UNIDAD DE CIENCIAS BÁSICAS

ASIGNATURA DE BIOQUÍMICA

GUÍA DE PRÁCTICAS

SEGUNDO AÑO

PRACTICA 8. DETERMINACION DE
TRIGLICÉRIDOS Y COLESTEROL TOTAL EN
PLASMA
SESIÓN 8. DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS Y COLESTEROL
TOTAL EN PLASMA

1. INTRODUCCIÓN.

Los triglicéridos son compuestos de naturaleza lipídica que normalmente se ingiere

en la dieta. Aproximadamente el 90% de la grasa dietaría corresponde a los
triglicéridos y el 10% restante a colesterol, fosfolípidos, glucolípidos, etc. El ser
humano tiene la capacidad de sintetizar triglicéridos, proceso que se realiza en el
hígado principalmente a partir de carbohidratos, mientras que en el tejido adiposo
los triglicéridos se sintetizan a partir de los triglicéridos que son conducidos por los
quilomicrones y VLDL. En el suero los triglicéridos endógenos (sintetizados en el
hígado) son transportados principalmente por los VLDL. La importancia de la
determinación de los niveles de triglicéridos en el plasma radica en que estos
compuestos están vinculados con diversas patologías como: hipotiroidismo,
nefrosis, diabetes mellitus, obesidad, dislipidemias, etc.

El colesterol es un metabolito que se encuentra presente en los tejidos y en el

plasma, ya sea como colesterol libre o unido a un ácido graso de cadena larga como
éster de colesterol, que constituye la forma de almacenamiento. En el plasma,
ambas formas se transportan en lipoproteínas. Se sintetiza en muchos tejidos a
partir de la acetil-CoA, siendo el precursor de todos los otros esteroides en el
organismo, incluso corticosteroides, hormonas sexuales, ácidos biliares y vitamina
D. El colesterol es sintetizado por el ser humano y también procede de la dieta. La
fuente de colesterol en la dieta lo constituyen alimentos de origen animal. Es uno de
los factores en la génesis de aterosclerosis, que ulteriormente podría ocasionar
patologías como: enfermedad cerebrovascular, enfermedad coronaria y
enfermedad vascular periférica.

La determinación de colesterol en suero es uno de los análisis más frecuentemente

utilizados como prueba auxiliar en el diagnóstico de las perturbaciones del
metabolismo lipídico.
2. OBJETIVO.

Determinar la concentración de triglicéridos y colesterol total en plasma mediante

un método espectrofotométrico y compararlos con los valores de referencia.

3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO.

La determinación de triglicéridos se fundamenta en la siguiente secuencia de

reacciones enzimáticas.

Triglicéridos glicerol + ácidos grasos

Glicerol + ATP glicerol-1-fosfato + ADP

Glicerol-1-fosfato H2O2 + dihidroxiacetona fosfato

H2O2 + 4-aminofenazona quinonimina (color rojo)

La determinación de colesterol en plasma se fundamenta en la siguiente secuencia

de reacciones enzimáticas:

Ésteres de colesterol colesterol + ácidos grasos

Colesterol + O2 Colesten-3-ona + H2O2

H2O2 + 4-aminofenazona + aceptor quinonimina (color rojo)

4. EQUIPOS, MATERIALES, REACTIVOS Y MUESTRA.

4.1. EQUIPOS.

Espectrofotómetro Baño de agua

Cronometro

4.2. MATERIALES.

Tubos de vidrio 13 x 100 Gradilla

Micropipetas Tips de micropipetas

Recipiente de bioseguridad Cubetas del espectrofotómetro

4.3. REACTIVOS.

Kit para determinar triglicéridos en suero o plasma.

Contiene: Estándar: solución de glicerol 200 mg/dL.

Reactivo: solución conteniendo buffer Good (pH 6,8), clorofenol, lipoprotein lipasa
(LPL), glicerol kinasa (GK), glicerol fosfato oxidasa (GPO), peroxidasa (POD),
adenosina trifosfato (ATP) y 4-aminofenazona (4-AF).

Kit para determinar colesterol en suero o plasma.

Contiene: Estándar: solución de colesterol 200 mg/dL.

Reactivo: solución conteniendo colesterol esterasa (CHE), colesterol oxidasa

(CHOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona (4-AF) y buffer Good.
4.4. MUESTRA.

Previo ayuno de 12 a 14 horas, obtener suero o plasma mediante la centrifugación

de la muestra. En caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda
únicamente el uso de heparina como anticoagulante para su obtención. El colesterol
en suero es estable por lo menos 1 semana en refrigerador y 2 meses en
congelador. Los triglicéridos en suero son estables 3 días en refrigerador (2-10ºC).
No congelar.

5. PROCEDIMIENTOS.

Tanto para triglicéridos como colesterol el procedimiento es similar, lo que

cambia es el reactivo y estándar por utilizar.

5.1. En tres tubos de ensayo rotulados como B, ST y M, colocar:

TUBOS BLANCO ESTANDAR MUESTRA

(B) (ST) (M)
Reactivo (ml) 1.0 1.0 1.0

Estándar (ul) 0 10 0

Suero (ul) 0 0 10

5.2. Mezclar e incubar durante 5 minutos en baño de agua a 37ºC.

5.3. Retirar y colocar en una cubeta y realizar la lectura en el espectrofotómetro a

505 nm, llevando el equipo a cero con el blanco.

5.4. Anotar los resultados de absorbancia (A) de los tubos ST y M.

6. CÁLCULO DE LOS RESULTADOS.

Calcule la concentración de triglicéridos o colesterol total utilizando la siguiente

formula:

Concentración (mg/dL) = A muestra x Concentración estándar

A estándar

Ejemplo 1:

A muestra = 0.137

Concentración del estándar = 200 mg/dL

A estándar = 0.279

Triglicéridos en plasma = 0.137 x 200 / 0.279 = 98.2 mg/dL

Ejemplo 2:

A muestra = 0.237

Concentración del estándar = 200 mg/dL

A estándar = 0.379

Colesterol en plasma = 0.237 x 200 / 0.379 = 125 mg/dL

7. VALORES DE REFERENCIA.

El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee

los siguientes valores:

Para triglicéridos:
Deseable: Menor 150 mg/dL.

Moderadamente elevado: 150 – 199 mg/dL.

Elevado: 200 - 499 mg/dL.

Muy elevado: Mayor a 499 mg/dL.

Para colesterol total:

Deseable: Menor 200 mg/dL.

Moderadamente alto: 200 – 239 mg/dL.

Elevado: Mayor o igual 240 mg/dL.

Para convertir las unidades al sistema internacional, se utiliza la siguiente formula:

Triglicéridos (mg/dL) x 76.9 = Triglicéridos (mmol/L)

Colesterol (mg/dL) x 0.0258 = Colesterol (mmol/L)

8. BIBLIOGRAFIA.

Alvaro Gonzales Hernandez. Principios de bioquímica clínica y patología molecular.

3ª ed. Elsevier España. 2019. Página 165-176. En:

https://www.clinicalkey.com/student/content/toc/3-s2.0-C20180005599

Executive Summary of The Third Report of The National Cholesterol Education

Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, And Treatment of High
Blood Cholesterol In Adults (Adult Treatment Panel III). Expert Panel on Detection,
Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults. JAMA. 2001 May
16;285(19):2486-97. doi: 10.1001/jama.285.19.2486. En:

http://www.aefa.es/wp-content/uploads/2014/04/NECP-guidelines-.pdf