DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE INGENIERIA INDUSTRIAL

CAMPUS LIMA NORTE

INFORME
LABORATORIO N° 3 DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL
“TÉCNICA DE TINCIÓN DIFERENCIAL GRAM”
Apellidos y Nombres Código
Peña Benites Brigitte Nataly U18207695
Roque Condori Bryan Rafael U17203653
Roncal Castañeda Alexandra Milena U17203646
Vásquez Durand Mayra Margot U17209187
Veliz Acosta Brenda Maritza U17204070

I. Descripción de las actividades en el laboratorio. (2 puntos)

Al iniciar la prueba del laboratorio, se esteriliza el área de trabajo para no

contaminar las muestras, asi mismo se esteriliza el asa de siembra para poder
realizar el frotis de una colonia y extenderlo en el portaobjetos luego de haber
colocado una gota de agua destilada, para posteriormente fijarlo con la ayuda de
un mechero durante 1 minuto. Una vez fijada la muestra podemos comenzar con
el proceso de (tinción) coloración de las bacterias gram (+) y gram (-).

 Se coloca el cristal violeta durante 1 minuto y luego se enjuaga con agua

destilada con cuidado.
 Luego, se coloca Lugol a la zona de la muestra durante 1 min para fijar el
color a la muestra y luego se lava con agua destilada.
 Se agrega alcohol de 96° durante 15 segundos para decolorar las gram (-) y
luego se lava con agua destilada.
 Se coloca safranina que nos permite teñir las gram (–) y luego se enjuaga con
agua destilada.
 Finalmente, Se seca la muestra con ayuda del mechero o con papel filtro sin
frotar la muestra para proceder a llevarlo al microscopio.
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Figura 1
Procedimiento para realizar la tinción de Gram

Tinción de Gram. (2019b, septiembre 4). [Figura]. Tinción de Gram.

https://edulabc.com.mx/tincion-de-gram/
II. Presentación de resultados obtenidos. (5 puntos)

Después de realizar todo el proceso de coloración de la muestra, se puede

observar y diferencias las bacterias que son gram (+) de las que son gram (-); asi
mismo, se puede identificar la forma que presentan estos microorganismos.

Así mismo, los resultados después de cada paso del proceso son los siguiente:

 El cristal violeta es el que va a teñir ambos tipos de organismos de color

violeta
 El Lugol es el compuesto que va a fijar el colorante a las bacterias
 El alcohol de 96°es el encargado de eliminar el cristal violeta de las gram
(-)
 La safranina es el encargado de teñir únicamente a las gram (-) de color
rosado, ya que están decoloradas dejando a las gram (+) teñidas de cristal
violeta
 Verificamos que en nuestra muestra se formaron bacterias en forma
esférica que se tiñeron de color violeta y bacterias en forma de bastón que
se tiñeron de color rosado.
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 Cuando se agrega el alcohol se debe tener mucho cuidado con tiempo, ya
que este proceso es el punto crítico del proceso de tinción.

III. Análisis e interpretación de resultados. (10 puntos)

Procedemos a diferencias las bacterias gram (+) de las gram (-).

GRAM (+)

 Son organismos que tienen varias capas de fosfolípidos con membrana

bicapa lipídica y el 90% que lo conforma es por su pared celular (capa
gruesa de peptidoglucano). (Tinción de Gram, 2019)
 Al colocar el cristal violeta en la muestra, el colorante quedará atrapado en
los espacios de la pared celular, por ello se tiñe de color morado.
 Posteriormente se le agrega lugol (mezcla que contiene yodo), cuando el
yodo ingresa y se encuentra con el cristal violeta, se formará un complejo
cristal violeta yodo (insoluble), por ello al lavarlo no pasará nada.
 Luego, al colocar el alcohol se deshidratará la membrana y no pasará
nada, ya que el complejo es insoluble, manteniéndose de color morado la
gram (+).
 De acuerdo a un laboratorio interactivo online se pudo observar que la
morfología de las gram positivas tienen la forma de cocos.

GRAM (-)

 Son bacterias que cuentan con ambas membranas (membrana bicapa

(externa) y membrana citoplasmática) y el 10% de su composición es por
su pared celular (capa delgada de peptidoglucano). (Tinción de Gram,
2019)
 Al colocar el lugol (mezcla que contiene yodo), cuando el yodo ingresa y
se encuentra con el cristal violeta, se formará un complejo cristal violeta
yodo (insoluble), por ello al lavarlo no pasará nada.
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 Asimismo, en la última capa de peptidoglucano quedará atrapado el
complejo cristal violeta yodo.
 Luego, al ingresar el alcohol (elemento apolar) degradará los ácidos
grasos de la membrana externa; esta membrana empezará a desaparecer se
diluye, esto permite la liberación del complejo cristal violeta yodo y la
gram negativa queda sin color.
 Se agrega la safranina, ocupando el lugar que se encontraba el cristal
violeta yodo.
 De acuerdo a un laboratorio interactivo online se pudo observar que la
morfología de las gram positivas tienen la forma de bacilos.

Figura 2

Muestra de las bacterias Gram (+) y Gram (-)

Michigan State University. (s. f.). The Gram Stain [Figura]. The Gram
Stain. https://learn.chm.msu.edu/vibl/content/gramstain.html
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IV. Conclusiones y recomendaciones. (3 puntos)

Conclusiones:

 La utilización de la safranina durante el experimento, nos permite teñir las

bacterias gram (-), ya que este compuesto debilita los ácidos grasos de la
membrana externa pudiendo penetrar el color rápidamente.
 El uso del alcohol de 96° permite decolorar a las bacterias gram negativas,
ya que la membrana externa de estas bacterias es soluble en solventes
orgánicos, es por ello que debilita los ácidos grasos de la membrana
externa y se pueden decolorar con facilidad.
 Se pudo diferencias claramente entre organismos gram (+) y gram (-)
debido a la diferencia de colores que presentan que son morado y rosados
respectivamente.
 Los análisis de un estudio de tinción de gram positiva y negativa son muy
relevantes para diagnosticar y tratar patologías causadas por bacterias, ya
que es necesario conocer cómo va a influir la composición de la pared
celular en el tratamiento. (Arteaga, 2015).

Recomendaciones:

 Se recomienda seguir la guía y los pasos del laboratorio exactamente para

apreciar los resultados de las pigmentaciones del gram (+) y gram (-).
 Se recomienda usar aceite de inmersión para la lente de mayor aumento
únicamente.
 Respetar los tiempos para cada proceso es fundamental ya que exceder o
minimizar esto puede ocasionar que los reactivos varíen en sus resultados.
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V. Bibliografía:

Arteaga, J. Farfán, G. Pinto, L. (2015) importancia de la tinción de gram para la

identificación de la escherichia coli. Universidad de Carabobo.

http://riuc.bc.uc.edu.ve/bitstream/123456789/5955/1/jearteaga.pdf

Michigan State University. (s. f.-b). The Gram Stain. Virtual Interactive

Bacteriology Laboratory. Recuperado 29 de octubre de 2021, de

https://learn.chm.msu.edu/vibl/content/gramstain.html

Tinción de Gram. (2019, 4 septiembre). EduLabC. Recuperado 29 de octubre de

2021, de https://edulabc.com.mx/tincion-de-gram/