1° Electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE): Las proteínas se
separan según su tamaño y carga eléctrica mediante electroforesis en
gel de poliacrilamida en presencia de un detergente llamado SDS
(dodecilsulfato de sodio).
2° Transferencia a una membrana: Las proteínas se transfieren desde el gel
a una membrana de nitrocelulosa o PVDF mediante una técnica de
transferencia electroforética llamada "transferencia de Western blot".
3° Bloqueo y anticuerpos: La membrana se bloquea para evitar la unión
inespecífica y luego se incuba con anticuerpos específicos que se unen a
la proteína de interés.
4° Detección de los anticuerpos: Los anticuerpos unidos a la proteína se
detectan utilizando una variedad de métodos, como la conjugación de
 los anticuerpos con enzimas que producen una señal colorimétrica o
quimio luminiscente.
Northern blot
se utiliza para detectar y analizar ARN específicos en una muestra. Los pasos
principales son similares al Southern blot, pero con algunas diferencias:
1° Electroforesis en gel de agarosa: Los ARN se separan según su tamaño
mediante electroforesis en gel de agarosa.
2° Transferencia a una membrana: Los ARN se transfieren desde el gel a
una membrana de nitrocelulosa o nylon mediante una técnica de
transferencia electroforética llamada "transferencia de Northern blot".
3° Hibridación de la sonda: La membrana se hibrida con una sonda de ARN
complementaria a la secuencia de interés marcada con una etiqueta.
4° Detección de la sonda: La presencia de la sonda marcada se detecta
utilizando técnicas similares a las utilizadas en el Southern blot.

6) ¿En qué consistía la técnica fingerprint descripta por Jeffreys y sirvió como
inicio para usar el ADN como huella genética forense?
La técnica de fingerprint o huella genética, descrita por el científico británico Sir
Alec Jeffreys, fue un avance fundamental en el uso del ADN como herramienta
de identificación en genética forense. Esta técnica permitió demostrar que el
ADN es único para cada individuo, lo que llevó al desarrollo de los perfiles de
ADN utilizados en la actualidad en investigaciones criminales y casos de
identificación. Esta técnica se basa en la variabilidad de las secuencias
repetitivas de ADN conocidas como microsatélites o STRs (Short Tandem
Repeats). Estas secuencias consisten en repeticiones cortas de 2 a 6 nucleótidos
que se encuentran dispersas en todo el genoma.
El proceso de fingerprinting se lleva a cabo de la siguiente manera:
1° Extracción de ADN: Se extrae el ADN de la muestra biológica, como
sangre, saliva o tejido.
2° Amplificación por PCR: Se amplifican específicamente las regiones de
microsatélites mediante la técnica de reacción en cadena de la
polimerasa (PCR). Se utilizan cebadores diseñados para flanquear los
sitios de microsatélites de interés.
3° Electroforesis capilar: Los productos de PCR amplificados se separan por
tamaño mediante electroforesis capilar. Esta técnica permite medir con
precisión la longitud de las secuencias de microsatélites amplificadas.
4° Análisis de los perfiles de ADN: Los patrones de bandas resultantes en el
gel de electroforesis capilar se visualizan y se crean los perfiles de ADN.
Cada banda en el perfil representa una variante de longitud de los
microsatélites.
5° Comparación de perfiles: Los perfiles de ADN obtenidos de diferentes
individuos se comparan para determinar si hay coincidencia o exclusión.
Si los perfiles coinciden en múltiples microsatélites, se puede inferir que
provienen del mismo individuo.
7) ¿En qué consiste la técnica PCR, reacción en cadena de polimerasa tan
nombrada en estos días?
La técnica de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) es una herramienta
fundamental en la biología molecular que permite amplificar y generar
múltiples copias de una región específica de ADN in vitro. El proceso de PCR se
lleva a cabo en ciclos repetidos de temperaturas controladas y consta de los
siguientes pasos:
1° Desnaturalización: La muestra de ADN que contiene la región objetivo
se calienta a una temperatura elevada (alrededor de 95-98 °C). Esta
etapa permite que las dos cadenas de ADN se separen, rompiendo los
puentes de hidrógeno entre las bases complementarias y generando
hebras individuales.
2° Anillamiento: La temperatura se reduce a alrededor de 50-65 °C para
permitir que los cebadores específicos (oligonucleótidos cortos) se unan
a las secuencias complementarias en las hebras de ADN molde. Los
cebadores son diseñados para unirse a las regiones flanqueantes de la
secuencia objetivo.
3° Extensión: La temperatura se aumenta a aproximadamente 72 °C y una
enzima llamada ADN polimerasa, termoestable y termofílica (como la
Taq polimerasa), utiliza los cebadores como punto de inicio y sintetiza
nuevas cadenas de ADN utilizando nucleótidos complementarios. La
ADN polimerasa lee las hebras individuales de ADN molde y sintetiza las
hebras complementarias.
La técnica de PCR ha sido fundamental para la realización de pruebas de
detección de COVID-19, ya que permite amplificar y detectar el material
genético del virus de manera rápida y precisa.

8) ¿En qué consiste la técnica de secuenciación del ADN? Desarrollada por Sanger
en 1977
La secuenciación de Sanger se basa en la síntesis in vitro del ADN utilizando
dideoxinucleótidos (ddNTPs), que son nucleótidos modificados que carecen del
grupo 3'-OH. Esto detiene la elongación de la cadena de ADN en el sitio donde
se incorpora el ddNTP, lo que permite la generación de fragmentos de
diferentes longitudes.
1° Preparación de la reacción de secuenciación: Se prepara una mezcla de
reacción que contiene una hebra de ADN molde, una pequeña cantidad
de un iniciador específico (cebador) que se une a la secuencia a
secuenciar, nucleótidos normales (dNTPs), ddNTPs marcados con
fluorocromos o radioisótopos, y una enzima ADN polimerasa.
2° Extensión de la cadena: La ADN polimerasa comienza a sintetizar una
nueva cadena de ADN complementaria utilizando el iniciador y los
dNTPs. A medida que la polimerasa incorpora los ddNTPs, la elongación
 se detiene aleatoriamente en diferentes posiciones, generando
fragmentos de diferentes longitudes.
3° Separación por electroforesis: Los fragmentos de ADN resultantes se
separan por tamaño mediante electroforesis en gel de poliacrilamida o
gel de poliacrilamida-urea. El gel contiene una matriz porosa que
retarda el movimiento de los fragmentos cargados eléctricamente. Los
fragmentos más cortos se mueven más rápido y llegan antes a la
posición final.
4° Detección y lectura de la secuencia: Los fragmentos de ADN separados
se detectan mediante métodos de marcado, como la radiación o la
fluorescencia. Se utiliza una técnica de lectura secuencial de los
fragmentos, donde cada fragmento se detecta y se registra la señal de
su ddNTP correspondiente. Estas señales se registran en un gel o en un
secuenciador automatizado.
5° Análisis de los resultados: Los datos obtenidos se analizan y se
ensamblan para obtener la secuencia completa de la cadena de ADN
original. Esto implica la alineación de los fragmentos en función de las
superposiciones y la identificación de la secuencia completa.
La secuenciación de Sanger fue utilizada en los primeros proyectos de
secuenciación del genoma humano y ha sido una técnica ampliamente
adoptada en la investigación genética y molecular. Aunque actualmente se han
desarrollado técnicas de secuenciación de nueva generación más rápidas y
eficientes, la secuenciación de Sanger sentó las bases para el campo de la
genómica y sigue siendo utilizada en aplicaciones específicas donde se requiere
alta precisión y para la validación de resultados obtenidos por otras técnicas.

9) Entre los últimos avances tecnológicos se encuentran los microchips y

microarrays ¿Para qué sirven?
Los microchips y microarrays son tecnologías avanzadas utilizadas en genética y
genómica para analizar y estudiar múltiples secuencias de ADN o ARN de
manera simultánea.
MICROCHIP DE ADN:
 Función: Los microchips de ADN, también conocidos como chips de ADN
o microarrays de ADN, son dispositivos en los que se imprimen miles o
millones de sondas de ADN en una matriz plana. Cada sonda de ADN es
una secuencia conocida y específica que se diseña para detectar o
analizar secuencias específicas de ADN o ARN objetivo.
 Uso: Se utilizan para analizar la expresión génica, identificar mutaciones
o variantes genéticas, realizar estudios de asociación genética,
caracterizar la estructura del genoma, entre otros análisis. El ADN o ARN
de la muestra se hibrida con los microchips, y la detección de la unión
de las sondas a las secuencias objetivo proporciona información sobre la
presencia, cantidad o características de las secuencias de interés.
MICROARRAYS DE PROTEÍNAS:
  Función: Los microarrays de proteínas son matrices en las que se
imprimen o sintetizan proteínas en miniatura, péptidos u otros
compuestos biológicos. Cada punto en el microarray contiene una
molécula diferente. Estos microarrays permiten el análisis simultáneo
de múltiples proteínas o interacciones proteína-ligando.
 Uso: Se utilizan para estudiar interacciones proteína-proteína,
identificar biomarcadores, analizar modificaciones postraduccionales,
detectar anticuerpos específicos, entre otras aplicaciones. Las muestras
biológicas se aplican al microarray, y la interacción entre las proteínas
de la muestra y las proteínas o ligandos en el microarray se detecta y se
analiza.
Ambos tipos de microarrays ofrecen ventajas como la alta capacidad de
multiplexación, la capacidad de analizar grandes cantidades de datos en una
sola prueba y la capacidad de detectar múltiples secuencias o interacciones
simultáneamente. Estas tecnologías han revolucionado la genómica y la
proteómica al permitir estudios más rápidos y de alto rendimiento, lo que ha
ampliado nuestra comprensión de la biología y ha facilitado el descubrimiento
de nuevos biomarcadores y dianas terapéuticas.