CONCEPTO: ¿De qué depende la velocidad de una reacción?

El sustrato se une a la enzima formando el complejo ES
que luego se descompone en enzima y producto.
• Unión de enzima a sustrato: proceso
bimolecular de orden dos.
• Transformación del complejo ES en producto:
proceso unimolecular de orden uno
• Se adiciona sustrato y enzima a una solución
amortiguadora y se mide la desaparición de sustrato o
la aparición de producto.
• pH y temperatura constantes, amortiguador.
• Se puede seguir una propiedad física que varíe en forma
proporcional a la concentración.
• Existen métodos continuos o discontinuos (de
muestreo)
Se determina la velocidad inicial, v₀

VELOCIDAD INICIAL

Es importante determinar V0 porque evita que la enzima

se inactive, que se consuma el sustrato, que cambie el
grado de saturación de la enzima, que ocurra la reacción
reversa, que haya inhibición por producto.

• Cuando se está en velocidad inicial, las gráficas

de concentración de producto en función del
tiempo son lineales.
• En general, cuando se está en velocidad inicial,
¿Por qué la línea se curva?
reaccionó menos de 10 % del sustrato.
Porque al principio estoy en las mejores condiciones que puedo
estar y a medida que pasa el tiempo voy consumiendo el
sustrato. La VELOCIDAD VA A DEPENDER DE LA
CONCENTRACION DE SUSTRATO, entonces, la enzima está
consumiendo el sustrato para transformarlo en P, por lo que la
velocidad baja.

VELOCIDAD MAXIMA (Vmax)

• La velocidad inicial varía en forma lineal con la
concentración de enzima.
• La velocidad inicial depende hiperbólicamente
de la concentración de sustrato.
CUANTO MAS ENZIMA PONGA MAS RÁPIDO VA A
ACELERAR EL PROCESO. SIEMPRE QUE AGREGUE MAS
ENZIMA VOY A TENER MAS DISPONIBILIDAD DE SITIOS
ACTIVOS PARA QUE SE UNA EL SUSTRATO Y SE DE LA
REACCIÓN.
La velocidad va a aumentar hasta cierto punto. Va a llegar un
momento que sí pongo mucho sustrato todos los sitios activos
de la enzima van a estar con sustrato y no van a poder unir más
sustrato, no importa cuánto más de sustrato le agregue, la
enzima va a estar saturada, todos sus sitios activos van a estar
ocupados con sustrato unido formando producto. ESO SE
LLAMA VELOCIDAD MÁXIMA.
 MICHAELIS Y MENTEN (Hipótesis del equilibrio)
La reacción más lenta limita la velocidad de la reacción
global, que a su vez es proporcional a [ES].
ES tiene dos caminos:
→ que forme producto y libere la enzima.
→ que libere el sustrato y quede la enzima y el
sustrato libre.
• La enzima se combina en primer lugar con el sustrato,
de forma reversible, estableciendo un equilibrio.
• El complejo se descompone en una reacción más lenta,
dando lugar al producto y enzima libre.
¿Qué significan KM?
→ KM = [S] cuando v = ½ Vmáx
→ Si k2 << k-1, KM = KS
→ Ks representa la afinidad entre la enzima y el
sustrato, pues es la constante de equilibrio de
disociación.
→ KM representa una constante aparente de
disociación, pues cuanto más pequeño sea KM,
hay menos enzima libre y más complejo enzima-
sustrato.
KS: CONSTANTE DE DISOCIACIÓN
La reacción más lenta va a limitar la velocidad de la reacción
Cuanto producto aparece en el tiempo, depende del paso
más lento.
KM: constante de Michaelis y Menten: Es la concentración
de sustrato cuando la velocidad inicial (v0) es un medio de
Vmax.
KCAT: es la constante cinética del paso más lento, es lo mismo
que decir K2.
ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN
¿Qué significan Kcat?
→ Vmáx = kcat [E]T entonces kcat = Vmáx / [E]T
→ En un mecanismo simple, kcat = k2 y representa el
proceso de primer orden de transformación de ES en
P
→ En un mecanismo complejo, representa el límite
inferior de las constantes de velocidad de la
transformación de ES en P
→ Es el número de recambio (turnover number), máximo
número de moléculas de S que se transforman en P
por unidad de tiempo y por sitio activo