UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO

DIVISIÓN DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS

LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA MÉDICA

PROFESORA:

DRA: CLAUDIA LETICIA MENDOZA MACIAS

MANUAL DE REPORTES

CYNTHIA DONAJÍ NEGRETE PALACIOS

 PRÁCTICA 1
TINCIÓN DE GRAM

I. TOMA DE MUESTRA
NO APLICA
II. METODOS DE AISLAMIENTO
NO APLICA
III. ANALISIS MICROSCOPICO DE LA MUESTRA

La tinción de Gram es un tipo de tinción que se aplica a las bacterias para que sean más
fáciles de ver al microscopio. Según la distribución del peptidoglicano en la pared celular
que las rodea, se tiñen de una forma u otra. Por lo tanto, las bacterias que no se tiñen con
esta técnica se denominan gram negativas, compuestos por una pared más delgada de
menos capas de peptidoglicano y una segunda membrana rica en lípidos que repele la
tinción de Gram, parecen incoloros bajo el microscopio. Las células Gram-positivas tienen
una pared celular mucho más gruesa, formada por una gran cantidad de capas de
peptidoglicano entre las que se intercala la tinción de Gram, dando un color púrpura
intenso al microscopio y se clasifican como Gram+.

 Entamoeba coli

 Staphylococcus aureus
Cocos Gram Positivos (diplococos, cadena o racimos)

IV. DIAGRAMA DICOTOMICO PARA LA IDENTIFICACION

NO APLICA

V. PROTOCOLO PARA PRUEBAS BIOQUIMICAS

Procedimiento de la tinción:
1- Contar con las cajas Petri que tienen el cultivo de cada uno de los
microorganismos a analizar

Escherichia coli Staphylococcus aureus

2- Se realizará un frotis de cada una de las
bacterias a analizar
3- Comenzaremos poniendo una gota de
agua destilada sobre un portaobjetos
limpio, con un asa bacteriológica
tomaremos una pequeña muestra de la
caja Petri que tiene nuestra bacteria
previamente sembrada, la depositamos
sobre la gota de agua destilada y será
fijada con calor pasándola varias veces
sobre la llama del mechero de forma rápida.

4- Cubrimos el frotis con cristal violeta, suficiente como para que no quede
ninguna parte de nuestra muestra sin teñir, después de un minuto se escurre
el exceso de reactivo y te lava con un chorro de agua.
5- Se cubrirá el frotis con la solución de Lugol, y después de un minuto se
lavará de forma suave y completa con agua de la llave.
6- Se añade solución de alcohol cetona de forma continua por 5 a 15
segundos o hasta que se deja de ver desprendimiento de colorante, lo que
nos indica que la decoloración ha terminado. Este es uno de los pasos mas
importantes a considerar en la tinción de gram, si no se realiza una
adecuada decoloración no se podrá apreciar de forma correcta la tinción
al microscopio.
7- Por último se cubrirá el frotis con safranina, después de un minuto se lavará
con agua suavemente y se dejará secar al aire para después poder ser
observado al microscopio.
8- Interpretación
Esta técnica permite diferenciar entre bacterias
gram positivas, las cuales se tiñen de morado, y
bacterias gram negativas que se tiñen de rosa-
rojizo. La diferencia de coloración se da debido
a la estructura de la pared celular de las
bacterias y la interacción con los reactivos
utilizados.

COLORANTES

El cristal violeta es básico (se une a

Gram Britania, Cristal Violeta:
componentes celulares de carga
negativa). Atraviesa la envuelta celular y se
acumula en el citoplasma. Para facilitar la
diferenciación se mezcla lugol con cristal
violeta: el complejo cristal-violeta-lugol
precipita. Así el lugol dificulta la salida del
cristal violeta de ambos tipos de células,
pero es más fácil de extraerlo de las Gram
negativas que de las Gram positivas.

Se usa alcohol o acetona para decolorar

Decolorante para Gram (alcohol-acetona)
las células. Las bacterias gramnegativas
tienen mucho menos peptidoglicano en
sus paredes celulares, por lo que este paso
esencialmente las vuelve incoloras,
mientras que solo una parte del color se
elimina de las células grampositivas, que
tienen más peptidoglicano (60-90% de la
pared celular). La pared celular gruesa de
las células grampositivas se deshidrata
mediante el paso de decoloración, lo que
hace que se encojan y atrapen el
complejo de yodo de tinción en su interior.

Lugol Concentrado para Gram El yodo de Gram ( yodo y yoduro de

potasio) se aplica como mordiente o
fijador. Las células grampositivas forman un
complejo cristal violeta-yodo.
 Safranina concentrada para Gram Después del paso de decoloración, se
aplica una contratinción para colorear las
bacterias de rosa. Tanto las bacterias
grampositivas como las gramnegativas
recogen la mancha rosa, pero no es visible
sobre el púrpura más oscuro de las
bacterias grampositivas.
Si el procedimiento de tinción se realiza
correctamente, las bacterias grampositivas
serán de color púrpura, mientras que las
bacterias gramnegativas serán de color
rosa.

CARACTERÍSTICAS DE LOS PRODUCTOS LISTOS PARA LA COLORACIÓN

- Violeta de genciana: solución color violeta.

- Lugol: solución color marrón.
- Decolorante: solución incolora.
- Safranina: solución rojiza.
-
VI. PROTOCOLO PARA ANTIBIOGRAMA
NO APLICA

VII. REFERENCIAS CONSULTADAS

Britania (20121) Gram Britania. Recuperado de: britanialab.com. 1 – 2 pp.

Bacilos grampositivos aerobios no esporulantes: corynebacterium, listeria, erysipelothrix,
nocardia y patógenos relacionados. Riedel S, & Hobden J.A., & Miller S, & Morse S.A., &
Mietzner T.A., & Detrick B, & Mitchell T.G., & Sakanari J.A., & Hotez P, & Mejia
R(Eds.), (2020). Jawetz, Melnick & Adelberg Microbiología Médica, 28e. McGraw
Hill. https://accessmedicina-mhmedical-com.e-
revistas.ugto.mx/content.aspx?bookid=2955&sectionid=249093192
Carranza M. Pérez M. (2015) Practica No. 4 Tinción de Gram. Identificación de
microorganismos con base en técnicas bacteriológicas 255 – 264 pp.
28e. McGraw Hill. https://accessmedicina-mhmedical-com.e-
revistas.ugto.mx/content.aspx?bookid=2955&sectionid=249093929

Inteligente, K. (2021, 24 agosto). Tinción de Gram. Kapital Inteligente.

https://www.kapitalinteligente.es/tincion-de-gram/
Arenas R, Micología médica ilustrada, 5ª ed., México, McGraw Hill, 2014, p. 381.

VIII. DATOS DEL EQUIPO QUE PRESENTA

IX. 137469 NEGRETE PALACIOS CYNTHIA DONAJI