PRACTICAS DE

BIOQUÍMICA Ii
DETERMINACIÓN DE
COLESTEROL EN
SANGRE
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
TOTAL EN SANGRE
Significación Clínica.-
 La determinación de colesterol en forma aislada tiene
utilidad diagnóstica limitada. Se ha visto que es colesterol es
uno de los factores contribuyentes a la formación de
ateromas dado que las complicaciones arterioscleróticas
prevalecen en individuos hipercolesterolémicos.
 Estudios epidemiológicos demuestran que el riesgo de
contraer enfermedad cardiaca coronaria para individuos de
más de 40 años con colesterolemia menor a 210 mg/dl es
tres veces menor que entre individuos con más de 230
mg/dl y seis veces menor que entre individuos con más de
260 mg/dl.
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
TOTAL EN SANGRE
Objetivo: Cuantificar el colesterol total presente en la
sangre.

Marco Teórico: Investigue sobre:

 Síntesis y Funciones del Colesterol.
Valores referenciales: Alteraciones: Diagnóstico y significación
clínica
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
TOTAL EN SANGRE

Fundamento.-
El colesterol es oxidado enzimáticamente por la acción de la
enzima colesterol oxidasa, previa hidrólisis enzimática de los
ésteres mediante una lipasa de origen fúngico. El agua
oxigenada generada en la oxidación, produce la combinación
oxidativa del fenol con la 4-amino-fenazona (4-AF) mediante
una reacción catalizada por la enzima peroxidasa. El
producto es una quinonimina roja cuya intensidad de color
está asociada a la cantidad de colesterol presente en la
muestra y que puede ser leído a una longitud de onda de
505 nm.
 DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
TOTAL EN SANGRE

LIPASA
ESTERES DE COLESTEROL  COLESTEROL + ACIDOS GRASOS

CHOD
COLESTEROL + 02  COLESTEN 3 – ONA H2O2

POD
H2O2 + 4– AMINO FENAZONA + FENOL  QUINONA COLOREADA + H2O
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
TOTAL EN SANGRE
Materiales y Reactivos.-
 Kit de reactivos “Colesterol” para determinación de
colesterol en suero (método enzimático).
 Espectrofotómetro.
 Baño de agua a 37ºC
 Tubos de ensayo 150 x 16
 Gradilla
 Pipetas automáticas y puntas descartables.
 Material biológico: muestras de suero sanguíneo.

Nota: Los sueros con hemólisis visible o intensa produce valores

produce valores falsamente aumentados por lo que no deben
ser usados.
En caso de utilizarse plasma como muestra se recomienda
únicamente el uso de heparina como anticoagulante. Otros
anticoagulantes comunes interfieren en la determinación
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
TOTAL EN SANGRE
Procedimiento.-
1. Preparar el reactivo de trabajo de acuerdo a las instrucciones del
Kit. Rotular y fechar.
Nota: El reactivo de trabajo es estable durante un mes a partir de su preparación,
mantenido en refrigeración (2 – 10ºC) y envasado en frasco color ámbar.
2. Homogenizar la muestra antes de usar.
3. Utilizar tres tubos perfectamente limpios e identificarlos como B
(blanco), S (estándar) y M (muestra)
4. Agregar a los tubos lo indicado en la tabla:
Tubo de Ensayo

B S M

Estándar - 10 ml -

Muestra - - 10 ml

Reactivo de trabajo 1 ml 1 ml 1 ml
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
TOTAL EN SANGRE
Procedimiento.-

4. Mezclar bien e incubar por 5 minutos en baño de agua

a 37ºC.
5. Retirar del baño y dejar que tome la temperatura
ambiente.
6. Leer en espectrofotómetro a 505 nm de longitud de
onda, llevando el equipo a cero con el blanco.

Nota: El color de la reacción final es estable durante una

hora, por lo tanto, las lecturas de absorbancia deben
realizarse dentro de ese lapso.
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
TOTAL EN SANGRE
Valores referenciales.- (*)
Deseable: menor a 200 mg/dl
Moderadamente elevado: 200 – 239 mg/dl
Elevado: igual o mayor a 240 mg/dl

(*) valores establecidos por el panel de expertos del Nacional

Colesterol Education Program (NCEP)

Observaciones.-
 Reporte todas las observaciones obtenidas durante la práctica.
 Incluya gráficos o fotografías de los aspectos que considere
relevante resaltar.

Conclusiones.-
Establezca las conclusiones a partir del objetivo planteado, las
observaciones y los resultados obtenidos durante la práctica
 DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
TOTAL EN SANGRE
Resultados.-
Registre en una tabla de datos, las lecturas obtenidas y calcule la
concentración de colesterol en la muestra de la siguiente
manera:

Corregir las lecturas con el blanco de reactivos y utilizar las

lecturas corregidas para los cálculos.

COLESTEROL mg/dl = DOm x F

F (factor) = Concentración Std

DOS

Conc Std = 200 mg/dl