MÓDULO: Microbiología clínica

HORAS: 168 h

UNIDAD 3: Preparación de medios para el cultivo

de microorganismos.
 Microbiología clínica
UD03: Preparación de medios para el cultivo de microorganismos

ÍNDICE DE CONTENIDOS

INTRODUCCIÓN 3

OBJETIVOS 4

1. COMPONENTES DE UN MEDIO DE CULTIVO. 5

2.1. SEGÚN EL ESTADO FÍSICO 7

2.2. SEGÚN SU FUNCIÓN 9

3. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 14

4. MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS HABITUALMENTE EN UN LABORATORIO DE

MICROBIOLOGÍA 17

IDEAS CLAVE DE LA UNIDAD 21

BIBLIOGRAFÍA 22

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UD03: Preparación de medios para el cultivo de microorganismos

INTRODUCCIÓN
Para estudiar a los microorganismos in vitro es fundamental reproducir su crecimiento
en el laboratorio. Por ello, es importante el medio de cultivo elegido, puesto que este
va a ser el alimento del que disponen las bacterias.
Los componentes básicos de los medios de cultivo son los nutrientes. Existen medios
líquidos y sólidos. En este último caso se necesitará un agente solidificante. Los medios
líquidos tienen una composición similar, pero no necesitan ser solidificados. También
contienen aditivos, los cuales varían en función del microorganismo.
Los factores que hay que tener en cuenta para el cultivo, además del medio, es el pH.
Los microorganismos viven en condiciones de pH muy estrictas, generalmente cerca de
la neutralidad. Para evitar desviaciones se utilizan los tampones o buffers e indicadores
que nos señalan dichas variaciones. De igual forma, la atmósfera de crecimiento puede
ser aerobia o anaerobia.
Otro aspecto importante es la temperatura de incubación, que para la mayoría de los
microorganismos de interés clínico está entre 25 y 40 ºC, similar a la temperatura
corporal, es decir, son organismos mesófilos.
La introducción a principios del siglo XX de los medios deshidratados y el agar favoreció
el gran desarrollo de la microbiología. Asimismo, el descubrimiento de los
requerimientos nutricionales de las bacterias ha dado lugar a una variedad de medios
ideados especialmente para la selección, el crecimiento y la identificación bacteriana.

¿SABÍAS QUÉ?

El término in vitro procede del latín y significa “en el vidrio”. Se utiliza para cualquier
técnica que haya referencia a un ensayo en un ambiente controlado, en una placa
Petri o un tubo de ensayo.

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OBJETIVOS
Los objetivos de aprendizaje de esta unidad son los siguientes:
● Conocer qué es un medio de cultivo.
● Identificar los distintos componentes de un medio de cultivo.
● Clasificar los medios de cultivo según su estado y función.
● Elaborar medios de cultivo.
● Reconocer los medios de cultivo más utilizados en microbiología.

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1. Componentes de un medio de cultivo.

Los medios de cultivo se realizan mezclando sustancias químicas y/o sustancias
naturales que, en determinadas concentraciones y condiciones físicas, son capaces de
favorecer el crecimiento de microorganismos.
Para diseñar un medio de cultivo, debemos tener en cuenta la fuente de energía,
además de otros requerimientos. Por lo general, los medios de cultivo contienen:

• Una base mineral con sustancias inorgánicas que pueda necesitar el

microorganismo en cuestión.
- Potasio, magnesio, calcio o hierro: suelen ir incluidos en la composición.
- Manganeso, cobalto, cobre, molibdeno o zinc: aparecen como elementos
traza.
- Fósforo: sirve como regulador del pH.
• Suplementación con:
- Macroelementos como carbono, nitrógeno y azufre.
- Factores del crecimiento, como vitaminas y aminoácidos.

IMPORTANTE
Las principales fuentes de energía utilizadas por los microorganismos son el carbono,
el nitrógeno y el azufre.

En el diseño del medio de cultivo, se utilizan una serie de constituyentes de forma

habitual. Algunos de los más utilizados son:
● Extractos: fuente de bases orgánicas saludables. Pueden obtenerse de animales,
vegetales o levaduras y se emplean como fuente de alimento rica en
carbohidratos, proteínas, vitaminas y minerales.
● Fluidos corporales: contienen factores del crecimiento que favorecen el
desarrollo de los microorganismos más exigentes. Los más utilizados son la
sangre y el plasma.
● Agentes solidificantes: el más común es el agar, un polisacárido que permite
aislar colonias bacterianas. Se encuentra en las algas marinas. Se licúa cuando
alcanza temperaturas de 100ºC y se solidifica sobre los 40ºC. Es el agente
gelificante más utilizado. También se puede utilizar gelatina, la cual tiene
naturaleza proteica y se obtiene a partir del colágeno de tejidos animales.
● Peptonas: formadas por péptidos y aminoácidos de composición variable. Se
trata de hidrolizados proteicos proveniente de proteasas. Muy útiles como
fuente de nitrógeno.

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● Sistemas amortiguadores: Favorecen el mantenimiento constante del pH del

medio. Los más usados son los fosfatos bisódicos y bipotásicos.
● Agentes reductores: Se añaden para permitir el desarrollo de microorganismos
anaerobios. Algunos de ellos son la cisteína o el tioglicolato.
● Agentes selectivos: Sustancias que se añaden al medio de cultivo para
convertirlo en un medio selectivo para determinados microorganismos. Algunos
de ellos son el cristal violeta, bilis, sales biliares o determinados antibióticos con
el fin de inhibir el crecimiento de unos y facilitar el de otros.
● Tampones de pH: evitan la acidificación resultante del metabolismo bacteriano.
También se utilizan otros compuestos como los carbohidratos para facilitar la
identificación, el Cloruro Sódico para corregir el equilibrio osmótico o colorantes como
indicadores de pH.

INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA, LAS PEPTONAS:

La hidrólisis enzimática se lleva a cabo con diferentes enzimas al pH óptimo de cada

una de ellas. Así, cuando se usa la pepsina, el pH de la mezcla es próximo a 1; mientras
que cuando se usa tripsina, el pH de la mezcla está en un rango de 7 a 7,5.

Los nombres que reciben los hidrolizados derivan del nombre de la proteasa usada
para su obtención, o del nombre del sustrato. Podemos hablar entonces de:

❖ Peptonas propiamente dichas: a partir de proteína animal digerida con pepsina.

❖ Triptonas: a partir de la digestión de la caseína con la tripsina (= pancreatina).
❖ Soitonas: a partir de la hidrólisis de proteína vegetal de soja con papaína.

Además, la composición final de estos productos puede cambiar dependiendo del

tiempo de digestión y sus características.

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2. Tipos de medios
La clasificación de los medios de cultivo se puede realizar de dos formas: según el estado
físico y según su utilidad.

2.1. Según el estado físico

Como se indica al inicio de la unidad, podemos encontrarnos con medios líquidos y
medios sólidos.
2.1.1. Medios líquidos
Los caldos o medios líquidos poseen los nutrientes necesarios para el desarrollo de los
microorganismos, pero no contienen agentes solidificantes. Se utilizan tubos de ensayo
como los que se pueden observar en la imagen 1.
El crecimiento bacteriano en estos medios se observa por la aparición de turbidez. En
ocasiones puede aparecer también en forma de precipitado o por un crecimiento en la
superficie del medio. Los más utilizados son el agua de peptona, el caldo tripticasa-soja
y el caldo común (ver su composición y utilidad en la tabla 1).

Imagen 1: Crecimiento bacteriano en un medio de cultivo líquido.

Fuente: Canva Pro

Este medio se utiliza cuando:

● No se necesita observar las colonias y el número de bacterias es mínimo.
● En pruebas de identificación bioquímica.
● Aislamiento por dilución.
● Mantenimiento de cepas.

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Tabla 1: Medios de cultivo líquidos más comunes. Fuente: Elaboración propia.

Medio Componentes Utilidad

Agua de peptona • Extracto de sangre. • Metabolismo proteico.

• Peptona. • Si se añade un agente tampón
• Cloruro sódico. con pH entre 8 y 9, es
• Agua destilada. selectivo para Vibrio cholerae.

Caldo tripticasa-soja • Tripticasa. • Uso general.

• Soja. • Puede añadirse agar para
• Agua destilada. transformarlo en medio sólido
(agar tripticasa-soja).

Caldo común • Extracto de sangre. • Uso general.

• Peptona. • Puede añadirse agar para
• Cloruro sódico. transformarlo en medio
• Agua destilada. sólido.

2.1.2. Medios sólidos.

En su composición contiene elementos solidificantes, agar principalmente. El
crecimiento y la multiplicación bacteriana se observa mediante la formación de colonias,
las cuales pueden ser cuantificadas. Se utiliza placa Petri o tubo inclinado.
Este medio se utiliza cuando:
● Es necesario observar la morfología de las colonias.
● Realizar el aislamiento, recuento e identificación.
● Pruebas bioquímicas, en las que se quiere poner en evidencia algún proceso
metabólico del microorganismo.
● Mantenimiento de cepas.

Los más utilizados son el agar nutritivo, el agar sangre y el agar chocolate.

¿SABÍAS QUÉ?
Por norma general, una célula viable puede dar lugar a una colonia a través de la
replicación, en la cual puede haber decenas de millones de células
descendientes. La cuantificación de microorganismos se mide por Unidades
Formadoras de Colonias (UFC), lo cual indica la cantidad de microorganismos
vivos en una muestra líquida o sólida. Se miden en unidades de volumen
(UFC/ml) o masa (UFC/g).

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Además de los medios líquidos y sólidos, se puede usar medios semisólidos, con una
consistencia intermedia entre ambos. Estos son útiles para apreciar la movilidad de los
microorganismos.

2.2. Según su función

2.2.1. Medios básicos o generales

También llamados medios no selectivos. Contienen una cantidad mínima de
sustancias nutritivas que permite el crecimiento bacteriano. Deben tener un pH y
una osmolaridad adecuada para la reproducción bacteriana.
Estos medios se utilizan para cultivar bacterias no exigentes y para preparar otros
medios de cultivo. Poseen peptona, extracto de carne, cloruro sódico (sal) y agua.

2.2.2. Medios enriquecidos

Medios básicos a los que se adiciona sangre o factores como vitaminas que permiten
el crecimiento de bacterias exigentes como los estreptococos, neumococos y otros
microorganismos.
Este tipo de medios se utiliza para favorecer el desarrollo de un patógeno bacteriano
determinado, a partir de una mezcla de microorganismos mediante el uso de
especificidad de nutriente. Es necesario utilizarlo en ocasiones porque las bacterias
en pequeña cantidad pueden no detectarse, en especial si hay otras bacterias
presentes en cantidades mucho mayores; está destinado a aumentar las cantidades
muy pequeñas del microorganismo deseado hasta niveles detectables.
En microbiología clínica es muy frecuente usar como medio sólido para aislar
variedad de patógenos nutritivamente exigentes el agar-sangre. Se obtiene
mediante la adición de un 5 a un 10% de sangre desfibrinada de un animal (cordero
generalmente) a una base nutritiva compleja y factores de crecimiento. La sangre
debe adicionarse al medio estéril y tibio (45-60ºC) antes de ser vertido a la placa de
cultivo. Como su nombre indica, presentan el color propio de la sangre. En cambio,
cuando el agar- sangre se calienta a unos 80º C durante 15 minutos, el color cambia
de rojo a marrón oscuro (sangre cocida), denominándose agar-chocolate, también
muy utilizado (ver imagen 2).

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Imagen 2: Agar-sangre (izquierda) y agar-chocolate (derecha). Fuentes:

https://www.labmedibac.com.ec/agar-sangre-de-cordero-medio-de-cultivo-agar-sangre-de-
cordero/ y https://www.labmedibac.com.ec/agar-chocolate-suplementado

2.2.3. Medios selectivos

Permiten el desarrollo de las bacterias que se quieren aislar inhibiendo al resto
existente que pueda contener la muestra. El medio más básico contiene sustancias
de tipo inhibidoras (como antibióticos o aumento/reducción del pH). El tipo de
medio que vaya a elegirse dependerá del tipo de muestra y de las características que
posea el grupo de bacterias que contenga. Por ejemplo, el agar McConkey contiene
sales biliares y cristal de violeta en su composición, que inhibe el crecimiento de
bacterias Gram positivas. Otro ejemplo sería el caldo de selenito para el crecimiento
de Salmonella o Shigella.
Igualmente, podemos incluir aquí los medios anaerobios. Se trata de medios
empleados para el crecimiento de bacterias que no necesitan oxígeno. Para eliminar
este gas, el medio de cultivo se calienta y se recubre con agar solidificado con
vaselina o con parafina, para evitar así que el oxígeno se expanda. Algunos medios
utilizados para este fin son el agar Schaedler o el agar Gardnerella.

¡ATENCIÓN!

Puede que veas otro tipo de medio, el medio de enriquecimiento. No es lo mismo

un medio enriquecido que un medio de enriquecimiento, ya que este último reduce
el crecimiento de bacterias comensales o no deseadas, mientras que el medio
enriquecido se utiliza para cultivar bacterias exigentes nutricionalmente.

Hay que saber distinguir también el medio de enriquecimiento del medio selectivo,
ya que el medio selectivo inhibe el crecimiento de los microorganismos que no son
de interés, y el de enriquecimiento no llegan a inhibir totalmente el crecimiento de
los demás.

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2.2.4. Medios diferenciales

En estos medios se diferencian rápidamente el tipo de bacterias de las que se trata
debido a que forman colonias típicas.
Podríamos encasillar aquí también al agar MacConkey para distinguir
enterobacterias. Este medio nos permite distinguir colonias de bacterias
fermentadoras de lactosa. Las lactosa positivas se verán de color rosa, mientras que
las lactosa negativas serán incoloras (ver imagen 3). Además, este medio inhibe el
crecimiento de las bacterias Gram positivas debido a que en su composición posee
sales biliares y cristal de violeta.
Otra variante del medio MacConkey es con sorbitol en lugar de lactosa, lo cual nos
sirve para distinguir cepas enteropatogénicas y enterohemorrágicas de E. coli.
Otros ejemplos pueden ser el medio Agar Manitol Salado (MSA) de Champan, para
estafilococos; o el agar de Hektoen, para distinguir Shigella (colonias incoloras) y
Salmonella (colonias negras). Puedes visualizar la diferencia de los dos últimos géneros
en la imagen 4.

Imagen 3: Medio MacConkey. Bacterias lactosa

negativo (A) y lactosa positivo (B). Fuente:
http://bacteriasactuaciencia.blogspot.com/2020/12
/resultados-practica-infecciones-del.html

¿SABÍAS QUÉ?

En ocasiones se combinan las características selectivas y diferenciales en un único

medio. Por ejemplo: el MSA es un medio con alto contenido de sal y que también
contiene un indicador de pH. Este cambia el color si se produce la fermentación del
manitol en el medio, acidificándolo. Este medio también es selectivo para bacterias
halófilas o halófilas facultativas, como el género Staphylococcus e inhibe el
crecimiento de aquellas bacterias incapaces de soportar la presión osmótica.

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Imagen 4: Medio agar de Hektoen. Shigella sp. (izquierda) y Salmonella sp. (derecha).
Fuente: http://www.medical-labs.net/hektoen-enteric-agar-2204/

Los medios de cultivo según su función son los que acabamos de mencionar. No
obstante, podemos hablar de otro tipo de medios para otras funcionalidades,
aunque es necesario recalcar que pueden ser igualmente clasificados en alguno de
los anteriormente explicados. Dicho esto, podemos hablar de los medios de
sensibilidad o los medios de transporte. Los medios de sensibilidad se conocen como
antibiogramas. Se utilizan cuando se quiere obtener una sensibilidad o resistencia
concreta de un microorganismo.

IMPORTANTE
Un antibiograma evalúa la respuesta in vitro de un microorganismo a uno o varios
antimicrobianos, sirviendo, en primera instancia, como factor predictivo de su
eficacia.

Ejemplo de ello sería el medio Müeller-Hinton, el cual se utiliza para realizar la

prueba de susceptibilidad a antibióticos (ver imagen 5). Al no tener una
concentración muy elevada de agar, permite la difusión de los antimicrobianos con
facilidad.

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Imagen 5: Placa de Müeller-Hinton con parches con

antibióticos. Fuente:
http://www.publicdomainfiles.com/show_file.php?id=135
31966211715

En cuanto a los medios de transporte, se utilizan para enviar la muestra al

laboratorio tras realizar la toma y es necesario asegurar que el microorganismo llega
vivo. Solo contienen buffers y sal, sin compuestos nutritivos para evitar su
proliferación. Se utilizan el agar Sturart para gonococos, o el agar Amies para V.
cholerae (viable durante 70 días), entre otros.

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3. Preparación de medios de cultivo

En la actualidad, lo más común es que los medios de cultivo se compren listos para su
uso o que se encuentren ya formulados, es decir, listos para dispensar en placas o tubos.
No obstante, es importante conocer el proceso de preparación puesto que en ciertas
ocasiones puede surgir la necesidad de prepararlos.
Para ello es necesario seguir el protocolo que adjunta la casa comercial y tener en cuenta
que tipo de medio se desea conseguir: medio sólido, líquido o semisólido.
Los materiales necesarios serán recipientes de vidrio estériles, agitador magnético,
balanza de precisión (puesto que las cantidades son pequeñas) y agua destilada.
En cuanto al procedimiento, se pueden realizar los siguientes pasos (ver imagen 6):
1. Pesar la cantidad del producto, preferiblemente de manera exacta, aunque no
pasa nada si la diferencia es pequeña (decigramos).

2. Medir la cantidad de agua necesaria en un recipiente estéril de vidrio.

Seguidamente se coloca sobre una placa calefactora y se introduce un agitador
magnético, de esta forma la disolución está en constante movimiento y no llega
a alcanzar la ebullición.

3. Pasado el tiempo sugerido por la casa comercial, se mide el pH. Hay que tener
en cuenta que el pH suele disminuir en una unidad tras meterlo en el autoclave
(siguiente paso).

4. Introducir el recipiente en el autoclave, tapando el orificio de salida con un

algodón y quitando el agitador magnético. La regla general es que para 500 ml
de disolución se programen 15 minutos a una temperatura de 1210. Si el volumen
es mayor se puede aumentar el tiempo hasta 30 minutos.

En algunos casos, el preparado no admite autoclavado debido a la inestabilidad

de sus componentes, por lo que es necesario esterilizarlos por el método de
filtrado.

5. Tras sacar el recipiente del autoclave y la temperatura sea de 450

aproximadamente, se añaden las sustancias enriquecedoras necesarias y se
distribuye entre las placas, aproximadamente 4 mm de grosor, para obtener un
medio de cultivo sólido.

6. Las placas se deben dejar enfriar dejándolas semiabiertas. Una vez atemperado,
se invierten y se guardan en nevera.

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Imagen 6: Flujo de trabajo para preparar un medio de cultivo. Fuente: Elaboración propia.

VÍDEO RECOMENDADO:
Preparación de medios de cultivo:
https://www.youtube.com/watch?v=YGoPu0cn9ms

Los materiales y el procedimiento son comunes a los diferentes estados en los que
podemos conseguir un medio de cultivo, salvo algunas particularidades:

• Para obtener medio líquido, el preparado no debe de contener agar, puesto que
es la sustancia que produce que el medio se gelifique pasando a estado sólido.
Se esterilizan en el recipiente definitivo, donde se vaya a producir la
correspondiente siembra.

• Para obtener medio semisólido o también conocido como agar inclinado, el

preparado debe contener una cantidad menor de agar en comparación al medio
sólido. Para conseguir la característica principal de este medio, la inclinación, es
necesario apoyar los tubos en una gradilla consiguiendo cierta inclinación (ver

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imagen 7). De esta manera, cuando solidifique obtendrá la forma deseada.

Asimismo, el líquido del medio no debe ocupar más de un tercio del tubo.

• Para obtener medio sólido utilizaremos agar o gelatina y se vierte en una placa
Petri, extremando las condiciones de esterilidad para evitar una contaminación
indeseada.

INFORMACIÓN ADICIONAL:

Las placas Petri fueron inventadas por el bacteriólogo alemán

Julius Richard Petri y gracias a ellas se pudieron aislar los
microorganismos que provocaban enfermedades en el siglo
XIX, como el cólera o la difteria, encontrando posteriormente
su cura.

Para más información al respecto consulta el siguiente enlace:

https://www.historiadelamedicina.org/petri.html

Imagen 7: Proceso de semisolidificación en tubo de agar inclinado. Fuente:

https://fiestadelosmicroorganismos.wordpress.com/2016/12/14/practica-4-preparacion-de-medios-de-
cultivo/

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4. Medios de cultivo utilizados habitualmente en un laboratorio

de microbiología

En el laboratorio de microbiología se trabajan diferentes tipos de muestras, quedando

organizadas por secciones: epidemiología, respiratorio, antibióticos, exudados,
genitourinario, coprocultivo y hemocultivo. Debido a esta clasificación, cada sección
utiliza medios de cultivo concretos.
A continuación, encontramos los medios de cultivo sólidos más utilizados:

• Agar sangre: medio enriquecido de uso general. Permite el crecimiento de

cualquier tipo de microorganismos y detecta los hemolíticos. La sangre que
contiene permite poner de manifiesto reacciones hemolíticas de algunas
bacterias. Podemos observar tres tipos de hemólisis (ver imagen 8):
- β-hemólisis: desaparición completa de todos los hematíes de la zona
que rodea la colonia. El microorganismo es capaz de lisar el eritrocito e
hidrolizar la hemoglobina, por lo que aparece un halo transparente
alrededor de las colonias.
- α-hemólisis: parcial, la zona que rodea la colonia adquiere un tono
verdoso. El microrganismo rompe el eritrocito pero no es capaz de
hidrolizar la hemoglobina, que se deposita en el medio de cultivo.
- γ-hemólisis: hace referencia a la ausencia de hemólisis.
Se cultiva en estufa convencional (370 C).

Imagen 8: Tipos de hemolisis en agar sangre. Fuente:

https://mykindofscience.com/2015/10/30/the-lab-chronicles-my-
experience-in-the-microbiology-lab-week-4/

• Agar chocolate: Uso general, es igual que el agar sangre, pero los glóbulos rojos
se le añaden cuando el agar esta todavía muy caliente, tal y como se ha explicado
anteriormente. Consecuencia de la rotura de los eritrocitos, el medio presenta
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factor X y factor V que permiten el crecimiento de microorganismos exigentes

que no crecen en agar sangre como el género Haemophilus. Se utiliza una estufa
de CO2 (370 C).

• Agar McConkey: como ya se ha explicado, se usa para aislamiento y

diferenciación de enterobacterias fermentadores (de lactosa, principalmente).
Ideal para muestras respiratorias y exudados. Se utiliza una estufa convencional
para su cultivo (370 C).

• Agar Columbia (CNA): medio de uso general. Se utiliza para microorganismos

Gram positivos, exigentes o no exigentes. Es común usarlo como medio selectivo
para estreptococos y neumococos, adicionando antibióticos (inhibiendo así a
enterobacterias y pseudomonas). También se puede añadir sangre, factores de
crecimiento o agentes selectivos para preparar otros medios como el agar sangre
o agar chocolate. Por lo tanto, sirve como base de siembra inicial (no sirve para
cultivar orina).
● Agar Sabouraud: medio selectivo para el cultivo y crecimiento de hongos, debido
a que posee una alta concentración de glucosa, aspecto que dificulta el
crecimiento de bacterias. Además, puede contener antibióticos de amplio
espectro para inhibir el crecimiento bacteriano, denominándose en ese caso con
el nombre del antibiótico (Ej: Saboraud-Cloranfenicol o Saboraud-Penicilina). Se
utiliza una estufa especial (300 C). Es ideal para estudio epidemiológico,
respiratorio, exudados y genitourinario.
● Agar Müeller Hinton: Uso para sensibilidad antibiótica de bacterias aerobias y
anaerobias facultativas de crecimiento rápido. Se cultivan en estufa
convencional (370 C).
● Agar MSA: con sal como agente selectivo resulta un medio ideal para
estafilococos ya que resisten las grandes presiones osmóticas. Este medio fue
diseñado para correlacionarse con la prueba de la coagulasa. Los estafilococos
coagulasa positivos son capaces de utilizar el manitol variando el pH del medio.
De esta forma, el color cambia de rojo/rosa a amarillo (gracias a la acción del rojo
fenol).

¿SABÍAS QUÉ?

El rojo fenol es un indicador del pH. Es de color rojo a pH básico y de color amarillo a
pH ácido. Se incorpora a diversos medios de cultivo, destacando el manitol salado y
se utiliza para confirmar la prueba de coagulasa.

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Imagen 8: Tipos de hemolisis en agar sangre. Fuente:

https://www.researchgate.net/figure/Staphylococci-on-Mannitol-Salt-Agar-MSA_fig2_290911856

• Agar Granada: medio selectivo diferencial para estreptococos del grupo B.

Permite la detección e identificación rápida y fácil de Streptococcus agalactiae
en muestras clínicas. Aparece de color anaranjado (ver imagen 9) y su incubación
es más efectiva en anaerobiosis.

Imagen 9: Streptococcus agalactiae en medio agar Granada. Fuente:

https://www.lifeder.com/streptococcus-agalactiae/

● Agar BHI: su nombre proviene de Brain Heart Infusion (infusión de cerebro y

corazón). Se trata de un medio complejo no selectivo para el crecimiento de una
amplia gama de microorganismos. También puede presentarse en medio líquido
como caldo BHI.
● Caldo Tioglicolato (TG): para identificación de microorganismos anaerobios. La
presencia de agar en pequeña proporción retarda la difusión del oxígeno en el
medio y la presencia de Tioglicolato Sódico ayuda a la eliminación del oxígeno
libre, favoreciendo el crecimiento de los microorganismos anaerobios. Los
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microorganismos estrictos aerobios pueden crecer en la parte superior del tubo

y los anaerobios crecen en la profundidad del medio.
Ideal para muestras de LCR y exudados. Con estufa convencional (370 C).

• Caldo de selenito: para el estudio de Salmonella. Es un medio muy tóxico, pero

en su presencia estos microorganismos pueden multiplicarse, a diferencias de
muchas otras bacterias. Las salmonelas reducen este compuesto a Selenio
elemental, que es insoluble en agua y se acumula en forma de gotículas esféricas,
dando lugar a un color rojo en el entorno del crecimiento de sus colonias.
También sirve para algunas especies de Shigella, en muestras de heces y
muestras que contengan flora mixta.

Se han explicado algunos de los medios de cultivo más comunes, pero existen muchos
otros. Algunos ejemplos más son el caldo de Tetrationato (para salmonelas), agar
inclinado Mycosel (Saboureaud con actidiona, para hongos dermatófitos), caldo Roiron
(para Trichomonas vaginalis), agar CLED (para patógenos en orina), agar Digalsky (para
enterobacterias y otros Gram negativos) o agares cromogénicos.

¿SABÍAS QUÉ?

Existen componentes delicados de los medios que no pueden resistir la esterilización

por vapor en autoclave (por ejemplo, suero, ciertas soluciones de hidratos de carbono,
ciertos antibióticos y otras sustancias termolábiles) pueden esterilizarse por filtración
con membranas. Las soluciones pasan a través de filtros de membrana que contienen
poros cuyo tamaño oscila entre 0,2 y 0,45 µm de diámetro; éstos no eliminan los virus,
pero eliminan de manera eficaz la mayoría de los contaminantes bacterianos y
micóticos.

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IDEAS CLAVE DE LA UNIDAD

Para garantizar el crecimiento y la reproducción de los microorganismos es necesario

conocer los diferentes tipos de medios de cultivos existentes y sus utilidades.
➢ Existen diferentes medios con diferentes cualidades, los cuales se destinan con
un fin específico según el objetivo que se quiere alcanzar, puesto que no es lo
mismo utilizar un medio de cultivo general que uno que esté enriquecido.
➢ Por normal general, los medios de cultivo presentan una o varias fuentes de
energía (principalmente carbono, el nitrógeno y el azufre) y una base mineral
(potasio, magnesio, fósforo, calcio, etc).
➢ Según el objetivo del medio de cultivo se le pueden adicionar ciertos
componentes, como extractos de carne o levadura, peptonas, sueros, agua
destilada, agar, agentes reductores y buffers, entre otros.
➢ Dependiendo de su estado físico existen medios líquidos, sólidos y semisólidos.
➢ Atendiendo a su función hay distintos tipos de medios: generales (no selectivos),
selectivos, enriquecidos, diferenciales, de enriquecimiento, de sensibilidad o
transporte.
➢ El agar sangre y el agar chocolate son similares, salvo porque el agar chocolate
es derivado del calentamiento del agar sangre (80ºC 15 minutos), lo cual le
otorga otras propiedades.
➢ El agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial para enterobacterias.
➢ El medio agar de Hektoen nos permite distinguir Shigella y Salmonella,
dependiendo si las colonias son trasparentes o negras, respectivamente.
➢ El agar Schaedler o el agar Gardnerella son medios anaerobios.
➢ El medio Müeller-Hinton se utiliza para realizar la prueba de susceptibilidad a
antibióticos.
➢ EL agar Sabouraud es un medio selectivo para el cultivo y crecimiento de hongos
y levaduras, inhibiendo el crecimiento bacteriano.
➢ El agar MSA contiene sal como agente selectivo para estafilococos.
➢ El medio BHI puedes presentarse en formato sólido o líquido, y es un medio
básico muy nutritivo.
➢ El caldo TG es útil para identificar microorganismos Gram negativos anaerobios.
➢ La toxicidad del caldo de Selenito es imprescindible para el crecimiento de
Salmonella.
Un técnico de laboratorio debe poseer unas nociones básicas sobre el modo de
preparación de estos medios, puesto que, a pesar de que la mayoría se compran a las
diferentes casas comerciales, en ocasiones se presenta la necesidad de preparar medios
de cultivo concretos, que también nos pueden servir en caso de no quedar existencias
para sustituir a otros de características muy similares.

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BIBLIOGRAFÍA

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