UT 4.

Citogenética
humana y análisis
cromosómico
Para el estudio de enfermedades de origen
genético, se utiliza la citogenética humana. Para
ello, se realiza une estudio de los cromosomas de
las células en metafase con el fin de obtener el
cariotipo.

El CARIOTIPO es el conjunto de cromosomas de

una especie, un individuo o una célula ordenados
de acuerdo a su tamaño y morfología.
Para obtener los cromosomas metafásicos se debe
realizar un cultivo de células, posteriormente se
practicará un sacrificio de células y finalmente la
extensión cromosómica.

Posteriormente se realizaran técnicas de bandeo

cromosómico, para poder visualizarlos y
analizarlos.
El cariotipo puede realizarse a diferentes niveles :

➢ Cariotipo de especie: Formado por el conjunto

NORMAL de cromosomas que caracteriza a una
especie determinada. Es el cariotipo “ base” en
función del cual se deben comparar los
cariotipos individuales y celulares.
➢Cariotipo del individuo o constitucional:
Conjunto de cromosomas
representativos del individuo. Es decir,
el que está presente en la mayoría de
células de su organismo.
➢Cariotipo de célula: Conjunto de
cromosomas que contiene una célula.
NO tiene porqué ser el mismo que el
del individuo (por ejemplo en el caso
de una célula tumoral)
La especie humana es una especie diploide
2n=46. El cariotipo humano está
constituido por 46 cromosomas agrupados
en 22 parejas de autosomas homólogos y
una pareja de cromosomas sexuales, XX en
la mujer y XY en el hombre.
https://www.youtube.com/watch?v=wH
HSF8XZB9k
CARIOTIPO ESTÁNDAR DE SANGRE PERIFÉRICA

Se obtiene a partir de una muestra de sangre periférica. Para

ello primero se realiza un cultivo de linfocitos,
posteriormente se obtiene la extensión de los cromosomas
en metafase (sacrificio del cultivo): consiste en inhibir la
división celular en la fase de metafase para poder realizar las
extensiones cromosómicas). A continuación se realizan las
técnicas de bandeo que se hayan determinado. Para finalizar
preceder a analizar los cromosomas teñidos.
 CARIOTIPO ESTÁNDAR DE SANGRE PERIFÉRICA

1.- CULTIVO DE LINFOCITOS

Para poder realizarlo es necesario contar con :

• Muestra: sangre periférica anticoagulada con heparina

• Medio de cultivo: los más utilizados son RPMI 1640, DMEM y Ham
F10. Se suplementan con suero bovino fetal, L-glutamina y
antibióticos (penicilina/estreptomicina).
• Recipiente: frasco roux o tubo para cultivo.
 El procedimiento se puede realizar en varios pasos:

1. Siembra: se efectúa añadiendo la sangre heparinizada al medio de cultivo en proporción 1/5-

1/10.
2. Adición de fitohemaglutinina: la fitohemaglutinina es una proteína de origen vegetal que se une
a linfocitos T y provoca su desdiferenciación a linfoblastos, los cuales empezarán a proliferar.
3. Incubación: se realiza a 37ºC y 5% de CO2 durante 72 horas. Si se utilizan tubos de cultivo, hay
que incubarlos con una inclinación de 45º en gradillas inclinadas.
4. Detención de la mitosis en metafase: entre dos horas y 90 minutos antes de finalizar el periodo
de incubación, se añade al cultivo colchicina.
5. Esta es una droga antimitótica que detiene las mitosis en metafase por destrucción de los
microtúbulos del huso acromático. De esta manera, en la fase final del cultivo se acumulan las
células en metafase
2.-OBTENCIÓN DE EXTENSIONES DE LOS CROMOSOMAS EN METAFASE

Estas se realizan sobre un portaobjetos, en varios pasos:

Ejemplo 1

• Sacrificio del cultivo: El cultivo se traspasa a un tubo falcon cónico y se

centrifuga ( 1500 rpm durante 5-10 min). Se procede a eliminar el
sobrenadante
• Choque hipotónico y posterior incubación: se añaden al tubo 5 ml de NaCl
0,075M, se mezcla el contenido y se lleva a incubación. El periodo y la
temperatura de incubación oscilan en los diferentes protocolos entre los 5 y
los 20 minutos, a temperatura ambiente o a 37ºC. En esta fase las células se
cargan de agua y se hinchan, lo que facilita la visualización de los
cromosomas. En las células en las que se ha detenido la división en
metafase, los cromosomas se distribuyen por todo el volumen de la célula,
separándose.

Al finalizar la incubación se centrifuga a 1500 rpm durante 5-10 minutos y se

elimina el sobrenadante, dejando un pequeño volumen para resuspender el
botón celular.
2.-OBTENCIÓN DE EXTENSIONES DE LOS CROMOSOMAS EN METAFASE ( cont)

• Fijación y lavado:

Se realiza con fijador de Carnoy, una mezcla de metanol-ácido acético en

proporción 3:1. Se añaden 5 ml de fijador al tubo con las células, se mezcla y se
deja reposar 5 minutos a temperatura ambiente.
A continuación, se centrifuga a 1500 rpm 5 minutos, se descarta el sobrenadante
y se realizan 2-3 lavados adicionales con el fijador hasta obtener un botón celular
blanco y limpio.

• Obtención de extensiones por goteo: a la hora de realizar las extensiones es

importante resuspender las células en fijador de Carnoy recién preparado. Para
ello se centrifugan, se elimina el sobrenadante y se añade una cantidad de
fijador recién preparado de modo que se vuelva a resuspender el botón celular
A continuación se carga la suspensión celular en una pipeta Pasteur y se
dejan caer (desde una altura aprox de 30 cm )una o dos gotas sobre un
portaobjetos que se haya mantenido en metanol ( para evitar
contaminaciones y que esté húmedo). En el momento del choque, las
células se rompen, y los cromosomas se dispersan.
Posteriormente los portaobjetos se dejan secar.

VIDEO CEBOLLA https://www.youtube.com/watch?v=y1YTHtIBkAk PARA VER

VIDEO SANGRE PERIFERICA https://www.youtube.com/watch?v=pIOgi66VJAE
Ejemplo de sacrificio 2
Tras el tiempo de incubación de 72 horas:
Sacrificio
❱ Antimitótico: añadir 250 ml de colchicina a temperatura ambiente e
incubar 1 hora en estufa a 37 °C.
❱ Pasar el contenido de los frascos a tubos de centrífuga de 10 ml y
centrifugar 5 minutos a 1.500 rpm. Con una pipeta Pasteur, que se
utilizará para cada paciente en todo el proceso, retirar el sobrenadante, dejando aproximadamente
0,25 ml.
❱ Choque hipotónico: dispensar aproximadamente 1 ml de ClK (precalentado para evitar un choque
importante de temperatura).
◗ Siempre dispensar sobre la pared del tubo, nunca sobre las células directamente, e inclinando el
tubo.
◗ Resuspender el sedimento con suavidad, sin sacar la pipeta del
líquido, y sin hacer burbujas. Puede sacarse con cuidado y dispensar sobre la pared del tubo.
Continuar hasta eliminar los grumos
(si hay algún coágulo, puede retirarse).
◗ Una vez resuspendido, añadir otros 4 ml de ClK (recordar hacerlo
siempre sobre la pared del tubo, nunca sobre las células) y resuspender con la pipeta.
◗ Incubar en el baño a 37 °C, durante 20 minutos
3.- TINCIÓN DE LOS CROMOSOMAS CON TÉCNICAS DE BANDEO

La forma convencional se realiza mediante la inmersión de los portas en una solución de

Giemsa ( al 3% en tampón fosfato) durante 3-4 minutos . A continuación se lava con
agua.
De este modo los cromosomas se tiñen de un modo uniforme, de este modo se controla
si la calidad de la metafase es correcta, antes de proceder al bandeo.

BANDEO G: Primero se debe proceder a envejecer la preparación, con la finalidad de

eliminar cualquier resto de fijador y asegurarse de que la preparación está seca. Para
ello, se mantienen las preparaciones en una estufa a 60-65ºC 1 o 2 días. O bien a 37 º C
durante 3-4 días.
El tiempo y la concentración del reactivo a utilizar varía entre cada laboratorio, pero
todos deben cumplir 2 pasos.
Digestión con tripsina: mediante inmersión de las preparaciones
Tinción con Giemsa: se realiza otra inmersión en una solución tamponada
 CARIOTIPO DE ALTA RESOLUCIÓN

Se obtiene a partir de cromosomas en profase

tardía o en prometafase.

Al estar los cromosomas más condensados en

estas fases, se obtiene un mayor número de
bandas en la técnica de bandeo G ( entre 550 y
850). De este modo, la sensibilidad del cariotipo
es mayor, al permitir detectar alteraciones
estructurales de menor tamaño.
 CARIOTIPO DE ALTA RESOLUCIÓN

Para realizar este cariotipo, debe añadirse

metotrexato al cultivo de linfocitos para
sincronizarlo. De esta manera, las células se
bloquean en la fase S del ciclo celular al no
poder replicar el ADN, puesto que se bloquea
la síntesis de Timidina.
 CARIOTIPO DE ALTA RESOLUCIÓN

Transcurrido un tiempo, se añade un análogo sintético

de la Timidina, con lo que se reinicia en proceso. Y todas
las células evolucionan a la siguiente fase de forma
sincrónica.

Cuando todas las células han alcanzado la profase, se

añade colchicina o colcemid, para evitar la formación del
huso acromático.
De este modo se obtienen cromosomas en profase.
CARIOTIPO DE ALTA RESOLUCIÓN
 EL ANÁLISIS CROMOSÓMICO

Mediante este proceso obtendremos el cariotipo. Se realiza el recuento y análisis de

los cromosomas de las metafases y su ordenación y emparejamiento.

Para ello se analizan COMO MÍNIMO 20 metafases visualizadas con el objetivo de

x100. de esas 20, se seleccionan 5 y se fotografían para someterlas posteriormente a
un análisis completo: análisis banda a banda de cada cromosoma con su homólogo.

A continuación se ordenan y emparejan con sus homólogos y se construye el

cariotipo, en función de sus características morfológicas y el patrón de bandas G de
los cromosomas metafásicos.
CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS CROMOSOMAS HUMANOS

Los cromosomas se ordenan en función de 3 criterios:

❑ El tamaño: de mayor a menor

❑ La posición del centrómero: metacéntricos- submetacéntricos-
acrocéntricos ( en humanos no existen telocéntricos pero en las especies
en las que existen, irían en último lugar)
❑ Si existen o no constricciones secundarias

De este modo el cariotipo humano queda ordenado en 8 grupos de

cromosomas, quedando al final los cromosomas sexuales.
https://www.youtube.com/watch?v=yZypE8k4Xe0
 GRUPOS CROMOSÓMICOS
GRUPO A : cromosomas 1, 2 y 3( los más grandes). El 1
y el 3 son metacéntricos y el 2 submetacéntrico.
GRUPO B: Cromosomas 4 y 5, grandes y
submetacéntricos.
GRUPO C: : Cromosomas del 6 al 12 (submetacéntricos
y medianos)
GRUPO D: Cromosomas 13, 14 y 15. Acrocéntricos de
mayor tamaño. Con constricción secundaria y satélite.
GRUPO E: Cromosomas 16, 17 y 18, submetacéntricos
pequeños
GRUPO F: cromosomas 19 y 20, los metacéntricos mas
pequeños
GRUPO G: cromosomas 21 y 22, acrocéntricos más
pequeños. Poseen constricción secundaria y satélite (en
realidad el cromosoma 22 es un poco más grande que
el 21 pero por cuestiones históricas se mantiene así)
CROMOSOMAS SEXUALES
GRUPOS CROMOSÓMICOS
 PATRON DE BANDAS G

Las bandas G son las más utilizadas en citogenética humana.

Dado que permiten la identificación de los cromosomas de
forma fidedigna. También permiten la identificación y
análisis de alteraciones estructurales de los cromosomas.

El patrón depende del grado de condensación de los

cromosomas. El patrón estándar es de 350-400 bandas,
correspondiente a cromosomas metafásicos totalmente
condensados.
Progresivamente se va incorporando la
automatización al proceso de análisis
cromosómico mediante cariotipadores, que
poseen microscopios motorizados, cámaras
digitales y programas informáticos que capturan
y analizan las células en metafase, clasifican los
cromosomas de forma automática por su patrón
de bandas, realizan el cariotipo y generan un
informe final, con los cromosomas ya ordenados
y con sus alteraciones detectadas
 VAMOS A HACER UN CARIOTIPO

PÁGINA PRINCIPAL. CARIOTIPO NORMAL

https://ilias.hhu.de/ilias.php?ref_id=884292&cmd=rend
er&cmdClass=ilrepositorygui&cmdNode=xk&baseClass=
ilrepositorygui

PÁGINA PRINCIPAL CARIOTIPO ABERRANTE

https://ilias.hhu.de/ilias.php?ref_id=884293&cmd=rend
er&cmdClass=ilrepositorygui&cmdNode=xk&baseClass=
ilrepositorygui
 NOMENCLATURA CITOGENÉTICA Y FÓRMULA CROMOSÓMICA

Los resultados obtenidos tras el análisis cromosómico se

describen por escrito mediante la llamada fórmula
cromosómica. Proporciona la descripción detallada del
cariotipo de un individuo. La nomenclatura usada incluye
abreviaturas y símbolos y las pautas para redactarla y se
rigen por el consenso internacional del ISCN (International
System for Human Cytogenetic Nomenclature).
Para estructurar la información en la fórmula cromosómica se siguen
las siguientes pautas

Sin anomalías

La fórmula se inicia con el número total de cromosomas que

posee el individuo seguido de una coma. A continuación se
especifican los cromosomas sexuales sin anomalías
estructurales.

• 46,XX corresponde al cariotipo normal de una mujer.

• 46,XY al cariotipo normal de un varón.
Anomalías numéricas

En el caso de que haya alguna anomalía numérica de los

cromosomas sexuales, se refleja directamente en la fórmula. Así,
por ejemplo:

• 45,X es una monosomía del cromosoma X.

• 47,XYY es una disomía del cromosoma Y.
Anomalías numéricas

Si la anomalía numérica afecta a los autosomas ( cromosomas no

sexuales), se informa a continuación de los cromosomas sexuales,
separada de ellos por una coma:

• Las monosomías se señalan con el signo – seguido del número

del cromosoma que falta.
• Las trisomías se señalan con el signo + seguido del número del
cromosoma extra.

Por ejemplo:
• 45,XX,-21 es la monosomía del cromosoma 21 (mujer).
• 47,XY,+21 es la trisomía del cromosoma 21 (varón).
 Anomalías estructurales
Las abreviaturas más empleadas son:

• Del: Deleción. • Pat: Origen paterno.

• Dup: Duplicación.
• I: Isocromosoma.
• Ins: Inserción.
• Inv: Inversión.
• Mos: Mosaicismo.
• ; separación entre cromosomas
o cromosomas diferentes
• Mat: Origen materno.
• R: Cromosoma en anillo.
• Rec: Cromosoma recombinante.
• T: Translocación.
• Tel: Telómero.
• : rotura
• :: rotura y reunión
 Anomalías estructurales

Se informan a continuación de las numéricas (en el caso de

que existan). Sino, se sitúan a continuación de los
cromosomas sexuales, separadas por una coma.
Si afectan solo a un cromosoma (deleción, duplicación,
inversión, cromosoma en anillo) se nombran con la
abreviatura de la alteración, indicando a continuación el
número del cromosoma afectado entre paréntesis. Además
se indica la banda o bandas afectadas por la mutación ( que
se denominan puntos de rotura y reunión) también entre
paréntesis.
 Anomalías estructurales

Por ejemplo:

46,XY,del(2)(q21q32) corresponde a un varón con deleción del

brazo largo del cromosoma 2 con puntos de rotura y reunión
en q21 y q32

46,XX,del(9)(q22) es el cariotipo de una mujer con deleción

del brazo largo del cromosoma 9 con punto de rotura en la
banda q22.
 Anomalías estructurales

46,XX,dir dup(3)(p12p22) pertenece a una mujer con

duplicación directa desde p12 hasta p22 en el cromosoma 3.

46,XX,r(10)(p14q25) corresponde a una mujer con cromosoma

10 en anillo y puntos de rotura y reunión en p 14 y q25.

46,XY,inv(4)(p22p28) es un varón con inversión en cromosoma

4 con puntos de rotura y reunión en p22 y p28.
Anomalías estructurales ( continuación)

• Las anomalías estructurales que afectan a dos

cromosomas (translocaciones) se informan con la
abreviatura de la alteración, poniendo a continuación
los números de los cromosomas afectados entre
paréntesis y separados por un punto y coma, seguidos
de los puntos de rotura y reunión en cada cromosoma,
también entre paréntesis y separadas por punto y
coma los de cada cromosoma.
Anomalías estructurales ( continuación)

• Las translocaciones no recíprocas, se consideran como

inserciones entre cromosomas (no homólogos). En
consecuencia, la abreviatura utilizada es «ins» y de los dos
cromosomas implicados se coloca primero el receptor y
después el donante (separados por punto y coma).

Por ejemplo:
• 46,XY,ins(10;3)(q22;p13p23) corresponde a un varón con
inserción en el cromosoma 10 a nivel de la banda q22 del
segmento comprendido entre p13 y p23 del cromosoma 3.
Anomalías estructurales ( continuación)

• En las translocaciones recíprocas, el orden de los cromosomas es

primero los cromosomas sexuales (si están implicados) y los
autosomicos de menor a mayor.

Por ejemplo:

• 46,Y,t(X;17)(q23;q21) corresponde a un varón con una translocación

recíproca entre los cromosomas X y 17 con puntos de intercambio en
Xq23 y 17q21. (En este caso, detrás de 46 solo se pone el cromosoma Y,
porque el X tiene anomalías estructurales.)

• 46,XX,t(9;10)(q32;p14) es una mujer con una translocación

Mosaicismos:

La fórmula comienza siempre con la abreviatura “mos” y a

continuación se describen todas las líneas celulares empezando por
las anormales y terminando por la normal. Las líneas celulares se
separan entre sí por el signo /.
Para conocer la proporción en la que se encuentra cada línea celular,
después de su descripción se pone entre corchetes el número de
metafases analizadas que presentan ese cariotipo.

- mos47,XYY[15]/46,XY[30] es la fórmula cromosómica de un individuo

con mosaicismo en el que se han analizado 45 metafases. En 15 de
ellas se ha detectado una disomía del cromosoma Y, mientras que las
30 restantes son normales.
 CITOGENÉTICA Y DIAGNÓSTICO PRENATAL

En el diagnóstico prenatal, la realización del cariotipo es una técnica

básica.
Está indicada en los casos siguientes:

Antecedentes de cromosomopatía en un progenitor.

Observación de anomalías ecográficas en el feto.
Retraso en el crecimiento intrauterino.
Resultado alterado del triple cribado (bioquímico y ecográfico) en el
primer trimestre de gestación.

Dependiendo de las semanas de embarazo, el cariotipo fetal se puede

realizar a partir de muestras de vellosidad corial o de líquido amniótico
 Anomalías estructurales

Lectura de ampliación
https://www.unioviedo.es/A.Roca/anexos/NOMENCLAT
URA_DE_LA_CITOGENETICA_HUMANA.pdf
 ALGUNAS ALTERACIONES CROMOSÓMICAS QUE HAY QUE CONOCER

•SÍNDROME DE DOWN Trisomía 21 47,XY,+21 | 47,XX,+21

•SÍNDROME DE EDWARDS Trisomía 18 47,XY,+18 | 47,XX,+18

•SÍNDROME DE PATAU Trisomía 13 47,XY,+13 | 47,XX,+13

•SÍNDROME DE TURNER Déficit de un cromosoma X en mujer 45,X o 45,X0

•SÍNDROME DE WOLF-HIRSCHHORN Deleción del brazo p cromosoma 4 46,XY,del(4)(p)|46,XX,del(4)(p)

•SÍNDROME DE KLINEFLETER (XXY) Exceso de cromosoma X sumado a XY 47,XXY

•SÍNDROME DE LA SÚPER MUJER Exceso de cromosoma X sumado a XX 47,XXX

•SÍNDROME DE LA DOBLE Y Exceso de cromosoma Y sumado a XY 47,XYY

 Citogenética y cáncer
En ocasiones el origen de las neoplasias se da por
alteraciones cromosómicas que producen
La pérdida de un gen supresor de tumores
La activación o sobreexpresión de oncogenes
Estas alteraciones se detectan en las células
tumorales. En muchas ocasiones, actúan como
biomarcadores, permitiendo valorar pronóstico,
evolución y tratamiento más adecuado, además de la
confirmación diagnóstica.
 Citogenética y cáncer
Las deleciones y aneuploidías pueden originar la perdida de
genes supresores de tumores. La adición de material
genético puede provocar la sobreexpresión de oncogenes
Las translocaciones e inversiones, al conllevar una
reordenación de genes dentro del cromosoma, producen la
activación o sobreexpresión de oncogenes. En otras
ocasiones, producen cromosomas aberrantes (Philadelpia).

No es infrecuente encontrarse más de una representación cariotípica con

más de una aberración, ya que se dan subpoblaciones dentro del propio
tumor.
 Citogenética y cáncer
➢ Leucemia mieloide crónica (LMC): Alteración
citogenética asociada a una hemopatía maligna: el
cromosoma Filadelfia, que consiste en una
translocación recíproca entre el cromosoma 9 y el
22. Esta alteración está presente en el 95% de los
pacientes
➢Leucemia aguda: En muchos casos, tanto linfoblásticas como
mieloblásticas, se producen aneuploidías en las células de la médula
ósea.
➢Linfoma de Burkitt: Se caracteriza por una translocación entre los
cromosomas 8 y otros cromosomas. La translocación más común es la
t(8;14)(q24;q32), aunque existen otras como t(2;8)(p12;q24) y
t(8;22)(q24;q11).
➢ Síndromes mielodisplásicos: Conjunto de síndromes que
tienen en común una alteración de la proliferación y
diferenciación de las células progenitoras hematopoyéticas.
Algunos presentan una deleción del brazo largo del cromosoma 5
(síndrome 5q-)

➢ Retinoblastoma: Se desencadena por una deleción en el brazo

largo del cromosoma 13.

➢ Meningioma: En muchos casos de este tipo de tumor craneal

usualmente benigno se encuentran deleciones o pérdidas del
cromosoma 22.