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BIOQUMICA CLNICA

PERFIL LIPDICO


Correa, Dolores*- Costa, Leonardo*- Guamn, Karina*- Yauri, Rmulo*
Profesionales en Formacin, rea de la Salud, Titulacin de Bioqumica y Farmacia,
Universidad Tcnica Particular de Loja, San Cayetano Alto s/n C.P. 11 01 608, Loja -
Ecuador. www.utpl.edu.ec.


INTRODUCCIN

El perfil lipdico lo constituye la cuantificacin analtica de una serie de lpidos que son
transportados en la sangre por los diferentes tipos de lipoprotenas plasmticas. La
determinacin de estos parmetros es un procedimiento analtico bsico para el
diagnstico y seguimiento de enfermedades metablicas, primarias o secundarias. Entre
estos parmetros analticos que se pueden determinar estn: el colesterol total, el
colesterol transportado por las LDL, el colesterol transportado por las HDL, los
triglicridos totales, ciertas apoprotenas particulares etc.

Colesterol es una sustancia cerosa, de tipo grasosa, que existe naturalmente en todas las
partes del cuerpo. El cuerpo necesita determinada cantidad de colesterol para funcionar
adecuadamente. Pero el exceso de colesterol en la sangre, combinado con otras
sustancias, puede adherirse a las paredes de las arterias. Los niveles de colesterol
elevados en la sangre pueden aumentar el riesgo de enfermedades cardacas. Los niveles
de colesterol tienden a aumentar con la edad. El aumento de colesterol no suele tener
signos ni sntomas, pero puede detectarse con un anlisis de sangre. (Dulbecco, A.
2008).

Valores referenciales
Normal: 135 mg/dL a 200 mg/dL
Intermedio alto: 200 mg/dL a 239 mg/dL
Alto: 240 y superior

DESARROLLO DE LA PRUEBA

MATERIALES Y MTODOS:

DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL

Utilizamos el mtodo enzimtico que se basa en enzimas acopladas.
Disponer de tubos de ensayo rotulados como blanco, patrn y muestra.
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En un tubo colocamos el reactivo y as tenemos el blanco, en otro tubo ponemos 10 L
de patrn ms 1000 L de reactivo, y lo denominamos patrn, para la siguiente muestra
# 2, igualmente colocamos 10 L de suero de la muestra ms 1000 L de reactivo,
colocamos los tubos a encubar a 37 C por 5 minutos, pasados los cinco minutos
procedemos a leer la absorbancia de cada una de la muestras en el espectrofotmetro.

RESULTADOS:
DETERMINACIN COLESTEROL TOTAL

MUESTRA ABSORBANCIA
Blanco 0
Patrn 0,358
Muestra 0,283






FACTOR DE COLESTEROL X
ABSORBANCIA
COLESTEROL
x 0,283 158mg/dl

DETERMINACIN DE TRIGLICERIDOS
Los triglicridos son steres de glicerol y cidos grasos que provienen de la dieta o son
sintetizados principalmente en el hgado. Los triglicridos se transportan en el plasma
en las lipoprotenas y son utilizados por el tejido adiposo, msculo y otros. Su principal
funcin es suministrar energa a la clula.

El mayor contenido de los triglicridos se encuentra en quilomicrones y VLDL. Las
concentraciones elevadas de triglicridos en suero pueden ser debidas a alteraciones
hepatobiliares, diabetes mellitus, nefrosis, hipotiroidismo, alcoholismo,
hiperlipoproteinemia familiar tipo IV (elevacin de VLDL) y tipo V (elevacin de
VLDL y quilomicrones), rara vez son tipo I (elevacin exclusiva de quilomicrones).
El diagnstico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico
ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio.


VALORES DE REFERENCIA
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Los siguientes valores discriminantes universales han sido establecidos por el US
National Institutes of Health y tambin aceptados en otros pases para la evaluacin del
riesgo.
Valores normales:
Normal: menos de 150 mg/dL
Limtrofe alto: 150 a 199 mg/dL
Alto: 200 a 499 mg/dL
Muy alto: 500 mg/dL o superior

DETERMINACION DE TRIGLICRIDOS
Para la determinacin de triglicridos lo realizamos mediante mtodo enzimtico que
cuantifica el glicerol a partir de hidrolisis de los triglicridos con la lipasa para lo cual
colocamos en un tubo solo el reactivo que ser el blanco, en otro tubo colocamos 10 ul
de patrn y 1000 de reactivo y as tenemos la muestra patrn , y para la muestra
colocamos 10 ul de suero ms 1000 ul de reactivo, colocamos a los tres tubos a 37 C
por cinco minutos, pasados estos cinco minutos procedemos a leer la absorbancia de
cada una de la muestras a 546 nm en el espectrofotmetro.

RESULTADOS:

DETERMINACIN DE TRIGLICRIDOS EN SUERO:

MUESTRA ABSORBANCIA
Patrn 0,199
Muestra 1 0,487






DETERMINACIN DE LDL

Las HDL y las LDL han sido las ms estudiadas por su importante actividad biolgica:
Las LDL, producto del metabolismo de las VLDL en plasma, son las encargadas
del transporte del colesterol exgeno (y en mucho menos proporcin, endgeno)
hacia el interior de las clulas.
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Las HDL, sintetizadas en el hgado, remueven el colesterol no utilizado por las
clulas (dentro de ciertos lmites de concentracin), transportndolo hacia el
hgado para su degradacin.

Diversos estudios epidemiolgicos han confirmado que el exceso de colesterol de LDL
con respecto a un valor crtico (1,9 g/l) debe ser considerado como factor de riesgo para
el desarrollo de enfermedad cardaca coronaria, considerando que el efecto protector de
las HDL slo parece tener relevancia dentro de cierto rango de concentraciones de
colesterol circulante. Tales hallazgos permiten deducir que los valores aislados de
colesterol de HDL o de LDL no pueden tomarse como ndices predictivos de riesgo,
sino que es necesario conformar un perfil lipdico con los valores de colesterol total,
colesterol de HDL y colesterol de LDL.

FUNDAMENTOS

Las lipoprotenas de baja densidad (LDL o -lipoprotenas) se separan del suero
precipitndolas selectivamente mediante el agregado de polmeros de alto peso
molecular. Luego de centrifugar, en el sobrenadante quedan las dems lipoprotenas
(HDL y VLDL); el colesterol ligado a las mismas se determina empleando el sistema
enzimtico Colesterol oxidasa/Peroxidasa.
Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el sobrenadante, se obtiene el
colesterol unido a las LDL.

MATERIALES
Muestra de sangre
Reactivos
Cubetas
Micropipetas
Centrfuga
Espectrofotmetro
Reloj

PROCEDIMIENTO
1. Extraer una muestra de sangre. Centrifugarlo por 10 minutos.
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2. En tres tubos o cubetas espectrofotomtricas marcadas B (Blanco), S (Standard)
y D (reactivo de trabajo).
3. Mezclar y esperar 5 minutos a 37C.
4. Medir la absorbancia de los tres tubos en 546nm de longitud de onda.
5. Anotar y calcular los resultados.

RESULTADO


CLCULOS DE LOS RESULTADOS PARA DETERMINAR LDL

LDL = CT T/5 cHDL

Para calcular el LDL, segn la frmula de Friedewald, se necesita las cantidades del
Colesterol Total (CT), menos los Triglicridos divido para 5 (T/5), menos colesterol de
las HDL (cHDL).

LDL = 158 56.7 (489.44mg/dL / 5) = 3.41mg/dL.

DETERMINACIN DE HDL

Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) son aquellas lipoprotenas que transportan
el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hgado.
Debido a que las HDL pueden retirar el colesterol de las arterias y transportarlo de
vuelta al hgado para su excrecin, vulgarmente se las conoce como el colesterol o
lipoprotena buena, dando una falsa idea de que sus valores altos pueden prevenir por s
solo ciertas enfermedades, algo no avalado por estudios cientficos concluyentes.
HDL son las lipoprotenas ms pequeas y ms densas, estn compuestas de una alta
proporcin de protenas. El hgado sintetiza estas lipoprotenas como protenas vacas y,
tras recoger el colesterol, incrementan su tamao al circular a travs del torrente
sanguneo.

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VALORES REFERENCIALES:

Colesterol HDL: superior a 35 - 65 mg/dL (lo deseable son valores mayores).

MATERIALES Y MTODOS:

DETERMINACION DE HDL

Utilizamos el mtodo enzimtico que se basa en enzimas acopladas.
Disponer de tubos de ensayo rotulados como blanco, patrn y muestra.
En un tubo colocamos el reactivo y as tenemos el blanco, en otro posilla ponemos 200
L de suero ms 500 L de precipitante, se agita constantemente y se deja reposar
Durante 10 minutos, luego lo llevamos a centrifugacin 1000 rev/min durante 10
minutos. Colocamos en un tubo 1000ul de reactivo (colesterol) ms 100ul de muestra
(sobrenadante) centrifugada.
Se coloca 5 min en la incubadora a una temperatura de 37C
Luego se procede a leer la absorbancia.

RESULTADOS:
DETERMINACIN LDL

MUESTRA ABSORBANCIA
Blanco 0
Muestra 0.15

378mg/dL *0,15 =56,7mg/dL

DISCUSIN:
Para el caso del colesterol obtuvimos un resultado de 158mg/dL lo cual
podemos determinar que el paciente se encuentra con una elevado concentracin
de colesterol de acuerdo a los valores referenciales de este.
El perfil lipdico es un grupo de exmenes de sangre que indican la forma como
nuestro cuerpo utiliza, cambia y almacena los lpidos. Los lpidos son grasas que
no pueden disolverse en la sangre. Los lpidos se pegan a las protenas en la
sangre recibiendo as el nombre de lipoprotenas. La cantidad de lipoprotenas en
su sangre puede cambiar dependiendo de lo que usted come, de una enfermedad
o por herencia. Algunos de estos lpidos son el colesterol y los triglicridos.
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Para el caso del colesterol obtuvimos un resultado de 158mg/dL lo cual
podemos determinar que el paciente se encuentra con una concentracin dentro
del rango normal de colesterol de acuerdo a los valores referenciales de este.
En el caso de triglicridos basndonos en los valores de referencia de acuerdo a
cada laboratorio se encuentra en un valor alto por lo que el mdico tomara las
debidas precauciones en el paciente.
En caso de la determinacin de la HDL se obtuvo un resultado de 56,7 estando
dentro del rango normal.
Para la cuantificacin del LDL se obtuvo una cantidad muy baja de la estimada
esto se debe a que la frmula que se utiliz nicamente sirve cuando las
concentraciones estn hasta 400 ug/dl de triglicridos pero como en nuestro
caso se encontr a 489,44 ug/dl no es vlida esta frmula.
Para el caso del HDL (lipoprotena de alta densidad) obtuvimos un resultado de
56.7mg/dL con lo cual podemos determinar que el resultado del paciente se
encuentra dentro de los valores normales.
CONCLUSIN

Para obtener este resultados se realizaron dos prcticas, la primera donde se
obtuvo los Triglicridos y la de esta clase las del Colesterol Total y las HDL. El
HDL se encarg otro grupo y confiamos que los resultados hayan dado normal.
Como podemos ver para determinar la LDL es necesario conformar un perfil
lipdico con los valores de colesterol total, colesterol de HDL y triglicridos.
La determinacin de estos parmetros es un procedimiento analtico bsico para
el diagnstico y seguimiento de enfermedades metablicas, primarias o
secundarias.
Tener cuidado al momento de pipetear la sangre y colocarla completamente en el
tubo ya que es la cantidad tanto de reactivo como de muestra est mal pipeteado
tendr un resultado alterado dando as falsos positivos.
Se debe tener en cuenta, que se debe cambiar el patrn por cada lote que
realicemos para evitar posibles errores.









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BIBLIOGRAFA:
Mundo Bioanlisis (2010). LDL Colesterol Reactivo Precipitante. Recuperado
de:http://www.mundobioanalisis.com/fabricante/wiener/electrolitos/descarga/12
20104.pdf
Colesterol (2014). Disponible en:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/cholesterol.html
Comprenda el colesterol. (2008). Disponible en:
http://www.cpmc.org/learning/documents/cholesterol-span.pdf
Perfil de riesgo coronario. (2012). Disponible en:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003491.htm