Facultad de Bioanálisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de
laboratorio

UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE BIOANÁLISIS BOCA DEL RÍO – VERACRUZ

QUÍMICA CLÍNICA

BIOQUÍMICA METABÓLICA 36943

REPORTE DE PRÁCTICA N° 2

ROCIO BONIFACIO FELICIANO

Bioquímica Metabólica 1
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PRACTICA 1.
Determinación cuantitativa de glucosa post-prandial.

1.- INTRODUCCIÓN
La medición de la concentración de glucosa en suero o plasma se utiliza
principalmente en el diagnóstico y vigilancia del tratamiento de diabetes mellitus.
Otras aplicaciones son la detección de hipoglicemia neonatal, la exclusión del
carcinoma celular de los islotes pancreáticos, así como la evaluación del
metabolismo de los carbohidratos en varias enfermedades.

2.-OBJETIVOS
2.1. El alumno realizara la determinación de glucosa post-prandial en suero
por método enzimático colorimétrico para constatar la presencia de
este metabolito en ayuno y 2 horas después de ingerir alimento.

3.- PRINCIPIO Y METODOLOGÍA DE LA DETERMINACIÓN

La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico. El
peróxido de hidrógeno (H2O2) producido se detecta mediante un aceptor
cromogénico de oxígeno, fenol, 4-aminofenazona (4-AF), en presencia de la
peroxidasa (POD):

Β-Glucosa + O2 + H2O GOD Ácido glucónico + H2O

H2O + Fenol + 4-AF POD Quinona + H2O

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa

presente en la muestra en ensayada.

4.- LISTA DE REQUERIMIENTOS

4.1 REACTIVOS
NUM. NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD
1 Reactivo para glucosa oxidasa 3 ml.
2 Estándar de glucosa 100mg/dl 10µl

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4.2 MATERIAL

NUM. NOMBRE DEL MATERIAL CANTIDAD

1 Tubos de ensaye de 12 x 75mm 3
2 Celda para espectrofotómetro 3
3 Guantes 2
4 Papel higiénico El necesario
5 Pipeta automática de 1000µl 1
6 Pipeta automática de 10µl 1
7 Puntas para pipeta 3

4.3.- EQUIPO

NUM. NOMBRE DEL EQUIPO

1 Baño maría a 37ºC
2 Espectrofotómetro

4.4. - MUESTRA BIOLÓGICA.

Suero

5.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

5.1. Desarrollo de la técnica

5.1.1. Rotula tres tubos de ensaye de 12 x 75 mm de la siguiente manera:
Blanco, Patrón y Muestra.
5.1.2. En cada tubo agregar lo siguiente:

Blanco Patrón Muestra

Reactivo (ml) 1 1 1
Patrón (µl) ----- 10 -----
Muestra (µl) ----- ----- 10

5.1.3. Mezclar e incubar 10 minutos a 37ºC en baño maría.

5.1.4. Ajustar el espectrofotómetro a 505nm.
5.1.5. Vaciar el contenido de cada tubo en una celda limpia y seca.
5.1.6. Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente a Blanco de reactivo.
El color es estable como mínimo durante 30 minutos.

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5.2.- REPORTE DE RESULTADOS

5.2.1. Cálculo de resultados.

(A) Muestra/(A) Patrón x 100(Concentración del patrón) =mg/dL de glucosa
en la muestra.

Ayuno: 0.320 x 100 = 87 mg/dl

0.368

Post prandial: 0.318 x 100 = 86 mg/dl

0.368

5.2.2. Reporte de resultados.

Valores de referencia en ayuno

60- 110 mg/dl

Valores de referencia post prandial

sin diabetes: < 140 mg/dl

Ayuno: 87 mg/ dl
Post prandial: 86 mg/dl

El paciente se encuentra entre el rango de referencia de los valores normales de

glucosa en sangre en ayuno y post prandial. Se determino que el paciente no
presenta hiperglucemia.

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El resultado se expresa en mg/dL, y el tipo de muestra procesada así como los
valores de referencia del equipo de glucosa utilizado.

6.- CONFIABILIDAD ANALÍTICA.

Mantener calibradas las pipetas automáticas, así como pipetear correctamente los
reactivos y la muestra problema.

7.- GARANTIA DE CALIDAD (CONTROL DE CALIDAD)

Evitar la utilización de reactivos caducados.

Calibrar correctamente el espectrofotómetro.
Verificar que la temperatura del baño maría sea la correcta.

8.- PRACTICABILIDAD

8.1. El analista debe ser un alumno de Química Clínica supervisado por el docente o
el técnico académico o bien un Químico Clínico, Químico Fármaco biólogo ó
Quimicobiólogo Parasitólogo con entrenamiento supervisado.

9.- BIBLIOGRAFÍA

9.1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1ª e. Frankfurt: TH-Books

Verlagsgesellschaft; 1998. 131-137.

9.2. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic samples. 1 ed. Darmstadt:
GIT Verlag; 2001; 30-31.

9.3. Sacks DB, Bruns DE, Goldstein DE, Mac Laren NK. Guidelines and
recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of
diabetes mellitus. Clin Chem 2002; 48: 436-472.

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