RECOMENDACIONES:

La tinción de Ziehl-Neelsen es un método de coloración utilizado principalmente

para identificar bacterias ácido-alcohol resistente, como el Mycobacterium
tuberculosis, el agente causal de la tuberculosis. Este método se basa en la
propiedad de ciertas bacterias de retener el colorante fucsina fenicada incluso
después de ser tratadas con una solución de ácido y alcohol.

Preparación de la Muestra:

Asegúrate de que el frotis sea delgado y uniforme. Un frotis demasiado grueso

puede impedir la correcta penetración del colorante y el ácido.

Fija la muestra al calor antes de teñir para adherir las células al portaobjetos y
matar cualquier patógeno presente.

Coloración Primaria:

Aplica la fucsina fenicada sobre el frotis y calienta suavemente hasta que

aparezcan vapores, por un período de 3 a 5 minutos. Evita hervir el colorante,
ya que esto puede dañar la muestra.

Decoloración:

Usa alcohol ácido (generalmente una solución de alcohol etílico al 70% y ácido
clorhídrico) para decolorar el frotis después de la aplicación de la fucsina. Esta
etapa es crucial, ya que las bacterias ácido-alcohol resistentes retendrán el
colorante, mientras que otras células y bacterias perderán el color.

Contracoloración:

Aplica un contracolorante, como el azul de metileno o el verde de malaquita,

por 1-2 minutos. Esto teñirá las células y bacterias no ácido-resistentes,
permitiendo una distinción clara bajo el microscopio.

Lavado:

Entre cada paso, lava suavemente el portaobjetos con agua para eliminar el
exceso de colorantes sin desprender la muestra del vidrio.

Secado:
Deja secar el portaobjetos al aire después de la última lavada. Evita usar calor
o movimientos bruscos que puedan perturbar la muestra.

Examinación Microscópica:

Examina el frotis bajo el microscopio utilizando objetivos de inmersión en

aceite. Las bacterias ácido-alcohol resistentes aparecerán rojas sobre un fondo
azul o verde.

Control de Calidad:

Incluye un control positivo conocido (como una muestra que contenga

Mycobacterium) y un control negativo para asegurar la calidad y precisión de la
tinción.

Seguridad:

Utiliza equipo de protección personal adecuada, como guantes y bata de

laboratorio, y realiza el procedimiento en un área bien ventilada para minimizar
la exposición a productos químicos y patógenos.

Descarte de Residuos:

Maneja y desecha todos los reactivos y materiales usados siguiendo los

protocolos de seguridad y regulaciones locales para residuos peligrosos.

Siguiendo estas recomendaciones, podrás maximizar la eficacia de la tinción

de Ziehl-Neelsen y obtener resultados confiables para la identificación de
bacterias ácido-alcohol resistentes.