INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

Tema: Análisis e identificación de carbohidratos

Objetivo

Objetivo general:

Determinar los niveles de colesterol en suero sanguíneo utilizando el método CHOP-PAP.

Objetivos específicos:

1. Aplicar de forma adecuada las técnicas analíticas para la cuantificación de colesterol

sérico.
2. Identificar posibles patologías asociadas a alteraciones en las concentraciones de
colesterol, mediante la interpretación de los resultados obtenidos.

Reactivos y Materiales

• Tubos de ensayo

• Gradillas para tubos de ensayo

• Baño María

• Galletas Salada

• Reactivo de Benedict

• Solución Glucosa 3%

• Solución Fructosa 5%

• Solución Sacarosa 5%

• Solución Lactosa 3%

• Solución Maltosa 3%

• Reactivo Fehling A, B

Marco teórico

El colesterol es un lípido esteroide de naturaleza anfifílica, indispensable para la vida de los

organismos aeróbicos. Forma parte estructural de las membranas celulares, modulando su

fluidez y permeabilidad. Además, es precursor en la síntesis del grupo de hormonas

esteroideas como los glucocorticoides, mineralocorticoides, estrógenos y andrógenos, así

como de la vitamina D y los ácidos biliares necesarios para la digestión de grasas.

El colesterol no puede disolverse en sangre, por lo que es transportado unido a

lipoproteínas como LDL, HDL y VLDL. Un exceso del colesterol circulante, especialmente la

fracción LDL, puede depositarse en las paredes arteriales en forma de placas de ateroma,

incrementando el riesgo de enfermedades cardiovasculares obstructivas como cardiopatía

isquémica, infarto agudo de miocardio, accidente cerebrovascular y enfermedad vascular

periférica.

El hipercolesterolemia como factor de riesgo coronario puede deberse a múltiples causas,

incluyendo predisposición genética, dieta rica en ácidos grasos saturados y colesterol,

sedentarismo, obesidad, consumo de alcohol y tabaco, alteraciones endocrinas como

hipotiroidismo o diabetes mellitus, insuficiencia renal crónica, hepatopatías, síndrome

nefrótico, paraproteinemias, retención de lipoproteínas por fármacos, entre muchos otros.

Los métodos enzimáticos colorimétricos, como el ensayo CHOD-PAP (colesterol oxidasa-

peroxidasa-4-aminofenazona), permiten cuantificar de forma rápida y específica la

concentración de colesterol total en sangre, con fines de diagnóstico bioquímico y para la

evaluación del riesgo coronario en pacientes adultos.

El fundamento del método CHOD-PAP se basa en la transformación enzimática del colesterol.

En una primera reacción catalizada por la enzima colesterol esterasa, el colesterol es hidrolizado

liberando colesterol libre y ácidos grasos. Luego, en presencia de colesterol oxidasa, el colesterol

es oxidado específicamente para formar colestenona y peróxido de hidrógeno. Finalmente, el

peróxido de hidrógeno generado reacciona con la 4-aminofenazona y el fenol, en una reacción

catalizada por la enzima peroxidasa, para formar una quinonaimina coloreada cuya absorbancia

a 500 nm es proporcional a la concentración de colesterol y puede ser detectada mediante

espectrofotometría.
Ilustración 1. Reacciones del método enzimático CHOD-PAP para la determinación cuantitativa de colesterol.

Para llevar a cabo este análisis enzimático, se requiere obtener una muestra de suero

sanguíneo del paciente, idealmente extraída en ayunas de 10-12 horas para evitar interferencias

por quilomicrones, y separada de las células sanguíneas mediante centrifugación para analizar

exclusivamente la fracción sérica.

Si bien la técnica CHOD-PAP presenta una elevada especificidad hacia el colesterol, existen

algunas posibles interferencias analíticas por parte de sustancias como la bilirrubina, el ácido

ascórbico, la hemoglobina y otros compuestos, que deben ser tenidas en cuenta. Es necesario

implementar tanto controles internos de calidad como la participación en programas de

evaluación externa para verificar la exactitud y precisión del procedimiento.

Los valores de referencia de colesterol sérico total permiten clasificar el riesgo cardiovascular

según sea normal (<200 mg/dL), limítrofe (200-239 mg/dL), moderado (240-300 mg/dL) o alto

(>300 mg/dL). La rigurosa interpretación de los resultados de cada paciente, su correlación con

datos clínicos y antecedentes, así como el seguimiento de las tendencias, posibilita orientar

adecuadamente el diagnóstico y tratamiento oportuno de dislipidemias primarias o secundarias,

aterosclerosis u otras afecciones caracterizadas por presentar alteración en los niveles de

colesterolemia.
Gráfico

Procedimiento
Obtención y preparación de la muestra

• Extraer una muestra de sangre del paciente utilizando una jeringa de 3 ml.
• Dejar reposar la muestra a temperatura ambiente durante 15 minutos o en un baño
maría a 37°C durante 10 minutos. Esto permite la formación del coágulo.
• Centrifugar la muestra durante 5 minutos para separar el suero sanguíneo del coágulo.
Preparación de reactivos

• Preparar el blanco, estándar y muestra de la siguiente manera:

Blanco Estándar Muestra
Estándar ---- 10μl ---
Muestra ---- --- 10μl
Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml
Incubación

• Incubar los tubos de blanco, estándar y muestra a 37°C durante 5 minutos. Esto permite
la reacción.
Medición
• Dejar enfriar los tubos a temperatura ambiente durante 5 minutos.
• Leer la absorbancia de las muestras en un espectrofotómetro a una longitud de onda
de 500 nm.

Cálculos y Resultados:

Cálculo de la concentración de colesterol

A fin de obtener los cálculos de la práctica, se realizó con la siguiente formula

𝐴 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑚𝑔
𝐶= × 𝐶 𝐸𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 [ 𝑑𝑙 ]
𝐴 𝐸𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
 0.212
𝐶= × 200
0.199

𝐶 = 213.065 𝑚𝑔/𝑑𝑙
Ahora bien, se determina la siguiente tabla que facilita la interpretación clínica del paciente

Sospechoso: sobre 220 mg/dl ó 5,7 mmol/l

Elevado: sobre 260 mg/dl ó 6,7 mmol/l

Observaciones:

Tras desarrollar los análisis de colesterol

Integrantes

Guanoluisa Acero María Rashel

Lemache Maigualema Erick Alexander

Telenchana Medranda Jennifer Andrea

Yaucán Buñay Claudio Fredy

Fecha: 10/11/2023
Bibliografía

1. Plaza-Díaz J, Augustín OM, Hernández ÁG. Los alimentos como fuente de mono y

disacáridos: aspectos bioquímicos y metabólicos. Nutrición Hospitalaria [Internet].

2013 [cited 2023 Nov 19];28(4):5–16. Available from:

https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=309227005002

2. RenyLab. Reactivo de Benedict [Internet]. es.renylab. 2016 [cited 2023 Nov 19].

Available from: https://es.renylab.ind.br/wp-content/uploads/2018/05/Reactivo-de-

Benedict.pdf

3. Lorén JM de J. Reactivo Fehling|epónimos científicos|Universidad CEU Cardenal

Herrera [Internet]. Epónimos Científicos | Universidad CEU Cardenal Herrera. 2011

[cited 2023 Nov 19]. Available from: https://blog.uchceu.es/eponimos-

cientificos/reactivo-de-fehling/
4. Quora [Internet]. [citado 19 de noviembre de 2023]. ¿Por qué no todos los azúcares

tienen sabor dulce? Disponible en: https://es.quora.com/Por-qué-no-todos-los-

azúcares-tienen-sabor-dulce

5. Isomería [Internet]. [citado 19 de noviembre de 2023]. Disponible en:

https://formafarmabcn.com/wp-content/uploads/2021/02/tema-5-ismoeria.pdf

6. Scribd [Internet]. [citado 19 de noviembre de 2023]. Isomeria Optica Quimica | PDF |

Chiralidad (Química) | Isómero. Disponible en:

https://es.scribd.com/presentation/532849483/isomeria-optica-quimica