Cuestionario de Práctica no.

8 “Aislamiento y cuantificación de
microorganismos”

1. Menciona tres métodos de aislamiento:

*Siembra por estriado en placa Petri
*Vaciado en placa
*Por picadura en tubo
*Cultivo por dilución y agitación

2. Menciona cinco métodos de recuento directo

 Determinación de peso húmedo o seco
 Determinación de nitrógeno total
 Determinación de un componente característico (peptidoglucano, ADN,
ARN, proteínas)
 Cámara de recuento de Petroff-Hauser
 Contadores electrónicos de partículas

3. Menciona tres métodos de recuento indirecto

 Medida de consumo de nutrientes o de producción de algún metabolito
 Método tubidimetricos (ópticos)
 Recuento de células viables en placa
 Recuento sobre filtros
4. Menciona tres métodos de cuenta total.
 Directos Totales: Cámara de Petroff-Hauser, Método de Breed, Contador
Colter-conter
 Indirectos totales: Turbidimetría, Nefelometría, Determinación de masa
celular (pesos seco y húmedo)

5. Menciona tres métodos de cuenta viable.

 Directos viables: Dilución y vaciado en placa, Extensión superficial, Gota de
Miles-Misra, Filtración, Asa Calibrada.
 Indirectos viables: Numero más probable, Actividad Metabólica

6. Cómo se realiza la cuantificación de hongos y bacterias filamentosas.

7. Indica qué es una colonia y qué es una unidad formadora de colonia.

 Colonia: Unidad de medida para el conteo de microorganismos. Es un
cultivo puro y tanto sus características morfológicas como las
transformaciones que produce sobre el medio de cultivo empleado tienen
valor diagnóstico.
 UFC : Unidad Formadora de Colonias, se utiliza para determinar si hay
infección, contaminación o esta dudoso el resultado del cultivo.
8. Indica por qué en el método de diluciones serias se debe reportar la placa
que contenga entre 30 y 300 UFC .
  Por precisión estadística, Evitar el efecto de Sobrecrecimiento, Estándares y
recomendaciones del laboratorio.

9. ¿Qué aplicaciones prácticas tienen los métodos de cuantificación de

microorganismos?, indica cinco.
 Control de calidad en la industria alimentaria
 Salud pública y epidemiologia
 Medicina y farmacéutica
 Biotecnología y producción industrial de enzimas y otros bioproductos
 Investigación ambiental y microbiología acuática
10. ¿Qué técnicas se emplean comúnmente para lograr el aislamiento de
bacterias y obtener cultivos puros?
 Medios de cultivo solidificantes con gelatina o agar en placas estériles de gran
superficie (placas petri)
11. Mencione 5 medios de cultivo selectivos (y/o diferenciales) así como las
bacterias generalmente aisladas en cada uno de ellos.
SELECTIVOS:
 Mac Conkey con cristal violeta que impide crecimiento de gran positivas sin
afectar a las negativas
 Thayer Martin selectivo para Neisseria gonorrhoeae, por antibióticos como
nistatina
 Caldo lactosado billis verde brillante (caldo brila) bacterias del grupo coliforme,
posee bilis que inhibe las gran positivas y la lactosa que favorece a las
coliformes.
 Medio de Lowestein Jennsen mas verde de malaquita, selecciona
Mycobacterium tuberculosis.
DIFERENCIALES:
 EMB escherichia E.Coli de las colonias de Enterobacter aerogenes
 DLA colonias coliformes de las otras bacterias
 Agar sangre diferencia Streptococcus pyogenes en Streptococcus B-
hemolitico
12. ¿Qué ventajas y desventajas encuentra entre los siguientes métodos de
aislamiento:
a) por estría cruzada
 VENTAJAS
 Simplicidad
 Economía
 Aislamiento de colonias puras
 Versatilidad
 Eficacia
 DESVENTAJAS
 Constantes practica
 Limitaciones con muestras densamente pobladas
 Riesgo de contaminación
 Tiempo de Incubación
 b) por diluciones seriadas
  VENTAJAS
 Permite conteo de microorganismos
 Versatilidad
 Cuantificación precisa
 Facilita el aislamiento de colonias
 DESVENTAJAS
 Requiere mayor tiempo y recursos
 Riesgo de error acumulativo
 Técnica y precisión
 Contaminación Potencial

13. ¿Cuál es el procedimiento que se sigue para obtener un cultivo puro a

partir de un cultivo mixto o contaminado en caldo?
 Utilizar técnica aséptica, la siembra puede ser por estría con movimientos de
zigzag o mediante diluciones seriadas para reducir la densidad de
microrganismo y facilitar el asilamiento
 Incubar las colonias y seleccionar las colonias que parezcan puras
( generalmente aquellas que están aisladas de otras colonias y tienen
morfología consistente)
 Transferir a placas nuevas por estría
 Inspección visual y pruebas adicionales para confirmar pureza y conservación
del cultivo puro

14. Describa el método de cuantificación de la gota o de Miles y Misra.

 En miles la nuestra se hará en diluciones seriadas para obtener
concentraciones decrecientes, usando pipeta estéril de depositan pequeñas
gotas de cada dilución en la superficie de un agar, incubación , conteo después
de la incubación y cálculo de UFC/mL. Puede tener potencial de desecación de
las gotas durante la incubación.

15. Describa el fundamento básico de los siguientes instrumentos útiles para

realizar una cuenta total de células en suspensión:
a. Cámara de conteo. La cámara de conteo es una placa de vidrio
grueso con una cuadricula grabada que define un volumen especifico.
Al colocar una muestra bajo el microscopio, las células pueden ser
contadas manualmente. El número total de células se calcula
multiplicando el número de células contadas por el factor de dilución y
por el inverso del volumen de la muestra observada.
b. Nefelómetro. La nefelometría mide la luz dispersada por las
partículas en suspensión, cuando un haz de luz pasa a través de una
muestra liquida las partículas presentes dispersan la luz en diferentes
direcciones, la cantidad de luz dispersada es proporcional a la
concentración de partículas.
c. Contador Coulter (Coulter Counter). El Contador de Coulter mide
el volumen de partículas al pasarlas a través de un pequeño orificio
entre dos electrodos sumergidos en una solución conductora. A medida
 que cada célula pasa por el orificio, desplaza su propio volumen de
electrolito causando una breve alteración en la resistencia eléctrica que
puede ser detectada y contada. La magnitud del pulso es proporcional
al volumen de la partícula.
16. Describa el fundamento básico de las siguientes técnicas útiles para
realizar la cuenta viable de células bacterianas en suspensión:
a. Tinción vital. La tinción vital implica el uso de colorantes que
puedan diferenciar entre células vivas y muertas basándose en la
integridad de sus membranas celulares los colorantes como el azul
de tripano penetra en las células con membranas comprometidas.
b. Filtración. Se utiliza para concentrar bacterias en volúmenes
grandes de líquido, la muestra pasa a través de un filtro que retiene
las bacterias posteriormente el filtro se coloca sobre un medio de
cultivo sólido, y se incuba.
c. Método de diluciones seriadas. Implica diluir repetidamente una
muestra en un medio liquido estéril para reducir la concentración de
bacterias a un nivel manejable. Una fracción de cada dilución se
siembra luego en placas de agar y se incuba. Solo las células viables
crecerán formando colonias que puedan ser contadas.
17. Indique como se prepara de manera general un tubo para trabajar la
escala de McFarland.
 Inocular una colonia (bacteria a estudio) en dos tubos con 5 mL de TSB e
incubar a 37C hasta que la turbidez sea visible (2-5h, fase exponencial o
logarítmica; 18h fase estacionaria)
 Ajustar la concentración de microorganismos (UFC/Ml) añadiendo solución
salina estéril hasta obtener una turbidez equivalente al estándar de 0.5 de
McFarland.

REFERENCIAS BIBLIORGRAFICAS
1.MICROBIOLOGÍA CUESTIONES BERENGUER.pdf [Internet]. Google Docs.
[citado el 26 de febrero de 2024]. Disponible en:
https://drive.google.com/file/d/1OzmsFHgcDmox58hVZIVrXbP8UI9spDEA/
view?usp=drivesdk
2.de Microbiología General I MDEL. SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DE
LOS LABORATORIOS DE DOCENCIA [Internet]. Unam.mx. [citado el 26 de
febrero de 2024]. Disponible en: https://www.zaragoza.unam.mx/wp-
content/2023/Licenciaturas/QFB/Manuales/MicrobiologiaGeneral_I.pdf