PRCTICA No.

8 AISLAMIENTO Y CUANTIFICACIN DE
MICROORGANISMOS
1. Menciona tres mtodos de aislamiento:
Directo, estras, inclusin o bao
a.
b.
2. Menciona cinco mtodos de recuento directo
Contaje en Placa Standard (Standard Plate Count).
Determinacin del nmero ms probable.
Mtodos basados en la reduccin de colorantes por viables.
Contaje microscpico directo.

3. Menciona tres mtodos de recuento indirecto

Impedancia, microcalorimetria y citometria de flujo
4. Menciona tres mtodos de cuenta total.
Nucleasa termoestable, lisado de limulus, sonda de acidos nucleicos
a.
b.
5. Menciona tres mtodos de cuenta viable.
a. Diluciones y cuenta en placa , misra

b.

c.
6. Cmo se realiza la cuantificacin de hongos y bacterias filamentosas.
Cuenta en placa
7. Indica qu es una colonia y qu es una unidad formadora de colonia.
a. Colonia: Conjunto de microorganismos visibles macroscpicamente y que
se han desarrollado a partir de un progenitor comn.
b. UFC : es un valor que indica el grado de contaminacin microbiolgica de
unambiente.

Expresa

el

nmero

relativo

de microorganismos de

un taxn determinado en un volumen de un metro cbico de agua.

8. Indica por qu en el mtodo de diluciones serias se debe reportar la placa que
contenga entre 30 y 300 UFC .
Porque en ese rango a un menor error estadistico
9. Qu aplicaciones prcticas tienen los mtodos de cuantificacin de
microorganismos?, indica cinco.
10. Qu tcnicas se emplean comnmente para lograr el aislamiento de bacterias y
obtener cultivos puros?
Mtodo de aislamiento por siembra por estra en placa: Para obtener un cultivo
axnico

11. Mencione 5 medios de cultivo selectivos (y/o diferenciales) as como las bacterias
generalmente aisladas en cada uno de ellos.
Agar Cetrimida. Agar King: Permiten el crecimiento de
Pseudomonas, inhibiendo Gram positivos y la mayora de
enterobacterias.El segundo pone adems de manifiesto la
pigmentacin fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV.
Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy
adaptado para el cultivo de anaerobios.
Agar Gardnerella:Agar con sangre humana ms una
mezcla de antibiticos que permiten la observacin de
colonias betahemolticas caractersticas de Gardnerella
vaginalis
Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de
Campylobacter intestinales creciendo a 42 C en
microaerofilia.
Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract):Se utiliza
para el aislamiento de bacterias del gnero Legionella
Lwenstein-Jensen:Este medio se utiliza para el cultivo de
Mycobacterium tuberculosis. Contiene verde malaquita
parainhibir parcialmente el crecimiento de otras bacterias.
El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento.

12. Qu ventajas y desventajas encuentra entre los siguientes mtodos de

aislamiento: a) por estra cruzada y b) por diluciones seriadas?
13. Cul es el procedimiento que se sigue para obtener un cultivo puro a partir de un
cultivo mixto o contaminado en caldo?
14. Describa el mtodo de cuantificacin de la gota o de Miles y Misra.
Miles y Misra Involucra la preparacin de diluciones seriadas de una suspensin
bacteriana. Las placas son divididas en sectores separados. Se inocula cada sector una
gota empleando una Pipeta Pasteur calibrada o bien micropipetas inoculando 0.02mL. Las
placas se incuban de 18 a 24 horas a la temperatura adecuada (37C). Se toman en
cuenta los sectores donde hay menos de 20 UFC. El nmero de bacterias viables se
obtiene calculando la media de cada dilucin en las repeticiones realizadas.
15. Describa el fundamento bsico de los siguientes instrumentos tiles para realizar
una cuenta total de clulas en suspensin:
a. Cmara de conteo.
b. Nefelmetro.
c. Contador Coulter (Coulter Counter).

16. Describa el fundamento bsico de las siguientes tcnicas tiles para realizar la
cuenta viable de clulas bacterianas en suspensin:
a. Tincin vital.
b. Filtracin.
c. Mtodo de diluciones seriadas.
17. Indique como se prepara de manera general un tubo para trabajar la escala de
McFarland.