IES LOPE DE VEGA DE MADRID

DEPARTAMENTO DE CICLOS FORMATIVOS DE QUÍMICA

PRÁCTICAS DE LABORATORIO

CICLO FORMATIVO: LABORATORIO DE ANÁLISIS Y CONTROL DE CALIDAD

MÓDULO: ENSAYOS BIOTECNOLÓGICOS

APELLIDOS: Claude Camuñas

CURSO: LACC2
NOMBRE: Ainara

TÍTULO: Determinación del punto isoélectrico.

Nº PRACTICA: 1 Fecha de realización: Fecha de entrega:

ÍNDICE:

Contenido
1.- Objetivo:¡Error! Marcador no definido.
2.- Fundamento Teorico:¡Error! Marcador no definido.
3.- Materiales, equipos y reactivos:¡Error! Marcador no definido.
4.-Procedimiento:¡Error! Marcador no definido.
5.- Cálculos previos:¡Error! Marcador no definido.
6.-Resultados experimentales:¡Error! Marcador no definido.
7.- Resultados finales:¡Error! Marcador no definido.
8.- Conclusiones:¡Error! Marcador no definido.
9.- Observaciones:¡Error! Marcador no definido.

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1.-OBJETIVO
2.-FUNDAMENTO TEÓRICO
La caseína resulta ser la principal proteína de la leche,
donde se encuentra a una concentración aproximada de 28 g/l. Es una mezcla heterogénea de
proteínas que contienen fósforo y que existe en cuatro formas:
alfa, beta, gamma y kappa, cada una de ellas con diferente composición. Como muchas otras
proteínas derivadas de fuentes animales, contiene todos los aminoácidos esenciales
requeridos para un crecimiento y desarrollo normal.

3.-MATERIALES,EQUIPOS Y REACTIVOS
Disolución de Acido acético al 10%.
Leche desnatada, 10 ml.
Vaso precipitados 100 ml
Pipeta Pasteur
Espátula.
Papel indicador de pH.
Centrífuga de mesa.
2 tubos cónicos de 15 ml con tapón.
Estufa.
Placa de petri con papel de filtro
Placa calefactora.

4.-PROCEDIMIENTO
PARTE A. AISLAMIENTO DE CASEÍNA DE LECHE
a) Caliente en un vaso de precipitado 75 ml de agua destilada a 38ºC, añada 25 ml de leche
y luego gota a gota y con agitación, adicione ácido acético 10% hasta que observe que se
forma un precipitado (la leche se corta). pH inferior a 5.

b) Prepare un filtro de pliegues y péselo junto a una cápsula de porcelana.

c) Deje sedimentar el precipitado, y filtre sobre papel de filtro usando un embudo de cristal.

d) Retire unos 10ml del filtrado y guárdalo en un tubo cónico con tapón para su posterior
uso en otras prácticas.

e) Lave el precipitado con 10 ml de etanol del 96% en el mismo filtro.

f) Seque el precipitado colocando varios pliegues de papel de filtro.

g) Coloque el precipitado en la cápsula pequeña previamente pesada, vuelva a pesar la

cápsula con el precipitado y, en el caso de que haya grasa adicione 5ml/g de éter etílico.

h) Filtre nuevamente.

i) Deseche el líquido quedando un precipitado blanco de fácil manipulación que es la

caseína.

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B. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE CASEÍNA:
- Coloque aproximadamente 250 mg de caseína
en un vaso de 50ml.

- Agregue 30ml de agua destilada y 5 ml de NaOH 1N; agite hasta lograr una solución total de
la caseína.

- Una vez disuelta la caseína, adicione 4 ml de ácido acético 1N y continúe hasta pH=10 y luego
acético 0,01N hasta pH=8,9, vierte en un matraz aforado de 50 ml, mezcle bien y diluya con
agua destilada hasta 50ml.

- La solución debe ser clara y limpia y si no es así, debe volver a filtrar.

C. DETERMINACIÓN DEL PI DE LA CASEÍNA:

En diez vasos de 25 ml limpios y secos adicione exactamente los volúmenes de los reactivos
según la siguiente tabla:

TABLA DE DISOLUCIONES

"Aquí debe ir la tabla con los mL a añadir de cada reactivo en los 10 vasos"

- Medir experimentalmente el pH de todos los

vasos, que debe cubrir un rango aproximado semejante al teórico (3 a 6,5). Anotar los valores
reales en la Tabla, que
deben ser semejantes a los expresados y en todo caso crecientes.

- Añadir 1 ml de disolución de caseína a cada tubo.

- Agitar suavemente cada uno y esperar aproximadamente 3 minutos.

- Medir la absorbancia de cada muestra a 640 nm con las cubetas de colorimetría de 1 cm de

paso óptico, teniendo la precaución de
agitar bien el contenido de cada tubo para obtener una solución/suspensión homogénea antes
de verter una porción en la cubeta.

- Anotar resultados, representar la absorbancia frente al pH, y determinar el pI aproximado de

la caseína, que corresponderá al pH cuya absorbancia sea máxima.

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5.-CÁLCULOS PREVIOS
6.-RESULTADOS EXPERIMENTALES
7.-RESULTADOS FINALES
8.-CONCLUSIONES
9.-OBSERVACIONES