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simple
El Polimorsmo de Conformacin de Cadena Simple
o SSCP, de sus siglas en Ingls (Single Stranded Conformational Polymorphism) es una tcnica de rastreo de mutaciones usada en el diagnstico molecular basada en la
migracin electrofortica del ADN. Se calcula que esta
tcnica detecta del 35 al 100% de las posibles mutaciones, pero debe haber al menos 30% de alelos mutantes.
Es til para detectar enfermedades hereditarias; sin embargo, es ms complicado para detectar enfermedades somticas como el cncer.
Introduccin
Como se ha dicho antes, esta tcnica no permite identicar la mutacin concreta; para ello es necesario secuenciar los productos de la PCR y compararlo con la secuencia normal. Sin embargo, la utilidad de esta tcnica deriva
de que permite de una manera rpida y sencilla descartar
la presencia de mutaciones.
A pesar de su sencillez, no est exento de ciertas desventajas, entre las que destacan el carcter imprevisible del
comportamiento electrofortico de las cadenas simples,
el cual se ve inuenciado por las condiciones en la que
tiene lugar la migracin (temperatura, etc.). La segunda
gran desventaja es que a medida que aumenta el tamao
de la molcula a analizar, sta se vuelve insensible a determinados cambios, adoptando siempre la misma conformacin tridimensional a pesar de haberse producido
un cambio en su secuencia. Adems, la desnaturalizacin
completa es difcil de conseguir y muchas veces aparecen
bandas en el gel correspondientes a doble cadena.
Procedimiento experimental
Los fragmentos de ADN a analizar por esta tcnica de- 3 Aplicaciones en Biologa Molecuben tener una tamao medio de unas 400 pares de bases,
lar
de manera que el primer paso es amplicar por PCR la
regin del gen de inters que queremos estudiar. A continuacin, el producto de la PCR se desnaturaliza calentn- La tcnica SSCP se ha usado para descubrir nuevos podolo a 94C y se enfra rpidamente en hielo. El cambio limorsmos en el ADN, pero actualmente est siendo re1
emplazada por las nuevas tcnicas de secuenciacin directa del ADN, dado que son ms ecientes y precisas.
Hoy en da, la tcnica SSCP es ms usada como mtodo de diagnstico en Biologa Molecular, ya que puede
ser utilizada para genotipar. Es decir, permite detectar
determinados alelos tanto en homocigosis como en heterocigosis, gracias a que cada alelo, debido a su diferencia
en la secuencia gentica, migrar con distinta movilidad
durante la electroforesis. Esto implica una notable utilidad en el diagnstico de ciertas enfermedades genticas.
Tambin es ampliamente usada en Virologa para detectar variaciones entre diferentes cepas de virus. Dichas cepas son distintas debido a mutaciones, lo que dar a lugar
a que adopten distintas conformaciones y por tanto, sean
diferenciables mediante un gel SSCP.[1]
Referencias
REFERENCIAS
5.1
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5.2
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5.3
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