“Año de la universalización de la salud”

INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

BIOQUÍMICA

González Siccha Anabel

Laboratorio N°10
Ciclo III

 CUADRA MEZA LIZANDRO ALFONSO

 CONDOR RIOS ROCIO
 CHÁVEZ CRESPÍN ÁNGEL
 CHÁVEZ DE LA CRUZ PABLO
 CHUQUIPOMA VILLANUEVA DIANA
 CHÁVEZ GARCÍA JAZMIN
 COELLO BOCANEGRA ANTHONY
 CORDERO VILCA ANTHONY

TRUJILLO – PERÚ

2020
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 ÍNDICE

I. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................. 3
II. MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................................... 4
III. RESULTADOS .................................................................................................................. 6
IV. DISCUSIONES .................................................................................................................. 8
V. CONCLUSIONES ................................................................................................................. 9
VI. BIBLIOGRAFÍA.............................................................................................................. 10
VII. ANEXOS ......................................................................................................................... 11

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 DETERMINACIÓN DEL COLESTEROL SÉRICO

I. INTRODUCCIÓN

El colesterol es un esteroide de alto peso molecular que contiene una estructura

Ciclopentanofenantreno. Aunque se le considera un lípido, no sirve, como fuente de energía

para el metabolismo, el organismo no puede degradar el anillo de colesterol.

Las LDL, producto del metabolismo de las VLDL en plasma, son las encargadas del

transporte del colesterol exógeno (y en mucho menos proporción, endógeno) hacia el interior

de las células. Las Lipoproteínas LDL transportan de 65 al 75 % del colesterol plasmático.

El hipercolesterolemia está casi siempre asociado con la elevación del colesterol- LDL (tipo

IIa). Es muy raro que la elevación este asociado con incremento en el colesterol HDL.

Las elevaciones del colesterol LDL pueden ser el resultado de alteraciones monogénicas,

alteraciones poligénicas o secundario a otras enfermedades. Ejemplos: hiprcolesterolemia

familiar, defecto familiar de Apo B100, hipercolesterolemia poligénica, cáncer de cabeza de

páncreas, diabetes, hipotiroidismo, síndrome nefrótico, etc.

Las HDL, sintetizadas en el hígado, remueven el colesterol no utilizado por las células

(dentro de ciertos límites de concentración), transportándolo hacia el hígado para su

degradación.

El colesterol de la dieta se absorbe parcialmente y también se sintetiza en el hígado y otros

tejidos. En el hombre, el intestino es la fuente principal del colesterol del plasma, en éste se

encuentra en forma libre o combinada con ácidos grasos, en la forma de ésteres del

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colesterol 75 %, ambos en asociación con lipoproteínas. Los tejidos extrahepáticos

sintetizan su propio colesterol, pero hay un equilibrio importante entre el colesterol del

plasma y el de los tejidos en el ser humano. El colesterol se excreta a la bilis como tal o tras

su transformación en sales biliares primarias y secundarias.

En el hombre el colesterol plasmático total es de 150 -250 mg. por 100 ml., elevándose con

la edad. Las concentraciones elevadas de colesterol-LDL se asocian con un riesgo creciente

de ateroesclerosis y enfermedad de las arterias coronarias, de diabetes mellitus, en

enfermedades obstructivas del árbol biliar, en el hipotiroidismo.

Hay hipocolesterolemia en: desnutrición, esteatorrea idiopática, hepatitis, hipertiroidismo,

infecciones agudas, anemia, cáncer, malabsorción y anorexia nerviosa.

OBJETIVOS

- El objetivo es determinar el colesterol sérico en sujetos aparentemente normales.

II. MATERIALES Y MÉTODOS

2.1 Materiales:

- 3 Tubos de ensayo

- Pipeta

- Gradilla

- Incubadora

- Espectrofotómetro a 505nm

2.2 Material Reactivos:

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- Standard: solución de colesterol 2 g/l.

- CHOD/POD: sol. de colesterol oxidasa (60 U/l) y peroxidasa (4000 U/l)

- Reactivo 4-AF.: sol. de 4-aminofenazona 25 mM en Buffers Tris 0.92 M.

- Reactivo Fenol: sol. de fenol 55 mmol/L.

- Reactivo de Trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo, colocar en una probeta 50

partes de agua destilada, 5 partes de Reactivo de 4-AF, 5 partes de Reactivo de Fenol y

llevar a 100 partes con agua destilada. Agregar 2 partes de CHOD/POD previamente

homogenizadas. Mezclar, Rotular y fechar.

- Mantener en refrigerador (2-10oC) y en frasco color caramelo es estable un mes a

partir de la fecha de su preparación.

2.3. Procedimiento:

 En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco), S (Standard) y P

(Problema), colocar:

Tubos B S P

Estándar o patrón - 10 ul. -

Muestra de suero/ plasma - - 10 ul.

Reactivo de trabajo 1,0 ml. 1,0 ml. 1,0 ml.

- Incubar 15 minutos en baño de agua a 37 ° C.

- Luego leer en Espectrofotómetro a 505 nm. o fotocolorímetro con filtro verde (490

–530 nm) llevando a cero con el Blanco.

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 - El color de reacción final es estable 2 horas por lo que la absorbancia debe ser

leída dentro de ese lapso.

CALCULOS: Colesterol g/l = D x f.

𝟐𝟎𝟎 𝒎𝒈/𝒅𝒍
𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝒄𝒂𝒍𝒊𝒃𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏 =
𝑳𝒆𝒄𝒕𝒖𝒓𝒂 𝒅𝒆𝒍 𝒔𝒕𝒂𝒏𝒅𝒂𝒓𝒅

VALORES NORMALES: Menores de 200 mg/ dl.

III. RESULTADOS

 Se lleva a la incubadora los tres tubos por un periodo de 5 minutos a una

temperatura de 37°C

 Se obtiene las lecturas en el espectrofotómetro.

 Pero primero se calibra el equipo con la muestra blanco a una longitud de onda de

505 nm .

 Se realiza las lecturas del estándar y de la muestra problema o desconocido.

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Se obtiene las siguientes lecturas:

𝐸𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟: 0.185 𝐴

𝑃𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎: 0.290 𝐴

Cálculo:

𝟐𝟎𝟎𝒎𝒈/𝒅𝒍
𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 =
𝑳𝒆𝒄𝒕𝒖𝒓𝒂 𝒆𝒔𝒕á𝒏𝒅𝒂𝒓

200𝑚𝑔/𝑑𝑙
=
0.185

= 1081.08

Ahora hallamos el colesterol con la siguiente fórmula:

𝑪𝒐𝒍𝒆𝒔𝒕𝒆𝒓𝒐𝒍 = 𝒑𝒓𝒐𝒃𝒍𝒆𝒎𝒂 𝒙 𝒇𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓

Problema N°1(0.290 A)

𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 = 0.290 𝑥 1081.08

= 313.5𝑚𝑔/𝑑𝑙

Sabemos.

 Valores normales de referencia: <200 mg/dl

 Valores de HIPOCOLESTEROLEMIA son <120 mg/dl

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En conclusión, podemos decir que la paciente presenta HIPERCOLESTEROLEMIA

IV. DISCUSIONES

Se considera de gran importancia el seguir los pasos descritos en el manual de prácticas, ya

que esto nos permitirá evitar cualquier error o confusión con los resultados de la prueba, y

derivado de esto nos arrojará un diagnóstico o signo erróneo acerca del estado de salud de un

paciente.

Para que la prueba de colesterol pueda ser realizada se necesita del uso aislado del suero de

la sangre, lo cual fue facilitado gracias al uso de la centrifugación como método.

Para determinar el valor de absorbancia se necesitó al espectrofotómetro, el cual arrojó el

resultado de cada uno de los tubos de prueba, con lo cual posteriormente se realizó el cálculo

con respecto a los valores preestablecidos de la absorbancia del colesterol, para de esta forma

tener un valor concreto de la concentración de colesterol en el suero obtenido de la punción

venosa.

Para obtener el valor final de la concentración de colesterol se utilizó la fórmula de referencia

para hacer este cálculo.

Por eso es importante controlar los niveles de colesterol regularmente y analizar los

resultados con

Este valor se ve influido por el estado en el que se encontraba el paciente, puesto que estaba

en ayuno, lo cual nos puede decir que se encuentra fuera de una afección referente al

colesterol, más sin embargo que debe de cuidar los niveles de este metabolito, pues si se

llegara a subestimar los valores podrían verse alterados, pudiendo llegar a tener un colesterol

en sangre elevado y tener más del doble de riesgo de una enfermedad cardiovascular del que

tendría una persona con un nivel normal de colesterol.

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En todo caso de que se presentara un paciente en ayuno con valores dentro del rango de

colesterol en sangre elevado (240 mg/dl o más) probablemente se hable de una

hipercolesteremia que es propensa a sufrir un ataque cardiaco y/o cerebral, al igual que

desarrollar síndrome metabólico u otra enfermedad relacionada

Los cálculos de colesterol en sangre presentaron variación, lo cual es atribuible

a que las concentraciones de cada tubo de ensayo no fueron exactamente iguales, lo cual

arrojó un resultado que se encontró fuera del rango de normalidad de los otros 2 tubos.

V. CONCLUSIONES

- La cantidad de colesterol en la muestra analizada fue de 313.5 mg/dl.

- El paciente presenta Hipercolesterolemia.

- Los niveles bajos de colesterol LDL y los niveles altos de colesterol HDL son

buenos para la salud del corazón.

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VI. BIBLIOGRAFÍA

 Mathews Ck, Van Holde Ke Y Ahern Kg. (2013): bioquímica. 4ta ed. Editorial mc

graw-hill. Interamericana, méxico.

 Murray Rk, Bender Da, Kennelly Pj, Dowell Vw, Weil Pa. (2012): bioquímica

ilustrada de harper. 29 avaed. Editorial mc graw hill- lange. España.

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VII. ANEXOS

Colesterol: Función biológica e implicaciones médicas

RESUMEN:

El colesterol (3-hidroxi-5,6 colesteno) es una molécula indispensable para la vida,

desempeña funciones estructurales y metabólicas que son vitales para el ser humano. Se

encuentra anclado estratégicamente en las membranas de cada célula donde modula la

fluidez, permeabilidad y en consecuencia su función.Esta regulación implica que el

contenido en colesterol de las membranas modifica la actividad de las enzimas ancladas en

ellas, así como la de algunas proteínas transportadoras y de receptores de membrana.

El colesterol presente en nuestro organismo, se obtiene principalmente de dos fuentes: De la

dieta (colesterol exógeno) y la síntesis endógena (colesterol endógeno). Prácticamente todos

los tejidos que contienen células nucleadas son capaces de sintetizar colesterol. La fracción

microsómica (retículo endoplásmico) del citosol es responsable de su síntesis.

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La tasa de síntesis de colesterol es regulada por la HMG-CoAR,11 cuya actividad es

controlada por el flujo de colesterol intestinal hacia el hígado. La acetil-CoA proporciona

todos los átomos de carbono para la síntesis del colesterol, la cual puede dividirse en cinco

etapas:

1. Síntesis de mevalonato, un compuesto de seis carbonos, a partir de acetil-CoA.

2. Formación de unidades isoprenoides por pérdida de CO2 del mevalonato.

3. Condensación de seis unidades isoprenoides para formar el intermediario, escualeno.

4. Cierre del escualeno para la formación cíclica del esteroide precursor, conocido como

lanosterol.

5. El colesterol se forma del lanosterol después de varios pasos posteriores que incluyen la

pérdida de tres grupos metilo.

El colesterol forma parte de las membranas celulares y es precursor de hormonas esteroideas,

ácidos biliares y de la formación de la vitamina D. A pesar de su importancia biológica, es

evidente que elevadas concentraciones plasmáticas de colesterol ocasionan alteraciones

profundas, tales como, el hipercolesterolemia, la cual promueve, la disfunción endotelial

causada por la ateroesclerosis. La evolución del ateroesclerosis representa el principal factor

de riesgo para el desarrollo de enfermedades cardiovasculares.

El hipercolesterolemia en general, es un problema grave de Salud Pública que requiere de

estudios más detallados en cuanto a la homeostasia del colesterol, ya que la implementación

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de nuevas estrategias dietéticas, farmacológicas o cambios en el estilo de vida, permitirán

mantener en niveles recomendables el colesterol plasmático.

La administración conjunta de ezetimiba y estatinas es una nueva alternativa eficaz y segura

que permite reducir significativamente los niveles de C-LDL, que cuando se administran por

separado. El efecto terapéutico de estos dos fármacos logra disminuir en gran medida la

incidencia de las enfermedades cardiovasculares; finalmente, todas las estrategias para

mantener los niveles de colesterol en valores recomendables, tanto las no farmacológicas que

incluyen cambios en los hábitos alimenticios y en el estilo de vida, y las farmacológicas,

mejorarían la calidad de vida de los pacientes con problemas de colesterol, finalmente es

importante recalcar que la farmacoterapia no sustituye al tratamiento integral con

modificación de la dieta y el estilo de vida.

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