INGENIERÍA BIOQUÍMICA

TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO EN CELAYA

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE CELAYA

D.C. SILVA MARTÍNEZ GUILLERMO ANTONIO
FECHA: VIERNES 31 DE MARZO DEL 2023

UNIDAD II: MÉTODOS Y TÉCNICAS DE CULTIVO MICROBIANO

PRÁCTICA 5 “TINCIÓN DE GRAM”

MICROBIOLOGÍA “A”
Pacheco Ramírez Carlos Emmanuel 20030600
Ramírez Juárez Alin 20030916
Sánchez Balderas María Teresa 20030665
Sánchez Jiménez Montserrat 20030189

Semestre enero 2023 - junio 2023

Microbiología general 14 de marzo de 2023

TINCIÓN DE GRAM
Ramírez Juárez, A., Pacheco Ramírez, C., Sánchez Balderas, M. y Sánchez Jiménez M.

RESUMEN

La tinción de Gram es una técnica de tinción diferencial que permite clasificar a las bacterias en dos grupos:
Gram-positivas (tiñen de color azul violeta) y Gram-negativas (tiñen de color rojo-rosa), en función del grado
de permeabilidad de la pared celular de las bacterias, las Gram-positivas contienen una capa gruesa de
peptidoglucano mientras que las otras contienen una delgada capa de peptidoglucano, esta característica
influye al momento de retener el colorante y facilita la clasificación una vez que se observa en el microscopio.

1. COMPETENCIA su agrupación, la presencia de esporos y la

Que el alumno utilice las técnicas de tinción simple y
tinción de Gram para diferenciar bacterias.
2. MARCO TEÓRICO
La tinción es una técnica auxiliar utilizada en
microscopía para mejorar el contraste en la imagen
vista al microscopio. Los diferentes colorantes
pueden ser utilizados para aumentar la definición y
examinar grandes cortes de tejido, poblaciones
celulares o incluso para resaltar organelos dentro de
células individuales. (Sánchez, 2015)
La tinción de este tipo más utilizada es la tinción de
Gram, denominada así por el bacteriólogo danés
Hans Christian Gram, quien la desarrollo. Sobre la
base de si reacción a la tinción de Gram, las
bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram-
positivas y Gram-negativas. Debido a su importancia
en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias
fundamentales de la pared celular de las distintas
bacterias. (Carbajal, 2017)
La tinción de Gram es un método que no tiñe
igualmente todas las células, es un proceso
denominado tinción diferencial. Es una prueba de
laboratorio útil para detectar la presencia de
microorganismos, especialmente bacterias y
algunas veces hongos, en una muestra obtenida del
foco infeccioso o sospechoso de serlo. Proporciona
resultados con rapidez y facilidad acerca de la
presencia de bacterias u hongos, y de ser así, del
tipo. (SEQC, 2022)
Existen distintos tipos de tinción:
Tinción simple: este tipo de tinciones nos permiten
observar la existencia de bacterias, su morfología,
existencia de otros tipos celulares.
Diferenciales: cumple la función de la tinción simple
y, además, permite la diferenciación de las bacterias
porque usan diferentes colorantes que se comportan
distinto según el microorganismo en cuestión. La
coloración de Gram es la más usada en
bacteriología. Son diferenciales, ya que se dividen
en Gram-positivas y Gram-negativas. Las primeras
se tiñen de color azul violeta y las segundas
adquieren un color rosado o rojo.
Especiales o Negativas: se usan para objetivar
distintas estructuras como la cápsula, el núcleo, los
flagelos, los esporos, etc. (Sánchez, 2015)
Las células fijadas al calor sobre un portaobjetos se
tiñen primero con una solución de cristal violeta y
son lavadas después para quitar el exceso de
colorante. En este estado todas las células están
teñidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces
con una solución yodo. El yodo entra en las células
y forma un complejo insoluble en agua con el cristal
violeta. De nuevo, todas las células se encuentran
en la misma situación. Se lleva a cabo después de
la coloración con alcohol. Algunos organismos no se
decoloran (Gram-positivos) mientras que otros
(Gram-negativos) lo hacen. La diferencia esencial
entre esos dos tipos de células está, por lo tanto, en
la resistencia a la decoloración. Después de la
decoloración las células Gram-positivas son todavía
más azules mientras que las Gram-negativas son
Incoloras. Para poner de manifiesto las células
Gram-negativas se usa un colorante rojo, como la
safranina o la fucsina básica. El proceso de
decoloración debe ser corto y es esencial un cálculo
preciso del tiempo para obtener resultados
satisfactorios. (Carbajal, 2017)

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3. MATERIALES Y MÉTODOS

Para llevar a cabo esta tinción se realizó un frotis a

partir del cultivo que se obtuvo en el medio sólido de
la práctica anterior, para esto, con ayuda de un asa
estéril se distribuyó homogéneamente una colonia
de la muestra en un portaobjetos limpio para
después fijarlo con ayuda del mechero (haciéndolo
pasar de manera rápida 2 veces), una vez que
estuvo seco se cubrió el frotis con colorante cristal
violeta por 1 minuto, se escurrió el colorante y se
lavó con agua destilada. Después, se cubrió con el
mordente Lugol por 1 minuto y se realizó el mismo
procedimiento, se puso a decolorar con alcohol-
acetona de 5 a 15 segundos para volver a escurrir y
lavar con agua y por último se cubrió con colorante
de contraste: safranina y se dejó actuar por 30
segundos, se escurrió y lavó con agua. Una vez que
se secó se observó con el microscopio.
Figura 3. Diagrama de flujo de la alumna Sánchez
Balderas María Teresa.

Figura 1. Diagrama de flujo de la alumna Ramírez Juárez Alin.

Figura 4. Diagrama de flujo de la alumna Sánchez Jiménez

Montserrat.

4. RESULTADOS

Debido al tiempo únicamente se pudo realizar la

tinción de Gram a cuatro de los cultivos generados
en practicas anteriores, a partir de estos se
obtuvieron los siguientes resultados:

Figura 2. Diagrama de flujo del alumno Pacheco

Ramírez Carlos Emmanuel. 2
Microbiología general
→ En Agar sangre inoculado con caldo
tioglicolato se observaron estafilococos con
una coloración azul-violeta indicando
bacterias Gram-positivas.
Figura 5. Estafilocos Gram(+)
→ En Agar Eosina Azul de metileno inoculado
con caldo nutritivo se observaron bacilos
con una coloración rojo-rosa indicando
bacterias Gram-negativas.
Figura 6. Bacilos Gram(-)
→ En Agar sangre inoculado con caldo nutritivo
se observaron cocos con una coloración
azul-violeta indicando bacterias Gram-
positivas.
Figura 7. Cocos Gram(+)
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Figura 8. Estreptococos Gram(+)
→ En Agar nutritivo inoculado con caldo
nutritivo se observaron estreptococos con
una coloración azul-violeta indicando
bacterias Gram-positivas.
5. DISCUSIÓN
El resultado obtenido en la práctica fue satisfactorio,
ya que solamente se obtuvo bacterias Gram-
negativas en el agar Eosina Azul de metileno, esto
se debe a que es un medio específicamente utilizado
para el aislamiento de bacilos Gram-negativos de
rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.
Este permite el desarrollo de todas las especies de
la familia Enterobacteriaceae.
Por otro lado, en el agar sangre y nutritivo hubo
presencia de bacterias Gram-positivas, en ambos
agares se pueden obtener bacterias Gram-positivas
y negativas. El agar nutritivo es un medio no
selectivo diferencial, mientras que el agar sangre
proporciona el crecimiento a partir de una bade rica
y complementada, ofreciendo óptimas condiciones
de desarrollo para microorganismos no fastidiosos.
El resultado obtenido en agar sangre de
estafilococos Gram-positivos sigue fomentando
nuestra teoría de la existencia de Staphylococcus
aureus ya que este género crece comúnmente en
medios no selectivos como agar sangre, son cocos
Gram-positivos presentados en pares, cadenas o en
este caso, racimos. Se espera que durante las
futuras prácticas podamos seguir reuniendo
información para su correcta identificación.
Microbiología general
6. CONCLUSIÓN
Con la tinción de Gram se pudieron identificar
bacilos Gram-negativos en agar EMB, lo cual indica
que en la muestra de la mesa exterior de la cafetería
II existe la presencia de enterobacterias, puesto que
este agar es selectivo de las mismas. Asimismo, se
confirmó la presencia de cocos en forma de racimos
(estreptococos) Gram-positivos en agar sangre, los
cuales, al presentar una hemolisis bien definida, se
puede sospechar de la presencia de Staphylococcus
aureus en la muestra problema.
Finalmente, es importante que las tinciones se
realicen de forma correcta, ya que es la clave para
la correcta interpretación de resultados a nivel clínico
y farmacéutico.
7. CUESTIONARIO
1. ¿Por qué es importante fijar la flama?
Porque hace que las bacterias queden
inactivadas y adheridas al portaobjetos
alterando lo menos posible la morfología
bacteriana y las posibles agrupaciones de
células que pudiera haber.
2. ¿Qué otros métodos de fijación se pueden
emplear?
Mediante la fijación química donde se emplea
sustancias químicas en la preservación como
formaldehido o formol, etanol, ácido acético, etc.
Presenta la ventaja de preservar las estructuras
celulares internas de los microorganismos.
3. Investiga cuáles son las estructuras
celulares o moléculas responsables de la
tinción simple realizada. Da ejemplos de
otros colorantes que podrían usarse.
La tinción simple es un procedimiento en el cual
se agrega un solo colorante a la muestra y tiñe
toda la célula, proporcionando información como
la forma, el tamaño, las estructuras presentes en
el citoplasma, y la agrupación de los
microorganismos. En estas tinciones se usa un
único colorante de carácter básico como puede
ser azul de metileno o violeta de genciana.
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4. ¿Qué es el aceite de inmersión? ¿Por qué
se utiliza?
Es un líquido viscoso transparente con alto
índice refractivo el cual les permite una
inmersión homogénea en aceite y elimina la
desviación del haz luminoso aumentando la
eficiencia del lente. Se utiliza ya que brinda la
propiedad de concentrar la luz cuando esta pasa
a través del objetivo de 100X del microscopio,
aumentando su poder de resolución.
5. ¿Cuáles son las desventajas o limitaciones
de la tinción simple?
La principal desventaja es que, debido al
tratamiento al que debe someterse un tejido vivo
para su tinción, las células acaban muriendo, por
lo que, no es posible observa a las células
activas en su estado natural, sino muertas.
6. ¿En qué se basa la tinción de Gram?
Es una prueba que detecta bacterias en el lugar
donde se sospecha una infección. Estas
también pueden usarse para detectar bacterias
en ciertos fluidos corporales, como la sangre o
la orina.
7. ¿De qué color se tiñen los Gram positivos y
los Gram negativos?
La tinción de Gram es de color púrpura. Si se
mantiene púrpura al combinarse con la bacteria
en muestra, quiere decir que son Gram
positivas; si cambia a color rosado o rojo, son
Gram negativas.
8. BIBLIOGRAFÍA
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Características generales del
Staphylococcus aureus. Revista
Latinoamericana de Patología Clinica.
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https://www.medigraphic.com/pdfs/patol/pt-
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[2]. Carbajal, S. (2017). Microbiologia: Tinción
diferencial Gram. Recuperado de
https://pdfcoffee.com/informe-2-
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microbiologia-tincion-diferencial-gram-pdf-
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[3]. González, R., Elizalde, B., Cortés, M. & Orduña,

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