AÑO DEL DIÁLOGO Y LA RECONCILIACIÓN NACIONAL”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE OBSTETRICIA

 ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA

 DOCENTE: JOHN VÍCTOR LÓPEZ ORBEGOSO

 ALUMNA: CHÁVEZ DOMÍNGUEZ, SANDRA YANINA

 GRUPO: A2

 HORARIO: JUEVES 7- 10

 CICLO: CUARTO

SETIEMBRE DEL 2018

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PRACTICA N°3

I. TÍTULO: “MEDIOS DE CULTIVO, ESTERILIZACIÓN Y PREPARACIÓN”

II. INTRODUCCIÓN:

III. OBJETIVOS:
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IV. PROFESIONAL DE OBSTETRICIA
DESARROLLO DEL TEMA:

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de

microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar
sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y
multiplicarse para dar colonias.

Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones
extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad de
nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes para su desarrollo están el
carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno. Muchas bacterias sin
embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento específicos en forma de suero,
sangre y extracto de levadura entre otros.

 EVOLUCIÓN:

La primera noticia de la utilización de medios de cultivo llega del micólogo Brefeld, que
consiguió aislar y cultivar esporas de hongos en medios sólidos realizados a base de gelatina.
Este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamaño) y no fue hasta el año
1878 cuando Lister popularizó un método enfocado al cultivo puro basado en diluciones
seriadas en un medio líquido.

Koch realizó sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como
soporte nutritivo sólido, pero no tardó en recurrir al caldo de carne líquido, diseñado por
Loeffler, al que, en 1881, añadió gelatina, logrando un medio sólido transparente ideal para la
observación de la morfología macroscópica de las colonias microbianas.

En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en relación con los
medios de cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el agar-agar (polisacárido
extraído de algas rojas) como solidificante.

En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se
llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clásicas bandejas de vidrio cubiertas
con campanas que se usaban hasta entonces.

Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las bacterias
quimioautótrofas (utilización de nitrógeno y azufre sobre todo) tuvieron gran importancia en
el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento.
Diseñaron este tipo de medios de tal forma que su especial composición química favorecía el
crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en función de sus procesos metabólicos,
eran los únicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes del medio.
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En 1892 Würtz impulsó el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores de pH a la
composición de ciertos medios con lo cual se podía observar la producción de ácidos en la
fermentación en ciertos microorganismos.

 CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

I. Según su origen:

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o

vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se
conoce exactamente.

b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cuali y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.

c) SEMISINTÉTICOS: son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento
bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de
levadura.

II. Según su consistencia:

a) LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.

b) SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de

15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono) que se
extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye
ningún elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado puede ser
vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y
diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran posibles en medio líquido".

c) SEMISÓLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la

motilidad de las especies en estudio.

III. Según su composición: A causa de los requerimientos químicos del mundo

microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar componentes químicos del
medio.

a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los

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microorganismos poco existentes. Es el medio más frecuentemente utilizado para
mantener colonias microbianas. Por ejemplo: agar común o caldo común.

b) ENRIQUECIDOS: están compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al

cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos,
por ejemplo: sangre, suero, líquido ascítico, etc. Se utiliza para microorganismos que
tienen grandes exigencias nutricionales.

c) SELECTIVOS: son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las

condiciones físicas del medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos
específicos con el fin de inhibir el crecimiento de especies químicas cuyo crecimiento
no interesa. Este tipo de medio sólo permite el crecimiento de un grupo de
microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar
microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por ejemplo, Agar salado-manitol o
Chapman (permite el crecimiento de ciertos estafilococos).

IV. Según su formulación:

a) QUÍMICAMENTE DEFINIDOS: se conoce la cantidad exacta de cada uno de los

compuestos que hay en el medio.

b) COMPLEJOS: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura,

sangre, etc.); no se conoce exactamente cuál es la composición del medio; sin
embargo, presenta la ventaja de que ya están presentes todos o casi todos los
elementos que una célula puede requerir.

V. Según su uso:

a) MEDIO GENERAL: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto

los que necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).

b) MEDIO SELECTIVO: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo

determinado (hongos, bacterias entéricas, protozoos...).
c) MEDIO DIFERENCIAL: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo
medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo, su respiración, etc. (por
ejemplo, medio de McConkey).

d) MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el

crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha
de diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio.
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e) MEDIO MÍNIMO: contiene la mínima cantidad de nutrientes posible que permite el

crecimiento de una especie.

f) MEDIO DE TRANSPORTE: preparado para servir como almacenamiento temporal a

especímenes transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y su
concentración simple.

 INGREDIENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

 Agua y derivados
 Bases nutritivas
 Peptonas, hidrolizados y digeridos
 Extractos, infusiones y dializados
 Carbohidratos
 Azúcares
 Almidones
 Sales Minerales
 Macroelementos (fósforo, azufre, sodio, cloro, hierro y otros) •Microelementos (zinc,
cobre y otros)
 Colorantes e indicadores
 Factores de crecimiento
 Vitaminas
 Proteínas
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 CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado

por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por
completo al propio medio.

1- Disponibilidad De Nutrientes Adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,

como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos
serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es

utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno
y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar
directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y
otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona.

2- Consistencia Adecuada Del Medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo

productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado
semisólido o sólido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente
de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas
inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de
licuarla.

Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad,
pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está ampliamente
extendido en el laboratorio.

3- Presencia (O Ausencia) De Oxígeno Y Otros Gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno
normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una
atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias
(tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
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4- Condiciones Adecuadas De Humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas
de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la
humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el
medio.

5- Luz Ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en

presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.

6- pH

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar
que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos
normales.

7- Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y

43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos
crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los
saprofítos tienen rangos más amplios.

8- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos medios.
El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es la autoclave (que utiliza vapor
de agua a presión como agente esterilizante)
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 ESTERILIZACIÓN

Se denomina esterilización al proceso por el cual se obtiene un producto libre de

microorganismos viables. El proceso de esterilización debe ser diseñado, validado y
llevado a cabo para asegurar que es capaz de eliminar la carga microbiana del
producto o un microorganismo más resistente.

Los agentes que matan microbios son denominados microbicidas (cida= “matar”) o
más comúnmente denominados “germicidas”. Si el agente específicamente destruye
bacterias, es llamado bactericida; si mata hongos es denominado fungicida. Tras una
exposición del objeto esterilizado al aire o a sus alrededores, éste se habrá
contaminado de nuevo con microorganismos.

Los métodos térmicos de esterilización son comúnmente los más utilizados para
eliminar los microorganismos, incluyendo las formas más resistentes como lo son las
endoesporas.

a) Métodos químicos: Los métodos químicos de esterilización son aquellos que

involucran el empleo de sustancias letales para los microorganismos, tales como el
óxido de etileno y el peróxido de hidrógeno. El uso de este método es muy
limitado para la Industria Alimentaria pero muy utilizado en otras industrias como
la farmacéutica.

b) Métodos físicos: Los métodos físicos son aquellos que no involucran el empleo de
sustancias letales para los microorganismos, sino procedimientos físicos como la
radiación ionizante, el calor o la filtración de soluciones con membranas que
impiden el paso de microorganismos, incluyendo virus. El método más usado en
esta categoría es el calor que mata microorganismos por la desnaturalización de
las enzimas; el cambio resultante en la forma tridimensional de las proteínas las
inactiva.

c) Métodos térmicos: Los métodos térmicos suelen englobar todos los

procedimientos que tienen entre sus fines la destrucción de los microorganismos
por el calor. Los métodos son tanto la pasteurización como la esterilización, cuya
finalidad principal es la destrucción microbiana, como al escaldado y a la cocción,
procesos en los que también se consigue una cierta reducción de la flora
microbiana, pero que sus objetivos principales son la variación de las propiedades
físicas.
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 Calor húmedo: Las condiciones de temperatura y presión de un proceso de

esterilización por vapor de agua en un autoclave van de 121 °C a 134 °C y 275-
350 kPa. Para el tratamiento de residuos hospitalarios se emplean tiempos de
operación entre 20 y 30 minutos. El método de esterilización por autoclave
utiliza pruebas microbiológicas, las cuales se ingresan dentro del ciclo de
operación y posteriormente por medio de una incubadora se busca detectar si
hay crecimiento de microorganismos.

 Calor seco: Las temperaturas de esterilización van desde 121 °C a 180 °C,
teniendo en cuenta los tiempos de esterilización para cada caso.
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REFERENCIAS:
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DE LA SALUD ESCUELA ACADÉMICO
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 Anónimo. (Desconocido). Medio de cultivo (Microbiología). 2018, de EcuRed

Sitio web: https://www.ecured.cu/Medio_de_cultivo_(Microbiolog
%C3%ADa)

 Anónimo. (2011). Medio de cultivo. 2018, de Wikipedia Sitio web:

https://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivo

 López Tévez, Leonor - Torres, Carola . (2006). Trabajo Práctico Nº 4 Medios

de Cultivo. Desconocido, de Universidad Nacional del Nordeste Sitio web:
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf

 Sitio web : http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm


http://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf