IES LOPE DE VEGA DE MADRID

DEPARTAMENTO DE CICLOS FORMATIVOS DE QUÍMICA

PRÁCTICAS DE LABORATORIO

CICLO FORMATIVO: LABORATORIO DE ANÁLISIS Y CONTROL DE CALIDAD

MÓDULO: ENSAYOS BIOTECNOLÓGICOS

APELLIDOS: Claude Camuñas

CURSO: LACC2
NOMBRE: Ainara

TÍTULO: Análisis de los aminoácidos del hidrolizado de caseína.

Nº PRACTICA: 2 Fecha de realización: 03/10/23-10/10/23 Fecha de entrega:

ÍNDICE:

Contenido
1.- Objetivo:¡Error! Marcador no definido.
2.- Fundamento Teórico:¡Error! Marcador no definido.
3.- Materiales, equipos y reactivos:¡Error! Marcador no definido.
4.-Procedimiento:¡Error! Marcador no definido.
5.- Cálculos previos:¡Error! Marcador no definido.
6.-Resultados experimentales:¡Error! Marcador no definido.
7.- Resultados finales:¡Error! Marcador no definido.
8.- Conclusiones:¡Error! Marcador no definido.

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1.-OBJETIVOS
-Aprender a llevar a cabo la técnica cromatográfica de capa fina.

-Identificar los aminoácidos mayoritarios en la caseína de la leche.

2.-FUNDAMENTO TEÓRICO
Esta práctica utiliza un sistema cromatográfico de capa fina para el análisis de los aminoácidos
mayoritarios de una proteína, la caseína.

La cromatografía es un método físico de separación en el que los componentes que se han de

separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales está en reposo (fase estacionaria, F.E.)
mientras que la otra (fase móvil, F.M.) se mueve en una dirección definida.

La técnica se basa en la distinta hidrofobicidad de los aminoácidos, los cuales les hace ser
arrastrados o retenidos en mayor o menor grado por un disolvente orgánico (fase móvil). El
análisis de aminoácidos mediante esta técnica es un método de diagnóstico adecuado para
analizar algunas enfermedades genéticas en las que existen fallos metabólicos en alguna de las
rutas biosintéticas de aminoácidos.

La ninhidrina es un agente oxidante poderoso que reacciona con los a-aminoácidos entre
valores de pH 4-8, originando un compuesto de color púrpura. Los aminoácidos también dan la
reacción originando un color amarillo. La elevada sensibilidad de la reacción la convierte en un
método útil para la detección de aminoácidos por cromatografía.

3.-MATERIALES,EQUIPOS Y REACTIVOS
Cubetas cromatográficas.

Placas de placa fina de silicagel, se cortan a medida.

1 micropipeta pequeña.

Agua destilada, acetona, ácido acético, propanol.

Disolvente cromatográfico: n-butanol: acético : agua(60:15:25).

Reactivo ninhidrina.(200mg/100ml de acetona)

Disoluciones patrón de aa: arginina, lisina, serina, Valina, y Glutámico. Concentración 0,01M en
(10% isopropanol/agua).

Muestra de hidrolizado de caseína 4mg/ml en isopropanol agua.

Estufa (150 ºC) y cápsula de porcelana.

Secador.

Cristalizador.

Guantes de seguridad.

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4.-PROCEDIMIENTO

1. Preparar las disoluciones de aa en matraces de 50ml, según los gramos a pesar calculados
de cada uno de ellos. Preparar también la muestra problema.

2. Preparar el disolvente cromatográfico y verterlo en la cubeta para que se sature.

3. Preparar la placa cromatográfica ( cada placa sirve para 4 cromatografías ).

4. Se marca una línea con lápiz muy fino a 1,5 cm del borde inferior de la placa, y se marcan
6 puntos en la línea de forma que estén equidistantes unos de otros, dejando el mismo
margen en los extremos de la placa.

5. Se pipetea unos 10ml , y se pincha colocando la punta de la micropipeta sobre el punto

marcado, dejando caer aproximadamente 1ml cada vez. Detrás de cada pinchazo se seca con
el secador de mano.

6. Una vez puestas todas las muestras se introduce

en la cubeta teniendo cuidado de que al soltar la
placa, el disolvente no sobrepase la línea del
pinchazo.

7. Terminado el desarrollo se saca la placa y se

seca al aire hasta eliminación total de disolvente. Se
tiñe la placa por inmersión en el líquido de tinción
durante 1 minuto y se seca en una estufa a 120ºC
hasta aparición de color.

8. Se mide la distancia recorrida por el frente y por

los aa.

5.-CÁLCULOS PREVIOS

·Preparación de los diferentes aminoácidos:

-Lisina: 0,01M · 0,05l · 146,19g/mol=m  m=0,0731g  pesados= 0,0726g.

-Serina: 0,01M · 0,05l · 150 g/mol=m  m=0,0530g  pesados= 0,0538g.

-Valina: 0,01M · 0,05l · 117,15g/mol ·100/98=m  m=0,05977g  pesados= 0,0607g.

-Glutámico: 0,01M · 0,05l · 147,13g/mol ·100/99,5=m  m=0,0740g  pesados= 0,0743g.

·Preparación de la muestra hidrolizado de caseína:

4mg/l · 50ml = 200mg · 10-3 g= 0,2g hidrolizado de caseína pesados – 5ml de propanol.

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6.-RESULTADOS EXPERIMENTALES

Lisina-0,9cm.

Serina-1,6cm.

Muestra(de más arriba a más abajo: 3,5cm; 3cm; 2cm; 1,7cm; 1cm).

Valina-3cm.

Glutámico-2cm.

7.-RESULTADOS FINALES

6cm

1,5cm

·Lisina: 0,9/6=0,15cm15mm

·Serina: 1,6/6=0,26cm26mm

·Valina:3/6=0,5cm5mm

·Glutámico: 2/6=0,3cm3mm

·Caseína: 3,5/6=0,58cm58mm

Los aminoácidos más polares, aquellos que se han desplazado menos, son la Lisina y la serina.

Los aminoácidos menos polares , aquellos que más se han desplazado, son la Valina y el
glutámico.

8.-CONCLUSIONES
Todos los aminoácidos que se emplearon están presentes en nuestra muestra de caseína;
obteniendo que la lisina y la valina son más polares; y que la valina y el glutámico los menos
polares.

9.-OBSERVACIONES
No hay observaciones.