Taller BCM 2023 Síntesis de glucosa, NADPH y ácidos grasos

I. Gluconeogénesis

Al finalizar el tema, el estudiante debe conocer los fundamentos teóricos referidos a:

Gluconeogénesis: Reacciones de la vía, balance y regulación. Localización subcelular

Relación y regulación recíproca con la glucólisis. Tejidos en los que ocurre. Regulación en ayuno
e ingesta

1. Análisis de la gluconeogénesis

La gluconeogénesis es una ruta anabólica encargada de la síntesis de glucosa a partir de

diversos precursores no glucídicos.

a) Indique en qué tejidos ocurre esta vía.

b) Escriba el balance global de la gluconeogénesis a partir de piruvato.
c) Realice una comparación con el balance de la glucólisis. ¿Cuántos enlaces fosfato de
alta energía se consumen en la síntesis de glucosa a partir del piruvato?

a) El principal órgano o tejido donde tiene lugar la gluconeogénesis es el hígado.

También se produce gluconeogénesis en la corteza renal, pero la cantidad total
de glucosa formada en el riñón es la décima parte de la formada en el hígado
debido a la menor masa renal.
b) La estequiometría de la gluconeogénesis a partir del piruvato es:
+
2Piruvato + 4ATP + 2GTP + 2NADH + 4H2O + 2H Glucosa + 4ADP +
+
2GDP + 6 Pi + 2NAD

c) En la síntesis de glucosa a partir de piruvato en la gluconeogénesis, se

consumen 6 enlaces fosfato de alta energía, cuatro del ATP y dos del GTP. A su
vez se requieren dos moléculas de NADH para la reducción de dos moléculas
de 1,3-bifosfoglicerato. Si comparamos la gluconeogénesis con la glucólisis
observamos que la síntesis de glucosa es un proceso costoso desde el punto de
vista energético.

2. Rodeo y regulación de la gluconeogénesis

El músculo esquelético libera grandes cantidades de lactato y alanina en distintas condiciones

metabólicas. Éstos son captados y utilizados a nivel hepático para formar glucosa, la que es
entonces liberada desde el hígado al torrente sanguíneo.

a) ¿Qué reacciones sufren el lactato y la alanina para formar glucosa?

b) ¿Cuáles de estas reacciones son compartidas con la glucólisis y cuáles no? ¿Por qué?
c) ¿Cuál sería el efecto a nivel celular si la glucólisis y la gluconeogénesis se llevaran a
cabo al mismo tiempo? Señale en qué etapas se podrían producir ciclos fútiles.
d) ¿Cuáles son los principales mecanismos de regulación de la vía gluconeogénica?
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1) Para superar las etapas exergónicas de la glucólisis el lactato y la alanina deben realizar
3 rodeos

2) La conversión de piruvato a PEP

En el caso de la alanina además debe

transaminase para convertirse en
piruvato según la siguiente reacción:

3) La conversión de la fructosa-1,6-bifosfato en fructosa-6-fosfato, catalizada por la

fructosa 1,6-bifosfatasa:

Fructosa 1,6-bifosfato Fructosa 6-fosfato + Pi

4) La conversión de glucosa-6-fosfato en glucosa, catalizada por la glucosa-6-fosfatasa:

Glucosa 6-fosfato Glucosa + Pi

b) Las reacciones compartidas entre la glucólisis y la gluconeogénesis son las reacciones

reversibles, es decir las reacciones 2, 4, 5, 6, 7, 8 y 9 de la glucólisis. Las reacciones catalizadas
por la hexoquinasa, fosfofructokinasa y piruvato kinasa son irreversibles, es decir que solo
ocurren en el sentido de la vía glucolítica y por lo tanto se necesita una reacción diferente o
rodeo para que ocurra.
c) Si la glucólisis y la gluconeogénesis ocurrieran en simultáneo sería una ciclo fútil, es decir se
oxidaría glucosa para formar ATP pero luego se utilizaría mas ATP para formar glucosa.. Un ciclo
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fútil es cuando dos vías metabólicas transcurren simultáneamente en direcciones opuestas, el

efecto final es disipar energía en forma de calor.

Si ambas rutas estuvieran activas simultáneamente el balance sería:

2ATP + 2GTP + 2H2O 2ADP + 2GDP + 4Pi

La glucólisis y la gluconeogénesis son procesos irreversibles en las células. Para evitar

los ciclos fútiles ambas rutas están reguladas independientemente mediante controles
ejercidos en los pasos enzimáticos específicos que no son comunes a las dos rutas, por
ejemplo mediante regulación alostérica.

c) Dentro de los mecanismos de regulación se encuentran aquellos que reflejan el nivel

energético dentro de la célula: el acetil CoA como un modulador alostérico positivo de la
piruvato carboxilasa, la inhibición alostérica de la FBPasa-1 por AMP. En condiciones de alta
concentración de ATP, Acetil CoA o citrato la gluconeogénesis se favorece.
Por otro lado, existe una modulación muy importante por la fructosa 2,6 bifosfato la cual es un
reflejo de los niveles de glucosa en sangre (su modulación depende de la insulina y glucagón)
como vimos en el taller de glucólisis. El aumento de la concentración de fructosa 2,6 bifosfato
estimula la glucólisis e inhibe la gluconeogénesis. Cuando disminuye la fructosa 2,6 bifosfato se
estimula la gluconeogénesis, para poder restaurar la glicemia.

3. Localización subcelular de la gluconeogénesis.

A partir de hígado de rata se obtuvieron por centrifugación diferencial fracciones subcelulares

enriquecidas en: mitocondrias, fragmentos de membrana (retículo y membrana plasmática) y
citosol. Complete la tabla con las actividades enzimáticas de la gluconeogénesis que espera
encontrar en las distintas fracciones. Si realizamos el mismo procedimiento a partir de músculo
esquelético ¿obtendremos las mismas actividades enzimáticas de la gluconeogénesis en las
fracciones subcelulares?

¿En qué fracción subcelular se localiza la enzima gluconeogénica que consume NADH? Analice
cómo resuelve el hepatocito la obtención de NADH para llevar a cabo la gluconeogénesis. ¿Qué
sucede si el precursor gluconeogénico es lactato o piruvato?

La gliceraldehído-3P deshidrogenasa es la enzima citosólica que cataliza la desfosforilación y

reducción del 1,3-bifosfoglicerato a expensas del NADH, generando el producto
gliceraldehído-3P. La gluconeogénesis no puede tener lugar si no se suministra NADH.

Cuando el precursor es piruvato, el transporte de malato desde la mitocondria al citosol y su

reconversión allí en oxalacetato, representa una forma efectiva de transportar equivalentes de
reducción en forma de NADH al citosol.
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Cuando el lactato es precursor gluconeogénico, la conversión de lactato en piruvato en el

citosol de los hepatocitos produce NADH citosólico, por lo que la exportación de equivalentes
reductores en forma de malato desde la mitocondria ya no es necesaria.

Localización subcelular
Actividades enzimáticas de
la vía gluconeogénica Mitocondria Citosol Retículo endoplasmático

Piruvato carboxilasa Si No No

PEP carboxiquinasa Si Si No

Enolasa No Si No

Fosfoglicerato mutasa No Si No

Fosfoglicerato kinasa No Si No

Gliceraldehído P No Si No
deshidrogenasa

Triosa P isomerasa No Si No

Aldolasa No Si No

Fructosa 1, 6 bifosfatasa No Si No

Fosfoglucoisomerasa No Si No

Glucosa-6-fosfatasa No No Si

4. Un paciente presenta una infección bacteriana, la cual produce una endotoxina que inhibe
una de las enzimas de la gluconeogénesis. Se determinan la actividad de algunas enzimas y la
producción de glucosa del paciente a nivel hepático utilizando diferentes precursores
(galactosa, alanina, glicerol y fosfoenolpiruvato), y se compara con un individuo sano como
control.
Analice los datos obtenidos indicando cuál es la enzima de la gluconeogénesis afectada y cuál
es la consecuencia en la producción de glucosa.

(a) Tabla - Actividades de algunas enzimas gluconeogénicas de tejido hepático del paciente y de
un individuo sano
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(b) Producción de glucosa por tejido hepático del paciente y de un individuo sano, medidas a partir de
diferentes precursores:

La enzima afectada por la endotoxina, es la PEP carboxiquinasa.

Los precursores más importantes de la gluconeogénesis son el lactato, aminoácidos y el glicerol

que entran en la vía principalmente a nivel del piruvato, oxalacetato y dihidroxiacetona-fosfato.
La alanina, sufre una desaminación e ingresa a la gluconeogénesis como piruvato que es luego
carboxilado por la piruvato carboxilasa rindiendo oxalacetato. El oxalacetato formado no puede
continuar con la gluconeogénesis porque es sustrato de la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa, y
en este caso se encuentra inhibida. Cuando el precursor es el producto de la PEP
carboxiquinasa (el fosfoenolpiruvato) la gluconeogénesis ocurre normalmente=
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II. Ruta o Vía de las Pentosas Fosfato

Al finalizar el tema, el estudiante debe conocer los fundamentos teóricos referidos a:

Ruta de las pentosas fosfato: Fase oxidativa y no oxidativa. Balance y regulación de la vía
Utilización de NADPH y ribosa-5-fosfato por las células en diferentes condiciones. Relación con
otras vías metabólicas

1. Análisis de la vía de las pentosas fosfato

a) Complete el esquema con el nombre de las vías (1 a 5) y de las enzimas (A y B) que

involucran a la glucosa-6-P.

En la siguiente figura se muestra un esquema de la ruta de las pentosas fosfato, identifique en

la figura:
a) La fase oxidativa y la no oxidativa. ¿Cuáles son los sustratos y productos de
cada fase?
b) Escriba las tres reacciones que forman parte de la fase oxidativa y el balance
global de esta etapa
c) ¿Cuál es el punto de regulación de esta vía?¿Cómo se regula?
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En la fase oxidativa el sustrato es la glucosa-6-P y el producto es la Ribosa-5-P. En la Fase no

oxidativa el sustrato son 6 pentosas fosfato (ribosa-5-P y Xilulosa-5-P) y el producto son 5
hexosas fosfato
b) Las reacciones de la fase oxidativa se muestran en la siguiente imágen
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El balance global de la vía es:

Glucosa-6-P + 2 NADP+ + H2O —------> ribosa-5-P + CO2 + 2 NADPH + H+

c) El punto de regulación de la vía es el comienzo; la enzima glucosa-6-fosfato deshidrogenasa y

se regula por los niveles de NADP+, esta molécula es un modulador alostérico positivo de la
glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, cuando los niveles de NADPH disminuyen, la vía de las
pentosas se activa, sin embargo cuando los niveles de NADPH son elevados, la glucosa-6-P se
destina principalmente a la glucólisis.

2. Teniendo en cuenta los productos principales de la vía de las pentosas fosfato son el NADPH
y la ribosa-5-P, indique en qué proporción se formarán cada uno (mayor, menor o igual
cantidad) en los siguientes tipos celulares. ¿Cuál será el destino de estos productos en cada
tipo celular?

A) Células con alta tasa de proliferación

B) Glándula mamaria durante la lactancia
C) Células hepáticas frente a necesidad de colesterol y ácidos grasos
D) Eritrocitos sometidos a estrés oxidativo

En la vía de las PP se produce ribosa 5-fosfato y de NADPH.

A) En células con alta tasa de proliferación, que utilizan ribosa- 5-P para síntesis de ácidos
nucleicos, coenzimas y nucleótidos y NADPH para síntesis de biomoléculas (ej. ácidos grasos y
colesterol). Las necesidades de ribosa 5-fosfato y de NADPH son del mismo orden y por tanto
se va producir la fase oxidativa.

B) y C) En células de tejidos que utilizan NADPH para sintetizar ácidos grasos (ej. Células
hepáticas, y glándula mamaria durante la lactancia), o para sintetizar colesterol (ej. Células
hepáticas), las necesidades de NADPH son mayores que las de ribosa 5-fosfato. En este caso se
dará la fase oxidativa y la fase no oxidativa: la fase no oxidativa permite reciclar las pentosas
fosfato a triosas fosfato y hexosas fosfato y se puede formar glucosa-6-P. La G-6-P será sustrato
de la fase oxidativa para seguir formando NADPH.

D) En células sometidas a estrés oxidativo, que utilizan el NADPH para mantener reducido al
antioxidante glutatión (ej. glóbulos rojos), las necesidades de NADPH son mayores que las de
ribosa 5-fosfato y por tanto se dará la fase oxidativa y fase no oxidativa: igual que en las partes
B y C.

3. Se realizó un estudio comparando las actividades de las enzimas responsables de

metabolizar la glucosa-6-fosfato en eritrocitos en tres individuos de características similares
(edad, peso). En el estudio se usó un lisado de eritrocitos de cada individuo, al que se le
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adiciona glucosa-6-P y NADP+. En cada muestra se midió la formación de NADPH en el tiempo

(Figura 1).

a) ¿Cuáles son las actividades enzimáticas analizadas en este ensayo?

b) Describa los resultados que se muestran en la figura para los tres individuos.
¿Considera que alguno de los individuos estudiados puede presentar un déficit en alguna
enzima? ¿Qué ensayos haría para demostrarlo?
c) ¿Cómo serán los niveles de ATP, NADH y NADPH de estos individuos?
d) ¿Cómo puede afectar esta condición al eritrocito y su función? Analice el esquema de
reacciones que está involucrado en este control de homeostasis redox.

En este ensayo se mide la producción de NADPH, por lo tanto se está analizando la actividad de
dos enzimas de la fase oxidativa de la ruta de las pentosas fosfato. Las enzimas son la glucosa
6-P deshidrogenasa y la 6-fosfogluconato deshidrogenasa
El individuo B presenta una deficiencia en la producción de NADPH por lo tanto podría tener un
deficit en la actividad glucosa-6-P deshidrogenasa o en la de 6-fosfogluconato deshidrogenasa.
Para demostrar cuál de las dos enzimas es la responsable de la deficiencia se podría utilizar el
6-fosfogluconato como sustrato y medir la producción de NADPH.
Los niveles de ATP y NADH no deberían encontrarse afectados ya que estos se producen en
otras vías metabólicas. Probablemente los niveles de NADPH en el individuo están disminuídos.
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La deficiencia de NADPH tiene un impacto en el eritrocito y su sensibilidad al estrés

oxidativo. Como se ve en la figura, el NADPH mantiene reducido al glutatión (GSH) el
cual es el dador de electrones en la reacción de la glutatión peroxidasa pero detoxificar
peróxido. Los oxidantes como el H2O2, O2- y OH. producen daño de los componentes del
glóbulo rojo llevando a su lisis. Sin NADPH, el glutatión queda en su estado oxidado
GSSG, lo cual impide la detoxificación de especies reactivas del oxigeno.
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III. Síntesis de ácidos grasos

Al finalizar el tema, el estudiante debe conocer los fundamentos teóricos referidos a:
Síntesis de ácidos grasos. Etapas de la síntesis de ácidos grasos, formación de malonil CoA
catalizada por la Acetil CoA carboxilasa y su regulación. Complejo ácido graso sintasa.
Localización subcelular de la vía, regulación y balance. Etapas de elongación e insaturación de
ácidos grasos

1) En la siguiente figura se muestra un esquema general de la ruta de la síntesis de ácidos

grasos.

a. ¿Qué metabolito es el precursor de los ácidos grasos? ¿Qué vías lo generan?

b. ¿Qué pasos se requieren para que este precursor se exporte al compartimento donde
se sintetizan los ácidos grasos?
c. ¿En qué tipos celulares ocurre la síntesis de AG?
d. ¿Qué ocurre con los AG luego de que son sintetizados?

a) El metabolito precursor para la síntesis de ácidos grasos es el Acetil CoA, el Acetil CoA
se forma en la mitocondria por oxidación del piruvato (Piruvato deshidrogenasa y por
la vía de la oxidación de ácidos grasos. Los carbonos provenientes de la glucosa son
los precursores para la síntesis de ácidos grasos
b) Ya que la síntesis de ácidos grasos ocurre en el citosol, el Acetil CoA debe transportarse
desde la mitocondria al citosol y lo hace en forma de citrato. Para ello, el acetil CoA se
condensa con el citrato y en condiciones donde el ciclo de Krebs está inhibido
(aumento del NADH y/o del ATP), el citrato se acumula en la matriz y se exporta al
citosol. Una vez en el citosol, se convierte en oxalacetato y Acetil CoA, reacción
catalizada por la citrato liasa y que requiere ATP.

c) La síntesis de ácidos grasos ocurre principalmente en el hígado (hepatocitos)

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d) Los acidos grasos sintetizados son destinados a formar triglicéridos, los cuales son
exportados principalmente como almacenamiento en el tejido adiposo.

2) Uno de los pasos importantes en la síntesis de ácidos grasos es la formación de malonil

CoA, reacción catalizada por la acetil CoA carboxilasa.

a. La reacción de formación de malonil

CoA a acetil CoA es una carboxilación
catalizada por la acetil CoA carboxilasa. Esta
reacción requiere Biotina como cofactor y la
hidrólisis de ATP
b. Los primeros dos carbonos del ácido
graso sintetizado provienen del acetil coA,
pero el resto (14 C) provienen del malonil
CoA
c. La enzima acetil CoA carboxilasa es
el paso limitante de la síntesis de ácidos
grasos y se encuentra regulada
alostéricamente y por modulación covalente.
El citrato es un modulador alostérico positivo
mientras que el palmitoil CoA (producto
final de la síntesis de ácidos grasos) la
inhibe. La fosforilación de la enzima ocurre en respuesta a la AMPK y al glucagón (los
cuales indican falta de ATP o glicemia disminuída respectivamente) y produce una
inhibición de la enzima. Por el contrario, su desfosforilación (producto de la
señalización por insulina) la activa. Por lo tanto la síntesis de ácidos grasos se realizará
en un estado metabólico con altos niveles de ATP y luego de una ingesta

3) Teniendo en cuanta el ejercicio anterior, se parte de un homogenizado de hígado de rata y se

realizan dos experimentos:
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i) A la fracción soluble del hígado se le agrega [ C]acetil-CoA (todos los carbonos son
14

isótopos radioactivos, C) resultando en la formación de ácido palmítico con todos los

14

carbonos marcados radioactivamente.

ii) Al mismo preparado de hígado se le agregan pequeñas cantidades de [ C]acetil-CoA

14

y un exceso de malonil-CoA (sin marcar), y se obtiene ácido palmítico marcado

solamente en los carbonos 15 y 16.

¿Qué puede concluir a partir de los resultados obtenidos en los experimentos?

En el caso (i) el Acetil-CoA actúa como único precursor de la síntesis de ácidos grasos, por lo
que deberán cumplirse todos los pasos de la biosíntesis.

● El primer residuo acetilo proveniente del Acetil-CoA se unirá al complejo ácido

graso sintasa (AGS).

● 7 Acetil-CoA son transformados en Malonil-CoA por la Acetil-CoA carboxilasa. El

Acetil- CoA es carboxilado en esa reacción y descarboxilado en el paso de
condensación de la AGS.

Por lo tanto, todos los carbonos del ácido palmítico sintetizado provienen del Acetil-CoA y s
contienen 14C.

En el caso (ii), al igual que en el anterior, la síntesis en la AGS implica:

● Unprimer residuo acetilo proveniente del Acetil-CoA (marcado con 14C) se unirá al
complejo ácido graso sintasa (AGS).

● 7 Malonil-CoA sin marcar aportarán residuos acetilo de 2C para la síntesis del

ácido graso.
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Por tanto, en la síntesis del ácido palmítico únicamente habrá dos carbonos marcados y, como
la dirección de la síntesis se da desde el extremo metilo (-CH3) hacia el extremo carboxilo
(-COOH), los únicos carbonos marcados serán los C16 y C15.

4) En la figura se muestran las reacciones que forman parte de la 𝛃 oxidación y la síntesis de

ácidos grasos:

a. Complete en la figura los metabolitos X e Y

b. ¿A qué tipo de reacción corresponde cada paso (numerados del 1-4) de cada una de las
vías?
c. ¿Qué molécula transporta los ácidos grasos en cada vía?
d. ¿Cuál es la importancia de la diferente localización subcelular de estas dos vías
metabólicas? ¿Cómo ocurre la regulación recíproca de ambas vías para que no ocurran
en simultáneo?

a) el metabolito X es NADPH y el Y es NADP+

b) En la B oxidacion los pasos son:

1- Oxidación, 2- hidratación, 3- oxidación y 4- tiolisis

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En la síntesis de ácidos grasos los pasos son

1- Condensación, 2- Reducción, 3 -deshidratación, 4 Reducción

c) En la beta oxidación los ácidos grasos están activados por la unión a la Coenzima A,
SH-CoA, mientras que en la síntesis de ácidos grasos son transportados por una
proteína portadora de acilos (ACP) la cual también tiene un grupo sulfhidrilo SH
d) La compartimentalización es uno de los mecanismos de regulación de ambas vías, ya
que la beta oxidación ocurre en la mitocondria y la síntesis de ácidos grasos en el
citosol. Por otro lado, el malonil CoA inhibe a la carnitina acil transferasa I (enzima que
transporta ácidos grasos a la mitocondria para su oxidación)

5. En la siguiente figura se observa la síntesis de ácidos grasos con sus principales puntos de
regulación

Explique cuáles de los mecanismos de regulación que se muestran en la figura ocurrirán en los
siguientes contextos metabólicos:

A. Un aumento de la concentración intramitocondrial de oxalacetato.

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B. Un aumento de la concentración citosólica de palmitoil-CoA.

C. Durante el ayuno prolongado
D. Un aumento en la relación AMP/ATP.

A- Ingesta rica en carbohidratos→ El aumento de Oxalacetato mitocondrial (en

conjunto con disponibilidad de acetil-CoA) puede provocar un aumento en la
síntesis de Citrato y su consecuente exportación al citosol. En tal caso, el Citrato
citosólico actúa como activador alostérico de la ACC, produciendo Malonil-CoA
para la síntesis de ácidos grasos.

B- Ingesta de una dieta rica en grasas → El Palmitoil-CoA en el citosol actúa como

inhibidor de ACC. Por ser el producto final de la ruta biosintética, el mecanismo es
denominado retroalimentación negativa.

C- Ayuno prolongado→ En el ayuno ocurrirá la fosforilación de la ACC promovida por la

acción del glucagón, por lo que la síntesis de ácidos grasos se encontrará inhibida.
En estas condiciones en el hígado se encuentra activa la beta oxidación, la
gluconeogenesis y la síntesis de cuerpos cetónicos.

D- Aumento relación AMP/ATP → Cuando la demanda energética de la célula está

insatisfecha, lo cual aumenta la concentración de AMP y disminuye la de ATP, se
activa la AMPK y se da la fosforilación de la ACC por lo que se inhibe la síntesis de
ácidos grasos.